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白屈菜红碱纳米粒的制备及体外抗黑色素瘤活性评价

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中国药房 2021年第24期32卷 2980-2986页

作者：杨锦韩伟张永萍陈晓兰李哲刘杰吴静澜贵州中医药大学药学院贵阳550025 贵州中医药大学基础医学院贵阳550025 贵州中医药大学兽用中药制剂创新研发中心贵阳550025

目的:制备白屈菜红碱纳米粒(CHE-NPs),对其处方进行优化,并评价其体外释药行为及对黑色素瘤的抑制作用。方法:以甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(m PEG-PLGA)为载体材料,采用纳米沉淀法制备CHE-NPs,采用高效液相色谱法和透析袋法... 详细信息

目的:制备白屈菜红碱纳米粒(CHE-NPs),对其处方进行优化,并评价其体外释药行为及对黑色素瘤的抑制作用。方法:以甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(m PEG-PLGA)为载体材料,采用纳米沉淀法制备CHE-NPs,采用高效液相色谱法和透析袋法测定包封率、载药量。以二者的总评归一(OD)值为因变量,以CHE投药量、mPEG-PLGA质量浓度、泊洛沙姆188(F68)浓度为自变量,采用Box-Behnken响应面设计优化CHE-NPs处方。检测最优处方所制CHE-NPs的粒径和Zeta电位,考察其体外释药特征,比较CHE原料药和CHE-NPs对小鼠B16黑色素瘤细胞存活率的影响并计算二者的半数抑制浓度。结果:最优处方为CHE投药量2 mg、mPEG-PLGA质量浓度13 mg/mL、F68浓度1.8%。以此所制CHE-NPs的平均包封率为(80.18±1.11)%,平均载药量为(11.36±0.28)%,平均OD值为0.96±0.04[与OD预测值(0.90)的相对偏差为6.67%],粒径为(113.1±1.40)nm,Zeta电位为(-21.6±0.29)m V,多分散性指数为0.07±0.01(n=3)。CHE对照品、CHE-NPs在孵育8 h时的累积释放率分别为90.87%、68.68%,后者的体外释药行为符合Weibull动力学模型。CHE-NPs对B16黑色素瘤细胞的抑制作用显著强于CHE原料药,CHENPs和CHE原料药的24 h半数抑制浓度分别为69.35、107.36μg/mL。结论:所制CHE-NPs具有缓释作用和较强的载药能力,同时增强了CHE对黑色素瘤的体外抑制作用。

关键词：白屈菜红碱黑色素瘤抑瘤作用甲氧基聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒 Box-Behnken响应面设计

基于PI3K/Akt信号通路探究当归补血汤干预大鼠实验性脑缺血再灌注损伤的作用机制

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中草药 2022年第16期53卷 5052-5065页

作者：石娅刘文刘兴德宋信莉李鑫舒万芬张甘纯秦琴王洪鑫贵州中医药大学贵州贵阳550025 贵州中医药大学药学院国家苗药工程技术研究中心贵州中药炮制与制剂工程技术研究中心贵州贵阳550025 贵州医科大学贵州贵阳550025

目的基于网络药理学结合体内实验探讨当归补血汤对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠的干预作用及相关作用机制。方法通过数据库收集当归补血汤中的活性成分及其治疗CIRI的靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作... 详细信息

目的基于网络药理学结合体内实验探讨当归补血汤对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠的干预作用及相关作用机制。方法通过数据库收集当归补血汤中的活性成分及其治疗CIRI的靶点,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并进行基因本体(gene ontology,GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;通过Auto Dock软件对关键作用靶点与主要活性成分进行分子对接验证。SD大鼠给予尼莫地平或当归补血汤2周后,采用改良Longa线栓法复制大脑中动脉栓塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,对神经行为学进行评分,并测定脑组织梗死面积;采用TUNEL染色法测定脑组织细胞凋亡情况;采用苏木素-伊红(HE)染色法考察脑组织病理变化;采用ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β水平;采用qRT-PCR检测脑组织TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达;采用Western blotting检测脑组织蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated Akt,p-Akt)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达。结果筛选出当归补血汤30种活性成分,得到当归补血汤治疗CIRI的靶点467个,核心靶点55个。KEGG通路富集分析表明磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/Akt信号通路是当归补血汤抗CIRI的关键机制之一。分子对接显示,当归补血汤中主要活性成分与核心作用靶点中的Akt1、信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、转录因子AP-1(transcription factor AP-1,JUN)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)、TNF和IL-6等具有较为稳定的结合活性。动物实验结果表明,当归补血汤能够改善CIRI大鼠神经功能损伤(P<0.05);减少脑组织梗死面积(P<0.05、0.01);减轻脑组织病理损伤;降低脑组织细胞凋亡指数(P<0.05、0.01、0.001);降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P<0.05、0.01);降低脑组织中TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达(P<0.01、0.001);增加脑组织中Akt的磷酸化水平(P<0.01、0.001)而激活PI3K/Akt信号通路,进一步上调Bcl-2蛋白表达(P<0.05、0.01、0.001),下调Bax蛋白表达(P<0.05、0.001)。结论当归补血汤可能通过作用多靶点及多通路治疗CIRI,其机制与影响Akt1、TNF、IL-6、IL-1β等蛋白的表达进而调控PI3K/Akt信号通路抑制炎症和细胞凋亡有关。

