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Mettl3通过PI3K/AKT信号通路调控Ang Ⅱ诱导肾脏纤维化的机制研究

中华心血管病杂志 2024年第7期52卷 814-826页

作者：邓熠王艳何平平李娇刘围围袁近松赵鸿彦刘志江沈长银石蓓遵义医科大学附属医院心血管内科遵义563000

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang ... 详细信息

目的:探讨甲基转移酶3(Mettl3)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导周细胞向肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化过程中的作用及相关机制。方法:使用C57BL/6J小鼠,(1)细胞实验中,采用磁珠分选法培养纯化小鼠肾脏周细胞,并予以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化,为Ang Ⅱ组;正常培养的周细胞为对照组。采用免疫荧光染色、蛋白质印迹(Western blot)及实时反转录PCR(RT-qPCR)检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以验证转分化成功。采用斑点印迹、RT-qPCR、Western blot检测N6-甲基腺苷(m6A)修饰水平及相关酶[Mettl3、Mettl14、Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)、肥胖相关蛋白(FTO)、ALKB同源蛋白5(ALKBH5)、YTH结构域家族蛋白(YTHDF)1、YTHDF2、YTHDC1、YTHDC2、YTHDC3]的表达水平。采用慢病毒转染Mettl3 shRNA的方法抑制细胞中的Mettl3表达,为sh-Mettl3组、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组;以转染慢病毒空载体作为阴性对照,为Ang Ⅱ+sh-NC组,观察Ang Ⅱ对周细胞转分化的影响,并检测下游磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白的表达,包括PI3K、AKT(丝氨酸磷酸化位点473)[p-AKT(S473)]、AKT(苏氨酸磷酸化位点308)[p-AKT(T308)]等。加入放线菌素D与各组周细胞共培养以抑制PI3K基因的转录,通过检测不同共培养时间残余PI3K mRNA表达量以计算PI3K mRNA半衰期。在Ang Ⅱ+sh-Mettl3组周细胞中加入AKT激动剂SC79,观察是否可逆转Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的作用。(2)动物实验中,分为假手术组(仅给予0.9%无菌生理盐水)、Ang Ⅱ组(泵入Ang Ⅱ溶液)、sh-Mettl3组(注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3组(泵入Ang Ⅱ溶液+注射Mettl3 shRNA慢病毒溶液)、Ang Ⅱ+sh-Mettl3+SC79组(Ang Ⅱ+sh-Mettl3组处理基础上注射SC79),每组6只。手术前后采用尾夹法测定血压,术后4周测定血清肌酐、尿素含量及尿液白蛋白含量。28 d后取肾脏组织,采用苏木精-伊红(HE)及Masson三色法对组织切片进行染色,检测肾脏纤维化程度。结果:(1)磁珠分选法可获得原代肾脏周细胞,以1×10 6 mmol/L的Ang Ⅱ处理周细胞48 h可成功诱导其向肌成纤维细胞转分化。斑点印迹结果显示,Ang Ⅱ组总RNA的m6A修饰水平高于对照组( P<0.05),RT-qPCR及Western blot结果显示,与对照组相比,Ang Ⅱ组中Mettl3 mRNA及蛋白表达水平上调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组细胞中的Mettl3蛋白表达水平低于Ang Ⅱ组,α-SMA、波形蛋白、肌间线蛋白、成纤维细胞激活蛋白a(FAPa)以及Ⅰ型胶原蛋白的表达水平亦低于Ang Ⅱ组( P均<0.05)。与对照组相比,Ang Ⅱ组的PI3K mRNA表达水平上调,且p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白高表达;Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的PI3K mRNA表达水平低于Ang Ⅱ组,p-AKT(S473)和p-AKT(T308)蛋白表达下调( P均<0.05)。Ang Ⅱ+sh-Mettl3组的半衰期短于Ang Ⅱ+sh-NC组(2.34 h比3.42 h)。而Mettl3抑制对Ang Ⅱ诱导周细胞-肌成纤维细胞转分化的改善作用可被SC79逆转。(2)动物实验结果显示,与假手术组比较,Ang Ⅱ组小鼠的血压更高,血清肌酐、尿素及24 h尿蛋白测量值更高,纤维化面积更大( P均<0.05);而Ang Ⅱ+sh-Mettle3组的纤维化面积小于Ang Ⅱ组( P<0.05),但在加入SC79后肾脏纤维化又加重。结论:Mettl3介导的RNA m6A表观遗传调控参与Ang Ⅱ诱导的肾脏周细胞-肌成纤维细胞转分化及肾脏纤维化,Mettl3可能通过影响PI3K的稳定性,进而影响PI3K/AKT信号通路发挥调控作用。

