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IGF1、CoQ10、MT联合添加缓解热应激对牛IVF囊胚的影响

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2474-2485页

作者：张航张培培杨柏高冯肖艺牛一凡余洲曹建华万鹏程赵学明中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所乌鲁木齐石河子832000

旨在探明胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factors 1,IGF1)、辅酶Q10(coenzyme Q10,CoQ10)及褪黑素(melatonin, MT)联合添加对牛卵母细胞和胚胎发育以及热应激囊胚的影响。本研究于屠宰场采集牛离体卵巢,于实验室抽取卵丘卵母细... 详细信息

旨在探明胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factors 1,IGF1)、辅酶Q10(coenzyme Q10,CoQ10)及褪黑素(melatonin, MT)联合添加对牛卵母细胞和胚胎发育以及热应激囊胚的影响。本研究于屠宰场采集牛离体卵巢,于实验室抽取卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs),在牛卵母细胞体外成熟(in vitro maturation, IVM)液及牛胚胎体外培养(in vitro culture, IVC)液中添加IGF1、CoQ10及MT,检测各添加方式对牛卵母细胞发育能力、牛卵母细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,ΔΨm)的影响;在囊胚期施加41℃热应激,检测热应激及联合添加对牛IVF囊胚发育能力及凋亡水平的影响,并利用qRT-PCR检测囊胚中胚胎质量相关基因mRNA表达水平。各组试验均重复3次。结果表明,与未添加组(CT-0组)相比,联合添加IGF1、CoQ10及MT组(ICM组)卵母细胞成熟率((90.40±2.06)%vs.(65.41±0.63)%)、卵裂率((93.33±1.96)%vs.(59.77±2.93)%)及囊胚率((51.43±5.34)%vs.(26.92±3.24)%)均显著提高(P<0.05);ICM组牛卵母细胞ROS水平显著降低;ΔΨm显著提高(P<0.05)。与热应激组(HS组)相比,联合添加IGF1、CoQ10及MT(ICM+HS组)显著提高了囊胚扩张率((62.00±2.97)%vs.(30.77±8.66)%,P<0.05),抑制了热应激囊胚细胞凋亡,并提高了IGFBP3、ATP1A1、DSC2及IFNT2的mRNA表达水平(P<0.05)。综上表明,联合添加IGF1、CoQ10及MT有效提高牛卵母细胞发育能力,降低ROS水平,提高ΔΨm。热应激降低牛囊胚扩张率,促进牛囊胚细胞凋亡,影响囊胚质量,而联合添加IGF1、CoQ10及MT缓解了热应激损伤。

关键词： IGF1 CoQ10 褪黑素热应激奶牛胚胎

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育成期代谢能摄入量对蛋鸡生殖器官发育、激素水平和卵巢基因表达的影响

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畜牧兽医学报 2024年

作者：卢建居小军王星果马猛王强李永峰窦套存胡玉萍郭军邵丹童海兵曲亮江苏省家禽科学研究所

旨在研究育成期代谢能（ME）摄入量对蛋鸡生殖器官发育、激素水平和卵巢基因表达的影响。将720只6周龄海兰褐蛋鸡随机分为3组，每组6个重复，每个重复40只鸡。6～17周龄，各试验组饲粮粗蛋白质水平分别为17.5%（6～12周龄）和15.5%（12... 详细信息

