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补中益气汤对TGF-β1诱导的肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤PI3K/AKT信号通路的影响

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中国免疫学杂志 2022年第19期38卷 2336-2341页

作者：王莹张颖高原王淳刘春英(指导) 辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847

目的:探讨补中益气汤干预上皮-间充质转化(EMT)改善肺腺癌顺铂耐药是否与PI3K/AKT信号通路相关。方法:取BALB/c裸鼠36只,随机分为6组:空载组(NG组)、模型组(MG组)、顺铂组(DDP组)、补中益气汤+顺铂组(BCD组)、顺铂+阻滞剂LY294002组(DLY... 详细信息

目的:探讨补中益气汤干预上皮-间充质转化(EMT)改善肺腺癌顺铂耐药是否与PI3K/AKT信号通路相关。方法:取BALB/c裸鼠36只,随机分为6组:空载组(NG组)、模型组(MG组)、顺铂组(DDP组)、补中益气汤+顺铂组(BCD组)、顺铂+阻滞剂LY294002组(DLY组)、补中益气汤+顺铂+阻滞剂LY294002组(BCDLY组),TGF-β1过表达A549/DDP细胞接种于裸鼠左侧腋窝皮下,接种8 d后成瘤,开始给药。通过免疫组化、Western blot和RT-qPCR检测移植瘤PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT、E-cad、N-cad表达。结果:各组间PI3K、AKT表达差异性较小。与MG、DDP组相比,BCD、DLY、BCDLY组p-PI3K、p-AKT、N-cad表达显著下调,E-cad表达显著上调(P<0.05),BCDLY组表达变化最为显著。结论:补中益气汤能抑制肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤的EMT,改善顺铂耐药,可能与其抑制PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：补中益气汤肺腺癌上皮-间充质转化 PI3K/AKT信号通路化疗耐药

基于网络药理学及实验验证探究葛根改善AD的作用机制

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沈阳药科大学学报 2023年

作者：方德宇张林吴品昌赵丹玉王艳杰辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁中医药大学信息工程学院

目的本研究基于网络药理学与分子对接分析，结合相关验证实验，探究葛根改善阿尔兹海默病的有效成分及潜在机制。方法通过检索TCMSP、DIP、GeneCards、OMIM、PharmGKB、TTD、DrugBank等数据库，构建“成分-靶点”网络，结合蛋白互作... 详细信息

目的本研究基于网络药理学与分子对接分析，结合相关验证实验，探究葛根改善阿尔兹海默病的有效成分及潜在机制。方法通过检索TCMSP、DIP、GeneCards、OMIM、PharmGKB、TTD、DrugBank等数据库，构建“成分-靶点”网络，结合蛋白互作分析，筛选葛根治疗阿尔茨海默病的核心成分及关键靶点，并通过GO/KEGG富集分析、分子动力学方法的分子对接模拟，结合细胞存活率和Westernblot检测，探究其潜在作用机制。结果共筛选得到4个核心成分，异黄酮类成分（芒柄花黄素、3’-甲氧基大豆苷元、葛根素）占3/4，甾醇类（β-谷甾醇）成分占1/4。25个葛根改善AD的关键靶点中，异黄酮成分中葛根素的关键靶点占比最高（18/25），在进一步的“核心成分-关键靶点”网络拓扑分析中，葛根素的综合结果最佳。细胞存活率检测发现，葛根素改善AD细胞的效果明显优于β-谷甾醇。关键靶点中的NOS3与四个核心成分分子对接结果最佳，100 μmol/L葛根素可显著上调AD细胞中NOS3的蛋白表达。结论异黄酮类成分是葛根中的重要活性成分，葛根素可能是其抗AD的重要物质基础，NOS3可能是葛根素改善AD的潜在作用靶点。

关键词：葛根葛根素 NOS3 阿尔兹海默病网络药理学分子对接

土荆皮乙酸通过PI3K/AKT通路抑制肺腺癌细胞A549上皮-间质转化

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中国免疫学杂志 2022年第2期38卷 171-174页

作者：宋佳易刘春英(指导) 辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847

目的:探讨土荆皮乙酸(PAB)对TGF-β1介导的人肺癌细胞A549上皮-间质转化(EMT)及侵袭能力的影响及作用机制。方法:采用Transwell小室实验检测PAB对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。免疫荧光法检测上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-Cad)表达。West... 详细信息