关键词：血管紧张素Ⅱ 周细胞肌成纤维细胞转分化 N6-甲基腺苷甲基转移酶3

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探索心血管疾病防治新路径——专访中国高血压联盟副主席、福建医科大学附属第一医院心血管内科主任医师、福建省高血压研究所所长谢良地

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健康中国观察 2024年第6期 90-93页

作者：柴广翰谢良地不详中国高血压联盟福建医科大学附属第一医院心血管内科福建省高血压研究所

习近平总书记指出,大力开展健康知识普及,倡导文明健康、绿色环保的生活方式。每个人都是自己健康的第一责任人,对家庭和社会都负有健康责任,近年来,因不良生活方式所致的高血压、高血脂人群增多,进而引起我国心脑血管疾病患病率持续增... 详细信息

习近平总书记指出,大力开展健康知识普及,倡导文明健康、绿色环保的生活方式。每个人都是自己健康的第一责任人,对家庭和社会都负有健康责任,近年来,因不良生活方式所致的高血压、高血脂人群增多,进而引起我国心脑血管疾病患病率持续增高,给经济社会发展和健康中国建设带来挑战。

关键词：不良生活方式高血压联盟心脑血管疾病健康责任心血管疾病防治内科主任医师第一责任人高血脂

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表观遗传调控血管平滑肌细胞重塑在主动脉瘤发生发展中的作用

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中国组织工程研究 2024年第4期28卷 602-608页

作者：何远杰陈宇恒赵永超王正龙遵义医科大学附属医院心血管内科贵州省遵义市563000

背景:表观遗传作为重要的基因表达网络的调控方式,已被证明在血管平滑肌细胞重塑介导主动脉瘤的发生发展中发挥重要作用。目的:文章从主动脉瘤发生及进展过程中血管平滑肌细胞重塑的表观遗传调控机制进行综述。方法:以“Aortic aneurysm... 详细信息

背景:表观遗传作为重要的基因表达网络的调控方式,已被证明在血管平滑肌细胞重塑介导主动脉瘤的发生发展中发挥重要作用。目的:文章从主动脉瘤发生及进展过程中血管平滑肌细胞重塑的表观遗传调控机制进行综述。方法:以“Aortic aneurysm,Vascular smooth muscle,Smooth muscle cells,Epigenetic,DNA methylation,Histone modification,Non coding RNA”为英文检索词,以“主动脉瘤,血管平滑肌,平滑肌细胞,表观遗传,DNA甲基化,组蛋白修饰,非编码RNA”为中文检索词,分别检索PubMed、Web of Science以及中国知网数据库1970-2022年发表的相关文献,最终纳入71篇文献进行综述。结果与结论:①表观遗传修饰可通过靶向调节血管平滑肌细胞重塑、细胞外基质降解而影响主动脉瘤的发生进展,可在主动脉瘤治疗、延缓病情及改善预后发挥关键作用。②表观遗传相关酶分子(如DNA甲基化酶和组蛋白修饰酶)可通过调节血管平滑肌重塑如细胞增殖、迁移和凋亡等因素影响主动脉瘤的进展,可作为主动脉瘤药物治疗的参考靶点。③目前表观遗传修饰对主动脉瘤的研究尚处于基础研究阶段,且部分表观遗传修饰机制尚未探究清楚,未来随着此领域研究的不断发展,靶向表观遗传修饰在治疗主动脉瘤以及临床转化过程中有望实现新的突破。

关键词：主动脉瘤血管平滑肌平滑肌细胞表观遗传 DNA甲基化组蛋白修饰非编码RNA 综述

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延胡索乙素改善PDGF-BB诱导的VSMCs氧化应激损伤的机制

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中国药房 2024年第15期35卷 1855-1861页

作者：陈文明蹇明辉遵义医科大学附属医院心血管内科贵州遵义563000

目的研究延胡索乙素(Thp)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)氧化应激损伤的保护作用,并基于核因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路探究其可能机制。方法在Thp抑制PDGF-BB诱导的... 详细信息

