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小血管的扫描电镜样品制备法

电子显微学报 2001年第4期20卷 535-536页

作者：李向党黄梅西安第四军医大学电镜中心西安710032

在小血管的扫描电镜样品制备过程中, 由于血管干燥之后, 血管弹力板层像棉花一样极不易切割, 强行切割时会出现撕裂血管壁的现象.我们试用强力万能胶粘剂对样品进行处理, 获得了满意的效果, 此法尚未见文献报道, 现介绍如下.

关键词：小血管白鼠 SEM样品制备强力万能胶粘剂切割血管弹力板层

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游离细胞超快扫描电镜样品制备法

电子显微学报 2001年第4期20卷 537-538页

作者：李向党西安第四军医大学电镜中心西安710032

在游离细胞的扫描电镜样品制备方法中, 需要解决的关键问题是如何使细胞均匀而又不重叠地分布于盖玻片上, 同时在一系列处理过程中细胞不易脱落.用常规的方法进行处理,步骤繁琐, 所用时间又长且在样品处理过程中细胞有丢失现象.我们用... 详细信息

在游离细胞的扫描电镜样品制备方法中, 需要解决的关键问题是如何使细胞均匀而又不重叠地分布于盖玻片上, 同时在一系列处理过程中细胞不易脱落.用常规的方法进行处理,步骤繁琐, 所用时间又长且在样品处理过程中细胞有丢失现象.我们用细胞沉淀器加微波辐射技术进行游离细胞快速扫描电镜样品制备, 获得满意的结果,现介绍如下.

关键词：游离细胞快速SEM样品制备盖玻片细胞沉淀器加微波辐射技术细胞丢失生物医学临床诊断

骨植入材料表面微结构对MC3T3-E1成骨细胞成骨分化的影响

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中国组织工程研究 2025年第10期29卷 1990-1996页

作者：黄丽苹李卉王新革王瑞常蓓李适廷兰小蓉李广文西南医科大学附属口腔医院种植科口颌面修复重建和再生泸州市重点实验室四川省泸州市646000 西南医科大学公共卫生学院流行病与统计教研室四川省泸州市646000 军事口腔医学国家重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔医学重点实验室第四军医大学口腔医院修复科陕西省西安市710032 空军军医大学唐都医院军队人员医疗保健中心陕西省西安市710032 火箭军特色医学中心口腔科北京市100088

背景:骨植入材料表面微纳结构仿生设计可模拟人体天然骨组织中细胞外环境的结构,从而获得较为理想的骨整合功能,但骨植入材料表面微纳结构调控细胞功能及促进成骨的机制还有待进一研究。目的:分析钛片材料微结构表面对MC3T3-E1成骨细胞... 详细信息

背景:骨植入材料表面微纳结构仿生设计可模拟人体天然骨组织中细胞外环境的结构,从而获得较为理想的骨整合功能,但骨植入材料表面微纳结构调控细胞功能及促进成骨的机制还有待进一研究。目的:分析钛片材料微结构表面对MC3T3-E1成骨细胞成骨分化的影响。方法:(1)在5 V或20 V恒定电压下,采用酸蚀和阳极氧化技术在钛片表面制备不同管径的纳米管阵列,分别记为R5组、R20组。检测纯钛片(未经酸蚀和阳极氧化处理)、R5组、R20组的表面形貌、粗糙度与亲水性。(2)将对数生长期的MC3T3-E1成骨细胞分别接种于纯钛片、R5组、R20组钛片表面,成骨诱导培养24 h后,采用RT-PCR检测与免疫荧光染色分析细胞机械敏感通道蛋白1的表达;加入含或不含机械敏感通道蛋白1激活剂Yada1的成骨诱导基,培养7 d后进行碱性磷酸酶染色,培养14 d后进行茜素红染色。结果与结论:(1)扫描电镜下可见纯钛片表面光滑,R5组、R20组钛片表面可见分布相对均匀且有序的纳米管阵列,平均直径分别约30 nm和100 nm,原子力显微镜进一步验证了扫描电镜观察结果。R5组钛片表面粗糙度大于纯钛片(P <0.05),水接触角小于纯钛片(P <0.05);R20组钛片表面粗糙度大于R5组(P<0.05),水接触角小于R5组(P<0.05)。(2)RT-PCR检测与免疫荧光染色显示,R5组细胞机械敏感通道蛋白1的表达高于纯钛片组(P <0.05),R20组细胞机械敏感通道蛋白1的表达高于R5组(P <0.05)。在成骨诱导条件下,与未加入Yada1情况相比,纯钛片组加入Yada1后的细胞碱性磷酸酶活性、钙化结节沉积均无明显变化,R5组、R20组加入Yada1后的细胞碱性磷酸酶活性、钙化结节沉积均显著增加(P <0.05);在加入或未加入Yada1情况下,R5组细胞碱性磷酸酶活性与钙化结节沉积均多于纯钛片组(P <0.05),R20组细胞碱性磷酸酶活性与钙化结节沉积均多于R5组(P <0.05)。(3)结果表明,钛片表面微结构可通过激活机械敏感通道蛋白1促进成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化。

