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慢性氟中毒大鼠睾丸组织中钙调神经磷酸酶和活化T细胞核因子1的表达

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中华预防医学杂志 2013年第12期47卷 1142-1147页

作者：邓超男于燕妮谢莹赵丽娜贵阳医学院病理学教研室 550004

目的探讨钙调神经磷酸酶（CaN）和活化T细胞核因子1（NFATc1）在慢性氟中毒大鼠睾丸损伤机制中的意义.方法 18只6周龄清洁级雄性SD大鼠按体重用随机数字表法分为3组（每组6只）,对照组饮用自来水（含氟量＜1 mg/L）,低氟组和高氟组分... 详细信息

目的探讨钙调神经磷酸酶（CaN）和活化T细胞核因子1（NFATc1）在慢性氟中毒大鼠睾丸损伤机制中的意义.方法 18只6周龄清洁级雄性SD大鼠按体重用随机数字表法分为3组（每组6只）,对照组饮用自来水（含氟量＜1 mg/L）,低氟组和高氟组分别饮用含5、50 mg/L氟化钠的自来水.饲养8个月后,观察氟斑牙发生情况,氟离子选择电极法检测尿氟含量情况;称量各组大鼠体重及睾丸质量;光镜观察各组大鼠睾丸组织形态学变化;免疫组化和原位杂交检测睾丸组织CaN和NFATc1的蛋白及mRNA表达情况.结果大鼠氟斑牙检出只数为对照组0只,低氟组4只（4/6）,高氟组5只（5/6）,差异有统计学意义（x2=10.60,P＜0.05）.在对照、低氟组、高氟组尿氟含量依次升高,分别为（1.26 ±0.17）、（2.06±0.64）、（7.69±1.96） mg/L（F=36.57,P＜0.05）;体重分别为（629.00±16.00）、（585.17±17.27）、（560.50±16.07）g,差异有统计学意义（F=26.67,P＜0.05）;睾丸质量分别为（2.58 ±0.17）、（2.43±0.31）、（2.35 ±0.38）g,差异无统计学意义（F=0.91,P＞0.05）.与对照组比较,各染氟组大鼠各级生精小管结构出现不同程度破坏,高氟组破坏程度最大.对照组、低氟组、高氟组睾丸组织中CaN蛋白表达灰度值依次增加,分别为59.10±5.62、77.93±4.16、101.69 ±6.31 （F=74.18,P＜0.05）;NFATc1蛋白表达灰度值分别为76.11 ±4.41、93.42±3.85、120.42±9.31,随染氟增加而逐渐增加（F =92.4,P＜0.05）.CaN的mRNA表达量分别为58.76±7.70、82.01±6.88、99.47±8.33（F=42.65,P＜0.05）,NFATc1分别为59.39±4.74、90.02±5.37、121.15±7.69（F=155.47,P＜0.05）.CaN和NFATc1蛋白及mRNA表达水平呈正相关（r分别为0.899、0.908）.结论 CaN依赖的信号通路表达变化可能参与到慢性氟中毒大鼠睾丸组织的损伤机制中.

关键词：氟化物睾丸钙调神经磷酸酶活化T细胞核因子

IL-6和AG490对Burkitt淋巴瘤细胞生长的影响

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中国病理生理杂志 2016年第3期32卷 432-438页

作者：李品浩杨文秀陈琴裴媛媛贵阳医学院病理学教研室贵州贵阳550004

目的:观察IL-6和AG490对Raji细胞生长的影响,探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)及survivin在Burkitt淋巴瘤发生发展中的作用,为寻找淋巴瘤生物治疗的新靶标提供实验依据。方法:培养Raji细胞,分别加入STAT3的激动剂IL-6和抑制剂AG490,... 详细信息

