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高活性脐带间充质干细胞干预老年树鼩衰老脾脏的作用与机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4000-4010页

作者：叶丽田川赵晓娟陈梦蝶叶倩倩李强廖珠银李晔朱向情阮光萍何志旭舒莉萍潘兴华贵州医科大学基础医学院免疫学教研室组织工程与干细胞实验中心贵州省贵阳市550004 中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院干细胞与免疫细胞生物医药技术国家地方联合工程实验室云南省细胞治疗技术转化医学重点实验室昆明市干细胞与再生医学重点实验室基础医学实验室云南省昆明市650032 遵义医科大学附属医院儿科学教研室贵州省遵义市563100

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作... 详细信息

背景:脾脏具有储血、造血和免疫功能,随着年龄增长,脾脏结构退变、功能衰退引起免疫系统功能受损,进而加速机体衰老进程,而高活性脐带间充质干细胞治疗树鼩脾脏衰老尚未见报道。目的:探讨高活性脐带间充质干细胞对树鼩脾脏衰老的干预作用及机制。方法:从剖腹产的新生树鼩脐带组织中分离、培养和获得高活性脐带间充质干细胞,三系分化试剂盒检测成脂、成骨、成软骨分化能力,流式细胞术检测细胞周期和表面标志物。以感染复数值分别为100,120,140,160,180,200的吉凯基因绿色荧光蛋白转染第2代高活性脐带间充质干细胞,筛选最佳转染条件;转染后的第4代高活性脐带间充质干细胞尾静脉输注给老年治疗组树鼩,青年对照组和老年模型组不予特殊处理,治疗4个月时取脾脏组织,苏木精-伊红染色观察脾脏组织结构;β-半乳糖苷酶染色检测衰老相关半乳糖苷酶活性;免疫组织化学染色检测p21和p53蛋白表达水平;Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞增殖活性;免疫荧光染色检测脾脏自噬蛋白分子Beclin1和APG5L/ATG5表达水平;活性氧荧光染色检测脾脏组织的活性氧含量;CD3免疫荧光染色检测总T淋巴细胞比例变化;酶联免疫吸附实验检测脾脏组织白细胞介素1β和转化生长因子β1分泌水平;DAPI复染细胞核观察绿色荧光蛋白标记的高活性脐带间充质干细胞在脾脏组织的分布情况。结果与结论:①高活性脐带间充质干细胞呈核小短梭形、鱼群样生长,G_(0)/G_(1)期占比大,具有向成脂、成骨和成软骨分化潜能。②感染复数为140且转染72 h为吉凯基因绿色荧光蛋白标记树鼩高活性脐带间充质干细胞的最佳条件。③与老年模型组相比,老年治疗组树鼩脾脏组织细胞排列紧密,白髓面积增加(P中心占比无显著差异(P>0.05),脾脏组织衰老相关半乳糖苷酶活性水平降低(P细胞比例增加(P细胞介素1β分泌水平降低(P0.05)。与青年对照组相比,以上检测指标在老年治疗组中均有显著差异(P细胞。结果表明:静脉输注高活性脐带间充质干细胞可迁移至脾脏组织,抑制活性氧产生,下调衰老相关蛋白分子表达,诱导细胞自噬,促进细胞增殖,降低慢性炎症,进而改善脾脏组织结构和功能。

关键词：高活性脐带间充质干细胞树鼩脾脏衰老免疫自噬炎症

基于异亮氨酸衍生物配体的配位聚合物的合成及其荧光应用

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无机化学学报 2022年第12期38卷 2372-2382页

