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中国HIV/AIDS患者B7-H1的表达特点及与疾病进展关系的研究

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中国HIV/AIDS患者B7-H1的表达特点及与疾病进展关系的研究

作者：孙国全中国医科大学

学位级别：硕士

目的艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)引起的免疫缺陷性疾病,目前尚无治愈手段,疫苗的研究也始终未有突破,根本原因在于对HIV生物学和人体免疫应答机制及两者... 详细信息

目的艾滋病(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)引起的免疫缺陷性疾病,目前尚无治愈手段,疫苗的研究也始终未有突破,根本原因在于对HIV生物学和人体免疫应答机制及两者之间的相互作用关系等科学问题缺乏本质上的理解和认知,特别是对免疫系统中起关键调控作用的因子作用仍知之甚少。在免疫系统中B7-CD28家族作为重要的共刺激分子家族,在T细胞的激活和行使效应过程中发挥重要调节作用,B7-H1(B7-homolog1)作为新近发现的B7家族共刺激因子,在病毒感染过程中的免疫调节作用备受关注。B7-H1主要表达在活化的树突细胞、巨噬细胞等抗原提呈细胞以及T细胞、非淋巴组织等,B7-H1不与CD28、CTLA-4、ICOS等结合,已经确定的B7-H1配体为PD-1,主要表达在活化的T细胞、NKT细胞、髓系细胞等。B7-H1通过传递负性刺激信号在介导肿瘤免疫逃逸、诱导免疫耐受以及在自身免疫性疾病和细菌、病毒感染等免疫反应中起重要作用。最近研究表明,上调B7-H1及配体的表达成为多种病毒免疫逃逸的重要方式,与慢性病毒感染关系最为密切,且是很有治疗前景的靶位。国外研究显示,B7-H1和配体PD-1抑制途径亦影响机体的抗HIV免疫应答,但其机制尚不明确。Trabattoni等发现HIV感染者T细胞、B细胞、单核细胞B7-H1表达与疾病进展密切相关,有效HAART治疗显著降低病毒血症患者B7-H1的表达水平,还有研究显示,B7-H1/PD-1可抑制HIV病毒特异性T细胞增殖和细胞因子分泌。中国人群的遗传背景不同于国外人群,B7-H1表达水平与HIV感染疾病进展的相关性研究国内外少见报道,尚无对于同一患者B7-H1及其配体同时检测的研究,探讨B7-H1/PD-1抑制途径与效应T细胞功能降低之间的的关系,将为阐明HIV感染效应T细胞免疫耐受的可能机制及临床免疫治疗提供新的思路。 1、研究对象 36例未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者均来自中国辽宁,其中男性22例,女性14例,年龄分布为19-58岁(39.17±10.64),所有患者均经Genelab公司蛋白印迹试剂盒确认为HIV抗体阳性。根据HIV感染时间和CD4+T细胞数量将上述患者分为HIV组(CD4+T细胞≥200个/μl,无艾滋病指征性疾病)和AIDS组(CD4+T细胞＜200个/μl或出现艾滋病指征性疾病)。36例HIV/AIDS患者中HIV组21例、AIDS组15例。健康对照组为20例随机抽取的HIV抗体阴性、未暴露于HIV的健康人,性别、年龄均与HIV/AIDS患者匹配,平均年龄为27-52岁(38.1±7.61),其中男性11名,女性9名。所有研究对象无菌采静脉血5ml(EDTA抗凝),并在抽血留样前均签署知情同意书并进行了相关问卷调查。 2、标本采集用EDTA抗凝负压真空采血管采集研究对象外周静脉血5ml,在6小时内进行试验。 3、CD4T淋巴细胞绝对计数 T淋巴细胞绝对值依据1997年美国CDC关于HIV感染者CD4+T细胞检测指导方法,应用BD公司TruCOUNT管、FACSCalibur流式细胞仪MULTISET软件检测。将20μl CD4/CD8/CD3 TRITEST试剂加入绝对计数管中,经反向加样法加入50μl抗凝血,室温避光15min,加入免洗溶血素450μl,室温避光15min,FACSMULTISET软件检测并进行自动分析,计算CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞绝对值及相应比值等。 4、密度梯度离心法分离外周血单个核细胞离心管中加入Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液14ml,沿管壁缓慢加入用PBS稀释后的抗凝全血30ml,离心400g,30min。用移液管吸取界面层的PBMC,移入另一离心管中。加入5倍体积的PBS缓冲液,洗细胞2次。 5、外周血B7-H1/PD-1表达检测树突细胞表面B7-H1表达水平流式检测:向2支流式管中各加入2×10HIV感染者及健康人PBMC,每管加入下列荧光标记的组合单抗:①Lin1-FITC、CD11c-APC、HLA-DR-PerCP、IgG1 -PE各20μl,②Lin1-FITC、CD11c-APC、HLA-DR-PerCP、B7-H1-PE各20ul,混匀后4℃避光染色30分钟,用PBS洗涤后加入含1%多聚甲醛的PBS重悬,FACSAria流式细胞仪Diva软件进行分析,计算mDC表面B7-H1表达的百分率。mDC的表面特征性标志为CD11cHLA-DRLin 1。 T淋巴细胞B7-H1和PD-1表达水平检测:向3支流式管中各加入1×10HIV感染者及健康人PBMC,每管加入下列荧光标记的组合单抗:①CD3-PerCP、CD4-APC-cy7、CD8-FITC、IgG1-PE

