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低浓度二硫苏糖醇去除CD38单抗干扰输血相容性检测的评估

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中国实验血液学杂志 2022年第4期30卷 1198-1202页

作者：宋婕陈李影慧刘爱萍王书亚吕先萍郑州大学第一附属医院输血科河南郑州450052

目的:探讨低浓度二硫苏糖醇(DTT)去除CD38单抗对输血相容性检测干扰的有效性和安全性,制定合理的临床输血策略。方法:按照标准方法进行血型表型、直接抗人球蛋白试验及抗体筛查,分别用0.2、0.1、0.05、0.02、0.01和0.005 mol/L的DTT处... 详细信息

目的:探讨低浓度二硫苏糖醇(DTT)去除CD38单抗对输血相容性检测干扰的有效性和安全性,制定合理的临床输血策略。方法:按照标准方法进行血型表型、直接抗人球蛋白试验及抗体筛查,分别用0.2、0.1、0.05、0.02、0.01和0.005 mol/L的DTT处理抗筛细胞及供者红细胞,用抗人球蛋白卡式法对CD38单抗治疗后血清进行抗体筛查及交叉配血。结果:DTT 0.01 mol/L 37℃处理检测红细胞30 min可以去除CD38单抗对抗体筛查及交叉配血的影响,同时保留其对抗-K、抗-LW、抗-JMH、抗-Lub、抗-e、抗-Dia及抗-Jka同种抗体检测的有效性。10例患者红细胞输注后均未发生急性或迟发性溶血性输血反应,血常规检测显示红细胞输注有效。结论:0.01 mol/L DTT在去除CD38单抗对输血相容性检测干扰的同时保留了对大多数同种抗体的检测能力,该方法安全有效。

关键词： CD38单抗二硫苏糖醇抗体筛查同种抗体

胎盘植入产妇剖宫产术中红细胞输注需求预测的列线图

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郑州大学学报（医学版） 2022年第6期57卷 830-835页

作者：张根豪朱迪杨乾坤吕先萍郑州大学第一附属医院输血科郑州450052

目的:建立评估胎盘植入(PAS)产妇剖宫产术中红细胞输注需求的预测工具。方法:428例PAS患者按照剖宫产术中是否输注红细胞分为输血组和非输血组,比较两组患者年龄、孕周、规律围产期保健(围保)和妊娠高血压情况、PAS类型、血常规、凝血... 详细信息

目的:建立评估胎盘植入(PAS)产妇剖宫产术中红细胞输注需求的预测工具。方法:428例PAS患者按照剖宫产术中是否输注红细胞分为输血组和非输血组,比较两组患者年龄、孕周、规律围产期保健(围保)和妊娠高血压情况、PAS类型、血常规、凝血功能、估计失血量等。按4∶6的比例将PAS患者随机分为训练队列和测试队列后,通过LASSO回归方程筛选预测变量并构建预测模型。联合预测模型以及患者临床特征构建列线图,并使用校准曲线进行验证。结果:428例PAS患者中92例接受了术中红细胞输注,输注率为21.49%。与非输血组相比,输血组患者规律围保的比例、红细胞计数、血红蛋白浓度、血细胞比容(HCT)和纤维蛋白原浓度较低(P<0.05),胎盘植入和穿透性胎盘植入的比例、红细胞分布宽度(RDW)、活化凝血酶时间(APTT)、凝血酶时间、D-二聚体浓度和估计失血量较高(P<0.05)。根据LASSO回归分析结果,筛选出RDW、白细胞计数、HCT、PT、APTT和D-二聚体浓度等6个指标建立风险评分模型,该模型具有良好的预测性能,训练队列术中红细胞输注需求预测的AUC为0.841,测试队列为0.767,全队列为0.795。Logistic回归分析显示该风险评分模型是术中红细胞输注的独立预测因素(RR=4.500,95%CI为3.797~5.484,P<0.001)。结合临床特征和上述模型建立预测列线图,校准曲线显示其预测能力良好。结论:列线图可以作为预测PAS患者剖宫产术中红细胞输注需求的分层工具。

