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SIRT6在肝纤维化形成进程中的作用及其机制

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中国病理生理杂志 2024年第9期40卷 1652-1659页

作者：林夏萍黄仙玉孙健李映莹徐云燕黄波杨媛吴芹遵义医科大学基础药理教育部重点实验室暨特色民族药教育部国际合作联合实验室贵州遵义563006 遵义医科大学附属医院消化内科贵州遵义563003

目的:探讨沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,SIRT6)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导的小鼠肝纤维化作用和机制,以及肝星状细胞在SIRT6沉默后其下游通路的表达变化。方法:将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分... 详细信息

目的:探讨沉默信息调节因子6(silent information regulator 6,SIRT6)对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导的小鼠肝纤维化作用和机制,以及肝星状细胞在SIRT6沉默后其下游通路的表达变化。方法:将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(n=6)和模型组(造模2、4、8、12周,n=24),采用腹腔注射CCl_(4)制备肝纤维化小鼠模型,每周2次,持续12周。检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)含量评估肝损伤;HE、Masson染色观察小鼠肝脏病理学改变;免疫组织化学染色检测小鼠肝脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;Western blot检测肝脏α-SMA、SIRT6、第9位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetyl histone H3 at Lys9,H3K9ac)、第56位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetyl histone H3 at Lys56,H3K56ac)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18蛋白的表达。将大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells-T6,HSC-T6)进行SIRT6基因沉默,分为NC siRNA组和SIRT6 siRNA组。Western blot检测SIRT6、H3K9ac和H3K56ac蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠血清中ALT和AST含量均显著升高(P<0.05);HE染色和Masson结果显示,模型组肝脏病理变化逐渐加重,胶原纤维沉积逐渐增多;免疫组织化学染色与Western blot均显示,在8和12周模型组中肝脏α-SMA表达显著增加(P<0.05);Western blot检测结果显示,CCl_(4)造模后各组小鼠肝脏中SIRT6蛋白表达均低于正常对照组(P<0.05),并随肝纤维化的加重逐渐降低;同时模型组小鼠肝脏H3K9ac、H3K56ac、IL-1β和IL-18表达水平在8、12周时明显升高(P<0.05);SIRT6沉默后,与NC siRNA组比较,SIRT6 siRNA组中的H3K9ac和H3K56ac显著增加(P<0.05)。结论:SIRT6缺乏通过H3K9ac和H3K56ac的异常增多使得IL-1β和IL-18的表达升高,加剧炎症反应而促进肝纤维化进程,提示SIRT6的表达异常参与了肝纤维化进程的发展。

关键词：肝纤维化四氯化碳肝星状细胞沉默信息调节因子6 炎症因子

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核桃肽铁螯合物的制备及其结构表征

食品与发酵工业 2024年

作者：林栋张咏清肖自芬李雪张丽赟李莹骆衡贵阳学院食品科学与工程学院贵州医科大学药用植物功效与利用国家重点实验室

为充分利用核桃粕资源，同时解决传统补铁剂生物可及性低的问题，该研究采用正交试验优化制备了核桃肽-铁螯合物；通过紫外光谱、荧光光谱、扫描电镜、氨基酸分析及红外光谱对核桃肽-铁螯合物的结构进行表征；通过体外胃肠模拟消化试验... 详细信息

为充分利用核桃粕资源，同时解决传统补铁剂生物可及性低的问题，该研究采用正交试验优化制备了核桃肽-铁螯合物；通过紫外光谱、荧光光谱、扫描电镜、氨基酸分析及红外光谱对核桃肽-铁螯合物的结构进行表征；通过体外胃肠模拟消化试验探究核桃肽-铁螯合物Fe2+释放率；运用噻唑蓝法探究螯合物对Caco-2细胞活力的影响。结果表明，核桃肽-铁螯合物的最佳制备条件为多肽浓度4%，pH 7，核桃肽/FeCl2质量比3:1，反应温度40 ℃，反应时间40 min。在此条件下，螯合物中Fe2+螯合率可达91.99%。Fe2+引入后，核桃肽的表观形貌由光滑平面转变为疏松多孔的颗粒。红外光谱结果表明Fe2+主要通过羧基氧和氨基氮原子与核桃肽螯合。体外模拟胃肠道消化和细胞毒性试验结果表明，相比于硫酸亚铁，核桃肽-铁螯合物具有更高的Fe2+释放率和安全性。该研究结果将为核桃加工副产物的高值化利用及新型膳食铁补充剂的开发提供有益参考。