关键词： HIV AIDS B7-H1 PD-1 共刺激分子

荧光定量PCR法检测大肠癌中microRNAs表达水平

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荧光定量PCR法检测大肠癌中microRNAs表达水平

作者：杨长成中国医科大学

学位级别：硕士

目的大肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一。在全世界范围内,大肠癌的发病率男女均处于恶性肿瘤的第3位,其中在西方发达国家,大肠癌的发病率处于第2位。2003年美国大肠癌新发病例数和死亡病例数均居美国癌症发病数和死亡数的第3位。... 详细信息

目的大肠癌是临床最常见的恶性肿瘤之一。在全世界范围内,大肠癌的发病率男女均处于恶性肿瘤的第3位,其中在西方发达国家,大肠癌的发病率处于第2位。2003年美国大肠癌新发病例数和死亡病例数均居美国癌症发病数和死亡数的第3位。在我国,随着生活水平的不断提高,饮食习惯的改变,大肠癌的发病率呈上升态势。排在恶性肿瘤和致死因素的第4位。虽然大肠癌的生物学恶性行为较低手术切除后的5年生存率平均可达40%～60%,但大肠癌仍然是我国肿瘤患者死亡的主要原因之一。因此,进一步提高临床医师对大肠癌的诊治水平是十分必要的。其中,及时发现大肠癌的癌前病变、早期诊断,早期治疗以及开规范化的手术治疗是提高大肠癌疗效的关键。肿瘤相关基因的研究可能在将来为临床上大肠癌的早期诊断,术前分期,术后监测复发转移,选择化疗方案提供有意义的参考依据。微小RNA（microRNAs,miRNAs）是一种真核生物内源性小分子单链RNA,长18—25nt,是近年来新发现的一类非编码小RNA。miRNAs分子通过形成RNA诱导沉默复合体（RNA induced silencing complex,RISC）与靶基因3‘端非翻译区（untranslated region,UTR）不完全互补结合,诱导mRNA的切割降解,翻译抑制或者其他形式的调节机制抑制靶基因的表达。目前已发现多种miRNAs在大肠癌组织及大肠癌细胞系中异常表达,一部分在癌细胞中较正常细胞表达明显下降如miR-143、miR-145、let-7、miR-34a等,一部分表达则升高如miR-31、miR-21等。miRNAs在大肠癌的发生、发展中可能起着重要作用,寻找与大肠癌相关的miRNAs分子,阐明其作用机制,将可能丰富大肠癌的病因学和分子病理学理论。miRNAs表达谱在大肠癌细胞与正常组织细胞中存在明显差异,有研究称在大肠癌发生的腺瘤阶段即有差异,因此miRNAs在大肠癌早期诊断方面可能有重要意义。目前的研究还发现,一些化疗药物如5-Fu能改变大肠癌细胞中某些miRNAs分子表达水平,提示我们miRNAs可能作为化疗药物作用靶点,为新型抗癌药物的开发提供新的策略和思路。我们参考国内外相关文献,结合前期试验预测高度可能与大肠癌相关的miRNAs分子。应用Real-Time RT-PCR技术,针对预测得到的miRNAs分子,在大肠癌组织和对应正常大肠粘膜中进行表达水平检测,并结合术后病理资料,分析miRNAs与大肠癌临床病理因素的相关性,以其为大肠癌早期诊断和抗转移治疗提供新的线索。材料与方法试验对象是2007年11月至2009年5月份在中国医科大学第一附属医院肿瘤外科住院手术治疗的31例大肠癌患者手术切除的肿瘤组织,术中标本移出体外后立即切取一部分迅速置于液氮中冷冻后-80℃保存备用,剩余送往病理室做病理检查。全部患者均经病理证实为大肠癌,全组平均年龄60.3岁,其中男12例女19例,详细记录肿瘤临床病理学参数,同时收集距癌灶5厘米以上正常肠粘膜组织作为正常对照。本实验采用美国Ambion公司microRNA提取试剂盒,按照说明提取组织RNA,然后在RNA3’端人为地加上ploy（A）尾巴,之后进行反转录,荧光定量PCR法检测miR-18b,miR-21,miR-148b,miR-365在大肠癌组织及癌旁正常肠粘膜中表达水平。采用2-△△CT算法计算癌组织与癌旁组织中miRNAs表达量的比值,结合术后病理参数,分析microRNAs在不同病理特征大肠癌组间表达的差异。试验结果采用SPSS13.0软件进行四格表、行列资料表卡方检验或Fisher确切概率法检验,P＜0.05认为有统计学意义。试验结果一、RNA加ploy（A）尾引物延伸RT-PCR法 microRNAs是长约22nt的单链小分子RNA,由于片段过短,无法设计上下游引物,因而不能用常规的PCR法检测,。因此本实验参考国内外最新文献,采用在RNA 3’端加ploy（A）尾巴,长约70-150个A（腺苷酸）,然后再设计长约60nt反转录引物,引物5’端为24个T（胸腺嘧啶核苷酸）加锚定单碱基（A,C,G）。这样就将长约22nt的microRNAs反转录成为长约80nt的cDNA,再进行PCR扩增。产物经测序后证实为目的序列。我们认为此种方法是检测microRNAs的一种简单有效方法,而且费用相对较低。二、miR-18b,miR-21,miR-148b,miR-365与大肠癌临床病理因素本实验结合术后病理资料,分析了31例大肠癌的临床病理因素与4种microRNAs表达差异的关系,包括肿瘤大小、淋巴结转移有无、淋巴管癌栓有无、Duke分期、浸润深度、组织类型、生长方式等。统计学结果显示在不同浸润深度组别中,miR-18b表达水平存在明显差