关键词：当归补血汤脑缺血再灌注损伤网络药理学磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路炎症细胞凋亡毛蕊异黄酮葡萄糖苷毛蕊异黄酮阿魏酸芒柄花素藁本内酯黄芪甲苷

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人字果质量标准的研究

中成药 2020年第10期42卷 2579-2583页

作者：赵超徐文芬孙庆文柏彩红贵州中医药大学贵州贵阳550025

目的建立人字果Dichocarpum dalzielii(*** Hutch.)*** et Hsiao质量标准。方法HPLC法测定木兰花碱含有量,酸性染料比色法测定总生物碱含有量,2015年版《中国药典》法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含有量。结果木兰花碱... 详细信息

目的建立人字果Dichocarpum dalzielii(*** Hutch.)*** et Hsiao质量标准。方法HPLC法测定木兰花碱含有量,酸性染料比色法测定总生物碱含有量,2015年版《中国药典》法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含有量。结果木兰花碱在0.2002~10.01μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为100.70%,RSD为2.9%;总生物碱在4.048~20.24 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为96.70%,RSD为3.6%。12批样品中,木兰花碱、总生物碱、水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物质量分数分别为0.27%~1.49%、3.35%~5.98%、6.45%~8.50%、9.11%~13.35%、0.27%~2.96%、18.41%~25.06%。结论该方法准确可靠,重复性好,可用于人字果的质量控制。

关键词：人字果木兰花碱总生物碱 HPLC 酸性染料比色 2015年版《中国药典》

矿物药自然铜光热纳米材料制备及光热性能研究综合性实验设计

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实验技术与管理 2024年第1期41卷 115-122页

作者：王贤书郝威李佳李明霞温尹杨莹周军王勤贵州中医药大学药学院贵州贵阳550025 贵州中医药大学药物物理研究中心贵州贵阳550025 贵州中医药大学药用矿物研究中心贵州贵阳550025

本文结合矿物药炮制研究特色和光热纳米材料研究热点,设计了“矿物药自然铜光热纳米材料制备及光热性能研究”综合性实验。该实验以矿物药自然铜为原料,通过火煅醋淬制备炮制品,再通过球磨磁选方法制备纳米光热材料。该实验过程涉及纳... 详细信息

本文结合矿物药炮制研究特色和光热纳米材料研究热点,设计了“矿物药自然铜光热纳米材料制备及光热性能研究”综合性实验。该实验以矿物药自然铜为原料,通过火煅醋淬制备炮制品,再通过球磨磁选方法制备纳米光热材料。该实验过程涉及纳米材料制备、光热性能测试、矿物药炮制与加工、表征与测试、数据处理等多方面知识,有利于学生深化所学理论知识、培养创新思维,并综合运用所学知识进行科学研究。

关键词：中药炮制学矿物药自然铜光热纳米

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中药药理与临床 2019年第6期35卷 45-49页

作者：杨凡管连城柴艺汇高洁李文秦忠陈云志贵州中医药大学第二附属医院贵阳550002 贵州中医药大学实验中心贵阳550025 贵州中医药大学基础医学院贵阳550025

目的:探讨淫羊藿苷对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及孕酮、孕烯醇酮相关基因表达的影响。方法:MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷和维生素D对H295R细胞增殖率的影响。ELISA法检测孕酮、孕烯醇酮分泌水平。RT-qPCR检测VDR、CYP27B... 详细信息

目的:探讨淫羊藿苷对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及孕酮、孕烯醇酮相关基因表达的影响。方法:MTT法检测不同浓度的淫羊藿苷和维生素D对H295R细胞增殖率的影响。ELISA法检测孕酮、孕烯醇酮分泌水平。RT-qPCR检测VDR、CYP27B、CYP24A、CYP17A1、CYP21 mRNA表达。Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:淫羊藿苷10-8 mol/L浓度,维生素D在0.25×10-11 mol/L和0.5×10-11 mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。而淫羊藿苷10-4 mol/L,维生素D在2×10-11 mol/L和4×10-11 mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与对照组比较,维生素D组与淫羊藿苷10-5 mol/L、10-6 mol/L组的VDR、CYP27B mRNA与蛋白表达明显上调,维生素D组与淫羊藿苷10-6 mol/L、10-7 mol/L组的CYP24A mRNA与蛋白表达则明显下调,维生素D组与淫羊藿苷各剂量组孕酮、孕烯醇酮分泌水平均明显下降,维生素D组与淫羊藿苷10-6 mol/L组CYP17A1、CYP21 mRNA表达均明显上调。结论:淫羊藿苷可能通过调节H295R细胞维生素D系统对孕酮、孕烯醇酮合成分泌产生影响。

