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2型糖尿病阴虚证病证结合分子网络模型的构建与初证

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中医杂志 2022年第15期63卷 1470-1478页

作者：郭航战丽彬孙晓霞陈宁翁泽斌南京中医药大学中医学院/中西医结合学院江苏省南京市210023 辽宁中医药大学

目的运用网络生物学方法构建2型糖尿病(T2DM)阴虚证病证结合分子网络,探究其生物学基础,并进行实验验证。方法整合DisGeNET、DrugBank、TTD、MalaCards、OMIM、CTD、GEO数据库信息,获得T2DM疾病相关基因。运用社团发现算法将STRING数据... 详细信息

目的运用网络生物学方法构建2型糖尿病(T2DM)阴虚证病证结合分子网络,探究其生物学基础,并进行实验验证。方法整合DisGeNET、DrugBank、TTD、MalaCards、OMIM、CTD、GEO数据库信息,获得T2DM疾病相关基因。运用社团发现算法将STRING数据库中的PPI网络划分为拓扑模块,将疾病相关基因映射至模块中获得T2DM疾病模块。将从SymMap、HPO、GeneCards数据库获取的阴虚证症状对应基因映射至疾病模块,从而筛选出T2DM阴虚证病证结合模块。再通过治疗T2DM西药对应靶点与模块靶点对应关系,以及滋阴方剂靶点与病证结合模块的相关性分析,验证结果的可靠性。借助Metascape平台对分子网络进行GO和KEGG富集分析。最后采用温热伤阴法构建病证结合小鼠模型,分为正常对照组、单纯阴虚证组、2型糖尿病组、2型糖尿病阴虚证组,取血清和下丘脑组织对预测的关键靶点进行验证。结果筛选出1514个T2DM疾病相关基因以及1547个T2DM阴虚证相关基因,确定了19个与T2DM密切相关的疾病模块,并将其中的7个与阴虚证相关的模块定义为T2DM阴虚证病证结合模块。经过西药靶点、滋阴方剂的验证,最终确立T2DM阴虚证病证结合核心模块Mem3、5、39。富集分析揭示生物学基础可能涉及糖脂代谢紊乱、免疫炎症、内分泌紊乱等诸多病理过程。对Mem5及Mem39的核心靶点白细胞介素6(IL-6)及鸟嘌呤核苷酸结合蛋白q多肽(GNAQ)介导通路相关蛋白即异源三聚体嘌呤核苷酸结合蛋白(Gq)、磷脂酶Cβ1(PLCβ1)、磷脂酶Cβ3(PLCβ3)蛋白进行验证,结果提示2型糖尿病阴虚证组小鼠血清中IL-6水平及下丘脑Gq、PLCβ1蛋白表达显著高于正常对照组和2型糖尿病组(P<0.05或P<0.01)。结论G蛋白信号转导系统、糖脂代谢、免疫功能、炎症反应、内分泌紊乱等是2型糖尿病阴虚证核心生物学过程。

关键词： 2型糖尿病阴虚证网络生物学病证结合模块

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基于超星学习通的解剖学翻转课堂应用

中国中医药现代远程教育 2022年第12期20卷 21-23页

作者：崔勇王冰鲍美阳祝宏江王柏力刘海兴辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110847

在移动网络普及、5G网络迅猛发展的背景下,利用超星学习通,在原有线下互动式教学方法的基础上结合线上平台辅助教学,做好学情分析与教学准备、课前预习材料制作与发布、课堂中知识内化以及课后反馈与形成性成绩评价,研究利用信息化手段... 详细信息

在移动网络普及、5G网络迅猛发展的背景下,利用超星学习通,在原有线下互动式教学方法的基础上结合线上平台辅助教学,做好学情分析与教学准备、课前预习材料制作与发布、课堂中知识内化以及课后反馈与形成性成绩评价,研究利用信息化手段辅助教学的有效方法,提高教学效果。基于超星学习通的翻转课堂教学模式符合“以学生为中心”的教育教学理念,是解剖学教学方式改革的有益尝试。

