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肝素酶在人β-防御素-3抗甲型流感病毒的作用研究

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中国病原生物学杂志 2022年第1期17卷 14-17,21页

作者：杨小余马贵凤唐源罗红江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州医科大学实验动物中心

目的探讨肝素酶在人β-防御素-3(Humanβ-defensin 3,HBD3)抗甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)中的作用。方法采用CCK8法检测肝素酶对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性情况;经肝素酶处理BEAS-2B细胞,并在4℃下与HBD3和IAV病毒液孵育... 详细信息

目的探讨肝素酶在人β-防御素-3(Humanβ-defensin 3,HBD3)抗甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)中的作用。方法采用CCK8法检测肝素酶对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性情况;经肝素酶处理BEAS-2B细胞,并在4℃下与HBD3和IAV病毒液孵育2 h,分为未处理组(HBD3+IAV),肝素酶+HBD3+IAV组,提取细胞总RNA和总蛋白,采用qRT-PCR检测感染细胞中的NP mRNA表达水平,Western blot和免疫共沉淀检测HBD3和IAV HA蛋白表达水平以及HBD3和HA蛋白的相互作用。试验设未经肝素酶处理BEAS-2B细胞对照组。结果肝素酶作用48 h,其浓度在30 U/mL以下浓度时对细胞无毒性作用;HBD3干预IAV感染细胞后细胞中的NP mRNA表达水平显著降低(t=12.81、26.13、28.68,P<0.01),经肝素酶处理IAV感染的细胞其NP mRNA表达水平升高(t=-4.55,P<0.05),结果显示HBD3可抑制病毒复制,而经肝素酶处理IAV感染的细胞其病毒未减少,表明只使用肝素酶不能降低病毒感染;与未经肝素酶处理的细胞相比,经肝素酶处理的细胞中HBD3和HA蛋白表达水平降低,以及HBD3和HA蛋白的相互作用显著降低(P<0.01),表明HBD3和肝素酶共同作用可降低HA的表达来阻止IAV进入细胞。结论肝素酶和HBD3共同作用可以抑制病毒进入细胞,具有抗甲型流感病作用。

关键词：甲型流感病毒人β-防御素3 肝素酶糖胺聚糖蛋白

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大麻二酚对小鼠肝纤维化抗氧化作用

中国公共卫生 2022年第2期38卷 181-185页

作者：马润舒远辉谢娜周艳项一宁王豫萍贵州医科大学医学检验学院临床微生物学及免疫学教研室贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫检验科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院病理科

目的探讨大麻二酚(CBD)对四氯化碳(CCL_(4))构建小鼠肝纤维化模型的抗氧化作用。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组,每组8只,依次为对照组,模型组,低、高剂量CBD组(4、8 mg/kg),秋水仙素组(0.2 mg/kg)。对照组小鼠腹腔注射花生油,剩余小... 详细信息

目的探讨大麻二酚(CBD)对四氯化碳(CCL_(4))构建小鼠肝纤维化模型的抗氧化作用。方法C57BL/6J雄性小鼠随机分为5组,每组8只,依次为对照组,模型组,低、高剂量CBD组(4、8 mg/kg),秋水仙素组(0.2 mg/kg)。对照组小鼠腹腔注射花生油,剩余小鼠按照5 mL/kg注射30%CCL_(4),每周2次,连续10周。CBD组和秋水仙素组在造模的同时每次注射相应剂量药物,对照组和模型组注射生理盐水。自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT);天狼星红染色检查肝组织胶原沉积情况;试剂盒检测肝组织氧化应激相关成分超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA);蛋白印迹(WB)检测肝组织还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶亚基gp91phox、核转录相关因子(Nrf2)表达情况。结果与模型组比较,低、高剂量CBD组和秋水仙素组肝指数[分别为(4.71±0.34)%、(4.68±0.20)%、(4.24±0.40)%]、血清ALT含量[分别为(79.38±14.79)、(87.13±9.40)、(77.88±3.76)U/L]明显降低(P<0.05),胶原沉积显著减少(P<0.05),肝组织SOD活力[分别为(259.90±36.05)、(223.13±37.49)、(246.39±53.49)U/mgprot]、GSH含量[分别为(63.07±16.71)、(100.38±22.44)、(96.39±19.40)nmol/mgprot]明显增高(P<0.05),而MDA含量[分别为(2.48±0.43)、(2.74±0.88)、(2.84±0.87)nmol/mgprot]显著降低(P<0.05),gp91蛋白表达降低(P<0.05),Nrf2蛋白表达增加(P<0.05)。结论CBD对CCL_(4)诱导的小鼠肝纤维化有一定的保护作用,其作用机制可能与调节gp91、Nrf2蛋白表达,减少自由基、抑制脂质过氧化相关。

