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hUMSCs外分泌上清联合替莫唑胺在不同胶质瘤细胞系中的协同增敏作用

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中国病理生理杂志 2024年第3期40卷 385-394页

作者：刘雨思王明明张玉富靳小燕贺晶史海燕陈美霓张静延安大学基础医学院陕西延安716000 延安大学附属医院陕西延安716000 西安医学院第二附属医院陕西西安710038 陕西干细胞工程有限公司陕西西安710075

目的:探讨人脐带间充质干细胞外分泌上清(hUMSC-CM)联合替莫唑胺(TMZ)在不同胶质瘤细胞系中的协同增敏作用及潜在机制。方法:采用2种血清剥夺法(24和48 h分批次撤血清法)收集hUMSC-CM并制备成冻干粉,设置5种浓度(0、1、3、6和9 g/L)处... 详细信息

目的:探讨人脐带间充质干细胞外分泌上清(hUMSC-CM)联合替莫唑胺(TMZ)在不同胶质瘤细胞系中的协同增敏作用及潜在机制。方法:采用2种血清剥夺法(24和48 h分批次撤血清法)收集hUMSC-CM并制备成冻干粉,设置5种浓度(0、1、3、6和9 g/L)处理大鼠恶性胶质瘤细胞系RG-2、人星形细胞瘤细胞系U251和人胶质母细胞瘤细胞系LN-428。通过CCK-8实验检测hUMSC-CM作用于胶质瘤细胞24、48和72 h后的肿瘤抑制可行性及敏感度。HE染色结合CCK-8法确定6种浓度(0、25、50、100、200和400µmol/L)的TMZ作用于胶质瘤细胞48 h后化疗敏感性的差异。筛选出低、高2种浓度(3和9 g/L)的hUMSC-CM和低、中、高3种浓度(50、100和200µmol/L)的TMZ配伍,作用于胶质瘤细胞后检测细胞活力和病理形态学变化。TUNEL染色检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期变化;Western blot检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved PARP1,以及自噬相关蛋白beclin-1和LC3的表达变化,探讨hUMSC-CM与TMZ体外联合给药协同增敏的作用机制。结果:3种胶质瘤细胞系对hUMSC-CM和TMZ的敏感度为RG-2>U251>LN-428。hUMSC-CM(3和9 g/L)与TMZ(50、100和200µmol/L)配伍给药对胶质瘤细胞生长的抑制作用比单独给药组显著增强(P系中呈现不同的增敏效果。(2)hUMSC-CM提高胶质瘤细胞对TMZ敏感度的机制可能与调节caspase-8/caspase-3/PARP1信号通路及自噬通路、诱导胶质瘤细胞发生凋亡和自噬有关。

关键词：脐带间充质干细胞替莫唑胺胶质瘤细胞凋亡自噬 caspase-8/caspase-3/PARP1信号通路

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌MSH6基因胚系突变的测序研究

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中华医学遗传学杂志 2007年第6期24卷 640-645页

作者：颜士岩周晓燕蔡三军于宝华张太明李小妹陆永明周恒花莫善兢杜祥施达仁复旦大学附属肿瘤医院病理科复旦大学上海医学院肿瘤学系上海200032 复旦大学附属肿瘤医院病理科复旦大学上海医学院腹部外科上海200032

目的探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC）家系中MSH6基因胚系突变。方法采用PCR-直接测序的方法检测39个无胚系MSH2及MLH1基因突变、符合不同临床标准的中国人HNPCC家系先证者MSH6... 详细信息

目的探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC）家系中MSH6基因胚系突变。方法采用PCR-直接测序的方法检测39个无胚系MSH2及MLH1基因突变、符合不同临床标准的中国人HNPCC家系先证者MSH6基因各外显子胚系突变;对137名正常人胚系基因组DNA进行错义突变相应外显子的测序分析。应用Envision二步法检测有突变的先证者肿瘤组织MSH6蛋白表达。结果在39个HNPCC先证者中共发现6个MSH6基因的胚系突变,分别位于第4、6、9和第10外显子;突变类型为4个错义突变、1个无义突变、1个剪接区的插入突变;对4个错义突变的相应外显子的测序分析显示：137名正常人胚系基因组DNA5例具有第6外显子1163密码子处的c.3488A〉T的错义突变,约占3.65%（5/137）,为单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）;其余错义突变在正常人群中均未发现。在6例有MSH6基因胚系突变家系的肿瘤组织中免疫组化染色除1例为SNP的肿瘤组织MSH6蛋白阳性表达外,其余均为阴性表达。经过查询国际HNPCC突变数据库及SNP数据库证实上述突变中5个为国际上尚未报道的病理性突变,1个为新发现的SNP。结论MSH6基因胚系突变在符合不同临床标准的中国人HNPCC中均起一定作用,对无MSH2及MLH1基因胚系突变的先证者行MSH6基因胚系突变的测序分析对确诊HNPCC家系是必要的。