旨在研究育成期代谢能（ME）摄入量对蛋鸡生殖器官发育、激素水平和卵巢基因表达的影响。将720只6周龄海兰褐蛋鸡随机分为3组，每组6个重复，每个重复40只鸡。6～17周龄，各试验组饲粮粗蛋白质水平分别为17.5%（6～12周龄）和15.5%（12～17周龄），ME水平分别为12.34、11.11（12.34×90%）和9.87（12.34×80%）MJ·kg-1（分别为对照组、90%ME限饲组和80%ME限饲组），其他营养素水平相同。对照组试验鸡自由采食，其它试验组蛋鸡按照对照组蛋鸡采食量定量饲喂。试验期为6～17周龄。结果表明：1)随着育成期能量限饲强度增加，各试验组蛋鸡17周龄体重、体斜长和跖围均显著线性减少（P<0.001）。2)随着育成期能量限饲强度增加，血清尿素氮（UN）和葡萄糖（GLU）水平均显著线性减小（P=0.040，P=0.044），但血浆雌二醇水平显著线性增加（P=0.026）。3)对17周龄血液雌二醇水平差异最显著的自由采食组（ALF17W）和80%能量限饲组（ERF17W）蛋鸡卵巢基质部进行RNA-Seq分析，纯净序列匹配到鸡参考基因组的比例均超过了94.61%，Q20和Q30的纯净序列含量分别高于97.38%和92.87%，两组共筛选出1299个差异基因，ERF17W中961个下调，338个上调。GO功能富集分析发现，差异表达的mRNAs参与调节细胞增殖、发育和生殖等48个显著富集的GO条目，KEGG信号通路显著富集在25个显著富集的KEGG通路，其中cAMP信号通路、雌激素信号通路、类固醇激素生物合成和卵巢类固醇生成等是与能量代谢或生殖相关的通路。筛选到的cAMP反应元件结合蛋白（CREB）和类固醇生成急性调节蛋白（StAR）富集在cAMP信号通路，孕激素受体（PGR）、代谢型谷氨酸受体1（GRM1）和细胞骨架蛋白角蛋白18（KRT18）富集在雌激素信号通路。qRT-PCR结果显示10个随机选择的差异表达基因的表达趋势与RNA-Seq结果一致。综上可见，随育成期ME摄入量减少，育成期末蛋鸡体重、血清UN和GLU含量均显著线性减小，但血浆雌二醇水平显著线性增加，育成期ME摄入量可能通过调控卵巢组织StAR、CREB1、KRT18、PGR和GRM1等基因的表达，作用于cAMP信号通路和雌激素信号通路，以调控蛋鸡能量代谢和雌激素生成。

关键词： RNA-seq 育成期代谢能摄入量雌激素卵巢蛋鸡

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母羊阴道脱出的诊断与治疗

农技服务 2024年第5期41卷 71-74页

作者：廖加法吴蕊汝宋德荣王勇贵州省威宁高原草地试验站贵州威宁553100 毕节市畜牧兽医科学研究所贵州毕节551700

阴道脱出是妊娠后期母羊常发疾病,也有母羊习惯阴道脱出的现象发生,若不及时采取治疗措施,将会引起病羊全身感染而死亡。为羊养殖户对母羊阴道脱出的诊断和治疗提供参考,从阴道脱出的发病原因、治疗要点、术后护理及预防措施方面介绍母... 详细信息

阴道脱出是妊娠后期母羊常发疾病,也有母羊习惯阴道脱出的现象发生,若不及时采取治疗措施,将会引起病羊全身感染而死亡。为羊养殖户对母羊阴道脱出的诊断和治疗提供参考,从阴道脱出的发病原因、治疗要点、术后护理及预防措施方面介绍母羊阴道脱出的诊断与治疗方法。

关键词：母羊阴道脱出治疗要点术后护理预防措施

冷季不同饲养管理模式和粗精比饲粮对牦牛瘤胃菌群结构和功能的影响

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草业科学 2024年第6期41卷 1453-1470页

作者：张振祥曹铨丁路明俞旸刘文亭杨晓霞张春平童永尚杨增增周沁苑王芳草董全民青海大学畜牧兽医科学院/青海省畜牧兽医科学院/青海省高寒草地适应性管理重点实验室青海西宁810016 西南民族大学青藏高原研究所四川成都610041

为探究饲养管理模式和不同粗精比饲粮对冷季牦牛瘤胃菌群丰度和多样性的影响,并预测菌群功能。选取2岁龄(24月龄),体重相近、体况良好的公牦牛(Bos grunmiens)24头随机分为4组,RCG1组在冬季放牧场自然放牧,RCC90、RCC70和RCC50组分别饲... 详细信息