关键词：大麻二酚四氯化碳肝纤维化氧化应激

重症肌无力患者治疗间期外周血记忆T细胞和滤泡T细胞及相关细胞因子水平变化的监测

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第3期38卷 257-262页

作者：马岚吴通前何菁菁沈雪余芳贵州医科大学医学检验学院临床微生物及免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床研究中心贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004

目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细... 详细信息

目的观察在重症肌无力(MG)治疗间期,T细胞亚群和炎性细胞因子及乙酰胆碱受体(AChR)抗体的变化,探讨其在MG发病机制中的作用。方法选取MG并处于治疗间期的患者30例及健康对照组20例,用流式细胞仪检测其外周血中CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、中枢记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+))细胞、效应记忆T(CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-)细胞、滤泡辅助T(CD4^(+)CXCR5^(+))细胞、滤泡调节T(CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+))细胞所占百分比情况;利用流式液相蛋白定量技术(CBA)检测外周血白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-12、IL-17及γ干扰素(IFN-γ)的水平;ELISA检测IL-7及AChR抗体的含量。结果与健康对照相比,MG患者外周血中CD4^(+)CXCR5^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7-T细胞、CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞及CD4/CD8比值未见明显变化,CD4^(+)CD45RO^(+)CCR7^(+)T细胞明显降低,CD4^(+)CXCR5^(+)FOXP3^(+)T细胞明显增加;MG患者IL-2、IL-4、IL-12、IL-17及IFN-γ水平均高于健康对照,而IL-7低于健康对照,AChR抗体水平无明显变化。各细胞因子水平与各T细胞亚群间未发现有明显相关性。结论治疗间期MG患者存在较为独特的记忆T细胞和滤泡T细胞表型及相关细胞因子水平变化。

关键词：重症肌无力记忆T细胞滤泡T细胞细胞因子细胞免疫

单核细胞HLA-DR百分比与单核细胞绝对计数联合应用对脓毒症预后的评估价值

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中国病原生物学杂志 2021年第4期16卷 384-388,395页

作者：张智琪汪浪沈雪张宇黄月明吴青青贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心

目的探讨外周血单核细胞人类白细胞抗原-DR(mHLA-DR)百分比联合单核细胞绝对计数(AMC)与脓毒症患者预后的相关性及其预测价值。方法选择2019年9月-2020年9月贵州医科大学附属医院收治的脓毒症患者33例,并根据28 d预后情况将其分为幸存... 详细信息

目的探讨外周血单核细胞人类白细胞抗原-DR(mHLA-DR)百分比联合单核细胞绝对计数(AMC)与脓毒症患者预后的相关性及其预测价值。方法选择2019年9月-2020年9月贵州医科大学附属医院收治的脓毒症患者33例,并根据28 d预后情况将其分为幸存组25例和非幸存组8例。记录患者一般资料、急性生理与慢性健康状况评估(APACHEⅡ)评分和序贯器官衰竭评估(SOFA)评分。比较两组患者外周血降钙素原(PCT)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、单核细胞绝对计数(AMC)和mHLA-DR表达水平的差异,采用单因素及多因素Logistic回归分析法分析脓毒症患者预后的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估不同指标对脓毒症患者的预后价值。结果非幸存组患者外周血PCT值6.04(1.03-20.16)ng/ml和NLR值13.69(7.86-24.21)均显著高于幸存组[2.18(0.54-9.50)ng/ml和和9.32(4.58-16.16)](P临床提供参考。

关键词：脓毒症人白细胞抗原-DR 单核细胞中性粒细胞/淋巴细胞值预后

联合检测四项生化指标对狼疮肾炎早期诊断的临床意义

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第11期 0050-0052页

作者：周艳贵州医科大学医学检验学院临床微生物免疫教研室贵州贵阳550004

探讨血清胱抑素C、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及肾小球滤过率估算值四项生化指标联合检测及血清抗核抗体谱对狼疮肾炎(LN)的早期诊断价值。方法收集2018年1月至2021年4月贵州医科大学附属医院收治的295例LN且伴有肾损伤的患者,另选取同时期... 详细信息