关键词：大肠癌 microRNA 逆转录聚合酶链反应临床病理特征表达水平

P-ezrin通过p38MAPK信号通路介导乳腺癌转移

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P-ezrin通过p38MAPK信号通路介导乳腺癌转移

作者：卢一艳中国医科大学

学位级别：硕士

前言埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(Ezrin-Radixin-Moesin,ERM)蛋白家族通过组成膜细胞骨架相关复合体和特殊膜结构对细胞活动进行调节,在肿瘤的侵袭转移中起了重要的作用。细胞骨架连接蛋白ezrin属于ERM家族成员之一,定位于6q25.2-6q26编... 详细信息

前言埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(Ezrin-Radixin-Moesin,ERM)蛋白家族通过组成膜细胞骨架相关复合体和特殊膜结构对细胞活动进行调节,在肿瘤的侵袭转移中起了重要的作用。细胞骨架连接蛋白ezrin属于ERM家族成员之一,定位于6q25.2-6q26编码基因为villin2。新近研究发现ezrin高表达与多种恶性肿瘤的侵袭转移呈正相关。细胞内ezrin通过N端与C端相互作用,形成头尾连接的折叠状态遮蔽了分子表面的结合位点,处于失活状态。Fievet等发现Thr567磷酸化和PIP2共同参与ezrin活化,活化的ezrin通过连接F-肌动蛋白丝与胞膜的CD44,E-钙黏附蛋白(E-cadherin),细胞间黏附分子1/2(Intercellular adhesion molecule1/2,ICAM1/2)等发挥功能。探讨ezrin上下游调控分子,这些与调控有关的分子将会成为治疗肿瘤转移的关键。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen Activated Protein Kinase,MAPK)是细胞的主要信号传导系统之一,p38MAPK属于MAPK的一个亚族,它通过磷酸化作用改变下游因子的表达,参与多种胞内信息传递过程。多种生长因子、炎症因子和应激反应可激活p38MAPK,p38MAPK激活后可使多种转录因子活化,影响基因转录、蛋白合成,细胞能动性和细胞骨架结构改变,在细胞侵袭、转移方面具有重要的调控功能。综上p38和ezrin只有都磷酸化后才能行使后续功能,目前关于p-p38,p-ezrin两者在介导乳腺癌转移方面的研究,国内外鲜有报道。 Mengdong Lan等研究发现小鼠永生性肝细胞系中ezrin蛋白通p38MAPK信号通路的磷酸化参与微绒毛的形成,这说明p38与ezrin可能存在着一定的联系,但是作者认为:1:转染raf-1基因的小鼠肝细胞中snail表达上调E-caherin,ezrin表达下调,微绒毛缩短,小鼠肝细胞发生上皮间质转,细胞间黏附变弱而易发生转移。2:加入p38抑制剂SB203580后,ezrin,p-ezrin,E-cadherin表达上调,微绒毛变长变粗,而snail表达下调,不易发生转移。然而我们认为:p38MAPK信号通路可能参与ezrin C端(Thr567)的磷酸化,使p-ezrin上调,微绒毛变长变粗,从而增强肿瘤的侵袭转移能力。为此本实验在回顾乳腺癌中p-ezrin和p-p38表达的基础上,着重研究两者在乳腺癌细胞系中的关系。探讨p38MAPK通路是否参与ezrin C端(Thr567)的磷酸化,影响p-ezrin蛋白表达,微绒毛的形成。为乳腺癌复发转移的治疗提供新的理论依据。材料和方法 1、材料 (1)临床资料80例乳腺癌组织,取自于中国医科大学附属第一医院2001年1月至2007年5月手术切除标本。所有患者术前未经任何治疗。80例均为乳腺浸润性导管癌(IDC),TNM分期Ⅰ-Ⅱ期51例,Ⅲ-Ⅳ期29例。有淋巴结转移33例;收集50例外科手术切除新鲜乳腺组织标本,标本取出后立即置-70℃冰冻保存。