关键词：核桃补铁剂螯合物结构表征生物可及性

贵州省15岁及以上居民烟草使用现状及影响因素分析

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中国慢性病预防与控制 2024年第09期 687-691页

作者：胡诗瑶王惠群喻浩何琳贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州医科大学公共卫生与健康学院贵州省疾病预防控制中心

目的了解贵州省15岁及以上居民吸烟情况及影响因素，为控烟措施的制定提供依据。方法数据来源于2020年中国成人烟草调查的贵州省部分，采用多阶段分层整群随机抽样方法选取6 249名贵州省15岁及以上居民为研究对象。采用中国疾病预防... 详细信息

目的了解贵州省15岁及以上居民吸烟情况及影响因素，为控烟措施的制定提供依据。方法数据来源于2020年中国成人烟草调查的贵州省部分，采用多阶段分层整群随机抽样方法选取6 249名贵州省15岁及以上居民为研究对象。采用中国疾病预防控制中心编制的“2020年中国成人烟草调查问卷”，由经过培训合格的调查员采用面对面询问的方式进行问卷调查。问卷内容包括调查对象的基本情况（性别、年龄、文化程度、职业等）、吸烟情况、吸烟危害的知晓情况、控烟宣传、烟草广告、烟草促销、工作场所对吸烟的规定等信息。采用SAS 9.4和SPSS 22.0软件进行Rao-Scottχ2检验、Wilcoxon秩和检验和Kruskal-Wallis秩和检验。采用多因素logistic回归分析吸烟行为的影响因素。结果贵州省15岁及以上居民现在吸烟率为33.71%；每日吸烟者的开始吸烟中位年龄为20岁；现在吸烟者日平均吸烟量中位数为15支；居民对吸烟会引起卒中、心脏病、肺癌和阳痿的知晓率分别为33.72%、40.87%、65.07%和20.74%。多因素logistic回归分析结果显示，25～44岁（OR=1.804,95%CI:1.094～2.975）、无业（OR=3.761,95%CI:1.505～9.410）、过去30 d看到过影视剧中有人吸烟（OR=1.469,95%CI:1.124～1.920）、室内工作场所规定为部分允许（OR=2.051,95%CI:1.515～2.778）和完全允许（OR=1.768,95%CI:1.243～2.514）吸烟与现在吸烟高风险相关，而女性（OR=0.027,95%CI:0.018～0.039）、高中或中专文化程度（OR=0.546,95%CI:0.335～0.889）、大专及以上文化程度（OR=0.272,95%CI:0.168～0.441）、过去30 d看到过控烟宣传（OR=0.747,95%CI:0.564～0.989）与现在吸烟低风险相关，均有统计学意义（P贵州省15岁及以上居民现在吸烟率处于较高水平，对吸烟危害认知不全面，应针对男性、25～44岁、无业、低文化程度居民采取有针对性的控烟措施，以降低人群吸烟率。

关键词：吸烟开始吸烟年龄日平均吸烟量影响因素

急性缺血性脑卒中早期神经功能恶化预测模型构建及评价

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现代预防医学 2024年第1期51卷 166-172页

作者：毛永佳罗鹏毛诗贤叶德鑫龙蓉卢春远张江萍贵州医科大学公共卫生与健康学院环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州医科大学附属白云医院神经内科贵阳市云岩区卫生健康局

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者发生早期神经功能恶化(END)的危险因素并建立预测模型。方法将2018年1月—2022年12月在贵州医科大学附属白云医院收治的622例AIS患者纳入研究，根据结局事件诊断标准，将病例分为END组127例和非END... 详细信息

目的探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者发生早期神经功能恶化(END)的危险因素并建立预测模型。方法将2018年1月—2022年12月在贵州医科大学附属白云医院收治的622例AIS患者纳入研究，根据结局事件诊断标准，将病例分为END组127例和非END组495例。回顾性收集患者的临床基线、实验室数据和影像学资料，基于logistic回归算法探讨END发生的危险因素，构建预测模型并绘制列线图，采用区分度、校准度、临床适用度评价模型的预测价值。结果多因素二元logistic回归分析显示，心律、大脑中动脉狭窄、颈动脉狭窄、入院NHISS评分、纤维蛋白原、白蛋白、脑利钠肽(BNP)为END的独立危险因素(P<0.05)。通过Stata软件构建预测模型并绘制出列线图，利用验证集分析得到AUC为0.888(95%CI:0.821～0.955)，校准曲线斜率接近1，临床决策曲线净收益高于两条参考线，表明该预测模型预测END发生风险具有较好的区分度、准确度和临床适用度。结论本研究构建的模型具有较高的区分度、校准度及临床适用度，综合预测效能较好，对END的早期预测具有一定临床应用价值。