探讨血清胱抑素C、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及肾小球滤过率估算值四项生化指标联合检测及血清抗核抗体谱对狼疮肾炎(LN)的早期诊断价值。方法收集2018年1月至2021年4月贵州医科大学附属医院收治的295例LN且伴有肾损伤的患者,另选取同时期314例SLE非肾损伤患者为对照组。分别记录两组血清胱抑素C、血清肌酐、血清尿素水平、肾小球滤过率及抗核抗体结果(抗核抗体核型、滴度),比较上述各指标在两组中的差异。结果 LN组与SLE非肾损伤组比较,四项生化检测指标均具有显著差异(P免疫抗核抗体均质型及其滴度均高于SLE非肾损伤患者(P免疫荧光抗核抗体不同荧光模型及滴度与对狼疮性肾炎早期诊断也具有一定临床价值。

关键词：狼疮性肾炎胱抑素C 肌酐尿素氮肾小球滤过率抗核抗体

防气溶胶污染的UDG-LAMP-LFD核酸检测体系的建立

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中国病原生物学杂志 2023年第2期18卷 147-152页

作者：陈星湘费樱黄月明汪浪王榕吴青青贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州省人民医院湖南医药学院

目的建立一种基于热敏UDG酶防污染的、环介导等温扩增(LAMP)技术及横向流动试纸条(LFD)联合使用的核酸检测方法,实现对HPV18的快速、可视化检测。方法使用LAMP在线引物设计软件设计HPV18特异性引物,同时引入热敏UDG酶,建立UDG-LAMP检... 详细信息

目的建立一种基于热敏UDG酶防污染的、环介导等温扩增(LAMP)技术及横向流动试纸条(LFD)联合使用的核酸检测方法,实现对HPV18的快速、可视化检测。方法使用LAMP在线引物设计软件设计HPV18特异性引物,同时引入热敏UDG酶,建立UDG-LAMP检测体系,优化T/U碱基比例,设置对照试验验证热敏UDG酶防污染能力;根据LFD要求,设计特异性同化探针及淬灭探针,建立UDG-LAMP-LFD核酸检测体系并对LAMP反应时间进行优化;对该体系进行灵敏度、特异性及临床样品的验证,并与QPCR结果进行比较。结果优化的LAMP反应时间为40 min, T/U比例为1∶1;热敏UDG酶孵育时间为10 min,防污染效果显著;LFD结果判读耗时5 min,整个检测时间为55 min。该UDG-LAMP-LFD核酸检测体系在以HPV18作为检测对象时,灵敏度10^(3)拷贝/μl;29例临床样品的验证结果与QPCR检测结果完全一致。结论建立的UDG-LAMP-LFD检测体系可快速、特异、灵敏、可视化的检测HPV18,同时可避免气溶胶污染导致的假阳性。该方法对实验设备及工作人员要求较低,适合在偏远地区及基层医院使用。

关键词：热敏UDG酶环介导等温扩增技术横向流动试纸条人乳头瘤病毒18型气溶胶污染

人β防御素3和γ干扰素在MAPK信号通路中的相互诱导及联合抗甲型流感病毒的机制

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贵州医科大学学报 2023年第4期48卷 373-382页

作者：唐源祝洁杨小余张乙进罗红江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州贵阳550004

目的探讨人β防御素3(HBD3)和γ干扰素(IFN-γ)在丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中相互诱导作用及体外联合抗甲型流感病毒(IAV)H1N1的作用。方法不同剂量IFN-γ(12.5、25.0、50.0、100.0μg/L)或HBD3(0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L... 详细信息