关键词：骨植入材料钛种植体材料微结构机械敏感通道蛋白成骨分化 PIEZO1

小肠RNA对受^(60)Co γ射线照射后小鼠肠粘膜屏障的保护作用

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辐射研究与辐射工艺学报 2006年第6期24卷 356-361页

作者：苏晓明曾桂英任东青田锐锋周晓光赵涛王爽杨家骥徐修礼第四军医大学军事预防医学系放射医学教研室西安710032 第四军医大学校直干休所西安710032 第四军医大学基础部电镜中心西安710032 第四军医大学西京医院检验科西安710033

以BALB/c小鼠为研究对象,用60Coγ射线进行11.5Gy的腹部一次照射,照后1—3h采用局部肠腔扩张注入法给小鼠空肠肠腔内注入正常大鼠小肠核糖核酸(Ribonucleicacid,RNA),照后1、3、5d取全小肠,制备肠粘液,测定免疫球蛋白分泌型免疫球蛋白A(... 详细信息

以BALB/c小鼠为研究对象,用60Coγ射线进行11.5Gy的腹部一次照射,照后1—3h采用局部肠腔扩张注入法给小鼠空肠肠腔内注入正常大鼠小肠核糖核酸(Ribonucleicacid,RNA),照后1、3、5d取全小肠,制备肠粘液,测定免疫球蛋白分泌型免疫球蛋白A(SecretedimmunoglobulinA,sIgA)含量;取空肠段,观察肠绒毛形态变化;取血,测定内毒素含量;取肠系膜淋巴结,测定细菌移位率。探讨小肠RNA对γ射线照射后小鼠肠粘膜屏障的保护作用。结果表明,小肠RNA可明显提高受照后小鼠肠粘液中免疫球蛋白sIgA的含量(p<0.01),减轻肠绒毛的萎缩及塌陷,改善肠粘膜形态结构,降低肠系膜淋巴结细菌移位率和血中内毒素含量。以上结果显示,小肠RNA对γ线照射后的小鼠肠粘膜屏障有明显的保护作用,能抑制肠道细菌移位和肠内内毒素的吸收。

关键词：小肠核糖核酸 γ射线分泌型免疫球蛋白A 内毒素细菌移位

不同声强超声波对细胞骨架微丝F-actin表达的影响

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中国康复医学杂志 2009年第6期24卷 515-517,I0001页

作者：王冰水袁华王斌牟翔刘卫刘静陈丹第四军医大学西京医院物理医学与康复科西安710032 第四军医大学电镜中心

目的:研究不同声强超声波对人脐血管内皮细胞(ECV-304)细胞骨架F-actin表达的影响,探讨超声波对人体的作用机制。方法:将人脐血管内皮细胞ECV-304接种于6孔板中,分别以频率800kHz,占空比为30%功率密度0.20、0.40、0.60和0.80W/cm2,的脉... 详细信息

