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rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值

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免疫学杂志 2011年第1期27卷 49-53,69页

作者：王敏李文桂蔡世飞重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法以纯化获得的rSj26-Sj32融合蛋白和SjAWA为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和Dipstick三种方法分别检测急性日本血吸虫病... 详细信息

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白用于急性日本血吸虫病患者的诊断价值。方法以纯化获得的rSj26-Sj32融合蛋白和SjAWA为包被抗原建立酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)和Dipstick三种方法分别检测急性日本血吸虫病患者血清中IgG抗体,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者以及健康人血清作对照。结果 rSj26-Sj32三种方法检测急性日本血吸虫病患者血清的敏感性分别为90.00%、100.00%和96.00%;特异性分别为97.67%、95.35%和97.67%。结论 rSj26-Sj32融合蛋白作为诊断抗原用于急性日本血吸虫病患者血清的诊断具有较好的敏感性和特异性,对急性日本血吸虫病的诊断有较大的应用价值。

关键词：日本血吸虫病 rSj26-Sj32融合蛋白免疫诊断

粪肠球菌介导的日本血吸虫重组疫苗的构建、鉴定及表达

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中华地方病学杂志 2023年第3期42卷 173-177页

作者：李文桂欧兴坤何爱琳重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

目的:构建粪肠球菌(Efs)介导的日本血吸虫(Sj)重组疫苗(rEfs-Sj26GST疫苗),并研究Sj26GST-GST融合蛋白在重组疫苗中的表达情况。方法:将pGEX-Sj26GST重组质粒电穿孔转化Efs ATCC47077株感受态,构建rEfs-Sj26GST疫苗,提取质粒进行PCR鉴定... 详细信息

目的:构建粪肠球菌(Efs)介导的日本血吸虫(Sj)重组疫苗(rEfs-Sj26GST疫苗),并研究Sj26GST-GST融合蛋白在重组疫苗中的表达情况。方法:将pGEX-Sj26GST重组质粒电穿孔转化Efs ATCC47077株感受态,构建rEfs-Sj26GST疫苗,提取质粒进行PCR鉴定;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)对表达产物进行分析和鉴定。结果:经PCR鉴定,扩增出大小约676 bp的片段,与Sj26GST扩增片段长度相符。经SDS-PAGE分析,得到相对分子质量约52 × 10 3的条带,与Sj26GST-GST融合蛋白条带相符。Western blot结果显示,rEfs-Sj26GST疫苗表达的Sj26GST-GST融合蛋白可被Sj感染者血清特异性识别。结论:成功构建了rEfs-Sj26GST疫苗,Sj感染者血清可特异性识别重组疫苗表达的Sj26GST-GST融合蛋白。

关键词：粪肠球菌日本血吸虫重组疫苗 Sj26GST-GST融合蛋白

载体介导的布鲁氏菌L7/L12疫苗研制现状

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中国病原生物学杂志 2019年第7期14卷 864-866页

作者：李文桂陈雅棠重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所

布鲁氏菌感染引起的布鲁氏菌病是一种严重危害人类健康的人畜共患传染病,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点领域之一。L7/L12蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述鼠伤寒沙门氏菌、乳酸乳球菌、大肠埃希菌、酿酒酵母和禽流感病毒等载... 详细信息

布鲁氏菌感染引起的布鲁氏菌病是一种严重危害人类健康的人畜共患传染病,采用疫苗防治该菌是当前研究的热点领域之一。L7/L12蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述鼠伤寒沙门氏菌、乳酸乳球菌、大肠埃希菌、酿酒酵母和禽流感病毒等载体介导的布鲁氏菌L7/L12疫苗的研制现状。

关键词：布鲁氏菌 L7/L12蛋白疫苗综述

铜绿假单胞菌重组Bb-OprH疫苗诱导的保护力及体液免疫应答

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中国病原生物学杂志 2019年第7期14卷 786-789页

作者：江帆李文桂重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所

目的用重组Bb-OprH疫苗免疫小鼠,观察其对小鼠的保护力及诱导的体液免疫应答情况。方法将重组疫苗经口灌胃接种BALB/c小鼠,1次/d,每周3d,连续3周。于首次免疫后第4周以5×10^7 CFU的铜绿假单胞菌PAO1株对小鼠滴鼻攻击,1次/d,连续3d,攻... 详细信息