关键词：胎盘植入 LASSO回归红细胞输注列线图

B(A)亚型一家系的血清学及分子遗传学分析

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郑州大学学报（医学版） 2022年第5期57卷 717-721页

作者：刘爱萍宋婕王书亚孔永奎吕先萍郑州大学第一附属医院输血科郑州450052

目的:分析罕见的B(A)亚型一家系的血清学及分子遗传学特征,探讨其发生机制及输血策略。方法:通过标准血清学方法对先证者及其家庭成员进行ABO血型血清学检测,通过PCR技术对先证者及其家庭成员的ABO基因第6、7外显子进行测序分析,同时对B... 详细信息

目的:分析罕见的B(A)亚型一家系的血清学及分子遗传学特征,探讨其发生机制及输血策略。方法:通过标准血清学方法对先证者及其家庭成员进行ABO血型血清学检测,通过PCR技术对先证者及其家庭成员的ABO基因第6、7外显子进行测序分析,同时对BA.02等位基因携带者进行单倍型分析,通过家系分析调查其遗传方式。结果:血型血清学显示先证者正反定型不符,正定型与AwB或者B(A)亚型血清学正定型表现相符,反定型为B型。ABO基因测序结果显示,先证者第7外显子在B.01基因的基础上发生c.700C>G杂合突变,符合BA.02等位基因特征,单倍型分析确认先证者基因型为BA.02/O.01.02。家系分析显示BA.02等位基因从父亲遗传至先证者再到女儿而非自然突变。结论:该B(A)亚型家系中共发现5例BA.02等位基因携带者,其血清学表现存在一定差异,BA.02等位基因的分子遗传基础来源于ABO基因第7外显子c.700C>G突变,在该家系中表现为稳定的顺式遗传。

关键词： ABO血型 B(A)亚型基因型测序分析家系分析

富血小板血浆协同力学信号促进大鼠软骨损伤修复的研究

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中华实验外科杂志 2023年第9期40卷 1795-1798页

作者：谢莹付苏杨乾坤严旭刘欣董树岭陈李影慧尚春风郑赛磊刘宏建郑州大学第一附属医院输血科郑州450052 郑州大学第一附属医院骨科郑州450052

目的探索富血小板血浆(PRP)与软骨细胞力学信号转导通路的协同机制,并将该机制应用于PRP治疗大鼠软骨损伤的修复治疗。方法体外实验部分,采用酶消法获取大鼠软骨细胞,给与PRP处理和(或)流体剪切力刺激(摇床每日3 h,40 r/min),分组为对... 详细信息

目的探索富血小板血浆(PRP)与软骨细胞力学信号转导通路的协同机制,并将该机制应用于PRP治疗大鼠软骨损伤的修复治疗。方法体外实验部分,采用酶消法获取大鼠软骨细胞,给与PRP处理和(或)流体剪切力刺激(摇床每日3 h,40 r/min),分组为对照组、PRP组、力学+PRP组、先力学后PRP组,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测Ⅱ型胶原、蛋白聚糖及整合素(Integrinβ2)的mRNA表达。体内实验部分,大鼠经木瓜蛋白酶注射后建立膝关节炎/软骨损伤模型,分为对照组(制动+注射生理盐水)、PRP组(制动+注射PRP),运动+PRP组(运动+注射PRP),运动后PRP组(先运动+后注射PRP),4周后取材切片进行苏木精-伊红(HE)、番红O染色评估软骨修复程度,并通过PCR测定Ⅱ型胶原、蛋白聚糖的mRNA表达。两组间比较行One way-ANOVA及LSD-t检验。结果体外实验正常培养的大鼠软骨细胞,PRP及力学+PRP均促进了Ⅱ型胶原及蛋白聚糖转录增多,但差异无统计学意义(3.085±1.166比2.153±0.705/0.818±0.116比1.045±0.266,t=0.561、1.550,P>0.05),然而先力学刺激后给予PRP处理则Ⅱ型胶原及蛋白聚糖转录增多最明显,显著高于PRP组及力学+PRP组(倍数为5.308±0.978及2.845±1.100,t=4.439、5.000、3.695、5.245,P一机制可能与力学反应性Integrinβ2表达升高有关。该体外实验趋势与大鼠体内实验结果相符合。大鼠对照组软骨损伤明显且表面缺损,PRP组及运动+PRP组软骨损伤有所恢复但表面仍有不平整。大鼠给与先主动运动后PRP治疗方案后,软骨损伤恢复最佳,Ⅱ型胶原纤维及蛋白聚糖mRNA含量最高(倍数分别为46.833±7.400及15.177±3.288,t=6.161、2.683、5.109、3.545,P<0.05)。结论PRP通过整合素β2受体,与软骨细胞的力学反应性信号转导存在协同效应,PRP治疗宜结合运动后PRP的组合方式,提高软骨修复治疗的疗效。