目的:研究不同声强超声波对人脐血管内皮细胞(ECV-304)细胞骨架F-actin表达的影响,探讨超声波对人体的作用机制。方法:将人脐血管内皮细胞ECV-304接种于6孔板中,分别以频率800kHz,占空比为30%功率密度0.20、0.40、0.60和0.80W/cm2,的脉冲超声波辐射5min,于辐射后不同时间,对ECV-304细胞进行F-actin免疫荧光染色,应用激光扫描共聚焦显微镜,观察细胞F-actin表达的改变,测定单个细胞F-actin的平均荧光强度。结果:假辐射组细胞有中等量的F-actin表达,荧光物质部分呈弥漫状态,部分呈线形应力丝状态,细胞膜荧光较强,胞浆内的肌动蛋白纤维丝,方向不规则,长短不一。四组不同强度超声波辐射后的细胞变化较为一致,辐射后均可看到胞浆中微丝F-actin粗大纤长,弥漫状态的荧光物质相对较少,应力丝沿细胞纵轴排列较多,数量及荧光强度也明显增加,细胞膜荧光较强,超声波辐射的四组细胞之间没有明显的差别。随时间的延长细胞应力丝逐渐减少,12h时已接近正常组细胞,各组细胞的变化是同步的。结论:800kHz的脉冲式超声波辐射ECV-304细胞可诱导F-actin表达的改变,导致细胞骨架重建,超声波强度≤0.80W/cm2时,引起的细胞骨架改变是可逆的。

关键词：超声人脐血管内皮细胞聚合态肌动蛋白激光扫描共聚焦显微镜

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一种快速简便的超薄切片选择性染色法

一种快速简便的超薄切片选择性染色法

优化配方的CPC/DBM/rhBMP-2复合材料在体内的超微结构和组织学特征

第十二届全国电子显微学会议

作者：李向党黄梅王春梅西安笫四军医大学电镜中心西安笫四军医大学电镜中心西安笫四军医大学电镜中心

本文针对细胞染色时间过长且易出污染样品现象,介绍了一种微波辐射技术,用以加快制作染色过程,提高染色质量.

关键词：染色技术细胞微波辐射技术电镜观察

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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解放军医学杂志 2008年第6期33卷 652-654页

作者：任民范清宇马保安王春梅吕荣龙华吴进陈烁周勇第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所西安710038 第四军医大学电镜中心第四军医大学西京医院骨科

目的探讨磷酸钙骨水泥(CPC)/脱钙骨基质颗粒(DBM)/重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)复合材料在骨内的超微结构和组织学特征,评价该材料的成骨性能。方法预制兔DBM,按0.2的DBM质量比制作CPC/DBM/rhBMP-2复合材料。将复合材料(A组,n=12)、CPC(... 详细信息

目的探讨磷酸钙骨水泥(CPC)/脱钙骨基质颗粒(DBM)/重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)复合材料在骨内的超微结构和组织学特征,评价该材料的成骨性能。方法预制兔DBM,按0.2的DBM质量比制作CPC/DBM/rhBMP-2复合材料。将复合材料(A组,n=12)、CPC(B组,n=10)、医用骨水泥(C组,n=7)分别植入兔股骨髁部骨缺损,在植入后第6、12、24周取材进行组织学和扫描电镜观察。结果术后第6周,A组中复合材料-骨界面模糊,宿骨发出纤维连续通过界面,编织骨样结构开始向材料内部长入。第12周,A组中血管和成骨细胞在复合材料内部生长,产生新骨。第24周,A组中骨缺损已修复,形成骨性连接,材料大部分被新骨替代。B组术后第6周CPC-骨界限清晰,未见新骨向材料内部长入,第24周骨缺损部位仍为CPC填充,材料内部未见新骨出现。C组材料直至第24周尚未与宿骨形成任何连接。A组材料在成骨细胞活性、血管化程度和新骨生长速度方面均优于B组。结论将DBM质量比为0.2的复合材料植入骨缺损内可以促进细胞、血管、新骨的长入,且易降解及被自体骨替代。

关键词：磷酸钙骨水泥脱钙骨基质骨形态发生蛋白质类超微结构骨代用品

Ⅰ型胶原修饰的多孔材料聚乙醇酸-乳酸共聚物对兔骨髓间充质干细胞粘附和增殖及成骨细胞基因表达的影响

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中华医学杂志 2003年第7期83卷 580-583页

作者：刘刚胡蕴玉颜永年熊卓王哲吕荣白建萍杨家骥第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032 清华大学机械系第四军医大学基础部病理学教研室第四军医大学电镜中心