关键词：急性缺血性脑卒中早期神经功能恶化危险因素预测模型

MicroRNA-23a在自身免疫性肺气肿模型大鼠肺泡隔细胞凋亡中的作用

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海南医学院学报 2024年

作者：程贵容卢江桃张程遵义医科大学贵州医科大学贵州省人民医院国家卫生健康委员会肺脏免疫性疾病重点实验室

目的：研究微小RNA-23a（microRNA-23a，miRNA-23a）对自身免疫性肺气肿模型大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响。方法：随机将24只雄性SD大鼠分为肺气肿组、正常对照组和miRNA-23a 模拟物（miRNA-23a agomir）干预组。肺气肿组经腹腔注射人脐静... 详细信息

目的：研究微小RNA-23a（microRNA-23a，miRNA-23a）对自身免疫性肺气肿模型大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响。方法：随机将24只雄性SD大鼠分为肺气肿组、正常对照组和miRNA-23a 模拟物（miRNA-23a agomir）干预组。肺气肿组经腹腔注射人脐静脉内皮细胞与完全弗氏佐剂的混合物造模[1]+同miRNA-23a agomir干预组同日尾静脉注射同体积生理盐水；miRNA-23a agomir干预组：同日同肺气肿组方法造模+造模后第1、7、14、21天分别经尾静脉注射miRNA-23a agomir（25 μmol/L）；正常对照组同日腹腔注射同剂量完全弗氏佐剂+同miRNA-23a agomir干预组同日经尾静脉注射同体积生理盐水。造模21 d后，取各组大鼠右下肺行苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色），观察病理学变化，测量平均肺泡数（mean alveolar number，MAN）和平均内衬间隔（mean linear interce-pt，MLI）[1]；右上肺经实时定量聚合酶链反应（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测miRNA-23a表达水平，通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（Terminal deoxynucleotidyl transferaseme-diated dUTP nick end labeling，TUNEL）法检测凋亡肺泡隔细胞并计算凋亡指数（Apoptotic index，AI）[2]。血清检测抗血管内皮细胞抗体（Antiendothelial Cell Antibodies， AECA）的浓度[1]。结果：（1）各组肺气肿病理改变程度：正常对照组miRNA-23a agomir干预组>肺气肿组，各组差异有统计学意义（P﹤0.01）。各组MLI比较：正常对照组miRNA-23a agomir干预组>肺气肿组，各组差异有统计学意义（P﹤0.01）。（5）各组肺泡隔细胞凋亡指数比较：正常对照组更多还原AbstractFilter('ChDivSummary', 'ChDivSummaryMore', 'ChDivSummaryReset');

关键词：自身免疫性肺气肿 miRNA-23a 肺泡隔细胞凋亡

天麻素通过调节SREBP1c信号通路抑制非酒精性脂肪肝

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中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 70-77页

作者：张孟莲张耀文唐林峰巩仔鹏韩岚王丹丹安徽中医药大学药学院现代中药安徽省重点实验室合肥230012 贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室贵阳550014

目的:观察天麻素对高脂高胆固醇饲料(HFHC)诱导的小鼠在类固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)信号通路中的影响,研究天麻素治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法:体内采用8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组... 详细信息

目的:观察天麻素对高脂高胆固醇饲料(HFHC)诱导的小鼠在类固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)信号通路中的影响,研究天麻素治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法:体内采用8周龄雄性C57BL/6J小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、天麻素组(50 mg·kg^(-1))、模型组、模型加天麻素组(50 mg·kg^(-1))。小鼠给予HFHC喂养4周建立NAFLD模型,4周后处死并取出小鼠肝脏组织。体外实验选用Huh7细胞,分为5组,游离脂肪酸(200μmol·L^(-1),油酸-棕榈酸2∶1)诱导NAFLD细胞模型;24 h后每组加入不同浓度的天麻素(0、5、10、20、40μmol·L^(-1))继续培养24 h。油红O染色检测小鼠肝脏和Huh7细胞内脂质蓄积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理形态变化,全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三脂(TG)的水平。相关试剂盒检测肝脏TC、TG和游离脂肪酸(FFA)的含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测脂质合成关键蛋白脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清TC、LDL-C和TG含量显著升高(P<0.01),出现脂肪肝病变且肝内TC、TG和FFA含量显著升高(P<0.01),Huh7细胞脂质蓄积水平显著升高(P<0.01),小鼠和Huh7细胞脂质合成相关基因SREBP1c、FASN、ACC1和SCD1的表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,天麻素治疗后小鼠血清TC、LDL-C和TG水平明显降低(P<0.05,P<0.01),脂肪肝病变明显改善,肝脏TC、TG和FFA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),Huh7细胞脂质蓄积水平明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠和Huh7细胞脂质合成相关基因SREBP1c、FASN、ACC1和SCD1的表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:天麻素能够降低肝内脂质积累与血脂水平,改善HFHC诱导的NAFLD,其作用机制可能与调节SREBP1c脂质合成相关信号通路有关。