目的用重组Bb-OprH疫苗免疫小鼠,观察其对小鼠的保护力及诱导的体液免疫应答情况。方法将重组疫苗经口灌胃接种BALB/c小鼠,1次/d,每周3d,连续3周。于首次免疫后第4周以5×10^7 CFU的铜绿假单胞菌PAO1株对小鼠滴鼻攻击,1次/d,连续3d,攻击后2周处死小鼠,计数小鼠肺细胞负荷。于免疫前、首次免疫后4周尾静脉采血,于攻击后2周眼球取血,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE。结果疫苗免疫及PAO1株攻击后,小鼠肺细菌负荷减少(F=1 506.793,P<0.05);初免后4周,小鼠血清抗体IgG、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE明显升高(0.078±0.005、0.010±0.002、0.038±0.004、0.029±0.002和0.027±0.003,P<0.05),较空载体组和Bb对照组差异有显著性(P<0.05);攻击后2周,小鼠血清抗体IgG、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE再次升高(0.118±0.010、0.018±0.001、0.068±0.013、0.032±0.003和0.041±0.004,P<0.05),较空载体组和Bb对照组差异有显著性(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌重组Bb-OprH疫苗可诱导铜绿假单胞菌感染小鼠产生保护性体液免疫应答。

关键词：铜绿假单胞菌 OprH 疫苗体液免疫应答

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青蒿素衍生物抗卡氏肺孢子虫体外作用的研究

中华结核和呼吸杂志 2001年第3期24卷 164-167页

作者：倪小毅陈雅棠重庆医科大学第一临床学院传染病寄生虫病研究所 400016

目的　研究不同浓度青蒿素衍生物双氢青蒿素、青蒿琥酯对体外培养卡氏肺孢子虫的作用。方法　接种卡氏肺孢子虫 (Pc)于人肝癌细胞系 (HepG 2 )。 4h后加入试验药物和对照试剂。双氢青蒿素药物浓度分别为 :10 0、5 0、10、5、0 5 μmol/... 详细信息

目的　研究不同浓度青蒿素衍生物双氢青蒿素、青蒿琥酯对体外培养卡氏肺孢子虫的作用。方法　接种卡氏肺孢子虫 (Pc)于人肝癌细胞系 (HepG 2 )。 4h后加入试验药物和对照试剂。双氢青蒿素药物浓度分别为 :10 0、5 0、10、5、0 5 μmol/L ;青蒿琥酯药物浓度分别为 :10 0、5 0、10、5 μmol/L ;对照药喷他脒 :15 μmol/L。以后每隔 1d取培养液观察 ,分别作六亚甲基四胺银 (GMS)和Diff Quik (DQ)染色计数Pc包囊和滋养体数目。结果　Pc滋养体和包囊在体外培养细胞上的生长高峰出现于第 5d ,双氢青蒿素浓度为 5 0 μmol/L和 10 0 μmol/L时对Pc滋养体的抑制率分别为 88 0 %与90 1% ,与喷他脒 15 μmol/L的抑制率 90 0 %相当 ;而青蒿琥酯浓度为 10 0 μmol/L时方可达到Pc滋养体抑制率 83 4%。Pc包囊抑制率 ,双氢青蒿素和青蒿琥酯浓度为 10 0 μmol/L时分别为 6 7 5 %和6 7 3% ,与喷他脒的抑制率 75 0 %之间无统计学差异。结论　双氢青蒿素和青蒿琥酯在一定浓度时对Pc的抑制作用与喷他脒相当 ;而双氢青蒿素的抑制作用略高于青蒿琥酯。

关键词：卡氏肺孢子虫双氢青蒿素青蒿琥酯喷他脒实验研究

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载体介导的猪瘟病毒囊膜蛋白疫苗的研制现状

中国病原生物学杂志 2023年第1期18卷 105-110,116页

作者：李文桂陈雅棠重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

猪瘟病毒(CSFV)是一种常见的猪场感染病毒,常引起猪瘟,其防治疫苗研制备受关注。囊膜蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述伪狂犬病毒(rPRV-E2)、鸡痘病毒(rFPV-E0/E2)、Semliki森林病毒(rSFV-E2)、水疱性口炎病毒(rVSV-E2)、猪痘病毒... 详细信息

猪瘟病毒(CSFV)是一种常见的猪场感染病毒,常引起猪瘟,其防治疫苗研制备受关注。囊膜蛋白是一种有效的疫苗候选分子,本文综述伪狂犬病毒(rPRV-E2)、鸡痘病毒(rFPV-E0/E2)、Semliki森林病毒(rSFV-E2)、水疱性口炎病毒(rVSV-E2)、猪痘病毒(rSPV-E2)、腺病毒(rAdV-E2)、牛痘病毒(rVV-E2)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(rPRRSV-E2)、杆状病毒(rBuV-E2)、猪霍乱沙门氏菌(rSc-E2)、鼠伤寒沙门氏菌(rSt-E2)、干酪乳杆菌(rLc-VP2-E290/E2-Tα1)、根癌农杆菌(rAt-E2)和酵母(rPP-E2)等载体介导的CSFV囊膜蛋白疫苗的构建及其免疫机制等方面研制现状。