目的:观察IL-6和AG490对Raji细胞生长的影响,探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)及survivin在Burkitt淋巴瘤发生发展中的作用,为寻找淋巴瘤生物治疗的新靶标提供实验依据。方法:培养Raji细胞,分别加入STAT3的激动剂IL-6和抑制剂AG490,用real-time PCR和Western blot检测STAT3、survivin的表达情况及STAT3的磷酸化,MTT法检查细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。结果:培养细胞中加入IL-6或AG490后,细胞生长受明显影响并呈现药物浓度依赖关系(P<0.05);与相应的对照组比较,IL-6组Raji细胞中STAT3、survivin mRNA的表达明显升高,AG490组Raij细胞中STAT3、survivin的mRNA表达明显降低。不同浓度的IL-6组之间、不同浓度的AG490组之间,STAT3和survivin mRNA的表达亦有显著差异(P<0.05),且2种基因mRNA表达都呈现出药物浓度依赖关系。p-STAT3、STAT3和survivin的蛋白水平在IL-6作用下表达增高,AG490作用下表达降低;细胞凋亡率在IL-6作用下逐渐降低,在AG490作用下逐渐升高,且都呈现出药物浓度依赖关系;经AG490处理后,G1期Raji细胞明显增加,S期细胞无明显改变,G1/S比值增加,而在IL-6组中,S期细胞明显降低。结论:IL-6和AG490对Raji细胞生长有明显影响,STAT3及其下游靶基因survivin的表达改变可能是IL-6及AG490影响Raji细胞生长的重要分子机制。

关键词： Burkitt淋巴瘤细胞信号转导及转录激活因子3 Survivin

Calpain2及其抑制剂在肝纤维化细胞凋亡中的机制

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重庆医科大学学报 2014年第7期39卷 960-963页

作者：谢汝佳韩冰杨婷邹河杨勤贵阳医学院病理生理教研室贵阳550004

目的:探讨钙中性蛋白酶2(calpain2)及其抑制剂calpastatin在肝纤维化过程中的表达变化及他们在肝细胞凋亡中的作用。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常组4、8周组和肝纤维化4、8周组,每组各10只。肝纤维化组按0.3 ml/100 g体质量皮... 详细信息

目的:探讨钙中性蛋白酶2(calpain2)及其抑制剂calpastatin在肝纤维化过程中的表达变化及他们在肝细胞凋亡中的作用。方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常组4、8周组和肝纤维化4、8周组,每组各10只。肝纤维化组按0.3 ml/100 g体质量皮下注射40%CCl4植物油溶液,每隔3 d注射1次,造模时间分别为4周和8周;正常组大鼠皮下注射等量植物油溶液。采用原位末端转移酶标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling,TUNEL)法检测肝组织中肝细胞凋亡的情况;免疫组织化学法及Western blot检测肝组织中calpain2、calpastatin及活性caspase3的表达情况;realtime PCR检测肝组织中calpain2及calpastatin mRNA的表达变化。结果:免疫组化及Western blot检测显示肝纤维化4周组大鼠肝组织中calpain2及calpastatin蛋白的表达与正常4周组比较差异无统计学意义(P>0.05);随着肝纤维化程度的加重,肝纤维化8周时大鼠肝组织中calpain2的表达明显增加,而calpastatin的表达明显减少;real-time PCR检测发现肝纤维化4、8周组大鼠肝组织中calpain2 mRNA表达较相应的正常对照组明显增加(P<0.01),而calpastatin mRNA的表达在肝纤维化8周组明显减少(P<0.01);此外,通过免疫组化及Western blot发现肝组织中活性caspase3的表达在肝纤维化4周时已明显增加,肝纤维化8周时达高峰;同时TUNEL法检测发现肝纤维化大鼠肝组织中肝细胞凋亡的数目较正常组大鼠显著增加(P<0.01)。结论:calpain2与calpastatin在蛋白及基因水平的表达变化,提示他们可能参与了肝纤维化的发生发展过程,其致肝纤维化的机制可能与促进肝细胞的凋亡有关。

关键词：肝纤维化钙中性蛋白酶2 calpastatin

miR-328-3p靶向下调FOXP3抑制IL-17诱导的Caco-2人结直肠癌细胞侵袭和迁移

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第6期38卷 487-493页

作者：张伟丽信阳职业技术学院医学院病理教研室河南信阳464000

目的研究miR⁃328⁃3p对白细胞介素17(IL⁃17)诱导的结直肠癌Caco⁃2细胞转移的影响和机制。方法实时定量PCR检测Caco⁃2结直肠上皮细胞和结直肠癌细胞中miR⁃328⁃3p、叉头盒P3(FOXP3)和IL⁃17 mRNA表达。将miR⁃328⁃3p模拟物(mimics)转染至结... 详细信息