关键词：天麻素非酒精性脂肪肝固醇调节元件结合蛋白1c 血脂紊乱脂肪变性

双重血浆分子吸附系统序贯血浆置换联合连续性肾脏替代疗法治疗慢加急性肝衰竭合并急性肾损伤的效果分析

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临床肝胆病杂志 2024年第3期40卷 556-561页

作者：文苑祝娟娟贵州医科大学附属医院感染科贵阳550002

目的观察双重血浆分子吸附系统(DPMAS)序贯血浆置换(PE)联合连续性肾脏替代疗法(CRRT)治疗慢加急性肝衰竭(ACLF)合并急性肾损伤(AKI)患者的临床效果。方法回顾性纳入2019年1月—2022年12月于贵州医科大学附属医院住院治疗的ACLF合并AKI... 详细信息

目的观察双重血浆分子吸附系统(DPMAS)序贯血浆置换(PE)联合连续性肾脏替代疗法(CRRT)治疗慢加急性肝衰竭(ACLF)合并急性肾损伤(AKI)患者的临床效果。方法回顾性纳入2019年1月—2022年12月于贵州医科大学附属医院住院治疗的ACLF合并AKI的90例患者临床资料,依据不同的血液净化方式,分为DPMAS序贯PE联合CRRT组(观察组,n=31),DPMAS序贯PE组(对照组,n=59)。收集所有患者入院一般资料、血液净化治疗前后实验室指标,包括肝肾功能、凝血功能、炎症指标等,计算eGFR、MELD-Na评分。正态分布的计量资料两组间比较采用成组t检验;非正态分布的计量资料组内前后比较采用Wilcoxon符号秩和检验,两组间比较采用Mann-Whitney U检验。计数资料两组比较采用χ^(2)检验或Fisher精确检验。结果观察组治疗有效率为48.4%(15/31),高于对照组治疗的有效率27.1%(16/59)(χ^(2)=4.071,P=0.044)。两组血液净化方式均可有效改善TBil、ALT、AST、PTA、Scr、PCT、CRP、e GFR及MELD-Na评分(P值均0.05)。对照组与观察组的AST、Scr、PCT、e GFR、MELD-Na评分、Hb、PLT治疗前后差值比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论DPMAS序贯PE联合CRRT模式可有效清除炎症介质,改善肾功能,稳定机体内环境,获得较好的临床疗效。

关键词：慢加急性肝功能衰竭急性肾损伤血浆置换双重血浆分子吸附系统连续性肾脏替代疗法

MiRNA-126硬脂胺阳离子脂质体递送系统的构建及细胞摄取考察

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药物评价研究 2024年第9期 2006-2016页

作者：唐永瑜邰诗蝶吴兴杰陈英冯发进沈祥春邹弢陶玲贵州医科大学贵州医科大学药学院贵州省特色天然药物资源高效利用工程中心贵州省高等学校天然药物药理与成药性评价特色重点实验室贵州医科大学-贵阳市联合重点实验室天然药物资源优效利用重点实验室贵州省生物技术研究开发基地有限公司北京积水潭医院贵州医院

目的基于阳离子脂质体制备血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）单克隆抗体（VCAM-1 mAb）修饰的负载微小RNA-126（miR-126）的靶向递送系统，并初步评价其稳定性、细胞毒性及细胞摄取。方法采用薄膜分散-挤出法制备硬脂胺阳离子脂质体（SCL... 详细信息

