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槲皮素通过上调脂解和脂噬途径改善肝细胞脂质蓄积

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陆军军医大学学报 2024年第20期46卷 2301-2312页

作者：张艳杨依林袁家奇糜漫天秦玉陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系营养与食品安全研究中心重庆市医学营养研究中心重庆市营养与健康重点实验室重庆400038

目的明确槲皮素(quercetin, QUE)通过调控脂解及脂噬途径改善肝细胞脂质蓄积的效应及作用机制。方法利用棕榈酸(palmitic acid, PA)诱导人正常HHL-5肝细胞株(human hepatocyte cell line 5, HHL-5)建立脂肪变性肝细胞模型,使用不同浓... 详细信息

目的明确槲皮素(quercetin, QUE)通过调控脂解及脂噬途径改善肝细胞脂质蓄积的效应及作用机制。方法利用棕榈酸(palmitic acid, PA)诱导人正常HHL-5肝细胞株(human hepatocyte cell line 5, HHL-5)建立脂肪变性肝细胞模型,使用不同浓度槲皮素(5、10、20和40μmol/L)干预脂肪变性的HHL-5细胞24 h,实验分为(n=3):对照组、PA组、PA+QUE5组、PA+QUE10组、PA+QUE20组、PA+QUE40组。为明确自噬对QUE作用的影响,利用3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)阻断自噬,将HHL-5细胞分为(n=3):对照组、PA组、PA+QUE40组、3-MA组、PA+3-MA组和PA+3-MA+QUE40组。2种不同实验分组均检测细胞内甘油三酯含量、脂滴蓄积情况、脂解和脂噬相关分子表达情况及共定位水平、自噬底物P62的表达水平。结果与对照组比较,PA组肝细胞的甘油三酯含量和脂质蓄积程度明显升高,脂解相关分子脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglycerides lipase, ATGL)和比较基因识别因子58(comparative gene identification-58,CGI58),以及脂噬相关分子Ras相关蛋白7(Ras-related protein 7, RAB7)和微管相关蛋白1B轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3β)的蛋白表达水平、平均荧光强度及共定位程度均明显降低,而P62表达增强(P<0.05)。与PA组相比,PA+QUE40组的甘油三酯含量和脂质蓄积程度显著降低,脂解和脂噬相关分子的蛋白表达水平、平均荧光强度及共定位程度也明显增加,而P62明显降低(P<0.05)。在脂肪变性肝细胞中加入3-MA抑制自噬后,QUE对脂肪变性肝细胞的脂质蓄积的改善作用以及对脂解和脂噬相关分子的调控作用基本被抵消。结论槲皮素可促进脂解和脂噬途径相关分子的表达及相互作用,从而减轻脂肪变性HHL-5细胞内的脂质蓄积,但以上作用可被自噬阻断剂3-MA削弱。

关键词：槲皮素肝脂质蓄积脂解脂噬

复合因素急性应激诱导肠道屏障功能障碍及其作用机制研究

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陆军军医大学学报 2024年第1期46卷 73-83页

作者：林启运候鹏飞郎和东张钧陈卡易龙糜漫天陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系军队营养与食品安全研究中心重庆市医学营养研究中心重庆市营养与健康重点实验室重庆400038

目的研究复合因素急性应激对肠道屏障功能的影响,并探索相关作用机制。方法20只7~8周龄的雄性C57BL/6小鼠(体质量20~22 g),用随机数表法分为对照(CON)组和模型(MOD)组,n=10。MOD组小鼠于24 h内先后给予4 h休息、15 h的睡眠剥夺、3 h的噪... 详细信息

