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lincRNA—ROR作为一个内源竞争RNA通过结合miR-145调节Oct4、Sox2和Nanog对结直肠癌干细胞生物学特性的影响及临床意义

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中华病理学杂志 2018年第4期47卷 284-290页

作者：闫振宇孙新超河南省南阳市中心医院病理科 473009 河南省南阳市第二人民医院病理科

目的探讨长链非编码RNA（lincRNA）－ROR作为一个内源竞争RNA（ceRNA）结合miR－145对下游干性相关基因Oct4、Sox2和Nanog的表达，及对结直肠癌干细胞生物学特性的影响，并阐明这种分子调控网络的临床意义。方法收集2014年至2016年间河... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA（lincRNA）－ROR作为一个内源竞争RNA（ceRNA）结合miR－145对下游干性相关基因Oct4、Sox2和Nanog的表达，及对结直肠癌干细胞生物学特性的影响，并阐明这种分子调控网络的临床意义。方法收集2014年至2016年间河南省南阳市中心医院及南阳市第二人民医院胃肠外科结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织共52例，采用即时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测52例临床患者结直肠癌组织标本及结直肠癌细胞系中lincRNA－ROR、miR－145的表达；分析lincRNA－ROR和miR－145的表达与结直肠癌临床病理特征的相关性；流式细胞术从SW1116中分离CD44－CD133－和CD44＋CD133＋细胞；qPCR检测细胞中CD44、CD133、Oct4、Sox2、Nanog表达及CD44＋CD133＋细胞贴壁黏附后CD44、CD133、lincRNA－ROR、miR－145表达；生物信息学分析miR－145与lincRNA－ROR及核心转录因子Oct4、Sox2、Nanog之间靶向调控关系，双荧光素酶报告基因实验、qPCR、Western blot进行验证；噻唑蓝法、克隆形成检测沉默lincRNA－ROR对结直肠癌干细胞增殖及化疗敏感性的影响。结果结直肠癌组织中lincRNA－ROR高表达，miR－145低表达，两者呈显著负相关（P〈0.05）；lincRNA－ROR表达与肿瘤大小、淋巴结转移、远端转移有关（P〈0.05），miR－145表达与肿瘤大小、肿瘤位置有关（P〈0.05）；流式细胞术成功分选出CD44＋CD133＋和CD44－ CD133－细胞，CD44＋CD133＋细胞中CD44、CD133、Oct4、Sox2、Nanog、lincRNA－ROR较CD44－ CD133－细胞高表达，miR－145低表达（P〈0.05）；贴壁黏附后CD44、CD133、lincRNA－ROR表达明显降低，miR－145表达增加（P〈0.05）；lincRNA－ROR能够结合miR－145调控Oct4、Sox2和Nanog表达；沉默lincRNA－ROR可显著抑制结直肠癌干细胞增殖克隆形成能力，增加其对顺铂、紫杉醇敏感性。结论lincRNA－ROR结合miR－145调控核心转录因子Oct4、Sox2和Nanog表达来影响结直肠癌干细胞增殖及化疗敏感性，为后续研究结直肠癌发生发展中遗传网络组分之间相互作用的病理生理功能提供了新见解，为结直肠癌治疗提供新思路。

关键词：结直肠肿瘤肿瘤干细胞微RNAs 细胞系肿瘤

葡萄糖调节蛋白78对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响

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中华病理学杂志 2016年第6期45卷 401-406页

作者：吉秋霞刘丽丽李琳邢晓明青岛大学附属医院病理科 266003 山东省东营市人民医院病理科山东省禹城市人民医院病理科

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建编码GRP78的shRNA慢病毒表达载体pLV。shRNAGRP78及阴性对照慢病毒表达载体pLV—control，分别转染人结直肠癌细胞系RKO。四甲基偶氮唑盐法实验和... 详细信息