目的研究延胡索乙素(Thp)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)氧化应激损伤的保护作用,并基于核因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路探究其可能机制。方法在Thp抑制PDGF-BB诱导的VSMCs氧化应激损伤效应研究中,将VSMCs分为对照组、PDGF-BB组(25 ng/mL)及Thp低、中、高浓度组(5、10、20 mg/mL)。在Thp作用机制研究(沉默Nrf2)中,将VSMCs分为PDGF-BB+阴性对照siRNA(NC-siNrf2)组(25 ng/mL PDGFBB+NC-siNrf2),PDGF-BB+Thp+NC-siNrf2组(25 ng/mL PDGF-BB+10 mg/mL Thp+NC-siNrf2),PDGF-BB+Nrf2小干扰RNA(siNrf2)组(25 ng/mL PDGF-BB+siNrf2),PDGF-BB+Thp+siNrf2组(25 ng/mL PDGF-BB+10.0 mg/mL Thp+siNrf2)。2个实验均检测VSMCs的增殖、迁移能力,活性氧(ROS)水平,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及Nrf2和HO-1蛋白表达。结果与对照组比较,PDGF-BB组VSMCs的增殖、迁移能力显著增强(P<0.01),ROS水平显著升高(P<0.01),SOD、CAT活性及Nrf2、HO-1蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.01);与PDGF-BB组比较,Thp不同浓度组VSMCs的增殖、迁移能力均显著下降(P<0.01),ROS水平均显著降低(P<0.01),SOD、CAT活性及Nrf2、HO-1蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.01)。沉默Nrf2可显著逆转Thp对PDGF-BB诱导VSMCs氧化应激损伤的改善作用(P<0.01)。结论Thp可以通过激活Nrf2介导的抗氧化防御途径来降低VSMCs的氧化应激水平,从而抑制VSMCs的增殖、迁移。

关键词：延胡索乙素血小板衍生生长因子-BB 血管平滑肌细胞 Nrf2/HO-1信号通路氧化应激

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秋水仙碱通过激活AMPK减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 226-235页

作者：陈国栋罗素新重庆医科大学附属第一医院心血管内科重庆400016

目的探究秋水仙碱(CCC)对心肌缺血再灌注损伤(I/R)的影响与相关机制。方法采用缺氧复氧(H/R)的方式在H9C2细胞上模拟缺血再灌注损伤,使用3 nmol/L秋水仙碱对行H/R处理的细胞进行干预;采用手术的方式在雄性C57/BL6小鼠上建立心肌缺血再... 详细信息

目的探究秋水仙碱(CCC)对心肌缺血再灌注损伤(I/R)的影响与相关机制。方法采用缺氧复氧(H/R)的方式在H9C2细胞上模拟缺血再灌注损伤,使用3 nmol/L秋水仙碱对行H/R处理的细胞进行干预;采用手术的方式在雄性C57/BL6小鼠上建立心肌缺血再灌注模型,将32只小鼠随机分为:假手术(SO)组,I/R组、I/R+CCC组和I/R+CCC+Dorsomorphin(DSMP)组,每组8只。使用CCK-8检测细胞活力,使用Western blot检测AMPK及其磷酸化水平、氧化应激指标(NOX4、NRF2、SOD2)和凋亡指标(BAX、Bcl-2、cleaved caspase-3),使用商用试剂盒检测心肌组织ATP含量,使用免疫荧光染色检测心肌组织8-OHdG和cleaved caspase-3阳性率,分离心肌线粒体和胞浆后分别检测线粒体BAX(Mito-BAX)和胞浆细胞色素C(Cyt-Cyto C),使用心脏超声评估心脏功能,使用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)溶液染色评估梗死面积,使用商用试剂盒检测血清乳酸脱氢酶(LDH)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)含量,为明确AMPK在其中的作用,使用DSMP抑制小鼠体内AMPK活性。结果体外实验中,H/R可以导致AMPK磷酸化水平、NRF2、SOD2和Bcl-2表达水平和细胞活力显著降低(P<0.05),并提高NOX4、BAX、cleaved caspase-3表达水平(P<0.05);秋水仙碱处理可以减轻H/R的损伤效应(P<0.05)。体内实验中,与SO组相比,I/R组AMPK磷酸化水平、ATP含量、NRF2、SOD2和Bcl-2表达水平、心脏功能均显著降低(P<0.05),NOX4、Mito-BAX、Cyt-Cyto C、BAX、cleaved caspase-3表达水平,心肌切片8-OHdG和cleaved caspase-3阳性染色率,心肌梗死面积,血清LDH和cTnT含量显著升高(P<0.05),秋水仙碱治疗可以逆转I/R带来的损伤效应(P<0.05),但DSMP可以抵消秋水仙碱的保护作用(P<0.05)。结论秋水仙碱可以通过激活AMPK减轻氧化应激和凋亡来减轻小鼠心肌缺血再灌注损伤,保护心功能。