关键词：淫羊藿苷 H295R细胞维生素D系统孕酮孕烯醇酮

黄芪多糖离体条件下对H295R细胞维生素D系统相关蛋白表达及睾酮分泌的影响

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中药药理与临床 2020年第2期36卷 132-136页

目的:探讨黄芪多糖对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及睾酮表达的影响。方法:随机分为空白对照组、维生素D组、黄芪多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL组,四唑盐(MTT)法检测不同浓度的黄芪多糖和维生素D对H295R细胞增殖率的影... 详细信息

目的:探讨黄芪多糖对人肾上腺皮质细胞(H295R细胞)维生素D系统及睾酮表达的影响。方法:随机分为空白对照组、维生素D组、黄芪多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL组,四唑盐(MTT)法检测不同浓度的黄芪多糖和维生素D对H295R细胞增殖率的影响,ELISA法检测睾酮分泌水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测维生素D受体(VDR)、25-羟基维生素D3-1α-羟化酶(CYP27B)、维生素D3-24-羟化酶(CYP24A)、17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD)、19α-羟化酶(CYP19A1)mRNA表达,Western blot法检测VDR、CYP27B、CYP24A蛋白表达。结果:黄芪多糖12.5μg/mL浓度,维生素D在0.25×10^-11 mol/L和0.5×10^-11 mol/L浓度,对H295R细胞增殖无显著影响。黄芪多糖200μg/mL,维生素D在2×10^-11 mol/L和4×10^-11 mol/L浓度时对H295R细胞增殖存在一定抑制作用。与空白对照组比较,维生素D组与黄芪多糖100μg/mL组睾酮分泌水平显著升高,VDR、CYP24A、17β-HSD mRNA表达显著上调,CYP27B蛋白及mRNA、CYP19A1 mRNA表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:离体条件下,黄芪多糖可能通过调节H295R细胞维生素D系统促进睾酮合成分泌。

关键词：黄芪多糖 H295R细胞维生素D系统睾酮

二甲双胍与结直肠癌发病关系的两样本孟德尔随机化研究

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现代预防医学 2024年第13期51卷 2484-2490页

作者：邱汉波唐东昕杨兵白媛媛李洲强杨柱贵州中医药大学贵州中医药大学第一附属医院临床医学研究中心贵州省中医肿瘤传承与科技创新人才基地贵州省中医肿瘤传承与创新研究团队广西中医药大学柳州市中医院

目的采用两样本孟德尔随机化(MR)分析评价二甲双胍改善结直肠癌是否存在潜在的因果关系。方法从遗传变异全基因关联研究(genome-wide association analyses, GWAS)数据库获取二甲双胍及结直肠癌数据样本及单核苷酸多态性（SNP），以MR... 详细信息

目的采用两样本孟德尔随机化(MR)分析评价二甲双胍改善结直肠癌是否存在潜在的因果关系。方法从遗传变异全基因关联研究(genome-wide association analyses, GWAS)数据库获取二甲双胍及结直肠癌数据样本及单核苷酸多态性（SNP），以MR Egger回归、IVW(inverse variance weighted)两种方法进行异质性检验，利用MR-Egger回归截距进行多效性分析，最后采用逆方差加权(IVW)作为主要分析方法，MR-Egger回归、加权中位值法（WM）、简单模式法（SM）、加权模式法为补充方法，计算OR值评估两者的潜在因果关系，以散点图、森林图的形式进行可视化。结果异质性检验MR Egger回归（P=0.61）、IVW(P=0.55)表明不存在异质性；多效性检验回归截距（MR Egger intercept=0.02,P=0.14）表明不存在多效性；IVW(OR=0.005 0,95%CI:0.000 4～0.070 3,P<0.001)、MR Egger(OR=5.47×10-6,95%CI:5.05×10-10～0.059 2,P=0.01)、加权中位值（OR=0.003 4,95%CI:6.68×10-5～0.169 7,P=0.004 4）、SM(OR=0.013 7,95%CI:2.46×10-5～7.599 1,P=0.19)、加权模式（OR=0.000 3,95%CI:2.26×10-5～0.036 7,P=0.002）方法 OR值均<1，且IVW、MR-Egger回归、加权中位值、加权模式均P<0.05。结论基于本次MR分析结果表明，二甲双胍能降低结直肠癌发病率。

