基于IGF-1R信号通路探讨去甲斑蝥素诱导宫颈癌细胞凋亡的作用机制

作     者：董秀 冯晓丹 毛雪 包红 王艳杰 DONG Xiu;FENG Xiaodan;MAO Xue;BAO Hong;WANG Yanjie

作者机构：辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学信息工程学院辽宁沈阳110847 

出 版 物：《沈阳药科大学学报》 (Journal of Shenyang Pharmaceutical University)

年 卷 期：2021年第38卷第8期

页      面：832-838页

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：辽宁省科技厅自然基金资助计划项目(2019-MS-232) 辽宁省科技厅自然基金指导计划(2019-ZD-0950) 辽宁省教育厅重点攻关项目(L202069)。 

主　　题：去甲斑蝥素 胰岛素生长因子I型受体 超氧阴离子 细胞凋亡 

摘      要：目的观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)诱导的超氧阴离子对IGF-1R的表达影响,探讨NCTD调控宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用机制。方法体外培养HeLa细胞24h后,直接加入60μmol·L^(-1)NCTD作用至指定时间,或者先加入20μmol·L^(-1)AG1024(IGF-1R的特异性酪氨酸激酶磷酸化抑制剂)或10μmol·L^(-1)genistein(总的酪氨酸激酶抑制剂)或超氧阴离子清除剂超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)作用1 h后,再加入60μmol·L^(-1)NCTD继续培养至指定时间点,然后采用甲基噻唑蓝比色法(MTT)检测AG1024和genistein对NCTD诱导的细胞毒性的影响;采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;采用流式细胞分析法检测细胞凋亡情况和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生变化;采用ELISA测定IGF-1R酪氨酸激酶的活力;采用免疫蛋白印迹法观察IGF-1R和p-IGF-1R的蛋白表达水平变化。结果AG1024和genistein预处理HeLa细胞后,能够显著促进NCTD对HeLa细胞的生长抑制作用;AG1024预处理再加入NCTD作用,细胞皱缩、变圆,出芽形成明显的凋亡小体。AG1024预处理再加入NCTD显著地升高了NCTD诱导的SubG1峰值;NCTD能时间依赖性的显著下调p-IGF-1R表达水平。SOD预处理后降低了NCTD诱导的ROS的产生。NCTD对IGF-1R信号通路有抑制作用,但SOD预处理后影响了NCTD对IGF-1R的酪氨酸激酶活力的抑制作用。AG1024促进了NCTD诱导的超氧阴离子产生,增加了NCTD对p-IGF-1R蛋白表达的抑制作用。结论NCTD可能是通过超氧阴离子的产生发挥其对IGF-1R通路的抑制作用,介导HeLa细胞凋亡。