关键词：秋水仙碱心肌缺血再灌注损伤 AMPK 氧化应激凋亡

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宽胸气雾剂改善冠心病PCI术后心绞痛患者生活质量临床研究

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：林志彬邓运生徐艳如梁桂连李崇信曾庆春南方医科大学南方医院心血管内科

目的观察宽胸气雾剂对冠心病经皮冠状动脉介入术（PCI）术后心绞痛患者临床疗效及生活质量的影响。方法选取2022年12月—2023年9月在南方医院诊断为冠心病接受PCI治疗后仍有心绞痛的患者72例。将患者随机分为试验组和对照组，每组各3... 详细信息

目的观察宽胸气雾剂对冠心病经皮冠状动脉介入术（PCI）术后心绞痛患者临床疗效及生活质量的影响。方法选取2022年12月—2023年9月在南方医院诊断为冠心病接受PCI治疗后仍有心绞痛的患者72例。将患者随机分为试验组和对照组，每组各36例。对照组给予常规药物治疗，试验组在常规药物治疗的基础上给予宽胸气雾剂舌下喷服，每次2喷，每日3次，连续喷服1个月。比较两组患者治疗前后的生活质量量表（SF-36）、西雅图心绞痛量表（SAQ）评分以及心绞痛缓解临床疗效。结果最终试验组35例和对照组34例患者完成试验。与本组治疗前比较，两组治疗后心绞痛发作频次、心绞痛发作持续时间降低，SAQ各维度评分增高（P0.05），但试验组显效率有升高趋势。结论宽胸气雾剂能降低冠心病PCI术后心绞痛发作次数及持续时间，并改善患者的生活质量。

关键词：宽胸气雾剂冠心病心绞痛生活质量中成药中西医结合

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肌集钙蛋白2与室性心律失常的研究进展

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中华心血管病杂志 2024年第2期52卷 199-204页

作者：陈佳翊武立达王如兴南京医科大学附属无锡人民医院心血管内科无锡214023

室性心律失常是一种常见的心律失常,是导致患者心原性猝死的重要原因。肌集钙蛋白2(Casq2)是Casq家族中的一种,广泛存在于哺乳动物肌肉细胞内质网中。近年来,Casq2通过基因突变和翻译后异常修饰等方式在室性心律失常发生发展中的作用逐... 详细信息

室性心律失常是一种常见的心律失常,是导致患者心原性猝死的重要原因。肌集钙蛋白2(Casq2)是Casq家族中的一种,广泛存在于哺乳动物肌肉细胞内质网中。近年来,Casq2通过基因突变和翻译后异常修饰等方式在室性心律失常发生发展中的作用逐渐为人所知。该文主要综述Casq2的在室性心律失常发生中的作用及机制,为临床室性心律失常的治疗提供潜在新靶点。

关键词：肌集钙蛋白2 兰尼碱受体室性心律失常基因转染

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miR-133a-3p修饰的间充质干细胞外泌体促进心肌梗死后大鼠心肌修复

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中华心血管病杂志 2024年第1期52卷 72-78页

作者：孙铃朱文武张健赵鹏程朱叶倩张凤祥南京医科大学第一附属医院、江苏省人民医院心血管内科南京210029 徐州市中心医院心血管内科徐州221000

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为... 详细信息

目的探讨miR-133a-3p修饰的人源脐带血间充质干细胞(ucMSC)衍生的外泌体对急性心肌梗死(AMI)后大鼠心肌修复的作用。方法体外扩增培养ucMSC,将携带miR-133a-3p的慢病毒载体及阴性对照载体分别转染至ucMSC,分别提取其分泌的外泌体,命名为miR-133a-3p-Exo及miR-NC-Exo。采用冠状动脉左前降支结扎术构建大鼠AMI模型,分别于梗死区边缘原位注射miR-133a-3p-Exo或miR-NC-Exo进行干预。干预后28 d,采用超声心动图检测大鼠心功能;采用Masson染色检测大鼠梗死后心肌纤维化面积;采用TUNEL染色评估梗死后大鼠心肌凋亡情况;采用免疫荧光染色评估梗死后大鼠血管新生情况。结果与miR-NC-Exo组相比,miR-133a-3p-Exo组在AMI后28 d左心室射血分数较高[(64.2%±8.9%)比(47.4%±9.8%),P血管的数量均较多[CD31:(13.9±2.0)条比(2.9±0.9)条,α-SMA:(11.0±1.6)条比(3.5±0.9)条,P均血管新生,从而改善AMI后大鼠的心功能。