作者：欧沙吴征秋谢唯岳萍胡祖权贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵阳550025

在溶剂热条件下,利用L‑异亮氨酸衍生物配体(C_(13)H_(19)NO_(3))与Zn(NO_(3))_(2)·6H_(2)O合成了配位聚合物[Zn_(2)(C_(13)H_(17)NO_(3))_(2)]_(n)(1)。单晶X射线衍射结果显示化合物1结晶于单斜晶系P2_(1)空间群,配体与金属离子桥联形成二维层状结构,层与层间通过范德瓦耳斯力形成了三维超分子网络结构。在化合物1合成过程中加入罗丹明B(Rho‑B),可以得到复合材料2。荧光测试结果显示,在激发波长为370 nm时,化合物1主要是基于配体的发光,而复合物2除配体的发光外,在580 nm处出现了Rho‑B的发射峰。利用配体与Rho‑B发射峰相对强度的比值为检测信号,将复合物2应用于金属阳离子和挥发性有机物(VOCs)检测。实验结果显示该材料能在水溶液中选择性识别Cr^(3+)离子,并且在短时间内对苯甲醛蒸气作出响应。

关键词：配位聚合物检测荧光罗丹明B

渗透压对未成熟树突状细胞生物力学特性和免疫学功能的影响

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医用生物力学 2020年第2期35卷 202-207页

作者：石玉玲胡祖权闵海宋咏刚赵雪王赟邱炜吴宁曾柱贵州医科大学基础医学院贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025

目的从力学生物学角度研究渗透压对未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)生物力学特性和免疫功能的影响。方法不同渗透压处理im DCs后,CCK-8检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架结构的变化,细胞电泳仪检测细胞... 详细信息

目的从力学生物学角度研究渗透压对未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)生物力学特性和免疫功能的影响。方法不同渗透压处理im DCs后,CCK-8检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架结构的变化,细胞电泳仪检测细胞电泳迁移率的改变,荧光偏振法检测细胞的膜流动性,实时荧光定量PCR检测免疫相关分子的表达变化,流式细胞仪检测细胞的抗原吞噬能力。结果高、低渗均会改变im DCs的F-actin结构,甚至诱导细胞凋亡。低渗组电泳率显著高于等渗组,高渗组电泳率低于等渗组(P细胞的膜流动性(P免疫表型分子CCR7、CD40、CD205、CD11a、CD11c的表达和抗原吞噬能力(P生物力学特性和免疫表型分子表达,研究结果对深入理解DCs的免疫调节功能具有重要意义。

关键词：树突状细胞渗透压生物力学特性免疫学功能

树突状细胞分化过程中部分微丝结合蛋白表达差异

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基因组学与应用生物学 2020年第12期39卷 5844-5850页

作者：王佳邱炜叶远浓胡祖权王赟曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

通过研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中部分微丝结合蛋白的表达差异,以期进一步深入理解DCs的生物学行为并为DCs疫苗的临床应用提供理论依据。从人外周血中分离出单核细胞(monocytes,MOs),经细胞因子诱导获得未成熟树突状... 详细信息

通过研究树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中部分微丝结合蛋白的表达差异,以期进一步深入理解DCs的生物学行为并为DCs疫苗的临床应用提供理论依据。从人外周血中分离出单核细胞(monocytes,MOs),经细胞因子诱导获得未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDCs)和成熟树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)。利用蛋白免疫印迹法检测MOs、imDCs和m DCs中部分微丝结合蛋白的表达水平,然后联合逐步回归分析和主成分分析在这些微丝结合蛋白中筛选出起关键作用的蛋白。DCs分化过程中,Arp2/3复合体、caldesmon、gelsolin、WASP、WAVE 1、fascin、filamin A、α-actinin和Cap Z的表达水平均发生了不同程度的上调,formin的表达水平发生下调,profilin和VASP的表达水平没有明显变化。联合逐步回归分析和主成分分析发现,在这些微丝结合蛋白中,Cap Z可能在DCs分化过程中起关键作用。DCs分化过程中部分微丝结合蛋白的表达发生了明显变化,可能与其形态和免疫学功能的变化密切相关,这对深入理解DCs的生物学行为来说具有重要意义。