目的探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对人结直肠癌RKO细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建编码GRP78的shRNA慢病毒表达载体pLV。shRNAGRP78及阴性对照慢病毒表达载体pLV—control，分别转染人结直肠癌细胞系RKO。四甲基偶氮唑盐法实验和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞周期的分布情况，划痕实验检测细胞迁移能力，裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内成瘤能力。Affymetrix人全基因组表达芯片检测GRP78表达抑制后RKO细胞中基因表达谱的变化。Westernblot技术验证部分差异基因以确定结果的可靠性。结果转染pLV—shRNAGRP78后，RKO细胞增殖能力及克隆形成数目明显受到抑制（P〈0．05），但迁移能力没有明显变化（P〉0．05）；流式细胞术检测结果显示，沉默GRP78导致G，期细胞比例显著增加，而s期细胞比例显著降低（P〈0．05）；裸鼠成瘤实验结果显示，沉默GRP78导致肿瘤细胞在裸鼠皮下成瘤能力显著减弱（P〈0．05）。基因芯片检测结果显示，GRP78表达抑制后，共有397个基因的表达发生改变（与对照组相比，变化表达倍数≥1．2），其中上调的基因258个，下调139个，这些基因主要涉及信号转导、细胞代谢、细胞凋亡等功能。通过生物信息学分析，筛选3个（CDKN2B、MTOR及BIRC3）特异相关的差异基因进行Westernblot验证，验证结果与芯片结果相符。结论沉默GRP78可通过抑制人结直肠癌RKO细胞周期G，／S期转换，从而抑制细胞的体内外增殖生长能力，但对细胞的迁移能力无显著影响。通过基因芯片技术能够筛选和鉴定与GRP78表达改变相关的基因。GRP78可能通过调控这些基因的表达从而影响结直肠癌细胞的增殖能力。

关键词：结直肠肿瘤细胞增殖细胞迁移分析细胞系,肿瘤葡萄糖调节蛋白78

METTL3介导m6A修饰长链非编码RNA THAP7-AS1表达上调促进肺癌发生的作用及机制研究

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中国肺癌杂志 2023年第12期26卷 919-933页

作者：张瑜王彦宏刘美甘肃省白银市第二人民医院病理科白银730900 中国人民解放军68303部队卫生连

背景与目的肺癌是对人类健康的一大威胁,有关肺癌发生发展的分子机制复杂且知之尚少,探索与肺癌发展相关的分子标志物有利于提高早期诊断和治疗的效果。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)THAP7-AS1已知在胃癌中高表达,但在其... 详细信息

背景与目的肺癌是对人类健康的一大威胁,有关肺癌发生发展的分子机制复杂且知之尚少,探索与肺癌发展相关的分子标志物有利于提高早期诊断和治疗的效果。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)THAP7-AS1已知在胃癌中高表达,但在其他癌症中研究较少。本研究旨在探究甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3,METTL3)介导N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰lncRNA THAP7-AS1表达上调促进肺癌发生的作用及机制。方法收集120例肺癌与对应癌旁组织样本,lncRNA微阵列分析差异表达的lncRNA,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测肺癌、癌旁组织、肺癌细胞系THAP7-AS1表达,分析THAP7-AS1对肺癌的诊断价值以及其表达水平与肺癌患者生存率、临床病理特征的关系。通过生物信息学分析、甲基化RNA免疫共沉淀(methylated RNA immunoprecipitation,meRIP)、RNA pulldown实验、RIP实验探究THAP7-AS1的分子调节机制;通过MTS、克隆形成、划痕、Transwell、体内异种移植实验测定各组SPC-A-1、NCI-H1299细胞增殖、迁移、侵袭、成瘤能力,Western blot检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kenase B,PI3K/AKT)信号通路蛋白表达。结果肺癌组织、细胞系THAP7-AS1表达升高(P二磷酸3-激酶催化亚基α(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha,PI3KCA)、磷脂酰肌醇-3激酶催化亚基δ(phosphoinositide-3 kinase-catalytic subunit delta,PI3KCD)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phospho-phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-AKT)、磷酸哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphomammalian target of rapamycin,p-mTOR)表达水平升高(P<0.05)。结论LncRNA THAP7-AS1通过METTL3介导的m6A修饰稳定表达,与CUL4B结合激活PI3K/AKT信号通路,促进肺癌发生发展。

关键词：甲基转移酶样3 N6-甲基腺苷长链非编码RNA THAP7-AS1 肺肿瘤增殖

肝细胞癌患者血清外泌体LncRNAZFAS1表达临床意义

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中华肿瘤防治杂志 2019年第12期26卷 849-854页