关键词：软骨损伤富血小板血浆软骨细胞力学信号转导初级纤毛胶原蛋白

单倍型造血干细胞移植后血小板减少的预后意义

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中华血液学杂志 2020年第2期41卷 160-163页

作者：王静孙慧郑州大学第一附属医院输血科郑州450000 郑州大学第一附属医院血液科郑州450000

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是血液系统恶性肿瘤患者的有效治疗方法。血小板减少是allo-HSCT后常见的并发症,如持续孤立性血小板减少症(prolonged isolated thrombocytopenia,PT)或继发性血小板恢复失败(secondary failure of plat... 详细信息

异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是血液系统恶性肿瘤患者的有效治疗方法。血小板减少是allo-HSCT后常见的并发症,如持续孤立性血小板减少症(prolonged isolated thrombocytopenia,PT)或继发性血小板恢复失败(secondary failure of platelet recovery,SFPR)。PT最早在1985年被提出[1],后被定义为HSCT后3个月以上PLT≤80×109/L,其余血细胞均恢复正常,并且没有明确的引起血小板减少的原因(植入失败、潜在恶性肿瘤复发、药物等)[2]。SFPR指移植后血小板重建后再次出现PLT20×109/L[3]。以往多项研究显示,HLA全相合allo-HSCT后血小板减少是影响患者总生存(OS)的危险因素[3-4]。为分析单倍型造血干细胞移植(haplo-HSCT)后血小板减少的预后意义,我们对92例haplo-HSCT患者进行回顾性分析。

关键词：预后意义血液系统恶性肿瘤血小板输注血小板减少症造血干细胞移植肿瘤复发单倍型危险因素

6月龄内婴幼儿ABO/RhD的血型结果及两种检测方法的对比分析

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中国实验血液学杂志 2021年第5期29卷 1589-1594页

作者：邵明杨乾坤朱伟涛孔永奎宋婕王静吕先萍郑州大学第一附属医院输血科河南郑州450052 郑州大学第一附属医院检验科河南郑州450052

目的:应用全自动微柱玻璃珠法与试管法检测不同胎龄和月龄的6月龄内婴幼儿ABO/Rh D血型并对比结果的差异。方法:收集2018年1月-2019年2月患儿血标本896例,同时应用以上两种方法检测ABO/Rh D血型抗原并进行ABO反定型抗体检出率和凝集强... 详细信息