为探究饲养管理模式和不同粗精比饲粮对冷季牦牛瘤胃菌群丰度和多样性的影响,并预测菌群功能。选取2岁龄(24月龄),体重相近、体况良好的公牦牛(Bos grunmiens)24头随机分为4组,RCG1组在冬季放牧场自然放牧,RCC90、RCC70和RCC50组分别饲喂粗精料比为90∶10、70∶30和50∶50的饲粮。试验结束屠宰后采集各组牦牛瘤胃液,利用16S rDNA高通量测序检测其菌群结构。结果表明,24份样品共检测到20696个ASVs,有4966、3069、3680和3536个ASVs分别在RCG1、RCC90、RCC70和RCC50组4组样品特异性表达。在门和属水平上,4组样品的共同优势菌为厚壁菌门、拟杆菌门、变形菌门,以及理研菌科RC9属、普雷沃菌属和克里斯滕森菌科_R-7菌群。RCG1组和补饲组牦牛瘤胃菌群区系和丰度差异显著(P0.05),均注释到营养代谢和复制与修复等生物过程。饲养管理模式和不同粗精比饲粮对牦牛瘤胃菌群结构影响显著(P0.05),冷季补饲10%精料可显著提高瘤胃菌群丰度和多样性(P研究结果为青藏高原牦牛的合理饲养提供了数据支撑,也为研发适宜于青藏高原牦牛养殖业的管理模式,减轻放牧场压力,解决草地退化、草畜失衡及保持牦牛养殖业的健康良性发展等问题提供了理论支持。

关键词：牦牛养殖放牧管理农牧结合管理饲粮结构瘤胃微生物 16S rDNA基因高通量测序功能预测

大肠杆菌耐药基因TD-PCR检测方法的建立及应用

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中国预防兽医学报 2024年第3期46卷 269-277页

作者：潘永王可人李婷杨莉李刚张亚楠徐景峨贵州省农业科学院畜牧兽医研究所贵州贵阳550005 遵义市农业农村局贵州遵义563000 广东省现代农业装备研究所广东广州510635

为建立一种检测大肠杆菌主要耐药基因(ARG)的通用降落PCR(TD-PCR)方法,本研究参考大肠杆菌标准菌株K12 MG1655 yeeJ基因序列设计合成不同Tm值引物、不同产物长度引物、不同长度引物,并参考Gen Bank中登录的β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰... 详细信息

为建立一种检测大肠杆菌主要耐药基因(ARG)的通用降落PCR(TD-PCR)方法,本研究参考大肠杆菌标准菌株K12 MG1655 yeeJ基因序列设计合成不同Tm值引物、不同产物长度引物、不同长度引物,并参考Gen Bank中登录的β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰胺醇类、喹诺酮类和黏菌素类部分ARG序列设计合成共29对引物。以大肠杆菌标准菌株K12 MG1655总DNA为模板,采用TD-PCR和普通PCR方法,分别利用不同Tm值引物(P1~P8)、不同产物长度引物(P9~P16)、不同长度的引物(P17~P22)分别扩增yeeJ基因,均用于检测TD-PCR方法的特异性;利用引物P5扩增yeeJ基因,根据目的条带平均亮度值,对TD-PCR方法的扩增产物量分析。不同Tm值引物的扩增结果显示,TD-PCR方法中利用8对不同Tm值引物扩增后均出现目的条带,且均无非特异性条带,而普通PCR方法仅有部分引物扩增后出现目的条带,表明以不同Tm值引物扩增时,TD-PCR方法特异性更强,且适用引物Tm值范围较广。不同产物长度扩增结果显示,TD-PCR方法中利用8对引物扩增后均出现相应目的条带,且无非特异条带,而普通PCR方法虽然均出现目的条带,但部分引物扩增后还出现了非特异性条带,表明以不同产物长度引物扩增时,TD-PCR方法的特异性更强。不同长度的引物扩增结果显示,TD-PCR方法中利用6对不同长度的引物扩增后均出现目的条带,且无非特异条带,而普通PCR方法在52℃退火温度时引物P22出现非特异性扩增,表明TD-PCR方特异性更强。扩增产物量分析结果显示,TD-PCR和普通PCR方法扩增的目的条带平均亮度值均随反应总循环数的增加而上升,但普通PCR方法扩增的产物目的条带平均亮度值始终高于TD-PCR,表明TD-PCR方法的扩增产物量低于普通PCR。以24株临床分离的鹅源大肠杆菌总DNA为模板,采用TD-PCR和普通PCR方法,分别对β-内酰胺酶、氨基糖苷类、酰胺醇类、喹诺酮类和黏菌素类共29种ARG进行检测。结果显示,TD-PCR方法对其中25种ARG的检测结果与普通PCR相同,二者符率为100%;而对另外4种ARG检测结果显示,与普通PCR相比,TD-PCR方法的非特异条带明显减少,且无假阳性。表明TD-PCR在检测ARG方面比普通PCR具有更强的特异性。本研究建立了一种特异性较强的检测大肠杆菌主要ARG的TD-PCR通用方法,为细菌耐药性的研究提供了便捷高效的检测技术手段。