作者：吴锋王翠香田华东营市第二人民医院检验科山东东营257335 东营市第二人民医院麻醉科山东东营257335 东营市第二人民医院耳鼻喉科山东东营257335

目的长链非编码核糖核酸(long-chain noncoding ribonucleic acid,LncRNA)锌指蛋白反义链1(ZFAS1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展中发挥重要作用。本研究探讨HCC患者血清外泌体中LncRNA ZFAS1表达水平,分析其临床意义。方法以2012-04-01-2014-01-31东营市第二人民医院肿瘤科收治的84例HCC患者为研究对象(HCC组);选取慢性肝炎和肝硬化患者共50例作为良性肝病组,另取同期健康体检者50名为对照组。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测受试者血清外泌体中LncRNA ZFAS1表达水平,分析其与HCC临床病理特征和患者预后关系。结果HCC组、良性肝病组和对照组血清外泌体LncRNA ZFAS1表达水平分别为3.62±0.84、1.56±0.41和1.02±0.29,组间比较差异有统计学意义,F=325.56,P<0.001;两两多重比较结果显示HCC组高于良性肝病组(t=16.212,P<0.001)和对照组(t=21.123,P<0.001);良性肝病组高于对照组,t=7.603,P<0.001。血清外泌体中LncRNA ZFAS1表达水平与HCC患者肿瘤分期(χ^2=6.980,P=0.008)、Child-pugh分级(χ^2=4.061,P=0.044)、AFP水平(χ^2=4.842,P=0.028)和淋巴转移(χ^2=5.010,P=0.025)有关联。LncRNA ZFAS1低表达组无进展生存期(progression-free survival,PFS)为60.71%,高于高表达组的37.50%,χ^2=4.061,P=0.044;LncRNA ZFAS1低表达组总生存期(overall survival time,OS)为64.29%,高于高表达组的39.29%,χ^2=4.677,P=0.031。多因素分析显示,LncRNA ZFAS1高表达水平(HR=2.687,95%CI:2.224~3.246,P=0.002)和肿瘤分期(HR=1.578,95%CI:1.061~2.346,P=0.046)是影响HCC患者预后独立危险因素。血清外泌体LncRNA ZFAS1诊断HCC曲线下面积(area under curve,AUC)为0.920(95%CI:0.876~0.965),约登指数为0.798,截断值为1.783,敏感度为90.5%,特异度为89.0%。结论HCC患者血清外泌体中LncRNA ZFAS1显著高表达,与HCC患者预后有关,检测血清外泌体LncRNA ZFAS1表达水平对诊断HCC有一定参考价值,可作为HCC患者诊断及预后判断参考指标。

关键词：肝细胞癌锌指蛋白反义链1 临床病理特征预后

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柯洛根勃氏瘤的B超诊断

中国超声医学杂志 1995年第7期 550-551页

作者：沈振松徐丽萍何瑾杭州市第二人民医院浙江省余杭市中医院

柯洛根勃氏瘤的Ｂ超诊断浙江省余杭市中医院邮政编码３１１１０６沈振松，徐丽萍，何瑾本文报告超声诊断柯洛根勃氏瘤１２例，胃癌组（经手术病理证实）７例，年龄１８～３２岁，平均２４岁，已婚５例，未婚２例（均有性生活史）。胃癌... 详细信息

柯洛根勃氏瘤的Ｂ超诊断浙江省余杭市中医院邮政编码３１１１０６沈振松，徐丽萍，何瑾本文报告超声诊断柯洛根勃氏瘤１２例，胃癌组（经手术病理证实）７例，年龄１８～３２岁，平均２４岁，已婚５例，未婚２例（均有性生活史）。胃癌切除术后组５例，平均年龄５１．５岁...