目的研究miR⁃328⁃3p对白细胞介素17(IL⁃17)诱导的结直肠癌Caco⁃2细胞转移的影响和机制。方法实时定量PCR检测Caco⁃2结直肠上皮细胞和结直肠癌细胞中miR⁃328⁃3p、叉头盒P3(FOXP3)和IL⁃17 mRNA表达。将miR⁃328⁃3p模拟物(mimics)转染至结直肠癌Caco⁃2细胞中,然后给予IL⁃17诱导处理后,Transwell^(TM)小室测定细胞侵袭和迁移,明胶酶谱法测定细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9活性。双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃328⁃3p与FOXP3的靶向调控关系,蛋白质印迹法检测miR⁃328⁃3p mimics对Caco⁃2细胞中FOXP3蛋白表达的影响。将FOXP3过表达载体(pcDNA3.1⁃FOXP3)和miR⁃328⁃3p mimics共转染到Caco⁃2细胞,利用上述相同方法测定细胞侵袭、迁移和细胞MMP2、MMP9活性。结果与结直肠上皮细胞比较,miR⁃328⁃3p在结直肠癌细胞中的表达水平降低,FOXP3和IL⁃17 mRNA水平升高。转染miR⁃328⁃3p mimics可降低IL⁃17诱导处理后的Caco⁃2细胞侵袭和迁移能力及细胞MMP2、MMP9活性。miR⁃328⁃3p靶向结合并抑制Caco⁃2细胞FOXP3蛋白表达。转染pcDNA3.1⁃FOXP3可降低miR⁃328⁃3p mimics对IL⁃17诱导的Caco⁃2细胞侵袭、迁移及细胞MMP2、MMP9活性的影响。结论miR⁃328⁃3p可能通过靶向抑制FOXP3减弱IL⁃17诱导的结直肠癌Caco⁃2细胞的侵袭和迁移能力。

关键词：结直肠癌 miR-328-3p 转移白细胞介素17(IL-17)

幽门螺杆菌阳性胃癌中vacA基因型的分布及其与MEX3A表达的关系

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中国医科大学学报 2022年第8期51卷 701-705页

作者：勾佳钰张忠薄威梁莉李佳琦李晓波王旭光沈阳医学院病理学教研室沈阳110034

目的探讨辽宁地区幽门螺杆菌(H.pylori)阳性胃癌患者的癌组织中细胞空泡毒素基因A (vacA)优势基因型分布及其与肌肉增生蛋白3A (MEX3A)表达的关系。方法选择2011年至2014年沈阳医学院附属中心医院外科手术切除的胃癌石蜡包埋病理标本9... 详细信息

目的探讨辽宁地区幽门螺杆菌(H.pylori)阳性胃癌患者的癌组织中细胞空泡毒素基因A (vacA)优势基因型分布及其与肌肉增生蛋白3A (MEX3A)表达的关系。方法选择2011年至2014年沈阳医学院附属中心医院外科手术切除的胃癌石蜡包埋病理标本98例,利用GT pureFFPE tissue DNA Extraction Kit提取DNA;利用PCR检测不同vacA基因型分布情况,用免疫组织化学染色法检测胃癌组织中MEX3A蛋白的表达情况,并分析二者的关系。结果在H.pylori阳性胃癌中vacA s1、vacA m1、vacA s1m亚型分布高于其他vacA亚型(P <0.05),其中,vacA m1亚型与MEX3A表达密切相关(P <0.05)。MEX3A表达情况与肿瘤分化程度有关,差异有统计学意义(P <0.05)。结论在辽宁地区H.pylori阳性胃癌患者的癌组织中,vacA m1为优势基因亚型,且表达与MEX3A有关,可能通过参与转录后调控相关细胞信号通路而影响胃癌发生、发展。

关键词：胃癌幽门螺杆菌细胞空泡毒素基因A 肌肉增生蛋白3A

梓醇抑制NADPH氧化酶保护2型糖尿病早期血管内皮功能

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中国中药杂志 2014年第15期39卷 2936-2941页

作者：刘江月潍坊医学院病理生理教研室

该研究观察梓醇对2型糖尿病(T2DM)大鼠血管内皮功能的保护作用并探讨其抑制NADPH氧化酶表达的机制。40只高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素致糖尿病大鼠随机分为模型组、梓醇低、中、高剂量组(10,50,100 mg·kg-1·d-1)。另以10只健康... 详细信息