关键词：大肠杆菌耐药基因 TD-PCR 特异性

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娄门鸭胸肌性状相关指标的全基因组关联分析

中国家禽 2024年第4期46卷 8-14页

作者：刘宏祥沈永杰张丽华周腾彬刘小倩章双杰朱春红朱静陈晓颖黄学成宋卫涛陶志云王志成徐文娟李慧芳江苏省家禽科学研究所江苏扬州225125 昆山市畜牧兽医站江苏苏州215300

为寻找与鸭胸肌性状相关的候选基因,鉴定鸭胸肌性状相关分子标记,试验以199只娄门鸭为试验材料,采集血液提取DNA,用基因组重测序方法进行基因分型,利用PLINK 1.90对分型结果进行质控后,采用rMVP软件中的FarmCPU模型对SNPs(Single nucleo... 详细信息

为寻找与鸭胸肌性状相关的候选基因,鉴定鸭胸肌性状相关分子标记,试验以199只娄门鸭为试验材料,采集血液提取DNA,用基因组重测序方法进行基因分型,利用PLINK 1.90对分型结果进行质控后,采用rMVP软件中的FarmCPU模型对SNPs(Single nucleo⁃tide polymorphisims)与胸宽、胸深、胸肌重和胸肌率4个性状指标做GWAS分析,定位出显著位点。结果显示:与胸宽相关的SNPs位点有4个,位于1、11、18号染色体上;与胸肌重相关的SNPs位点有2个,位于2、3号染色体上;与胸肌率相关的SNPs位点有2个,位于2号染色体上。通过基因功能注释,这些位点对应的胸肌性状候选基因有8个,分别是LOC119715526、RLBP1、ABHD2、KYAT1、SPOUT1、LOC101800569、EVA1A和NOL4。研究表明,在不同染色体上共鉴定到8个与胸肌性状显著相关的SNPs位点,这些位点共涉及8个候选基因。

关键词：鸭胸肌全基因组关联分析单核苷酸多态性

妊娠相关糖蛋白的生物学功能及其在畜牧生产中的研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 874-881页

作者：钟朱夏胡修忠向敏余婕刘辰晖赵胜兰万平民王定发周源程蕾武汉市农业科学院畜牧兽医研究所武汉430208

妊娠相关糖蛋白(pregnancy associated glycoproteins, PAGs)属于天冬氨酸蛋白酶基因编码的多基因家族成员,由偶蹄类动物胎盘滋养层巨细胞合成分泌的特异性糖蛋白,可在胎盘附着后的母体循环中检测到。PAGs在胚胎附着、胎盘发育、妊娠维... 详细信息

妊娠相关糖蛋白(pregnancy associated glycoproteins, PAGs)属于天冬氨酸蛋白酶基因编码的多基因家族成员,由偶蹄类动物胎盘滋养层巨细胞合成分泌的特异性糖蛋白,可在胎盘附着后的母体循环中检测到。PAGs在胚胎附着、胎盘发育、妊娠维持、胚胎存活、蛋白水解活性和免疫调节等方面具有潜在作用,常作为早期妊娠诊断和胚胎丢失的生物标志物,同时还可作为检测胎儿生存能力和监测胎盘健康的指标。在本文主要综述了PAGs家族的起源及特征、生物学功能及其在畜牧生产上应用的研究进展,以期为深入探究PAGs的生物学功能以及推动其在畜牧业快速发展提供参考依据。

关键词：妊娠相关糖蛋白胎盘起源及特征生物学功能畜牧生产

紫花苜蓿MsSPL17的克隆及生物学功能验证

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中国农业科学 2024年第17期57卷 3335-3351页