其中30例为IDC,有淋巴结转移为13例,20例为乳腺纤维腺瘤。 (2)细胞系三种人乳腺细胞系(MCF-10A为乳腺正常上皮细胞系,MCF-7为低侵袭低转移癌细胞系,MDA-MB-435s为高侵袭高转移癌细胞系)原购自北京协和基础医学院细胞中心,本实验由中国医科大学已有的细胞复苏而得。 (3)主要试剂抗人p-p38单克隆抗体(#9216)和兔抗人p-ezrin单克隆抗体(#3149)购自Cell signaling公司。p38MAPK特异性抑制剂SB203580(#559398)购自美国Calbiochem公司,于-20℃保存待用。异硫氰四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽(TRITC-Phalloidin)购自Sigma公司,Transwell小室(孔径8um)购自Corning公司。 2、方法 (1)免疫组织化学技术80例标本经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片,采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(Streptavidin-peroxidase,S-P)按说明书行免疫组化染色。p-p38稀释比例为1∶200,p-ezrin稀释比例为1∶50;以PBS代替一抗作阴性对照,用已知阳性乳腺癌切片作阳性对照。 (2)Western blot技术总蛋白从组织、生长到对数期收集的细胞及不同浓度的SB203580(0、5、10、20umol/L)处理24小时后的435s细胞中提取。用Bradford法测定蛋白浓度。取等量蛋白,进行SDS-PAGE和转印,分别孵育一抗(p-p38 1∶400,p-ezrin1∶400稀释)4℃过夜,相应二抗(1∶4000)37℃孵育,ECL发光,拍照。用表达p-p38的PVDF膜剥脱后重新孵育获得β-actin抗体作为内参。 (3)细胞免疫

关键词： p-p38 p-ezrin 乳腺癌转移

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向纵深拓展的《共同核心数学标准》

上海教育 2015年第11期 11-14页

作者：亢明铭上海师范大学教育学院

早在1989年,美国国家研究委员会发布的《人人关心数学教育的未来》便指出:优质的数学教育与经济发展关系紧密。虽然美国经济在全世界一直处于领跑地位,但近年来国际大规模教育测评(如PISA和TIMSS)的结果却表明,美国中小学学生的数学成... 详细信息

早在1989年,美国国家研究委员会发布的《人人关心数学教育的未来》便指出:优质的数学教育与经济发展关系紧密。虽然美国经济在全世界一直处于领跑地位,但近年来国际大规模教育测评(如PISA和TIMSS)的结果却表明,美国中小学学生的数学成绩仅处在中等或中等偏上水平,这引起了美国数学教育界的普遍担心。为此,美国数学教师委员会颁布了一系

关键词：核心数学平面图形有理数数学建模数学教育运算性质统计与概率加减法学校数学算术运算三角函数纵深拓展

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加速康复理念在全膝关节置换术中的应用研究

中华关节外科杂志（电子版） 2022年第3期16卷 295-300页

作者：张强宋强梁钰琪郭崇军李立新刘泽欣李聪牛东生白志刚西北民族大学兰州730000 宁夏回族自治区人民医院关节外科银川750000

目的:研究在全膝关节置换术(TKA)围手术期间应用加速康复理念(ERAS)的效果评价。方法:选取在宁夏回族自治区人民医院接受TKA治疗的患者60例,分为"常规治疗组"和"ERAS组",对其疼痛视觉模拟评分(VAS)、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)、... 详细信息