关键词：微RNAs 间充质干细胞外泌体急性心肌梗死心肌修复

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冰片通过TRPM8减轻小鼠心肌梗死后炎症反应和心脏重构

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中国病理生理杂志 2024年

作者：何滢蓉胡陶王武帅杨曦段清华杜萱王强成都医学院西部战区总医院心血管内科西南医科大学临床医学院心血管内科

目的：研究冰片（borneol）对小鼠心肌梗死（myocardial infarction, MI）后炎症反应和心脏重构的作用及可能机制。方法：8周龄野生型（wild-type, WT）C57BL/6小鼠和瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(transient receptor potential ... 详细信息

目的：研究冰片（borneol）对小鼠心肌梗死（myocardial infarction, MI）后炎症反应和心脏重构的作用及可能机制。方法：8周龄野生型（wild-type, WT）C57BL/6小鼠和瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8(transient receptor potential cation channel subfamily M member 8, TRPM8)基因敲除（TRPM8 gene knockout, TRPM8-/-）小鼠随机分为假手术组和MI组，再分别用生理盐水（对照组）或冰片（冰片组）灌胃。绘制小鼠MI后生存曲线，28 d后超声心动图检测心脏功能，多导生理记录仪测量血流动力学参数，病理染色观察MI面积、心肌肥大和间质纤维化，并检测梗死交界区心肌中炎症反应情况。结果：在WT小鼠中，梗死交界区心肌组织中TRPM8表达显著增加（P0.05），但可提高小鼠生存率，缩小MI面积，抑制MI后心脏重构，改善心脏功能（P0.05）。在WT小鼠中，冰片可减少中性粒细胞和巨噬细胞的浸润（P0.05）。结论：TRPM8可能是冰片在心脏的作用靶点；冰片可能通过TRPM8减轻MI后炎症反应和抑制心脏重构，改善小鼠MI后的心脏功能。

关键词：心肌梗死心脏重构冰片瞬时受体电位阳离子通道M亚家族成员8 炎症

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宽胸气雾剂改善冠心病PCI术后心绞痛患者生活质量随机对照研究

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中国中西医结合杂志 2024年第2期44卷 138-142页

作者：林志彬邓运生徐艳如梁桂连李崇信曾庆春南方医科大学南方医院心血管内科广州510515

目的观察宽胸气雾剂对冠心病经皮冠状动脉介入术(PCI)术后心绞痛患者临床疗效及生活质量的影响。方法选取2022年12月—2023年9月在南方医院诊断为冠心病接受PCI治疗后仍有心绞痛的患者72例。将患者随机分为试验组和对照组,每组各36例。... 详细信息

目的观察宽胸气雾剂对冠心病经皮冠状动脉介入术(PCI)术后心绞痛患者临床疗效及生活质量的影响。方法选取2022年12月—2023年9月在南方医院诊断为冠心病接受PCI治疗后仍有心绞痛的患者72例。将患者随机分为试验组和对照组,每组各36例。对照组给予常规药物治疗,试验组在常规药物治疗的基础上给予宽胸气雾剂舌下喷服,每次2喷,每日3次,连续喷服1个月。比较两组患者治疗前后的生活质量量表(SF-36)、西雅图心绞痛量表(SAQ)评分以及心绞痛缓解临床疗效。结果最终试验组35例和对照组34例患者完成试验。与本组治疗前比较,两组治疗后心绞痛发作频次、心绞痛发作持续时间降低,SAQ各维度评分增高(P0.05),但试验组有升高趋势。结论宽胸气雾剂能降低冠心病PCI术后心绞痛发作次数及持续时间,并改善患者的生活质量。

关键词：宽胸气雾剂冠心病心绞痛生活质量中成药中西医结合随机对照试验

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