关键词：胃癌切除术余杭市浙江省中医院洛根性生活史粘液癌粘液腺癌超诊断

RNA干扰应用于抑制脊髓损伤急性期白细胞介素6受体表达的实验(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第32期11卷 6497-6501页

作者：高明勇肖建德李振宇闫洪印余铮田长庆陈扬顾洪生深圳市第二人民医院脊柱外科广东省深圳市518035

背景:由于中枢神经损伤后局部微环境病理生理机制极其复杂,尤其急性期炎性反应及继发胶质瘢痕形成对有效轴突再生、局部神经细胞再生排列及局部干细胞增殖迁徙影响极大,成为早期阻碍神经修复的根本原因,故如何有效拮抗损伤区急性期炎性... 详细信息

背景:由于中枢神经损伤后局部微环境病理生理机制极其复杂,尤其急性期炎性反应及继发胶质瘢痕形成对有效轴突再生、局部神经细胞再生排列及局部干细胞增殖迁徙影响极大,成为早期阻碍神经修复的根本原因,故如何有效拮抗损伤区急性期炎性损伤因素,优化神经再生微环境是目前脊髓损伤修复的重要策略之一。目的:应用大鼠脊髓损伤模型,设计构建并筛选最佳白细胞介素6受体α表达抑制shRNA腺病毒表达载体。设计:重复测量实验。单位:深圳市第二人民医院脊柱外科。材料:选用健康Wistar大鼠40只,雌雄不拘,鼠龄8～10周。兔抗鼠GFAP一抗购自Santa Cruz公司,siRNA构建真核表达质粒pGenesil(携带绿色荧光表达系统)购自武汉晶赛生物工程技术公司。方法:实验于2006-11在武汉同济医学院基础医学部免疫教研室开放实验室及深圳市第二人民医院医学实验中心完成。针对白细胞介素6受体α基因编码序列设计并合成三对9bp茎环结构19bp干扰序列特异性shRNA模板,体外构建带绿色荧光蛋白的重组腺病毒表达载体;并建立大鼠急性脊髓损伤模型,损伤后12h局部注射编码shRNA重组腺病毒,通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术,观察RNA干扰后损伤脊髓局部白细胞介素6R表达抑制效果,筛选最佳抑制白细胞介素6R表达的腺病毒表达载体。主要观察指标:RNA干扰后损伤脊髓局部IL-6RRNA表达、蛋白表达水平抑制效果。结果:序列测定证实白细胞介素6R-shRNA重组腺病毒表达载体构建成功,通过实时荧光定量RT-PCR,Western blot技术筛选出最佳白细胞介素6R-shRNA效应腺病毒表达载体,在mRNA及蛋白表达水平抑制白细胞介素6R基因表达效率分别为49%和56%。结论:构建并筛选成功的白细胞介素6R-shRNA效应腺病毒表达载体,在大鼠急性脊髓损伤模型中能高效抑制白细胞介素6R基因表达。

关键词：脊髓损伤 RNA干扰白细胞介素6受体α 腺病毒组织构建

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二维超声对肾窦成像规律的应用研究

中国超声医学杂志 1995年第7期 515-516页

作者：时伟蒋晓光韩山理陈振秀杨帮成安徽省阜阳市保健院阜阳地区第二人民医院

二维超声对肾窦成像规律的应用研究安徽省阜阳市保健院邮政编码２３６００３时伟，蒋晓光，韩山理阜阳地区第二人民医院陈振秀，杨帮成肾小结石、肾盂内小肿瘤、集合系统的感染性疾患等疾病，往往与肾窦回声相仿，不具有某种声像图特征... 详细信息

二维超声对肾窦成像规律的应用研究安徽省阜阳市保健院邮政编码２３６００３时伟，蒋晓光，韩山理阜阳地区第二人民医院陈振秀，杨帮成肾小结石、肾盂内小肿瘤、集合系统的感染性疾患等疾病，往往与肾窦回声相仿，不具有某种声像图特征，以致造成临床及超声上的很多漏诊、...