目的:研究在全膝关节置换术(TKA)围手术期间应用加速康复理念(ERAS)的效果评价。方法:选取在宁夏回族自治区人民医院接受TKA治疗的患者60例,分为"常规治疗组"和"ERAS组",对其疼痛视觉模拟评分(VAS)、美国特种外科医院膝关节评分(HSS)、失血量、术后输血人数、术后并发症、住院时间、住院费用及术后满意度进行研究。纳入标准:膝关节骨关节炎;单侧、初次TKA患者。排除标准:炎性关节炎;膝关节不稳定需要特殊假体者。计量资料使用两独立样本t检验,计数资料使用卡方检验或Fisher确切概率法,不同时间相关资料比较采用重复测量方差分析。结果:ERAS组术后1 d静息状态下VAS评分(F=67.67,P统计学意义(F=1.20,P>0.05)。ERAS组术后1月的HSS评分(F=485.83,P统计学意义(F=0.17,P>0.05)。ERAS组在失血量(t=4.27,P系感染及术后切口并发症差异无统计学意义(均为P>0.05)。ERAS组的平均住院时间为(11.9±1.3)d,常规治疗组的平均住院时间为(14.6±1.5)d(t=7.40,P<0.01),ERAS组比常规治疗组住院费用减少(t=2.09,P<0.05)。ERAS组满意度较常规治疗组高(χ^(2)=5.46,P<0.05)。结论:TKA术后不放引流管、术后4 h下地可降低输血率,减轻患者术后疼痛。在TKA围手术期中应用ERAS可减少术后恶心呕吐发生率、降低输血率、节省医疗费用、提高患者满意度。

关键词：关节成形术置换膝加速康复外科骨关节炎膝

从美国数学课程标准的变革看现代数学课程的发展

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从美国数学课程标准的变革看现代数学课程的发展

作者：刘水凤广西师范大学

学位级别：硕士

众所周知，美国是西方数学课程发展中具有重要影响的国家，它的一系列观点和举措历来为世界教育工作者所关注：先是NCTM在1989年制定的《学校数学课程和评估标准》，继而是十年后《学校数学的原则和标准》的颁发，集中反映了美国面向21... 详细信息

众所周知，美国是西方数学课程发展中具有重要影响的国家，它的一系列观点和举措历来为世界教育工作者所关注：先是NCTM在1989年制定的《学校数学课程和评估标准》，继而是十年后《学校数学的原则和标准》的颁发，集中反映了美国面向21世纪数学教育改革的新动向。为了落实教育部《面向21世纪教育振兴行动计划》，1999年，我国“数学课程标准”研制小组正式启动，美国数学教育的新近发展，无疑对我国正在制定的数学课程标准有着重要的启示和借鉴意义。鉴于目前我国尚无系统研究这两个标准之工作，本文拟对此作一比较研究，以揭示现代数学课程发展的趋势。美国的数学教育从十年的应用NCTM标准中学到了什么?在观念上有何改变?这些问题的探索产生了修改NCTM标准的结果。我们先从美国数学课程发展历史沿革的基础上对《标准1989》与《原则与标准》进行比较，得到的结论是： 1、教育观念（1）数学早期教育思想。《原则与标准》将数学学习延伸到幼儿园前，体现了数学学习从小抓起的思想。（2）教师在数学教学中的作用和地位。从采取不恰当的教学形式，如过分强调合作学习，未发挥教师的应有作用到强调教学课程计划的实施依赖于有责任心、有能力的教师，突出教学活动的创造性，这是《标准1989》到《原则与标准》的发展。（3）教学评估。继承了把评价看成学习整体的一个部分的观点，并且要强调其并行发展的重要性，评价目标与教学目标的一致性以及发展多种侧面的评价方式，体现了一种观念上的进步。 2、教学内容（1）降低弹性，强调统一，分层要求，利于评价与提高。（2）离散数学的不同处理方法。（3）在低年级中引入函数、代数。（4）强调数据分析、统计、概率以适应技术和信息社会的需要。 3、教育策略（1 计算趴与计算器的戍队Z标沼19别X强泥了ir杖术的应卧迫县g术的应用削弱了5能的摹队遣而计算扒扫术的迅猛发陈报则与标盾E＄泪：一是数学教学应当为孕生进入技术牲不断僧拄的杜会作叮准＄ 7是区分现代日术“螃的闷田”和“坏m应用” 门）差别课程缴扒遣匝不同水平的学生对＋来职业的还践以及天来发晨的炽耍达到不冈的人学氰同的敷学的耍说 (引强调数掌学习过甩不汉体现了整个佩S的连续性而目旧清但地表明了课沿 (乌S生饼习过程〕的发展性和阶团世不w担出了＊么星应该达到的．卫侣明了什么足能够这到巩泉炖这更五足＊和学生S习过侣的煤入研兄其况从我国数学课程标卅与美国标准的比铰中可以自b 1．o设旭》与《原则与标准B＄适应了现代杜会的济发履的出要 Z 郡更注董缴学万法在数学学习过I口中的作用和繁W 】都揭凋了学生个扫的发恳 1从叹程B标悼系来舀《设想B月踞则与标陆E将谈租目林分为坊块领酞体呗了饲识”和能刀”的发展尘托〕学生对数宇知识RJta构方式的认说数学学习星一种接目学不血．是一和纯粹的 B我构扭揭调个性不能忽w其性J 汪习豁剽u出艰苦的劳动从而获得成o的M验和自信最后我们认为吸代数乍B侣的发屉方问和趋势是 L“人众数学”的昏熄乙以S主为中口的4践教刺k谨丸〕全体g众内逆学巳当今杜吕中m重要牲的以说 L 发屡基础8广的数学陡九 i以学课程弦调学生今天和5来的实际孺耍 6 强据充H便用计算钒和i＋算玖