关键词：超星学习通解剖学翻转课堂

白术内酯Ⅱ逆转M2型巨噬细胞极化调控PDL1表达抑制A549细胞迁移

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天然产物研究与开发 2023年第11期35卷 1857-1863页

作者：蒋宗蓥赵云辉张云亭郑一王建光刘羽茜王艳杰辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847

探究白术内酯Ⅱ(atractylenolideⅡ,AT-Ⅱ)对M2型巨噬细胞极化与A549细胞迁移能力的影响,并分析其潜在机制。利用PMA将THP-1细胞诱导成M0巨噬细胞,然后加入IL-4和IL-13继续诱导为M2型巨噬细胞。利用Transwell小室将M2型巨噬细胞与A549... 详细信息

探究白术内酯Ⅱ(atractylenolideⅡ,AT-Ⅱ)对M2型巨噬细胞极化与A549细胞迁移能力的影响,并分析其潜在机制。利用PMA将THP-1细胞诱导成M0巨噬细胞,然后加入IL-4和IL-13继续诱导为M2型巨噬细胞。利用Transwell小室将M2型巨噬细胞与A549细胞共培养,分别给予0、2.5、5μmol/L的AT-Ⅱ进行作用。采用MTT实验测定共培养条件下AT-Ⅱ对A549细胞活力的影响;采用Real-time PCR检测M2型巨噬细胞Arg-1的mRNA表达水平;采用ELISA检测共培养体系中TNF-α、IL-1β的含量;采用WB检测A549细胞TLR4、p-p65、NF-κB(p65)、PDL1的蛋白表达水平;采用划痕实验检测A549细胞的迁移能力。结果显示,共培养条件下,与对照组相比,实验组(2.5、5μmol/L)A549细胞活力降低(2.5μmol/L组P>0.05、5μmol/L组P0.05);A549细胞TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白TLR4、p-p65、NF-κB(p65)蛋白表达水平降低(P<0.01);A549细胞PDL1蛋白表达水平显著降低(P<0.01),A549细胞迁移能力下降。以上结果表明,AT-Ⅱ可以逆转M2型巨噬细胞极化,抑制A549细胞TLR4/NF-κB信号通路降低PDL1的表达水平,从而抑制肺癌细胞的迁移。

关键词：白术内酯Ⅱ A549细胞 M2型巨噬细胞 PDL1蛋白

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具有调节血糖功效的复合植物酵素的研究

食品与发酵工业 2023年第17期49卷 62-68页

作者：陈青青董墨思石岩张雨婷杨宇峰李苏红沈阳农业大学食品学院辽宁沈阳110866 辽宁中医药大学中西医结合学院、中医学院辽宁沈阳110847

该研究以红参、玉竹、马齿苋、枸杞、柚子、南瓜、生姜、芹菜、山药为原料制备酵素。通过单因素及星点设计-响应面试验确定酵素制备的最优条件,通过α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制试验及大鼠试验探究酵素的血糖调节功能。结果表明,发酵... 详细信息

该研究以红参、玉竹、马齿苋、枸杞、柚子、南瓜、生姜、芹菜、山药为原料制备酵素。通过单因素及星点设计-响应面试验确定酵素制备的最优条件,通过α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制试验及大鼠试验探究酵素的血糖调节功能。结果表明,发酵时间为49.5 h,发酵温度为37℃,复合乳酸菌添加量为0.1%(质量分数)时效果最好,低聚果糖添加量对α-淀粉酶抑制率无显著影响(P>0.05)。酵素对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的IC_(50)值分别为(16.54±0.40)和(46.54±6.50)mL/L,酵素含量为33.3 mL/L时可完全抑制α-淀粉酶活性。大鼠试验表明酵素能明显改善糖尿病大鼠的空腹血糖。该研究确定了复合植物酵素的最优发酵工艺,通过抑制酶活性和降低大鼠空腹血糖确定酵素有调节血糖作用,为开发具有调节血糖功效的复合植物酵素提供理论依据。