目的　探讨Ⅰ型胶原修饰多孔高分子材料聚乙醇酸乳酸共聚物 (PLGA)对骨髓间充质干细胞 (MSC)粘附、增殖的影响及成骨细胞基因表达情况。方法　以密度梯度离心法获得成年兔骨髓间充质干细胞 ,在含 10 %小牛血清的RPMI 16 4 0为培养基... 详细信息

目的　探讨Ⅰ型胶原修饰多孔高分子材料聚乙醇酸乳酸共聚物 (PLGA)对骨髓间充质干细胞 (MSC)粘附、增殖的影响及成骨细胞基因表达情况。方法　以密度梯度离心法获得成年兔骨髓间充质干细胞 ,在含 10 %小牛血清的RPMI 16 4 0为培养基条件下 ,以一定初始浓度分别接种于大小约为 0 3cm× 1 2cm× 2 0cm立体材料PLGA。其中 ,预先包被Ⅰ型胶原的PLGA作为实验组 ,未经Ⅰ型胶原修饰作为阴性对照组。分别于接种后 2、4、6和 8h收获细胞 ,通过检测 [3 H] 胸腺嘧啶核苷 ([3 H] TdR)的掺入率 ,反映细胞的粘附情况 ;检测细胞接种后 7、14、2 1d的 [3 H] TdR掺入率 ,了解细胞的增殖速率。应用RT PCR法检测细胞骨钙素 (OCN)、碱性磷酸酶 (ALP)、骨桥蛋白 (OPN)mRNA的表达 ,观察骨髓基质细胞的成骨细胞分化情况。并通过电镜 ,观察细胞在材料上的形态和贴附情况。结果　Ⅰ型胶原能明显促进MSC在高分子材料上的粘附 ,6h和 8h时间点与对照组相比 ,差异均有显著意义 (6h ,2 14 4cpm± 14 1cpmvs 1797cpm± 118cpm ,P =0 0 17;8h ,2 311cpm±113cpmvs 1891cpm± 10 3cpm ,P =0 0 10均P <0 0 5 )。Ⅰ型胶原也显著能促进MSC增殖 ,细胞培养第 7d ,实验组的cpm值为 10 2 1± 15 9,对照组 4 5 1± 6 7(t=- 7 330 ,P =0

关键词： I型胶原修饰多孔材料聚乙醇酸-乳酸共聚物骨髓间充质干细胞粘附增殖成骨细胞基因表达影响

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HBV感染人胎盘滋养层细胞机制的初步探讨

中华实验和临床病毒学杂志 2008年第1期22卷 51-53页

作者：王安辉汪爱勤徐德忠门可闫永平张景霞刘媛黄晓峰王春梅第四军医大学流行病学教研室陕西西安710061 第四军医大学电镜中心陕西西安710061 西安通信学院门诊部

目的采用透射电镜观察HBV体外感染人胎盘滋养层细胞的超微结构变化。方法HBV体外感染人胎盘滋养层细胞。ELISA检测培养上清中HBsAg，PCR检测细胞培养上清和滋养层细胞中的HBVDNA。HBV荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBVDNA量（拷贝／ml... 详细信息

目的采用透射电镜观察HBV体外感染人胎盘滋养层细胞的超微结构变化。方法HBV体外感染人胎盘滋养层细胞。ELISA检测培养上清中HBsAg，PCR检测细胞培养上清和滋养层细胞中的HBVDNA。HBV荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBVDNA量（拷贝／ml）。透射电镜观察滋养层细胞的超微结构。结果感染组滋养层细胞培养上清中HBsAg在PBS清洗后12h时A值为0．942，96h时上升为1．264。PCR检测感染组细胞培养上清和感染组细胞HBVDNA均为阳性。PBS彻底清洗后0、12、36、60、84h感染组细胞培养上清的HBVDNA分别为：〈10^3，3×10^4，6×10^5，5×10^5，3×10^5拷贝／ml。透射电镜观察到感染组滋养层细胞膜附近存在包涵素（Clathrin）形式的内吞小体形成，并且发现内吞小体内存在病毒颗粒样结构。在感染组细胞粗面内质网内发现HBsAg特异性的纤维丝状结构。结论HBV可能经包涵素依赖的细胞内吞形式进入滋养层细胞，进而实现感染细胞或通过胞释作用将病毒排至细胞的对侧而实现穿越滋养层细胞屏障。

关键词：肝炎病毒乙型感染胞吞作用