关键词：猪瘟病毒囊膜蛋白疫苗综述

铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗诱导的保护力及细胞免疫应答

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中国病原生物学杂志 2019年第11期14卷 1282-1285页

作者：梁诚诚李文桂重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所

目的研究铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后,其诱导产生的保护力及细胞免疫应答。方法将21只BALB/c小鼠随机分为3组,分别为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,取5×10^8菌落形成单位(CFU)疫苗经口灌胃,每周3次,... 详细信息

目的研究铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗免疫及PA01株攻击小鼠后,其诱导产生的保护力及细胞免疫应答。方法将21只BALB/c小鼠随机分为3组,分别为疫苗组、空载体对照组和Bb对照组,取5×10^8菌落形成单位(CFU)疫苗经口灌胃,每周3次,连续3周。初次免疫后4周用5×10^7 CFU的PA01株进行滴鼻攻击。攻击后2 d杀鼠,取肺,计数肺细菌负荷;取脾,制备脾细胞悬液,MTT法检测脾细胞增殖情况,流式细胞术检测脾CD4^+、CD8^+ T细胞亚群变化和脾细胞凋亡。结果与两个对照组的肺细菌菌落数(7.37±0.89)×10^8 CFU和(7.42±0.80)×10^8 CFU相比,免疫小鼠的菌落数量(0.27±0.02)×10^8 CFU减少;疫苗组的脾细胞增殖活性增强;CD4^+ T细胞比例增加;脾细胞凋亡率降低。结论铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗可诱导小鼠产生一定的保护力和有效的细胞免疫应答。

关键词：铜绿假单胞菌重组Bb(pGEX-OprF-I)疫苗免疫

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的动态观察

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免疫学杂志 2009年第1期25卷 31-33,38页

作者：李文桂朱佑明王鸿重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所

目的动态观察细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EgAg或ConA刺激培养,收集脾... 详细信息

目的动态观察细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后脾细胞因子的变化。方法疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,用EgAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果口服免疫组的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平分别在免疫后4～10周、2～10周、2～18周和10周升高,分别在免疫后10、10、6和10周达最高水平;鼻腔内接种组的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平分别在免疫后2～18周、2～10周、2～18周和10周升高,分别在免疫后10、8、12和10周达最高水平。结论细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗在免疫早期(2～10周)可诱导小鼠脾细胞产生Th1和Th2混合型细胞因子。

关键词：细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗细胞因子

铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF-I构建、鉴定及其在大肠埃希菌中的表达效率

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中国病原生物学杂志 2019年第5期14卷 534-538页

作者：梁诚诚李文桂重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所

目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF-I,观察其在大肠埃希菌中的表达效率。方法以铜绿假单胞菌PA01株的DNA为模板,PCR扩增OprF和OprI抗原编码基因,采用基因拼接法(gene SOEing)剪切OprF和OprI得到OprF-I融合基因,酶切后与表达... 详细信息

目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF-I,观察其在大肠埃希菌中的表达效率。方法以铜绿假单胞菌PA01株的DNA为模板,PCR扩增OprF和OprI抗原编码基因,采用基因拼接法(gene SOEing)剪切OprF和OprI得到OprF-I融合基因,酶切后与表达载体pGEX-1λT连接,构建重组质粒pGEX-OprF-I并转化入大肠埃希菌中,抽提质粒进行双酶切和PCR鉴定。重组菌用异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot分析和鉴定表达产物。结果基因拼接法获得1289 bp的OprF-I融合基因;其连接产物经双酶切和PCR鉴定证实该基因成功插入pGEX-1λT中。重组质粒转化DE3后经IPTG诱导,SDS-PAGE检测显示重组菌表达预期约68×10~3的融合蛋白,该蛋白约占菌体总量的18%。Western blot检测Pa感染的鼠血清可特异性识别该融合蛋白。结论成功构建并鉴定了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF-I,转化大肠埃希菌后高效表达OprF-I融合蛋白,该蛋白具有反应原性。

关键词：铜绿假单胞菌重组质粒PGEX-OprF-I 大肠埃希菌表达效率