关键词：酵素调节血糖星点设计-响应面优化 α-淀粉酶 α-葡萄糖苷酶

基于生信分析对阿尔茨海默病炎症相关关键基因的筛选及鉴定

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天津医科大学学报 2023年第5期29卷 486-493页

作者：司蕊豪刘羽茜朱仲康王旭侯文晓赵丹玉辽宁中医药大学中西医结合学院生物化学教研室沈阳110847 辽宁中医药大学中西医结合学院生理学教研室沈阳110847 辽宁中医药大学中西医结合学院组织与胚胎学教研室沈阳110847

目的:筛选并鉴定阿尔茨海默病(AD)神经炎症相关关键基因。方法:用R语言limma包分别筛选GEO数据库中的数据集GSE144459(Healthy=16,AD=16)和GSE135999(Healthy=6,AD=7)中的差异基因(DEGs);用在线韦恩图工具对上述获得的差异表达基因(DEG1... 详细信息

目的:筛选并鉴定阿尔茨海默病(AD)神经炎症相关关键基因。方法:用R语言limma包分别筛选GEO数据库中的数据集GSE144459(Healthy=16,AD=16)和GSE135999(Healthy=6,AD=7)中的差异基因(DEGs);用在线韦恩图工具对上述获得的差异表达基因(DEG1、DEG2)与NCBI数据库获得(IRGs)取交集,以获得差异表达的IRGs;用R语言clusterProfiler包对其进行功能富集分析;通过STRING数据库(https://***)和Cytoscape软件对差异表达IRGs进行PPI网络构建,并用cytoHubba插件来筛选PPI中的关键节点作为候选基因。后续用于LASSO回归分析进一步筛选特征基因并构建分类器,用数据集GSE122063(AD=56,Control=44)验证特征基因的表达并绘制箱线图。结果:本研究共获得106个差异表达的IRGs。富集分析与金黄色葡萄球菌感染、中性粒细胞外陷阱形成、Toll样受体、FcγR介导吞噬作用等功能及信号通路相关。经过PPI网络的构建、LASSO回归分析、分类器构建及受试者工作特征(ROC)曲线绘制以及特征基因的表达验证,最终得出Fcgr2b、Cd14、Fcgr1、Fcgr3、Ly86在AD中具有较强的预测诊断能力。结论:Fcgr2b、Cd14、Fcgr1、Fcgr3、Ly86在AD中起着关键作用,可以作为AD潜在的诊断和治疗靶点。

关键词：阿尔茨海默病炎症生信分析

基于IGF-1R信号通路探讨去甲斑蝥素诱导宫颈癌细胞凋亡的作用机制

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沈阳药科大学学报 2021年第8期38卷 832-838页

作者：董秀冯晓丹毛雪包红王艳杰辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学信息工程学院辽宁沈阳110847

目的观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)诱导的超氧阴离子对IGF-1R的表达影响,探讨NCTD调控宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法体外培养HeLa细胞24h后,直接加入60μmol·L^(-1)NCTD作用至指定时间,或者先加入20μmol·L^(-1)AG1024(I... 详细信息

目的观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)诱导的超氧阴离子对IGF-1R的表达影响,探讨NCTD调控宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法体外培养HeLa细胞24h后,直接加入60μmol·L^(-1)NCTD作用至指定时间,或者先加入20μmol·L^(-1)AG1024(IGF-1R的特异性酪氨酸激酶磷酸化抑制剂)或10μmol·L^(-1)genistein(总的酪氨酸激酶抑制剂)或超氧阴离子清除剂超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)作用1 h后,再加入60μmol·L^(-1)NCTD继续培养至指定时间点,然后采用甲基噻唑蓝比色法(MTT)检测AG1024和genistein对NCTD诱导的细胞毒性的影响;采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;采用流式细胞分析法检测细胞凋亡情况和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生变化;采用ELISA测定IGF-1R酪氨酸激酶的活力;采用免疫蛋白印迹法观察IGF-1R和p-IGF-1R的蛋白表达水平变化。结果AG1024和genistein预处理HeLa细胞后,能够显著促进NCTD对HeLa细胞的生长抑制作用;AG1024预处理再加入NCTD作用,细胞皱缩、变圆,出芽形成明显的凋亡小体。AG1024预处理再加入NCTD显著地升高了NCTD诱导的SubG1峰值;NCTD能时间依赖性的显著下调p-IGF-1R表达水平。SOD预处理后降低了NCTD诱导的ROS的产生。NCTD对IGF-1R信号通路有抑制作用,但SOD预处理后影响了NCTD对IGF-1R的酪氨酸激酶活力的抑制作用。AG1024促进了NCTD诱导的超氧阴离子产生,增加了NCTD对p-IGF-1R蛋白表达的抑制作用。结论NCTD可能是通过超氧阴离子的产生发挥其对IGF-1R通路的抑制作用,介导HeLa细胞凋亡。