该研究观察梓醇对2型糖尿病(T2DM)大鼠血管内皮功能的保护作用并探讨其抑制NADPH氧化酶表达的机制。40只高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素致糖尿病大鼠随机分为模型组、梓醇低、中、高剂量组(10,50,100 mg·kg-1·d-1)。另以10只健康Wistar大鼠作为正常组。正常组、模型组分别给予相当量的生理盐水。6周后全自动生化分析仪检测血糖、血脂;ELISA检测血清8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)含量;硝酸还原法检测血清一氧化氮(NO)水平;羟胺法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)含量;观察离体胸主动脉环内皮依赖性血管舒张反应;荧光法检测主动脉组织活性氧(ROS)的水平;HE染色观察主动脉病理形态学改变;RT-PCR,western-blot分别检测主动脉组织Nox4,p22phox mRNA及蛋白表达。结果显示梓醇中、高剂量组血管内皮损伤明显减轻,主动脉ROS水平降低,血清NO水平升高,8-iso-PGF2α含量减少,SOD含量升高;主动脉组织Nox4,p22phox mRNA及蛋白表达均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。因此梓醇对T2DM血管内皮具有保护作用,其机制可能与其下调Nox4,p22phox表达,抑制氧化应激反应有关。

关键词： 2型糖尿病内皮功能氧化应激 NADPH氧化酶

病理学特征聚类分析法在口腔组织病理学实验课教学中的应用

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中华口腔医学杂志 2023年第5期58卷 457-461页

作者：孙雅楠王丽杨邵东张佳莉武汉大学口腔医学院口腔组织病理学教研室武汉430079

本研究提出一种以学生为主导的新教学方法,即病理学特征聚类分析(pathological feature clustering,PFC)法,学生将具有相同病理特征的不同疾病进行聚类,并对这些疾病进行鉴别诊断。纳入武汉大学口腔医学院2018级77名本科生,采用分层随... 详细信息

本研究提出一种以学生为主导的新教学方法,即病理学特征聚类分析(pathological feature clustering,PFC)法,学生将具有相同病理特征的不同疾病进行聚类,并对这些疾病进行鉴别诊断。纳入武汉大学口腔医学院2018级77名本科生,采用分层随机抽样方法将学生分为4组,每组18~20名同学。每组学生将从以下4个主题中选择一类疾病作为主题并总结疾病的组织学特征:①口腔黏膜疾病;②牙源性肿瘤及瘤样病变,口腔颌面部囊肿;③唾液腺疾病;④上皮源性肿瘤和瘤样病变(简称为主题1、2、3、4)。在讨论特定类型疾病时,选择该类疾病为主题的小组为总结组(SG组),其他组为非总结组(NSG组)。各组学生通过相同的病理特征对疾病进行总结后,通过幻灯片分享展示总结结果,并由教师进行点评和补充。通过比较课前测试成绩和期末考试成绩评价教学效果。通过调查问卷评估学生对PFC教学方法的接受度(≥3分表示满意),问卷包括8个客观问题和1个主观问题,问卷采用李克特量表(Likert-scale)设计,每个问题1~5分,学生根据自身情况对每个问题打分。各组间的差异采用Mann-Whitney U非参数检验进行比较。课前测试结果显示,主题1、2、3的SG组学生得分[分别为(5.6±0.8)、5.0(1.0)和(2.9±1.0)分]均显著高于NSG组[分别为(5.1±1.0)、4.0(2.5)和1.5(2.5)分](U=402.50,P=0.047;U=392.00,P=0.026;U=295.00,P=0.003)。期末考试成绩显示,在主题1、2、3、4中,SG组与NSG组的分数差异均无统计学意义(P>0.05)。经过组间分享PFC教学方法的总结结果后,SG组与NSG组之间的差异缩小,进一步证明PFC教学方法的有效性。问卷调查结果显示,81.8%(63/77)学生对PFC教学方法非常满意,13.0%(10/77)学生感到满意,5.2%(4/77)学生基本满意。根据李克特量表客观评价问卷的反馈,每个问题的平均分在4.19~4.77分之间不等,表明学生认为PFC教学法对口腔病理学的学习有较积极的影响。本研究提出的PFC教学方法可提高本科生的病理鉴别诊断能力。

关键词：病理学,口腔实验课教学组织学特征聚类分析

阿霉素对模式生物斑马鱼中abcb4基因表达的影响

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四川大学学报（医学版） 2016年第1期47卷 7-13页