目的:应用全自动微柱玻璃珠法与试管法检测不同胎龄和月龄的6月龄内婴幼儿ABO/Rh D血型并对比结果的差异。方法:收集2018年1月-2019年2月患儿血标本896例,同时应用以上两种方法检测ABO/Rh D血型抗原并进行ABO反定型抗体检出率和凝集强度并进行比较分析。结果:两种方法正定型均检出A型标本308例(34.4%),B型标本281例(31.4%),O型标本210例(23.4%),AB型标本97例(10.8%),Rh D血型均为阳性,ABO/Rh D血型抗原的凝集强度无明显差异(P> 0.05);除AB型外,B型患儿反定型抗体检出率明显高于A型和O型,反定型A细胞凝集强度均明显高于B细胞(P <0.05)。全自动微柱玻璃珠法检测A型和O型患儿的反定型抗体检出率及各血型患儿的反定型凝集强度均明显高于试管法(P <0.05)。足月儿组的ABO反定型抗体检出率和凝集强度均明显高于早产儿组(P <0.05)。全自动微柱玻璃珠法检测两组患儿反定型抗体检出率以及凝集强度均明显高于试管法(P <0.05)。不同月龄4组患儿中,Ⅳ组(4月龄至6月龄)患儿ABO反定型检出率和凝集强度均明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(3月龄以下,P<0.05)。全自动微柱玻璃珠法检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组患儿反定型抗体检出率及各组患儿反定型凝集强度均明显高于试管法(P <0.05)。结论:大部分婴幼儿可以准确检测出ABO/Rh D血型抗原,而ABO抗体检出率与胎龄和月龄相关。全自动微柱玻璃珠法对ABO血型的反定型抗体检出率及凝集强度均强于试管法,特别对于早产儿以及3月龄以内的患儿更为可靠和敏感。

关键词：全自动微柱玻璃珠法试管法 6月龄内婴幼儿 ABO血型 Rh血型

基因分型技术对1例PNH患者抗-C同种抗体合并抗-f类同种自身抗体的辅助鉴定

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中国实验血液学杂志 2020年第5期28卷 1740-1745页

作者：孔永奎杨乾坤蔡晓红宋婕邵明王静王莉吕先萍郑州大学第一附属医院输血科河南郑州450052 上海交通大学医学院附属瑞金医院输血科上海200025

目的:通过基因分型对1例有输血史的PNH患者疑难抗体进行鉴定。方法:采用卡式凝胶法检测患者RH分型,谱细胞鉴定PNH患者抗体特异性。在血清学鉴定困难的情况下,利用基因分型的方法排除RH无关表型,利用不同的RH表型细胞分别吸收放散后进行... 详细信息

目的:通过基因分型对1例有输血史的PNH患者疑难抗体进行鉴定。方法:采用卡式凝胶法检测患者RH分型,谱细胞鉴定PNH患者抗体特异性。在血清学鉴定困难的情况下,利用基因分型的方法排除RH无关表型,利用不同的RH表型细胞分别吸收放散后进行抗体鉴定,不同的RH表型细胞组合排除其它无关抗体。结果:卡式凝胶法鉴定显示RH分型C抗原存在双群,其它抗原阳性,分别进行RHD合子型鉴定、RHD和RHCE基因测序分析。结果显示,RHD基因型为纯合子RHD/RHD,RHCE基因未发现c.122A>G突变,排除携带有Cw抗原;RHCE第1外显子48G,第5外显子存在676碱基G/C杂合,第2-4、6-10外显子没有发生突变,第4内含子发现一个新的突变IVS4+29A>C。因此可以判断出RH血型基因型为Dce/DcE,其表型应该为ccDEe。结合不同的RH表型细胞吸收放散实验最终确定患者血清中含有抗-C同种抗体合并罕见的抗-f类同种自身抗体,最后选择配血相合的AB型ccDEE的红细胞输注给患者,未出现输血不良反应。结论:基因分型可以辅助用于患者血清中疑难抗体的鉴定,从而减少患者输血风险。

关键词：抗体筛查基因分型基因测序 RHD基因 RHCE基因同种抗体自身抗体

cisAB03亚型分子生物学鉴定及分子对接

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郑州大学学报（医学版） 2020年第4期55卷 533-536页