关键词：美国数学课程课程标准比较

创伤国际疾病分类编码向简明损伤定级编码转换研究

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创伤国际疾病分类编码向简明损伤定级编码转换研究

作者：薛富波第四军医大学

学位级别：硕士

随着人类社会的发展，创伤的发病率在不断上升，越来越成为影响人类健康的主要疾病。因此，开展创伤的预防控制与治疗方面的研究，降低创伤发病率和提高创伤救治水平对于当代的人类社会有着更加重大的意义。创伤救治是我军各级医... 详细信息

随着人类社会的发展，创伤的发病率在不断上升，越来越成为影响人类健康的主要疾病。因此，开展创伤的预防控制与治疗方面的研究，降低创伤发病率和提高创伤救治水平对于当代的人类社会有着更加重大的意义。创伤救治是我军各级医疗单位的主要任务，对创伤的防治研究是我军各级医疗单位及医学科研单位的主要工作之一。其中，创伤严重度评分研究是创伤研究的基础内容，是提高创伤其他方面研究水平的前提条件。产生于20世纪70年代的简明损伤定级标准(Abbreviated InJury Scale，AIS)现已得到世界各国从事创伤临床和科研单位的公认和广泛应用，是创伤严重度记分和生存概率测算的基础。我国的创伤严重度评价方法研究起步较晚，大多数是采用国外已有的方法，在对我国创伤患者人群的适用性方面存在较多的问题，而且在硕士学位论文评价标准方面远未达到规范和统一。基于以上原因，创立一种简单易行、规范统一的创伤评分方法对于我国现阶段的创伤防治研究具有重大的意义。目前，ICD－gCM是全军所有医院共用的疾病诊断编码标准。以合理甲利用各级医院病案数据库中大量的创伤数据为出发点，设想建立一种从创伤ICD习编码向AISq0编码转换的方法。这种方法的建立，使得人们在几乎不增加人力物力支出的情况下，获得对创伤病例的创伤评分。简明损伤定级标准（AIS）采用美国机动车医学促进会（AAAM）最新修订的 1990版 98修订本。国际疾病分类（ICD－gCM）以人民军医出版社出版，刘海一、何连德主编的《疾病诊断和手术操作名称与代码标准应用指南》为参照标准。研究中应用的病案首页数据库由总后卫生部卫生统计信息中心提供，包括全军263所医院1995年～1998年所有收治入院的创伤患者共301854例。 1．分解AIS－90编码，分析其编码规律。按照AIS的编码规则，将其各个位置上的数字代码依据含义依次分解，找出编码的规律。再将其重新组合成两个部分，即代表创伤病种名称部分的“亚目”（前四位数字代码）和代表创伤严重程度的部分（后三位数字代码）。1341条AIS－90 编码分别属于288个亚目，单个创伤严重度以AIS分值表示，从1到6 依次代表由最轻到最重6个级别的创伤严重程度，另外AIS分值为9时表示严重程度未知的状态。 2．建立初步的对应表。根据两种编码系统在创伤病种上的分类定 0 义，寻找创伤各病种ICD－gCM编码与AJS－90编码的对应关系。对于含义较概括的ICD－gCM ＄码，建立其与AIS．90亚目的对应关系。769条中的207条ICD习编码建立了与AIS习0编码较为精确的对应关系。 3．病案首页数据库创伤信息的加工处理。应用病案首页数据库，将创伤病人按照国内ICD－gCM六位数编码进行归类，对归类后数据进行描且二 S 硕士学位论不述性统计计算，得出各条创伤ICD－gCM编码的若干统计指标，从医学专业角度初步筛选出与创伤严重程度关系密切者。同时，参照 Turner Osier 的做

关键词：创伤评分,ICD－9CM,AJS－90,判别分析

环氧合酶-2在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

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环氧合酶-2在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