关键词： MSH6基因遗传性非息肉病性结直肠肿瘤 DNA突变分析

PMA对U937细胞CD18 mRNA表达的诱导作用及其机制

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中国病理生理杂志 2002年第5期18卷 497-500页

作者：何晓文刘宇健潘真钟纪根卢建海军医学研究所上海200433 第二军医大学基础部病理生理教研室上海200433 第二军医大学海医系上海200433

目的 :研究PMA对CD18mRNA表达的促进作用及机制。方法 :选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型 ,运用定量RT -PCR方法检测U937细胞CD18mRNA的表达水平。结果 :PMA具有浓度和时间依赖性地诱导U937细胞CD18mRNA表达的作用 ,这种作用能分别被... 详细信息

目的 :研究PMA对CD18mRNA表达的促进作用及机制。方法 :选用PMA刺激下的U937细胞为实验模型 ,运用定量RT -PCR方法检测U937细胞CD18mRNA的表达水平。结果 :PMA具有浓度和时间依赖性地诱导U937细胞CD18mRNA表达的作用 ,这种作用能分别被PKC、NF -κB抑制剂所抑制 ,但不能被转录因子AP - 1抑制剂所抑制。结论 :PMA能激活细胞的PKC ,进而通过其后的信号转导通路促进CD18mRNA的表达 ,转录因子NF -κB为PMA刺激下的U937细胞CD18基因转录所必需 ,而AP -

关键词： PMA U937细胞 CD18mRNA 诱导作用机制佛波醇酯类结合素类 NF-KappaB 淋巴细胞瘤

人脐带间充质干细胞运载呼肠孤病毒对人慢性髓系白血病K562细胞溶瘤作用的研究

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中国病理生理杂志 2024年第6期40卷 1043-1051页

作者：刘雨思贺晶杜娟靳小燕张静张玉富延安大学基础医学院陕西延安716000 延安大学附属医院陕西延安716000 西安医学院第二附属医院陕西西安710038 陕西干细胞工程有限公司陕西西安710075

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUMSCs)运载3型呼肠孤病毒(Reo3)对人慢性髓系白血病K562细胞的溶瘤效应。方法:流式细胞术检测hUMSCs和K562细胞表面Reo3易感受体——连接黏附分子A(JAM-A)表达情况,电镜观察Reo3感染hUMSCs 72 h后胞内病... 详细信息

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUMSCs)运载3型呼肠孤病毒(Reo3)对人慢性髓系白血病K562细胞的溶瘤效应。方法:流式细胞术检测hUMSCs和K562细胞表面Reo3易感受体——连接黏附分子A(JAM-A)表达情况,电镜观察Reo3感染hUMSCs 72 h后胞内病毒包涵体分布。将不同(0、1、2和3)感染复数(MOI)的Reo3感染hUMSCs 24、48、72、96和120 h后利用CCK-8法筛选最适MOI。选择最适滴度的Reo3感染hUMSCs 24、48、72、96和120 h后收集上清液,利用小鼠成纤维细胞系L929结合半数组织培养感染剂量(TCID50)法测定各组上清液中Reo3病毒滴度以确定最适感染时间。将K562细胞分为对照组、hUMSCs组、Reo3组和hUMSCs-Reo3组,hUMSCs组和hUMSCs-Reo3组设置hUMSCs与K562细胞作用的低、中、高比例(5∶1、10∶1和20∶1)。CCK-8法分析hUMSCs-Reo3与K562细胞共培养24、48、72 h后K562细胞活力的变化。流式细胞术评估细胞凋亡。利用L929细胞确定抗Reo3单克隆抗体的半数效应浓度(EC50);验证在体外抗体存在条件下hUMSCs-Reo3对K562细胞溶瘤作用的变化。Western blot检测运载体作用于K562细胞后胞内Bcl-2、Bax、survivin和cleaved caspase-3蛋白水平。构建K562细胞的BALB/c裸鼠皮下荷瘤模型(每组6只),分析hUMSCs-Reo3在体内对K562细胞的抑瘤效果。结果:hUMSCs和K562细胞表面JAM-A分子表达量分别为11.0%和99.0%。电镜显示Reo3感染hUMSCs 72 h后胞内出现大量病毒包涵体。在120 h范围内,与未感染组相比,MOI=1的Reo3对hUMSCs活力无显著影响,故最佳MOI为1;TCID50结果显示,MOI=1的Reo3感染hUMSCs 48 h后细胞裂解液中病毒滴度最高,故最适感染时间为48 h。hUMSCs-Reo3作用24、48和72 h后K562细胞活力呈现剂量与时间依赖性抑制。抗Reo3单克隆抗体的EC50为1∶34;在体外不同浓度(1∶34、1∶300和1∶600)抗体存在条件下,hUMSCs仍能运载Reo3抑制K562细胞活力并诱导凋亡发生。与对照组相比,hUMSCs-Reo3作用48 h后K562细胞中Bcl-2和survivin表达水平显著下调(P病理学分析及小动物活体成像仪检测组织蛋白酶B/L活性结果表明,运载体在体内对K562细胞具有溶瘤效应而对正常组织无不良影响。结论:hUMSCs可有效运载Reo3,该运载体系在体内、外实验中能够释放足量Reo3抑制K562细胞恶性增殖并促进细胞凋亡,从而发挥溶瘤效应。