目的探讨人β防御素3(HBD3)和γ干扰素(IFN-γ)在丝裂源活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中相互诱导作用及体外联合抗甲型流感病毒(IAV)H1N1的作用。方法不同剂量IFN-γ(12.5、25.0、50.0、100.0μg/L)或HBD3(0.25、0.50、1.00、2.00 mg/L)分别作用人支气管上皮细胞BEAS-2B 4、12、24、48 h,另设立p38 MAPK、ERK和JNK通路抑制剂预处理后、用IFN-γ(25.0μg/L)或HBD3(1.00 mg/L)处理BEAS-2B细胞4 h, qRT-PCR和ELISA检测HBD3及IFN-γ基因和蛋白表达,Western blot检测p-p38 MAPK、p-ERK、p-JNK蛋白表达;25.0μg/L IFN-γ、1.00 mg/L HBD3、HBD3 siRNA转染及IFN-γ中和抗体(0.50 mg/L)单独或联合作用BEAS-2B细胞、用5×TCID50H1N1感染,qRT-PCR和Western blot检测IAV核蛋白(NP)基因和蛋白的表达情况。结果在BEAS-2B细胞中,不同剂量的IFN-γ与HBD3可互相诱导表达(P0.05)。结论在BEAS-2B细胞中,HBD3和IFN-γ可通过MAPK通路相互诱导表达,且2者联合使用可增强抗IAV H1N1的作用。

关键词：甲型流感病毒人β防御素3 γ干扰素丝裂原活化蛋白激酶

利妥昔单抗对多发性硬化症复发期患者外周血NK细胞功能

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贵州医科大学学报 2024年第5期49卷 691-696页

作者：何菁菁晏世荣吴通前杨秀兰沈雪余芳贵州医科大学医学检验学院临床微生物及免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床研究中心贵州贵阳550004

目的观察利妥昔单抗对多发性硬化症(MS)复发期患者外周血NK细胞活化及ADCC功能的影响及机制。方法选取MS复发期病例(n=28),并将无自身免疫疾病及重大感染疾病的受试者作为健康对照组(n=25),提取两组被检者外周血单个核细胞(PBMCs),检测... 详细信息

目的观察利妥昔单抗对多发性硬化症(MS)复发期患者外周血NK细胞活化及ADCC功能的影响及机制。方法选取MS复发期病例(n=28),并将无自身免疫疾病及重大感染疾病的受试者作为健康对照组(n=25),提取两组被检者外周血单个核细胞(PBMCs),检测利妥昔单抗处理前后B细胞、自然杀伤细胞(NK)细胞比例及NK细胞活化水平;建立PBMCs与人慢性髓源白血病细胞系K562细胞直接接触共培养体系,检测利妥昔单抗处理后NK细胞抗体依赖细胞介导细胞毒性作用(ADCC)的效应因子释放。结果利妥昔单抗能诱导MS复发期组和健康对照组外周血中B细胞和NK细胞比例显著下调,且能诱导健康对照组的NK细胞活化及ADCC功能的显著上调,但对MS复发期患者NK细胞的活化及ADCC功无明显影响。结论利妥昔单抗可诱导MS复发期患者B细胞及NK细胞比例下调,但对NK细胞的活化及其ADCC功能无明显影响。

关键词：多发性硬化症利妥昔单抗自然杀伤细胞细胞活化效应因子抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用

抗血小板抗体在系统性红斑狼疮血小板减少患者中的临床意义

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2020年第11期 0049-0050页

作者：周艳宋华梅贵州医科大学医学检验学院临床微生物免疫教研室贵州贵阳550004

讨论抗血小板抗体在系统性红斑狼疮血小板减少患者中的临床作用。方法:收集我院2018年10月-2019年4月接收的37名系统性红斑狼疮血小板减少患者当作病例组,同时集我院同期50名系统性红斑狼疮血小板非减少患者当作疾病对比组,检测两组血... 详细信息

讨论抗血小板抗体在系统性红斑狼疮血小板减少患者中的临床作用。方法:收集我院2018年10月-2019年4月接收的37名系统性红斑狼疮血小板减少患者当作病例组,同时集我院同期50名系统性红斑狼疮血小板非减少患者当作疾病对比组,检测两组血清的抗血小板抗体,同时收集两组患者的临床资料包括:血小板计数、ANA抗体谱、免疫球蛋白:IgG、IgA、IgM、补体:C3、C4并对其进行统计学分析。结果:系统性红斑狼疮血小板减少组和血小板非减少组抗血小板抗体阳性率分别为为40.50%、12.00%,组间差异显著(P0.05),而病例组血清C3、C4与疾病对比组对比差别有统计学作用(P0.05)。结论:抗血小板抗体在系统性红斑狼疮血小板减少患者中显著升高。

关键词：系统性红斑狼疮血小板减少抗血小板抗体