作者：孙颖中国医科大学

学位级别：硕士

前言子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，约占女性癌症总数的7％，占女性生殖道恶性肿瘤的20％～30％。近年来其发病率在世界范围内呈持续上升趋势，是威胁妇女生命的一个主要疾病。因此，子宫内膜癌的病因学研究及寻... 详细信息

前言子宫内膜癌是女性生殖道常见的三大恶性肿瘤之一，约占女性癌症总数的7％，占女性生殖道恶性肿瘤的20％～30％。近年来其发病率在世界范围内呈持续上升趋势，是威胁妇女生命的一个主要疾病。因此，子宫内膜癌的病因学研究及寻找早期诊断和有效治疗子宫内膜癌的方法一直是学者们研究的热点。随着分子生物学技术的飞速发展，癌基因、抑癌基因及相关物质异常被认为是正常组织癌变并导致生物学行为一系列改变的基本原因。流行病学的研究表明，服用非甾体类抗炎药可使结肠癌的发生率降低40％～50％。其原因很可能与该药对环氧合酶(COX)的抑制作用有关。COX是一种膜结合蛋白，是前列腺素生物合成的限速酶。目前发现人类基因至少含有COX的两种基因编码，即COX-1和COX-2。COX-2是早表达基因，它被细胞因子、生长因子、丝裂原等迅速诱导产生，在炎症和肿瘤中起重要作用。越来越多的研究表明，在结直肠癌、食管癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、膀胱癌等多种上皮性肿瘤中，都有COX-2表达的异常增高，但有关COX-2在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌临床病理特征关系的研究尚未见报道。为确定COX-2与子宫内膜癌发生、发展的关系，本研究采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法对32例子宫内膜癌，10例不典型增生子宫内膜和10例正常子宫内膜组织中COX-2 mRNA水平进行检测。资料与方法 1．资料来源取2000年3月～2002年3月于中国医科大学第一、第二临床学院妇科刮宫或手术切除的新鲜组织标本52例，分为3组：门）子宫内膜癌组32例;p）不典型增生子宫内膜组10例;闷）正常子宫内膜组 10例。所有病例均为初治病例，平均年龄 53．7岁。部分标本经福尔马林固定，进行常规HE染色，请二位病理专家阅片，按国际妇产联盟（FIGOV 年修订的标准确定病理学诊断、组织学类型和组织学分级。其余标本置液氮中冷冻，然后送于－ 70℃冰箱中保存。子宫内膜癌组均有完整的！临床病理资料，其中内膜样腺癌22例，腺角化癌7例，透明细胞癌3例;手术－病理分期 1期 18例，11期 9例，皿期5例;组织学分级 G;级 14例人。级 10例下。级8例;伴深肌层浸润12例;伴淋巴结转移5例;腹腔液细胞学检查阳性4例。 2．主要试剂 COX－2及内参照引物均由北京奥科生物有限责任公司合成;提取总RNA的TRIzol试剂由美国Promega公司提供;逆转录和PCR扩增所需的酶及其它试剂由日本TaKaRa公司提供;电泳用琼脂糖由沈阳联星生物公司提供。 3．方法门人总RNA提取：采用TRIZOI一步抽提法。RNA纯度采用紫夕透射仪测定OD值刀D260／280值为1．6－2．0。＊）逆转录合成 CDNA：在 10pl反应体系中分别加人样本 RNA l…以 90℃孵育3而n，42℃ 30而n合成 cDNA。闷）PCR扩增和产物分析：在PCR反应体系中将CDNA产物及引物在95℃905 预变性，94℃905 变性，55℃455 退火，72℃905 复性，进行35个循环后，72℃10min延伸。另一反应体系中同时扩增p－achn作为内对照。将PCR扩增产物用2％琼脂糖凝胶电泳检测，溪乙锭染色分析，紫外灯下拍照，电泳凝胶成像及自动分析系统摄像、并检测各扩增带的产物含量。thX174－Hinc 11 DNA Marker为分子量标准。每次实验均设阳性及空白对照。 ·2· 4．结果判断上B显色后，与 Marker相比较有 305hp条带及内对照690hP条带显示者判断为阳性，仅有内对照690hP条带显示者判断为阴性。用内对照吸光度值标化COX－2吸光度值，得到 COX－2的相对含量，具体计算公式如下：COX－2相对含量＝（COX－2密度／p－actin密度）x 100。 5．统计学处理：采用SPSS软件进行统计学处理。表达率采用 Fisher’s精确概率法和 x‘检验;相对含量采用方差分析和 t检验。另果 1．COX－ZmRNA在子宫内膜癌、不典型增生子宫内膜及正常子宫内膜组织中的表达：三种组织中都有COX—2 mRNA的表达，在子宫内膜癌和不典型增生子宫内膜组织中，COX－2 mRNA表达率高于正常子宫内膜组织，经Fisher’s精确概率法检验，有显著性差异（P＜0．05入而两者间表达率比较，差异无显著性h＞0． 05入 COX－2 mRNA在三种组织中的相对含量经方差分析，差异非常显著什＜0．01入两两比较经Q检验，亦有显著性差异汗＜O． 01）。 2．COX－ZmRNA异常表达与子宫