关键词：人脐带间充质干细胞呼肠孤病毒慢性髓系白血病溶瘤作用细胞凋亡荷瘤模型

豌豆铁蛋白转基因水稻纯系重要生物学特性的变异

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农业生物技术学报 2007年第2期15卷 251-256页

作者：叶红霞郭泽健李梅徐晓晖包劲松沈圣泉浙江大学农业与生物技术学院中国农业大学植物病理系中国计量学院生命科学学院

选取经7代自交纯化并结合GUS标记辅助选择所获得的26份独立豌豆铁蛋白(pea ferritin,Fer)转基因水稻(Oryza sativa)纯系,以秀水11为CK,就外源基因(Fer)导入对稻米Fe含量、重要农艺性状、稻米品质和植株耐逆性的影响进行了研究。结果表明... 详细信息

选取经7代自交纯化并结合GUS标记辅助选择所获得的26份独立豌豆铁蛋白(pea ferritin,Fer)转基因水稻(Oryza sativa)纯系,以秀水11为CK,就外源基因(Fer)导入对稻米Fe含量、重要农艺性状、稻米品质和植株耐逆性的影响进行了研究。结果表明:1)26份转基因纯系的精米平均总铁含量为10.37μg/g,仅有4份(即Fer34、Fer36、Fer39和Fer65)显著高于CK(6.46μg/g);2)除单株穗数和剑叶长外,播抽天数、株高、主穗长、主穗总粒数、结实率、千粒重和单株产量等7个性状均有部分纯系与CK存在显著差异,但尚未发现经济性状明显变劣的纯系;3)所有参试纯系的糙米率、精米率、整精米率、米粒长、米粒宽、米粒长/宽比和直链淀粉含量等7个性状表现均与CK相仿,而在垩白粒率、垩白度、碱消值和胶稠度等4个性状,部分纯系发生了显著变异,其变化缺乏明显的规律性;4)参试纯系间的耐冷性和耐热性变异与稻米铁含量变化并无显著相关性,但对稻瘟病(Pyricularia oryzae)、白叶枯病(Xanthomonas oryzae)和褐稻虱(Niaparvata lugens)抗(耐)性有随着稻米铁含量增加而减轻危害的趋势。

关键词：转基因水稻铁蛋白(Fer) 农艺性状稻米品质性状耐逆性状

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名人代言目的地对旅游者态度和行为的影响

资源科学 2015年第8期37卷 1588-1597页

作者：刘力陈浩韦瑛合肥学院旅游系合肥230601 合肥学院环巢湖文化与经济社会发展研究中心合肥230601 安徽农业大学经济管理学院合肥230036 英国Multi-lab公司

聘请名人担任形象代言人逐渐成为一种流行的目的地营销策略,但旅游学界对名人代言的研究才刚刚起步。采用准实验设计研究方法,以大学生为样本收集数据,使用结构方程模型检验了名人代言的主流范式"一致性假说"在旅游研究领域的适用性。... 详细信息