目的基于阳离子脂质体制备血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）单克隆抗体（VCAM-1 mAb）修饰的负载微小RNA-126（miR-126）的靶向递送系统，并初步评价其稳定性、细胞毒性及细胞摄取。方法采用薄膜分散-挤出法制备硬脂胺阳离子脂质体（SCL），以脂质体粒径、电位为指标，单因素法考察大豆磷脂与胆固醇质量比、硬脂胺用量、无水乙醇的用量、成膜温度、水合介质用量、水合制备温度、水合制备时间；并考察其稀释稳定性及储存稳定性。采用琼脂糖凝胶阻滞实验考察SCL对miR-126的负载能力及对酶解的保护效果。利用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）/N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）交联法制备VCAM-1 mAb修饰的SCL（Va-SCL），并通过SDS-PAGE法考察VCAM-1 mAb与SCL的耦连效率。MTT法考察其对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的毒性，流式细胞术和荧光显微镜考察正常HUVECs及LPS(1μg·mL-1)刺激后HUVECs对miR-126、SCL/miR-126、Va-SCL/miR-126的摄取情况。结果精密称量大豆磷脂120mg、胆固醇40mg、硬脂胺10 mg于茄形瓶中，加入5 mL无水乙醇，50℃超声（功率300 W、频率40 kHz）使其充分溶解，肉眼观察无可见颗粒物或者不溶物，水浴减压蒸发除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明的脂质薄膜；加入12 mL DEPC水作为水合介质，水浴超声30 min，挤出器过孔径为200 nm聚碳酸酯膜7次，取续滤液，得SCL，稳定性良好。当氮磷比为10∶1时，SCL能够有效负载miR-126;miR-126通过静电吸附于SCL表面，SCL一定程度上保护miR-126不被酶解。SDS-PAGE结果显示，VCAM-1mAb与SCL成功偶联，接枝率为（53.2±7.6）%。MTT结果显示，Va-SCL、Va-SCL/miR-126对HUVECs的半数抑制浓度（IC50）值分别为17.38、71.61 nmol·L-1,SCL、SCL/miR-126的IC50值分别为81.03、97.79 nmol·L-1。荧光显微镜及流式结果均显示Va-SCL/miR-126的细胞摄取效果更为明显。结论成功制备了Va-SCL/miR-126，能明显增加miR-126的细胞摄取。

关键词：阳离子脂质体 miR-126 薄膜分散法 EDC/NHS法血管细胞黏附分子-1单克隆抗体修饰

S100A4在肥大细胞的表达及血清S100A4含量的检测对过敏性哮喘的诊断价值

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第9期 826-833页

作者：莫诗卉陶甜王晨予晏世荣李静吴通前余芳贵州医科大学医学检验学院微生物及免疫教研室贵州医科大学附属医院临床研究中心

目的初步研究S100钙结合蛋白A4(S100A4)是否参与肥大细胞脂质代谢以及对过敏性哮喘的临床意义。方法从基因表达数据集(GEO)数据库中下载过敏性哮喘相关的单细胞RNA(scRNA)表达矩阵GSE213085,使用R包进行数据可视化处理。通过体外培养... 详细信息

目的初步研究S100钙结合蛋白A4(S100A4)是否参与肥大细胞脂质代谢以及对过敏性哮喘的临床意义。方法从基因表达数据集(GEO)数据库中下载过敏性哮喘相关的单细胞RNA(scRNA)表达矩阵GSE213085,使用R包进行数据可视化处理。通过体外培养C57肥大细胞，慢病毒感染肥大细胞建立S100A4低表达的细胞系，实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测S100A4的mRNA和蛋白水平，实时荧光定量PCR检测脂质代谢相关基因ATP柠檬酸合成酶(ACLY)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、 CD36、溶质载体家族27a成员6(SCL27a6)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)的mRNA水平。采集过敏性哮喘的患者和健康对照人群外周血，ELISA检测血清S100A4水平，绘制受试者工作特征(ROC)曲线，分析S100A4对疾病的诊断效能，并计算曲线下面积(AUC)。结果用scRNA数据集GSE213085鉴定出26 225个细胞，提取出肥大细胞进行后续分析，功能富集分析结果表明，肥大细胞特征基因集中于脂质代谢相关的途径。肥大细胞低表达S100A4时，其脂质代谢相关基因ACLY、 ACC1、 CD36、 SCL27a6、 PPARα表达下调。ELISA检测显示过敏性哮喘患者血清S100A4较健康对照人群升高，ROC曲线发现，血清S100A4含量对过敏性哮喘具有一定诊断效能(AUC=0.746)。结论 S100A4可能参与肥大细胞脂质代谢调节，血清S100A4检测对过敏性哮喘诊断可能有一定价值。

关键词：过敏性哮喘肥大细胞 S100钙结合蛋白A4(S100A4) 生物信息学分析受试者特征曲线

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