关键词：去甲斑蝥素胰岛素生长因子I型受体超氧阴离子细胞凋亡

2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型的建立与评价

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中国中西医结合杂志 2023年第2期43卷 200-211页

作者：孙晓霞任威铭陈宁崔荣兴翁泽斌战丽彬南京中医药大学中医学院·中西医结合学院南京210023 辽宁中医药大学中医药创新工程技术中心沈阳110847

目的建立2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型,制定模型评价方法。方法SPF级雄性db/db小鼠随机分为糖尿病组(简称D组)10只和病证结合模型组(简称M组)40只,同窝m/m小鼠10只为正常组(简称C组)。第1~4周为阴虚证造模阶段:M组每日灌服伤阴药,... 详细信息

目的建立2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型,制定模型评价方法。方法SPF级雄性db/db小鼠随机分为糖尿病组(简称D组)10只和病证结合模型组(简称M组)40只,同窝m/m小鼠10只为正常组(简称C组)。第1~4周为阴虚证造模阶段:M组每日灌服伤阴药,余组灌服等体积超纯水。阴虚证造模结束后,将M组随机分为糖尿病阴虚证组(简称DY组)、六味地黄汤低、中、高剂量组(分别简称为DY-L、DY-M、DY-H组),每组10只。第5~8周为六味地黄汤干预阶段:DY-L、DY-M、DY-H组每日增加灌服相应剂量六味地黄汤(0.1 mL/10 g),余组灌服等体积超纯水。每周检测小鼠空腹血糖、体温、水量及唾液流率、皮肤含水量、粪便含水量、24 h尿量、体质量、食量和拉力;第8周末进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)、胰岛素耐量实验(ITT)及旷场实验。结果阴虚证造模4周后,与C组比较,D组与M组空腹血糖升高,D组OGTT及ITT实验曲线下面积(AUC)增高(P结合耗伤阴液法可成功建立2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型。动态检测宏观表征及客观指标,结合以方测证是2型糖尿病阴虚证病证结合模型系统性评价的一种重要方法。

关键词： 2型糖尿病阴虚证病证结合动物模型中医

基于肠道菌群探讨参苓白术散改善慢性炎症防治ZDF大鼠肥胖2型糖尿病

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中国中药杂志 2022年第4期47卷 988-1000页

作者：张栎婧战丽彬杭天怡罗金童赵春燕南京中医药大学中医学院·中西医结合学院中医脾藏象现代研究实验室江苏南京210023 辽宁中医药大学中医药创新工程技术中心辽宁沈阳110847

从菌群紊乱及慢性炎症角度探讨参苓白术散(Shenling Baizhu Powder,SLBZP)防治肥胖2型糖尿病的作用机制。10只LZ(Lean Zucker)大鼠为正常组,40只自发性肥胖2型糖尿病(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠随机分为模型组以及参苓白术散低、... 详细信息