作者：孔永奎杨乾坤王书亚靳慧芳吕先萍郑州大学第一附属医院输血科郑州450052

目的:通过1例罕见的cisAB03亚型的研究,探讨关键氨基酸突变后糖基转移酶影响糖供体和受体结合的分子机制。方法:采用血清学方法鉴定血型表型,直接测序方法鉴定基因型,转移酶同源建模后进行UDP和H糖链的对接,分析突变后糖基转移酶结构差... 详细信息

目的:通过1例罕见的cisAB03亚型的研究,探讨关键氨基酸突变后糖基转移酶影响糖供体和受体结合的分子机制。方法:采用血清学方法鉴定血型表型,直接测序方法鉴定基因型,转移酶同源建模后进行UDP和H糖链的对接,分析突变后糖基转移酶结构差异对底物结合的影响,最后利用细胞体外表达实验间接验证突变后糖基转移酶合成产物的效率。结果:血清学鉴定表型为cisAB,基因测序显示患者基因型是ABO*cisAB.03/O.01.01,同源建模显示与野生型相比,cisAB03糖基转移酶p.Pro234Ser突变导致Met266结构朝向改变,分子对接后表面显示呈现催化活性中心结合凹槽结构改变,更有利于UDP-GalNAc加成到H抗原。细胞体外表达实验证实cisAB03合成的A抗原强于B抗原。结论:p.Pro234Ser突变是形成cisAB03糖基转移酶双功能活性的关键位点。

关键词： ABO亚型 cisAB血型基因测序同源建模分子对接

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DNA甲基化对白血病ABO基因表达的影响

中华血液学杂志 2016年第9期37卷 795-799页

作者：邵明吕先萍杨乾坤朱伟涛宋婕孔永奎王静孙玲王芳郑州大学第一附属医院输血科 450052 郑州大学第一附属医院检验科 450052 郑州大学第一附属医院血液内科 450052

目的探讨白血病ABO基因启动子区CpG岛甲基化对ABO基因表达的影响。方法以25例白血病患者及20名健康对照者为研究对象，同时以不同浓度去甲基化药物地西他滨处理白血病细胞株K562、HL．60和Jurkat细胞，采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP... 详细信息

目的探讨白血病ABO基因启动子区CpG岛甲基化对ABO基因表达的影响。方法以25例白血病患者及20名健康对照者为研究对象，同时以不同浓度去甲基化药物地西他滨处理白血病细胞株K562、HL．60和Jurkat细胞，采用序列特异性引物PCR（PCR-SSP）法检测ABO基因分型，采用实时荧光定量PCR法检On,4ABOmRNA表达，采用亚硫酸氢盐测序法检测ABO基因启动子区CpG岛甲基化情况。结果①急性淋巴细胞白血病组（10例）和急性髓系白血病组（10例）ABO基因启动子平均甲基化率分别为53．85％和18．22％，明显高于健康对照组（20名，2．33％）和慢性髓性白血病组（5例，2．12％）。②K562细胞的ABO基因型为O1O1，药物作用前后ABO基因型变化不大；HL-60和Jurkat细胞药物作用前基因型无法辨认，药物作用后ABO基因型为O1A1和A1O2。⑧K562细胞ABOmRNA相对表达水平为1275．67：k35．86，明显高于HL-60和Jurkat细胞（O．54±0．07和0．82±0．16）（P值均〈0．05）。@K562、HL-60、Jurkat细胞ABO基因启动子区甲基化率分别为0、58．14％和96．74％；与药物作用前比较，随地西他滨浓度增高，HL-60和Jurkat细胞的甲基化水平下降、ABOmRNA表达水平增高，差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论ABO基因启动子区甲基化水平与急性白血病ABO基因表达呈负相关，DNA甲基化导致ABO基因沉默是急性白血病ABO抗原表达减弱的重要机制之一。

关键词： DNA甲基化白血病 ABO血型系统启动区遗传