作者：陈菲儿张志鹏蒋庆雪马琳王学敏中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

【目的】分枝是决定紫花苜蓿产量的重要影响因子，SPL家族基因是一类重要的转录因子，其成员参与多种植物的分枝（分蘖）发育过程。研究紫花苜蓿MsSPL17的生物学功能，鉴定MsSPL17在调控紫花苜蓿分枝发育中的作用，为紫花苜蓿高产生物... 详细信息

【目的】分枝是决定紫花苜蓿产量的重要影响因子，SPL家族基因是一类重要的转录因子，其成员参与多种植物的分枝（分蘖）发育过程。研究紫花苜蓿MsSPL17的生物学功能，鉴定MsSPL17在调控紫花苜蓿分枝发育中的作用，为紫花苜蓿高产生物育种提供重要参考。【方法】运用生物信息学方法分析MsSPL17序列，并构建系统进化树；采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析MsSPL17在紫花苜蓿中的组织表达特异性；利用烟草瞬时表达系统确定MsSPL17蛋白的亚细胞定位；利用酵母系统检测MsSPL17的转录自激活活性；利用农杆菌介导转化的方法获得转基因紫花苜蓿并进行表型分析；利用转录组分析，筛选出在转基因株系中的差异表达基因，并验证用于后续研究。【结果】MsSPL17包含一个长度为1 011 bp的开放阅读框，编码由366个氨基酸构成的蛋白，属于SBP蛋白家族。系统进化分析表明，MsSPL17及其同源基因的进化与物种的分化高度相似，表明其是一个功能保守的基因。MsSPL17在紫花苜蓿分枝发育关键时期中的各组织包括茎、茎节、叶、顶端中均有表达，暗示该基因对紫花苜蓿分枝性状具有重要调控作用。亚细胞定位试验表明，MsSPL17蛋白定位于细胞核中。转录自激活试验表明，MsSPL17不具有自激活活性，可后续进行互作蛋白的筛选。MsSPL17转基因沉默株系出现分枝数和茎节数明显增多、节间长度缩短、营养品质升高的显著表型。【结论】成功克隆了紫花苜蓿MsSPL17，其在紫花苜蓿分枝发育关键组织中均有表达，它编码的蛋白定位于细胞核中且无转录自激活活性。获得具有多分枝性状的转基因株系，其产量方面出现分枝数显著增多等表型，品质方面粗蛋白含量提高。

关键词：紫花苜蓿 SPL基因分枝发育转录组 RNAi沉默

基于Smart-seq2探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活囊胚基因表达的影响

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 3936-3946页

作者：杨柏高龙熙张亮徐皆欢戴建军赵学明潘红梅重庆市畜牧科学院重庆402460 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106

旨在探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活(parthenogenetic activation,PA)囊胚基因表达的影响。本研究以猪PA囊胚为研究对象,根据试验处理分为新鲜组、玻璃化冷冻组Ⅰ和玻璃化冷冻组Ⅱ,随后从每组挑选3枚形态良好的囊胚,利用Smart-seq2单细胞... 详细信息

旨在探究玻璃化冷冻对猪孤雌激活(parthenogenetic activation,PA)囊胚基因表达的影响。本研究以猪PA囊胚为研究对象,根据试验处理分为新鲜组、玻璃化冷冻组Ⅰ和玻璃化冷冻组Ⅱ,随后从每组挑选3枚形态良好的囊胚,利用Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术进行转录组测序分析。结果显示,玻璃化冷冻组Ⅰ与新鲜组相比,共鉴定到772个差异表达基因(differential expression genes,DEGs),GO和KEGG富集分析结果显示,这些DEGs与细胞脂质代谢过程、细胞葡萄糖稳态、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与新鲜组相比,共鉴定到1613个DEGs,主要与糖异生、代谢途径、氨基酸生物合成等相关;玻璃化冷冻组Ⅱ与玻璃化冷冻组Ⅰ相比,鉴定到822个DEGs,主要与丙酮酸代谢过程、N-聚糖生物合成、细胞衰老等相关。综上,本研究基于Smart-seq2单细胞全长转录组测序技术揭示了玻璃化冷冻对猪PA囊胚脂质代谢、能量代谢、MAPK信号通路等相关基因表达的影响。

关键词： Smart-seq2 玻璃化冷冻猪孤雌激活囊胚