目的:探讨土荆皮乙酸(PAB)对TGF-β1介导的人肺癌细胞A549上皮-间质转化(EMT)及侵袭能力的影响及作用机制。方法:采用Transwell小室实验检测PAB对A549细胞迁移、侵袭能力的影响。免疫荧光法检测上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-Cad)表达。Western blot检测上皮相关标志物E-Cad、α-连环蛋白(α-CA)、间质相关标志物波形蛋白(Vim)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。RT-qPCR法检测上皮及间质蛋白标志物α-CA、Vim、α-SMA mRNA水平。结果:与空白组相比,诱导组上皮标志蛋白E-Cad、α-CA表达下降,间质标志蛋白Vim、α-SMA表达上调,PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K、AKT表达上调,A549细胞迁移、侵袭能力增强。与诱导组相比,实验组与上述结果相反,且A549细胞迁移、侵袭能力减弱。RT-qPCR检测同样验证上述结果。结论:PAB可有效控制A549细胞EMT及迁移、侵袭能力,作用机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：中药抗肿瘤上皮-间质转化转移土荆皮乙酸

补中益气汤含药血清干预TGF-β介导的A549/DDP细胞E-cadherin、N-cadherin表达的影响

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时珍国医国药 2022年第1期33卷 52-54页

作者：于丹王莹高原刘春英辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110032

目的观察补中益气汤含药血清对TGF-β诱导前后,A549/DDP细胞E-cadherin、N-cadherin表达的影响,探讨补中益气汤干扰上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)分子机制。方法细胞分为A549/DDP组;TGF-β1组(5ng/L,48h);中药组(10%补中益气汤含药血清),采用免疫细胞化学法、Western blot法、实时荧光定量PCR法检测补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞E-cadherin、N-cadherin蛋白及mRNA水平的影响。结果与A549/DDP组比较,TGF-β1组E-cadherin蛋白及mRNA表达水平下调(P<0.05),与TGF-β_(1)组比较,中药组E-cadherin蛋白及mRNA表达水平上调(P<0.05),差异具有统计学意义。而N-cadherin蛋白及mRNA水平的影响呈现相反的变化趋势。结论E-cadherin、N-cadherin可作为EMT的重要分子标记物,且补中益气汤含药血清可下调E-cadherin蛋白及mRNA表达,上调N-cadherin蛋白及mRNA表达,逆转A549/DDP细胞EMT,进而干预肺腺癌细胞的侵袭、转移。

关键词：补中益气汤 A549/DDP细胞 EMT 侵袭转移

补中益气汤含药血清对TGF-β介导的A549/DDP细胞Snail、E-cadherin表达的影响

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中国老年学杂志 2023年第7期43卷 1636-1639页

作者：于丹王莹高原刘春英辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110032

目的观察补中益气汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导前后,A549/DDP细胞Snail、E-钙黏蛋白(cadherin)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用。方法A549/DDP细胞分为:空白组、TGF-β1组(TGF-β15 n... 详细信息

目的观察补中益气汤含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导前后,A549/DDP细胞Snail、E-钙黏蛋白(cadherin)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)的干预作用。方法A549/DDP细胞分为:空白组、TGF-β1组(TGF-β15 ng/L,48 h)、中药组(10%补中益气汤含药血清)、干扰组(Snail干扰)。采用siRNA技术,运用免疫细胞化学法、Western印迹法、实时荧光定量PCR法,检测补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞Snail、E-cadherin及mRNA水平的影响。结果与空白组比较,TGF-β1组E-cadherin及mRNA表达水平显著下调(P<0.05);与TGF-β1组比较,中药组及干扰组E-cadherin及mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。而Snail蛋白及mRNA水平的影响呈现相反的变化趋势。结论Snail作为转录因子,可抑制E-cadherin基因的表达,诱导EMT发生,而补中益气汤含药血清可通过干预Snail蛋白及基因的表达,解除其对E-cadherin的抑制作用,从而逆转A549/DDP细胞EMT。

关键词：补中益气汤 A549/DDP细胞上皮-间充质转化(EMT)

补肾填精法对肾虚阿尔茨海默小鼠海马自噬的干预作用

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中国实验方剂学杂志 2019年第20期25卷 43-48页