关键词：子宫内膜癌环氧合酶-2 逆转录聚合酶链反应

Tiam-1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义的研究

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Tiam-1蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其意义的研究

作者：杜江中国医科大学

学位级别：硕士

目的探讨非小细胞肺癌Tiam-1（T Lymphoma invasion and metastasis 1 T淋巴瘤侵袭和转移诱导因子1）的表达及临床意义。实验材料 1．病例及组织标本随机选取86例从1999年... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌Tiam-1（T Lymphoma invasion and metastasis 1 T淋巴瘤侵袭和转移诱导因子1）的表达及临床意义。实验材料 1．病例及组织标本随机选取86例从1999年4月～2000年6月间中国医大一院胸外科手术切除的原发非小细胞肺癌组织标本。其中，男61例，女25例，年龄36～76岁，平均58.2岁。鳞癌42例，腺癌44例。分化程度：高、中分化55例，低分化31例。病人术前均未行放化疗及免疫治疗，术后所有诊断经病理证实。所有标本均经10％甲醛固定，常规石蜡包埋。另获取上述病例中转移淋巴结15例，正常肺组织手术切除标本15例。共47例获得随访资料，随访时间6～45个月。 2．主要试剂一抗是由美国Santa Cruz公司提供的兔抗人Tiam-1（H-300）蛋白单克隆抗体，工作浓度1：100。S-P试剂盒为北京中山生物制剂有限公司的通用型产品。实验方法 1．免疫组化染色将石蜡包埋的标本制成5μm厚石蜡切片，丙酮固定10分钟后风干。脱腊后，3％的过氧化氢-甲醇液室温浸泡10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。滴加1：50封闭用正常血清室温孵育 20分钟，PBS稀释一抗Tiam-1（1：100）室温孵育2小时或4℃过夜;1:100生物素标记二抗（IgG）室温孵育30分钟;1：100S－P溶液室温孵育20分钟;DAB显色3一分钟，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶固定，封片。PBS代替一抗做阴性对照。制片：将石蜡包埋的标本制成sop厚石蜡切片，贴于涂有APES防脱片浓的载玻片上，丙酮固定10 d后风干。 2．染色结果判定：阳性判定以着色强度及阳性细胞数综合判断：着色强度分为，无色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分。阳性细胞数分为，S 10见为二分、10阮一50院为二分、50防一75伍为3分、＞75邮为大分。两项得分相乘结果＞3为阳性病例(十八2 3阴性(刁。最终结果是由两位病理医师用双盲法分别鹏每例切片所获得的一致意见。 3．统计分析方法：应用SPS10．0统计软件处理。Tiam—且表达与临床病理因素的关系的分析采用卡方检验和确切概率法。Cox模型进行预后多因素分析。P＜o．田为有统计学意义。实验结果二．Tiam一二蛋白阳性染色的分布及特点： Tiam一二蛋白在正常肺泡上皮、间质及正常支气管粘膜上皮中均无表达。在肺鳞癌细胞中，Ti一二蛋白存在于癌细胞胞浆中，被染成黄褐色颗粒状，尤以癌巢中央部明显(图乙2人在肺腺癌细胞中，Tiam一二蛋白同样存在于胞浆中，分布较均匀，胞膜表达不明显(图3，4人Tiam—l蛋白在钢支气管肺泡细胞癌中无表达(图5人在淋巴结检测中，Tiazn一二蛋白在淋巴结边缘窦转移 ·2· 癌细胞内呈阳性表达(图6人而在正常淋巴组织中则呈阴性表达。 2．Tiam一蛋白表达与临床及病理学因素间的关系＊＊小细胞肺癌Tiam一二蛋白表达与病理学分化程度的关系在86例肺癌中，高、中分化55例，阳性率40％(22／5太低分化31例，阳性率67．74％p 人统计分析显示两组间表达有显著性差异口＜o．05人 K＊小细胞肺癌TiamJ蛋白表达与肿瘤转移间的关系 86例肺癌中有转移者(包括淋巴结转移及远隔转移万6例，其中 Tiam一二蛋白表达阳性 25例，阴性＊例;无转移者 50例，其

关键词： NSCLC Tiam-1 肿瘤侵袭和转移免疫组化 Cox风险回归分析