关键词：树突状细胞微丝结合蛋白分化逐步回归分析主成分分析

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前列腺癌干细胞的分离及鉴定

基因组学与应用生物学 2021年第3期40卷 1361-1366页

作者：周静韦坤丽胡文慧何水先彭仕雄沈文秀贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

前列腺癌DU145细胞在普通培养基中培养至对数生长期,无血清培养基重悬细胞培养至形成球状体,以细胞三维(3D)培养和二维(2D)培养方法分离前列腺癌类干细胞,观察细胞球的形成及其生长情况,通过CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕修复实验检测所... 详细信息

前列腺癌DU145细胞在普通培养基中培养至对数生长期,无血清培养基重悬细胞培养至形成球状体,以细胞三维(3D)培养和二维(2D)培养方法分离前列腺癌类干细胞,观察细胞球的形成及其生长情况,通过CCK-8细胞增殖实验和细胞划痕修复实验检测所分离细胞的增殖能力,结果显示前列腺癌DU145细胞在普通培养基中呈长梭形贴壁生长,无血清培养基培养72 h形成大量细胞球聚集体,细胞3D培养分离的细胞球的透明度和形态比2D培养分离的细胞好,3D培养分离细胞的增殖能力和划痕修复能力明显强于2D培养分离细胞。因此,细胞3D培养技术联合无血清培养基有利于前列腺癌干细胞的分离。

关键词：前列腺癌肿瘤干细胞无血清培养 2D培养 3D培养

皮肤炎症启动过程中树突状细胞的迁移及其诱导初始T细胞特异性增殖的数值模拟

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生物医学工程学杂志 2017年第5期34卷 797-802,811页

作者：胡文慧黄文竹胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025

树突状细胞(DCs)是目前已知的功能最为强大的专职抗原提呈细胞(APCs),在启动和放大固有免疫以及适应性免疫应答中起到重要的作用。在其发挥免疫功能的过程中,DCs的迁移能力以及DCs活化初始T细胞的能力与其发挥免疫功能的效率有着密切关... 详细信息

树突状细胞(DCs)是目前已知的功能最为强大的专职抗原提呈细胞(APCs),在启动和放大固有免疫以及适应性免疫应答中起到重要的作用。在其发挥免疫功能的过程中,DCs的迁移能力以及DCs活化初始T细胞的能力与其发挥免疫功能的效率有着密切关系。然而,由于免疫系统的复杂性,对于皮肤炎症引起DCs免疫应答的过程中细胞数量的动态变化依然知之甚少。因此,本研究利用数学模型对该过程进行数值模拟以及动态预测。通过设置函数和参数初始条件并构建常微分方程,模拟炎症引起免疫应答的初始阶段。结果显示,该方程能够较好地模拟DCs的迁移以及诱导初始T细胞特异性增殖的免疫应答过程,符合实际情况下免疫应答的持续时间、DCs和T细胞的增殖率和迁移率等生理学特性,并且能够对不同时间点DCs与T细胞的数量进行预测,可为研究DCs的免疫学功能提供理论参考,进一步为临床治疗免疫相关疾病提供实践指导。

关键词：树突状细胞皮肤炎症数学模型常微分方程

结直肠癌血液外泌体ceRNA网络的构建及生物信息学分析

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基因组学与应用生物学 2022年第3期41卷 682-690页

作者：闵海熊宇余鹏王赟张世超黄江涛刘鲜梅胡祖权曾柱贵州医科大学生物与工程学院贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心/生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵州省感染免疫与抗体工程重点实验室贵阳550025