作者：朱仲康张林柳春王旭刘慧慧赵丹玉辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847

目的:通过研究六味地黄丸对肾虚阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经元自噬水平的改善作用及部分机制,探讨补肾填精法对AD的部分治疗机制。方法:健康雄性C57-B6小鼠分为正常组,AD组,肾虚AD组,六味地黄丸组(1. 08 g·kg-1)。正常组与AD组每日... 详细信息

目的:通过研究六味地黄丸对肾虚阿尔茨海默病(AD)小鼠海马神经元自噬水平的改善作用及部分机制,探讨补肾填精法对AD的部分治疗机制。方法:健康雄性C57-B6小鼠分为正常组,AD组,肾虚AD组,六味地黄丸组(1. 08 g·kg-1)。正常组与AD组每日皮下注射生理盐水(15 m L·kg-1),肾虚AD组和六味地黄丸组每日皮下注射氢化可的松注射液(15 m L·kg-1),连续注射20 d。第21天除正常组侧脑室注射无菌生理盐水外,其余3组侧脑室注射β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35),6μg/只。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组小鼠血清皮质醇、睾酮水平;透射电镜观察海马神经元细胞形态变化;免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测选择性自噬接头蛋白(p62)的蛋白表达。结果:与正常组比较,AD组和肾虚AD组小鼠的血清皮质醇、睾酮水平显著降低(P <0. 01),小鼠海马LC3表达显著减少(P <0. 01),小鼠海马p62蛋白表达显著增加(P <0. 01);与AD组比较,肾虚AD组小鼠的血清皮质醇、睾酮水平明显降低(P <0. 05,P <0. 01),小鼠海马p62蛋白表达显著增加(P <0. 01);与AD组和肾虚AD组比较,六味地黄丸组小鼠的血清皮质醇、睾酮水平显著升高(P <0. 01),小鼠海马LC3表达显著增多(P <0. 01),p62蛋白表达显著减少(P <0. 01)。正常组和六味地黄丸组小鼠神经元细胞内可见自噬小体,AD组和肾虚AD组小鼠神经元细胞内自噬小体鲜见。结论:补肾填精法能保护海马神经元细胞,增加海马神经元中LC3表达,降低p62表达水平,提高海马神经元自噬水平,对肾虚阿尔茨海默病具有一定的治疗作用。

关键词：自噬阿尔茨海默病海马神经元六味地黄丸 β淀粉样蛋白25-35

基于非靶向代谢组学的高脂血症大鼠肝脏和血清脂代谢异常相关生物标志物发现及人参皂苷Rb_(1)干预机制研究

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中国中药杂志 2023年第14期48卷 3922-3933页

作者：冷雪马艺鑫辽宁中医药大学中西医结合学院辽宁沈阳110847 辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室辽宁沈阳110847

通过对高脂血症大鼠肝脏及血清内源性物质进行非靶向代谢组学研究,发现高脂血症大鼠脂代谢异常的相关生物标志物,并探寻人参皂苷Rb_(1)(ginsenoside Rb_(1))改善高脂血症的作用靶点并阐明其作用机制。全自动生化仪检测各组大鼠血清内生... 详细信息

通过对高脂血症大鼠肝脏及血清内源性物质进行非靶向代谢组学研究,发现高脂血症大鼠脂代谢异常的相关生物标志物,并探寻人参皂苷Rb_(1)(ginsenoside Rb_(1))改善高脂血症的作用靶点并阐明其作用机制。全自动生化仪检测各组大鼠血清内生化指标含量;通过液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对大鼠的肝脏组织和血清代谢质谱进行分析,利用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对比正常组、高脂血症组、人参皂苷Rb_(1)组的代谢数据,筛选潜在的生物标志物,并进一步通过KEGG数据库分析构建相关代谢通路。结果表明高脂引起大鼠血脂紊乱,而人参皂苷Rb_(1)治疗缓解了大鼠血脂紊乱情况;非靶向代谢组学结果显示高脂血症大鼠肝组织中含有297种差异代谢物,血清样本中含有294种差异代谢物,人参皂苷Rb_(1)干预高脂血症大鼠的差异性代谢物共有560种,其中回调肝脏和血清样本共同代谢物是紫苏酸(perillic acid)和N-鸟氨酰基-L-牛磺酸(N-ornithyl-L-taurine),二者可作为人参皂苷Rb_(1)改善高脂血症的潜在生物标志物;通过对其肝脏和血清的通路富集发现人参皂苷Rb_(1)可以共同参与肝脏和血清中胆碱代谢通路,此外还通过参与ABC转运蛋白,丙氨酸、天冬氨酸与谷氨酸代谢,蛋白质消化和吸收,β-丙氨酸代谢,牛磺酸和亚牛磺酸代谢,咖啡因代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成,花生四烯酸代谢,蛋氨酸及半胱氨酸代谢等10条通路改善大鼠血脂紊乱。