关键词：二维超声肾窦回声反射声高回声区成像规律短轴切面

肺部结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤11例临床病理学分析

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中华病理学杂志 2019年第6期48卷 433-437页

作者：高献争魏建国李晟磊王冠男韩静赵武干谢艺林李文才郑州大学第一附属医院病理科 450052 浙江省绍兴市人民医院病理科 312000

目的探讨肺部结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma,nasal type,ENKTL-NT)的临床病理特点、诊断及鉴别诊断。方法收集郑州大学第一附属医院2013年8月至2018年11月间11例诊断为肺部ENKTL-NT的病例,结合组织形态学、免... 详细信息

目的探讨肺部结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T-cell lymphoma,nasal type,ENKTL-NT)的临床病理特点、诊断及鉴别诊断。方法收集郑州大学第一附属医院2013年8月至2018年11月间11例诊断为肺部ENKTL-NT的病例,结合组织形态学、免疫组织化学和原位杂交检测,观察分析其临床病理特点,并结合文献进行讨论。结果11例肺部ENKTL-NT中,男性8例,女性3例,男女之比为8∶3;年龄30~74岁,中位年龄43岁,平均年龄48岁;发生部位:左肺上、下叶各1例,右肺下叶1例,双肺均累及者8例。临床症状主要表现为发热,并常伴咳嗽、咳痰,多数痰中带血。11例标本中10例为粗针穿刺,1例为支气管活检。所有病例均为ⅣE期。组织形态学特点为凝固性坏死和多种炎性细胞混合浸润的背景上,具有明显多形性的肿瘤性淋巴细胞散在或灶性分布,仅少数病例内肿瘤性淋巴细胞弥漫分布,少数病例可见血管中心性和血管破坏性浸润。免疫学标记:肿瘤细胞多数表达CD3ε、CD3、CD43、CD56、T细胞胞质内抗原1、颗粒酶B,不表达CD20、CD79a、CD5,Ki-67阳性指数较高,约40%~90%,EB病毒编码的小mRNA原位杂交均阳性。5例获得随访(1~62个月),其中4例死亡,生存期1周至13个月。结论肺部ENKTL-NT少见,恶性度高,预后差;送检标本多为穿刺活检标本,因坏死较多,细胞成分较杂,极易漏诊或误诊,结合临床病史、免疫组织化学和原位杂交可有效提高肺穿刺标本中ENKTL-NT的诊断。

关键词：肺肿瘤淋巴瘤,结外NK-T细胞免疫组织化学

长链非编码RNASPRY4-IT1对膀胱癌生长的影响

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安徽医科大学学报 2016年第7期51卷 978-984页

作者：陈明伟黎健发庄成乐刘宇辰陈志聪何安邦张巧霞黄卫人蔡志明安徽医科大学深圳市第二人民医院临床学院泌尿外科深圳518035 深圳市第二人民医院中心实验室深圳518035 深圳市第二人民医院泌尿外科深圳518035

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)SPRY4内含子转录本1(SPRY4-IT1)对膀胱癌生长的影响。方法使用qRT-PCR法检测SPRY4-IT1标本和细胞表达水平并分析其临床病理特征之间的关联;使用特异性小干扰RNA(siSPRY4-IT1)转染两种膀胱癌细胞,使用qRT-... 详细信息

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)SPRY4内含子转录本1(SPRY4-IT1)对膀胱癌生长的影响。方法使用qRT-PCR法检测SPRY4-IT1标本和细胞表达水平并分析其临床病理特征之间的关联;使用特异性小干扰RNA(siSPRY4-IT1)转染两种膀胱癌细胞,使用qRT-PCR法检测siSPRY4-IT1效果,再分别以CCK-8实验、MTT实验、划痕实验、ELISA实验和流式细胞术检测SPRY4-IT1对膀胱癌细胞在增殖、迁移和凋亡等方面的影响。结果 SPRY4-IT1在膀胱癌组织中高表达(68.33%,P=0.026 3)。SPRY4-IT1表达水平与病理分级(P<0.05)和TMN分期(P<0.001)有关。SPRY4-IT1在5637(P=0.002 29)和T24(P=0.000 12)细胞中明显高表达。si-SPRY4-IT1可显著降低SPRY4-IT1表达(P<0.001);si-SPRY4-IT1可显著抑制两种细胞的增殖、迁移和增加凋亡(P<0.01)。结论 SPRY4-IT1在膀胱癌标本组织和细胞水平中高表达,有促进膀胱癌细胞生长的作用,在膀胱癌中起着癌基因的作用。

关键词：膀胱癌长链非编码RNA SPRY4-IT1 细胞增殖细胞迁移细胞凋亡