作者：孙琮杰何志旭舒莉萍胡荣英何思佳贵阳医学院儿科教研室贵阳550004 贵阳医学院组织工程与干细胞中心贵阳550004 贵阳医学院免疫学教研室贵阳550004

目的选择斑马鱼作为实验对象,研究阿霉素（doxorubicin,DOX）对其abcb4基因表达的影响,进一步了解abcb4基因在斑马鱼多药耐药机制中可能的作用。方法分别以2mL/L二甲基亚砜（DMSO）,10μmol/L DOX及含2mL/L DMSO的10μmol/L DOX对斑... 详细信息

目的选择斑马鱼作为实验对象,研究阿霉素（doxorubicin,DOX）对其abcb4基因表达的影响,进一步了解abcb4基因在斑马鱼多药耐药机制中可能的作用。方法分别以2mL/L二甲基亚砜（DMSO）,10μmol/L DOX及含2mL/L DMSO的10μmol/L DOX对斑马鱼胚胎进行药物处理,另以Eggwater处理的胚胎作为对照组。将正常发育的4-16个细胞期斑马鱼胚胎,随机分入以上各组中,药物处理至120hpf。收集药物处理下的斑马鱼不同时期胚胎运用实时荧光定量PCR和胚胎原位杂交技术,检测abcb4基因在斑马鱼中的表达变化情况。结果相较于对照组,药物处理的斑马鱼胚胎abcb4基因mRNA表达水平升高（P〈0.05）,而abcb5基因mRNA表达情况则无明显变化。通过斑马鱼胚胎原位杂交,均在斑马鱼120hpf胚胎小肠部位发现有abcb4基因阳性杂交信号,且药物处理的斑马鱼胚胎在脑及心脏部位发现abcb4基因阳性杂交信号。结论 DOX能诱导斑马鱼胚胎abcb4基因表达水平增高,对阐明abcb4基因在斑马鱼多药耐药产生机制中的作用具有重要意义。

关键词：斑马鱼多药耐药阿霉素 abcb4

白杨素调控NF-κB/Twist 1信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化的机制研究

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中国中药杂志 2021年第1期46卷 146-154页

作者：卢林明付裕李秋阳何晓伟汤娟李先伟皖南医学院病理学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院药理学教研室安徽芜湖241002

研究白杨素(ChR)是否通过影响核转录因子κB(NF-κB)/Twist 1信号通路,进而抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化作用。动物实验设对照组、博莱霉素组(BLC)、BLC+ChR(50 mg·kg^(-1))和BLC+ChR(100 mg·kg^(-1))剂量组... 详细信息

研究白杨素(ChR)是否通过影响核转录因子κB(NF-κB)/Twist 1信号通路,进而抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化作用。动物实验设对照组、博莱霉素组(BLC)、BLC+ChR(50 mg·kg^(-1))和BLC+ChR(100 mg·kg^(-1))剂量组,每组动物15只。气管注射BLC(7500 U·kg^(-1))诱导肺纤维化大鼠模型,造模后连续灌胃给药28 d。细胞实验设对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)(5 ng·mL^(-1))组、TGF-β1+ChR(1,10,100μmol·L^(-1))组,Ⅱ型肺泡上皮细胞先用TGF-β1处理24 h,再用TGF-β1和(或)不同剂量ChR处理48 h。肺组织病理变化和胶原沉积情况分别采用HE染色、Masson染色和免疫组化法进行观察。肺组织和细胞内Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、E钙粘蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和Twist 1 mRNA及蛋白表达分别采用qPCR和(或)Western blot法检测。动物实验结果显示,与BLC组相比,ChR给药28 d后,大鼠肺纤维化程度明显减轻;肺组织collagenⅠ表达明显下降(P<0.05或P<0.01);肺组织肺泡上皮细胞EMT程度明显受到抑制[ZO-1和E-cadherin的表达明显升高,α-SMA和vimentin的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)];肺组织细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平、胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果表明,不同剂量ChR能够明显减轻TGF-β1诱导的collagenⅠ的表达(P<0.05或P<0.01),显著抑制细胞EMT[E-cadherin和ZO-1的表达明显升高,vimentin和α-SMA的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)],同时能够明显抑制TGF-β1诱导的细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平并降低细胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达(P<0.05或P<0.01)。综上结果推测ChR能够逆转肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT、缓解肺纤维化,其机制可能与其降低细胞内IκBα磷酸化水平、抑制NF-κB p65的磷酸化和其核转移,进而下调Twist 1的表达有关。

关键词：白杨素上皮间质转分化(EMT) 核转录因子κB Twist 1 肺纤维化