聘请名人担任形象代言人逐渐成为一种流行的目的地营销策略,但旅游学界对名人代言的研究才刚刚起步。采用准实验设计研究方法,以大学生为样本收集数据,使用结构方程模型检验了名人代言的主流范式"一致性假说"在旅游研究领域的适用性。研究发现:1名人/目的地一致性通过名人可信度影响旅游者的目的地态度和旅游意向,即旅游者感知到名人形象与目的地形象越一致,他们对该名人担任代言人的信任度就越高,进而就会对其代言的目的地形成好感并产生较强的旅游意向;2名人/自我一致性通过名人认同影响旅游者的目的地态度和旅游意向,即旅游者感知到名人形象与自我形象越相似,他们对该名人的认同度就越高,因而对其代言的目的地就会产生较好的态度和较强的旅游意向。

关键词：一致性假说名人/目的地一致性名人/自我一致性名人可信度名人认同目的地态度旅游意向

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西夏语

西夏研究 2020年第4期 75-81页

作者： [英]三宅英雄麻晓芳(译) 英国国家博物馆北京语言大学

本文是《中国语言暨语言学百科全书》中西夏语的介绍部分。作为科普性的介绍,本文从西夏文字的发现开始,分系属、语音、词汇、形态及句法几个方面简要描述了西夏语的语言面貌,并概括了相关研究情况,包括语音构拟、趋向标记、人称呼应、... 详细信息

本文是《中国语言暨语言学百科全书》中西夏语的介绍部分。作为科普性的介绍,本文从西夏文字的发现开始,分系属、语音、词汇、形态及句法几个方面简要描述了西夏语的语言面貌,并概括了相关研究情况,包括语音构拟、趋向标记、人称呼应、语序、特殊句式以及动词模板等内容。

关键词：西夏语语音形态句法

ALCAM基因1沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

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安徽医学 2018年第4期39卷 377-380页

作者：马艳英赵继敏赵冬梅郑州大学附属肿瘤医院病理科河南郑州450008 郑州大学基础医学院病理生理系河南郑州450052

目的探讨活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法将ALCAM和对照shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量(RT-PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western bl... 详细信息

目的探讨活化白细胞黏附分子(ALCAM)基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法将ALCAM和对照shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量(RT-PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况。采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响。结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA(1.01±0.26)和蛋白质的表达水平(1.66±0.23)低于对照shRNA组细胞ALCAM mRNA(0.12±0.06)和蛋白质水平(0.23±0.09),差异有统计学意义(P系比较,ALCAM shRNA稳定细胞系细胞增殖活性下降(P<0.05)、凋亡水平升高(P<0.05)、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓(P<0.05)。ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路。结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡。

关键词：胃癌活化白细胞黏附分子细胞增殖细胞凋亡

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胸腺素β10在人类乳腺癌中的表达

中国肿瘤临床 2004年第9期31卷 481-484页

作者：刘从容杨京平王玉平廖松林郑杰北京大学医学部病理学系北京市100083

目的:探讨胸腺素β10(Thymosinβ10,Tβ10)在人类乳腺癌中的表达及其临床病理意义。方法:采用兔抗人Tβ10多克隆抗体,ABC免疫组织化学方法检测经福尔马林固定、石蜡包埋的10例乳腺增生症、76例原发性乳腺癌及27例淋巴结转移性乳腺癌中T... 详细信息

目的:探讨胸腺素β10(Thymosinβ10,Tβ10)在人类乳腺癌中的表达及其临床病理意义。方法:采用兔抗人Tβ10多克隆抗体,ABC免疫组织化学方法检测经福尔马林固定、石蜡包埋的10例乳腺增生症、76例原发性乳腺癌及27例淋巴结转移性乳腺癌中Tβ10的表达状况,同时检测两种恶性度、转移潜能以及雌激素受体表达状况均不相同的乳腺癌细胞系中Tβ10蛋白的表达水平;此外,我们还检测了76例原发性乳腺癌临床病例中ER和c-erbB-2的蛋白水平。结果:Tβ10表达定位于胞浆中,10例乳腺增生症组织表达为阴性或仅在肌上皮内有非常微弱的表达。临床乳腺癌病例的阳性率为100%(76/76),但表达强弱有差别:伴早期浸润的原位癌弱于普通浸润癌,二者具有显著性差异(P0.05)。在乳腺癌细胞系中,雌激素依赖性、恶性度和转移潜能较低的MCF-7细胞的Tβ10表达弱于雌激素不依赖性、恶性度和转移潜能较高的MDA-MB-231细胞。未发现Tβ10与ER和c-erbB-2的表达具有相关性。结论:虽然乳腺正常的肌上皮细胞中可存在少量Tβ10蛋白,但此蛋白在乳腺组织发生癌变和浸润的过程中会逐渐增高。

关键词：胸腺素β10 乳腺癌免疫组织化学诊断预后表达