从菌群紊乱及慢性炎症角度探讨参苓白术散(Shenling Baizhu Powder,SLBZP)防治肥胖2型糖尿病的作用机制。10只LZ(Lean Zucker)大鼠为正常组,40只自发性肥胖2型糖尿病(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠随机分为模型组以及参苓白术散低、中、高剂量组。从5周龄开始对应灌胃超纯水及不同剂量的参苓白术散水煎液,每周监测体质量、血糖等基础指标,9周龄时取粪便及肠内容物进行16S rRNA测序及代谢组学测定,全自动生化仪检测血清生化指标,ELISA检测血清胰岛素,芯片检测瘦素及炎症因子。参苓白术散能够减轻ZDF大鼠体质量,显著降低血糖和糖化血红蛋白,改善血脂水平。9周龄时,模型组大鼠中Anaerostipes、Turicibacter、Bilophila、Ochrobactrum、Acinetobacter和Prevotella显著下降,而参苓白术散高剂量组可以有效上调上述这些菌属的丰度;模型组Psychrobacter、Lactobacillus、Roseburia和Staphylococcusc显著上升,参苓白术散高剂量组可以明显下调其丰度。此外,4-hydroxyphenylpyruvic acid、phenylpyruvic acid、octanoic acid、3-indolepropionic acid、oxoglutaric acid、malonic acid、3-methyl-2-oxovaleric acid和methylmalonic acid为具有显著差异的肠道菌群代谢物。同时,参苓白术散可以显著降低游离胰岛素和胰岛素抵抗水平及大鼠的瘦素抵抗,以及大鼠血清白细胞介素1β(interleukin,IL-1β)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平,可见参苓白术散能有效缓解大鼠全身慢性炎症。参苓白术散能够调节肠道菌群及代谢物,缓解机体全身慢性炎症,控制肥胖,防治2型糖尿病。

关键词：参苓白术散肠道菌群代谢产物慢性炎症

基于网络药理学探讨二陈汤治疗肥胖的作用机制及实验验证

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中药药理与临床 2022年第1期38卷 24-31页

作者：赵春燕战丽彬赵田周雯南京中医药大学中医学院·中西医结合学院南京210023 辽宁中医药大学中医药创新工程技术中心沈阳110847

目的:基于网络药理学探究二陈汤治疗肥胖的分子机制,并采用ZDF自发性肥胖模型大鼠对关键信号通路进行验证。方法:通过TCMSP数据库筛选二陈汤的活性成分;STITCH及SwissTargetPrediction数据库获取活性成分的潜在靶点;OMIM及DisGeNet数据... 详细信息

目的:基于网络药理学探究二陈汤治疗肥胖的分子机制,并采用ZDF自发性肥胖模型大鼠对关键信号通路进行验证。方法:通过TCMSP数据库筛选二陈汤的活性成分;STITCH及SwissTargetPrediction数据库获取活性成分的潜在靶点;OMIM及DisGeNet数据库收集肥胖治疗靶标。将病药重合靶点导入String数据库得到靶点间的相互作用关系,利用网页级别算法筛选其中的关键靶点。通过DAVID数据库对重合靶点进行KEGG及GO富集分析。最后采用ZDF大鼠白色脂肪组织对关键通路进行验证。结果:二陈汤包含135种活性成分和203个潜在靶点,其中106个与肥胖相关,TP53、MAPK8、AKT1、IL-6、MAPK1等8个靶点在PPI网络中起到关键调控作用。动物试验表明,1.52、4.57、13.71 g/kg二陈汤均可显著减轻ZDF大鼠的体质量,4.57、13.71 g/kg二陈汤可显著降低腹围,4.57 g/kg二陈汤可显著降低TG、TC以及FSI水平,1.52、4.57 g/kg二陈汤显著降低HOMA-IR指数(P<0.05或P<0.01)。Western blot结果显示4.57 g/kg二陈汤可上调白色脂肪组织PI3K蛋白及升高p-AKT/AKT的比值,降低p-JNK/JNK比值(P<0.05或P<0.01)。结论:二陈汤通过调节脂质代谢、参与脂质转运、缓解脂肪组织炎症及胰岛素抵抗等途径发挥治疗肥胖的作用。

关键词：二陈汤肥胖网络药理学信号通路实验验证