关键词：结直肠癌二甲双胍孟德尔随机化

金乌健骨胶囊对类风湿关节炎滑膜细胞增殖、迁移及凋亡的影响

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中华中医药杂志 2022年第1期37卷 513-517页

作者：凌益任妮娜徐晖肖丽娜黄颖陆道敏唐芳姚血明陈昌明马武开贵州中医药大学贵阳550001 贵州中医药大学第二附属医院贵阳550001

目的:探讨金乌健骨胶囊对类风湿关节炎成纤维样滑膜(RA-FLS)细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:采用组织块贴壁法分离培养RA-FLS细胞,HE染色和免疫化学法鉴定细胞。根据含药血清比例将细胞分为空白对照组,兔血清对照组,金乌健骨胶囊含... 详细信息

目的:探讨金乌健骨胶囊对类风湿关节炎成纤维样滑膜(RA-FLS)细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:采用组织块贴壁法分离培养RA-FLS细胞,HE染色和免疫化学法鉴定细胞。根据含药血清比例将细胞分为空白对照组,兔血清对照组,金乌健骨胶囊含药血清高、中、低剂量组和来氟米特对照组。CCK-8法检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Western Blot检测Caspase8和Caspase3蛋白表达水平,ELISA检测TNF-α、TNFR1的分泌。结果:组织块法分离培养的细胞为RA-FLS。与空白组比较,不同浓度金乌健骨胶囊24、48 h能抑制RA-FLS增殖(P<0.05)。与兔血清对照组比较,金乌健骨胶囊各剂量组抑制RA-FLS伤口愈合(P<0.05),下调Caspase8、Caspase3蛋白表达(P<0.05),下调细胞培养上清中TNF-α浓度(P<0.05),上调TNFR1浓度(P<0.05)。其中金乌健骨胶囊高剂量组各指标优于来氟米特对照组(P<0.05)。结论:金乌健骨胶囊通过抑制RA患者FLS细胞TNF-α分泌,促进TNFR1的分泌,增加Caspase8、Caspase3蛋白表达,正向调节RA-FLS细胞凋亡,抑制RA-FLS增殖和迁移。

关键词：类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞金乌健骨胶囊增殖迁移凋亡机制

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鹿皮胶对气血亏虚模型小鼠的保护作用

中成药 2024年

作者：毛洪运刘雨彤崔杰李梦雨郑云枫张童侯蓉华永庆许惠琴江苏省中药资源产业化过程协同创新中心南京中医药大学药学院贵州广济堂健康药业有限公司江苏省中药药效与安全性评价重点实验室

目的研究鹿皮胶对气血亏虚模型小鼠的改善作用。方法将60只小鼠随机分为空白组、模型组、阿胶组(0.8g/kg)和鹿皮胶低、中、高剂量组(0.585、1.17、2.34g/kg)，每组10只，给予相应药物干预15d，除空白组外，其余各组小鼠于第2、5天通过... 详细信息

目的研究鹿皮胶对气血亏虚模型小鼠的改善作用。方法将60只小鼠随机分为空白组、模型组、阿胶组(0.8g/kg)和鹿皮胶低、中、高剂量组(0.585、1.17、2.34g/kg)，每组10只，给予相应药物干预15d，除空白组外，其余各组小鼠于第2、5天通过腹腔注射环磷酰胺和皮下注射乙酰苯肼建立气血亏虚模型。给药结束后，计算各组小鼠体征评分，爬杆实验测定力竭时间，检测外周血常规及血清EPO、IL-3、SCF、BUN、LD水平，检测肝糖原水平及肌肉组织ATP酶活性，流式细胞术检测BMNCs凋亡率及其CD34+细胞表达率。结果与模型组比较，鹿皮胶高剂量组小鼠体征评分降低(P<0.01)，RBC、WBC、HGB及血清SCF水平升高(P<0.05)，BMNCs凋亡率降低(P<0.01)，CD34+细胞表达率升高(P<0.01)，爬杆时间、肝糖原水平及肌肉组织Na+-K+-ATPase活性升高(P<0.05)，血清BUN、LD水平降低(P<0.01)。结论鹿皮胶具有增强气血亏虚模型小鼠造血功能及抗疲劳作用，其作用可能与抑制骨髓细胞凋亡、促进造血干细胞分化、升高外周血细胞数目，促进糖原合成及升高ATP酶活性等能量利用有关。

关键词：鹿皮胶气血亏虚益气补血造血干细胞抗疲劳