关键词：人参皂苷Rb_(1) 非靶向代谢组学高脂血症血清肝脏

右归丸通过AOPPs调控RAGE/ROS/NF-κB轴及Wnt/β-catenin信号通路对阿霉素诱导肾病综合征大鼠的保护机制

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中国实验方剂学杂志 2022年第15期28卷 21-27页

作者：王新斌马睿玲李赟王丽丽章宪慧甘肃中医药大学中西医结合学院兰州730000

目的:探究右归丸对阿霉素诱导的肾病综合征(NS)大鼠的影响及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、右归丸低、中、高剂量组和泼尼松组。模型组大鼠尾静脉注射阿霉素构建NS模型,右归丸低、中、高剂量组分别按生药2.8、5.6、11... 详细信息

目的:探究右归丸对阿霉素诱导的肾病综合征(NS)大鼠的影响及其作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、右归丸低、中、高剂量组和泼尼松组。模型组大鼠尾静脉注射阿霉素构建NS模型,右归丸低、中、高剂量组分别按生药2.8、5.6、11.2 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,泼尼松组以醋酸泼尼松6.3 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃。各用药组连续给药6周,正常组及模型组灌服等体积生理盐水。BCA法检测24 h尿蛋白(24 h UP);全自动生化分析仪检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理形态变化;试剂盒检测血清晚期氧化蛋白产物(AOPPs)、活性氧(ROS);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织晚期糖基化终产物受体(RAGE)、核转录因子-κB(NF-κB)磷酸化水平、Wnt及β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h UP、血清BUN、SCr、TC、TG、AOPPs、ROS水平均显著升高(P<0.01),ALB显著降低(P<0.01),且肾组织存在典型的病理性损伤,RAGE、磷酸化(p)-NF-κB、Wnt1及β-catenin蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,右归丸低、中、高剂量组大鼠24 h UP、血清BUN、SCr、TC、TG、AOPPs、ROS水平均显著降低(P<0.01),ALB明显升高(P<0.01),肾组织损伤减轻,RAGE、p-NF-κB、Wnt1及β-catenin蛋白表达均显著降低(P<0.01),且呈剂量相关。结论:右归丸能够改善阿霉素诱导的NS大鼠肾损伤,其机制可能与降低AOPPs水平,抑制RAGE/ROS/NF-κB轴及Wnt/β-catenin信号活化相关。

关键词：右归丸肾病综合征晚期氧化蛋白产物晚期糖基化终产物受体(RAGE)/活性氧(ROS)/核转录因子-κB(NF-κB) Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)

线上教学模式下的试卷分析及学习行为数据分析——以中医学“5+3”专业为例

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中国免疫学杂志 2021年第13期37卷 1633-1636页

作者：王建光雷萍徐铭关洪全韩晓伟辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847

目的:评估试卷质量及了解学生在线学习的相关因素情况。方法:对中医学"5+3"专业59名学生的医学免疫学与病原生物学考试试卷进行质量分析,并对期末考试成绩与在线学习行为数据的相关性进行分析。使用SPSS25.0软件对试卷进行质量分析,并... 详细信息

目的:评估试卷质量及了解学生在线学习的相关因素情况。方法:对中医学"5+3"专业59名学生的医学免疫学与病原生物学考试试卷进行质量分析,并对期末考试成绩与在线学习行为数据的相关性进行分析。使用SPSS25.0软件对试卷进行质量分析,并检验期末考试成绩与在线学习时长、参与讨论次数、查看章节次数等学习行为的相关性。结果:试卷的难度为0.788,各题型区分度范围为0.41~0.51,试卷信度α系数为0.788;期末考试分数与参与讨论次数呈现相关性,回归分析显示在线学习时长、章节学习次数与期末考试成绩有一定相关性。结论:试卷难度系数、区分度、信度均处于合理区间,相关性分析显示期末考试成绩与参与讨论次数呈正相关;回归分析显示在线学习时长、章节学习次数对期末考试成绩有一定影响,呈三次曲线关系。

关键词：试卷分析在线学习学习行为数据相关性分析