为构建结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者血液外泌体circRNA/lncRNA-miRNA-mRNA的竞争性内源RNA(competitive endogenous RNA,ceRNA)网络,预测差异表达基因(differentially expressed genes,DEGenes)之间的潜在调控机制,我们从exoRBase数据库下载健康人(Homo sapiens)及CRC患者血液外泌体中信使RNA(messenger RNA,mRNA)、长非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)、环状RNA(circular RNA,circRNA)的基因数据,并进行差异筛选,共发现120个差异mRNAs,52个差异lncRNAs和81个差异circRNAs。利用多个数据库预测与lncRNA、circRNA和mRNA结合的miRNA,进而成功构建lncRNA/circRNA-miRNA-mRNA的ceRNA网络。基因本体(gene ontology,GO)分析表明,ceRNA网络中的DEGenes主要涉及细胞高尔基体的生物学调控及结构维持、细胞黏附连接及酶的催化活性。京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of gene and genomes,KEGG)分析共富集到14条信号通路,主要涉及志贺氏菌(Shigella)病和MAPK信号通路。因此,本研究成功构建了CRC患者血液外泌体ceRNA网络,为探究CRC的发病机制奠定了基础。

关键词：结直肠癌生物信息学 ceRNA 外泌体

白介素10对人成熟树突状细胞蛋白表达的影响

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基因组学与应用生物学 2019年第11期38卷 5250-5257页

作者：黄江涛赵雪刘江丽王赟刘丽娜胡祖权曾柱贵州省免疫细胞与抗体工程研究心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵阳550025

利用人外周血淋巴细胞分离液密度梯度离心分离CD14^+的单核细胞,并通过IL-4、GM-CSF、LPS、IFN-γ等重组细胞因子在体外将其诱导为成熟树突状细胞(mature dendritic cells,mDCs),利用10 ng/mL白介素10(interleukin-10,IL-10)处理mDCs 4 h,双向电泳联合MALDI-TOF/TOF MS技术分析差异表达蛋白。结果显示共筛选出35个差异蛋白点,其中21个上调,14个下调,它们的功能主要涉及糖代谢、HIF信号转导通路、细胞骨架和免疫功能等。因此,IL-10可能通过调控mDCs的代谢过程以及细胞骨架或运动能力等相关蛋白来影响其生物学功能,为进一步深入研究IL-10对mDCs的影响具有潜在作用。

关键词：白介素10 树突状细胞双向电泳差异表达蛋白

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贵州玉米籽粒镰刀菌污染情况调查

微生物学通报 2019年第4期46卷 752-759页

作者：尚国富于欢赵雪夏雪刘江丽彭晓燕曾柱胡祖权贵州省免疫细胞与抗体工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学生物与工程学院贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院贵州贵阳550025 环境污染与疾病监控省部共建教育部重点实验室(贵州医科大学) 贵州贵阳550025

【背景】镰刀菌引起的作物病害在贵州省内时有发生,由于该地区低温高湿的气候特征并不适宜镰刀菌生长,之前未系统开展镰刀菌侵染和分布情况调查。【目的】调查贵州省玉米籽粒中镰刀菌病害的污染情况。【方法】收集贵州省58个县/县级市... 详细信息

【背景】镰刀菌引起的作物病害在贵州省内时有发生,由于该地区低温高湿的气候特征并不适宜镰刀菌生长,之前未系统开展镰刀菌侵染和分布情况调查。【目的】调查贵州省玉米籽粒中镰刀菌病害的污染情况。【方法】收集贵州省58个县/县级市的玉米籽粒样品78份,利用原核表达的可用于检测镰刀菌的Fv SG7-AP融合蛋白对样品进行快速免疫学检测,并对部分样品进行生物学培养鉴定。【结果】共有67份样品检测结果为阳性,污染率高达85.90%,生物学培养后显微镜观察到镰刀菌菌丝和孢子。检测出镰刀菌污染的玉米样品分布在贵州省51个县/县级市,其中19个地区检测到轻度污染样品,20个地区检测到中度污染样品,12个地区检测到重度污染样品。【结论】贵州省绝大部分地区存在不同程度的镰刀菌污染,有必要在作物耕种、收获及贮藏期间采取有效的防控措施,以保障食品安全与人畜健康。

关键词：镰刀菌真菌污染单链抗体融合蛋白快速免疫学检测