目的研究复合因素急性应激对肠道屏障功能的影响,并探索相关作用机制。方法20只7~8周龄的雄性C57BL/6小鼠(体质量20~22 g),用随机数表法分为对照(CON)组和模型(MOD)组,n=10。MOD组小鼠于24 h内先后给予4 h休息、15 h的睡眠剥夺、3 h的噪音(120 dB)/闪光(2000±500 lx)和2 h的强迫游泳运动(水温26±1℃、水深45 cm),建立复合因素急性应激模型;CON组小鼠置于恒温恒湿、正常昼夜节律的无噪音环境中不做任何处理。MOD组小鼠强迫游泳运动结束后,将小鼠麻醉采血,颈椎脱臼处死并取材。通过免疫酶联吸附实验试剂盒检测血清肠损伤标志物,HE染色法检测结肠组织形态变化,PAS染色检测肠道杯状细胞数目,免疫荧光、免疫组化和RT-qPCR法检测结肠组织屏障功能和炎症因子相关蛋白及基因表达,16S rRNA技术分析小鼠肠道菌群变化。结果与CON组比较,MOD组小鼠血清肠道损伤标志物脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、肠脂肪酸结合蛋白(Intestinal fatty acid binding protein,I-FABP)、连蛋白(Zonulin)明显升高(P<0.05);HE染色显示MOD组小鼠肠道组织损伤明显;免疫荧光染色和RT-qPCR结果显示机械屏障相关分子紧密连接蛋白-1(Zona occludens 1,ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)表达显著降低(P<0.05),免疫组化和PAS染色提示化学屏障相关杯状细胞数目及黏蛋白2(mucin2,Muc-2)、抗菌肽再生胰岛衍生蛋白3γ(regenerating islet derived-3γ,Reg3γ)、再生胰岛衍生蛋白3β(regenerating islet derived-3β,Reg3β)显著降低(P<0.05);肠道菌群β多样性显著改变,有害菌拟杆菌门、脱硫弧菌门显著增加,有益菌瘤胃球菌科、丹毒丝菌(norank_f_Erysipelotrichaceae)属、孪生球菌(Gemella)属、丹毒丝菌(Erysipelotrichaceae)属显著减少(P<0.05);炎症相关肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)以及活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平均显著增加(P<0.05)。结论复合因素急性应激显著诱导小鼠肠道损伤和肠屏障功能障碍。

关键词：复合因素急性应激肠道屏障机械屏障化学屏障微生物屏障

鹅去氧胆酸通过FXR调控高脂饮食诱导小鼠肠道GLP-1表达水平改善胰岛素抵抗的作用

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陆军军医大学学报 2024年第9期46卷 952-961页

作者：李鹏飞蒋玲候鹏飞董妞糜漫天易龙陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系营养与食品安全研究中心重庆市医学营养研究中心营养与健康重庆市重点实验室重庆400038

目的探究鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid, CDCA)通过FXR对高脂饮食诱导小鼠肠道GLP-1表达水平的影响及相关机制。方法 C57BL/6小鼠40只分为对照组(Control组)、高脂饮食组(HFD组)、HFD+CDCA组、HFD+Z-Gug(FXR拮抗剂)组、HFD+CDCA+Z-Gug组,每组8只。干预8周,期间每周检测体质量及24 h摄食量。第8周进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT)、腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT)。小鼠处死后,检测血清学指标GLu、TG、CHO、LDL-C、HDL-C;免疫荧光检测小鼠肠道组织GLP-1及FXR表达水平;RT-qPCR检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β、Gcg及FXR mRNA表达;ELISA试剂盒检测血清GLP-1含量;流式细胞术检测小肠IELs亚群比例及CD26/DPP4表达水平。结果与Control组相比,HFD组小鼠体质量增加,血清糖脂代谢异常,口服糖耐量受损,胃肠激素分泌减弱(P<0.05);FXR mRNA及蛋白表达水平增加,Gcg mRNA表达及GLP-1分泌水平下降(P<0.05);肠道炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达水平升高(P<0.05);TCRαβ+IELs、TCRαβ+CD8αα+IELs与TCRαβ+CD8αβ+IELs细胞比例增加,TCRγδ+IELs比例下降,IELs总CD26/DPP4表达增加(P<0.05)。与HFD组相比,HFD+CDCA组小鼠体质量增加,口服糖耐量异常,胃肠激素分泌减弱(P<0.05);肠组织FXR mRNA及蛋白表达增加,Gcg mRNA表达及GLP-1分泌降低(P<0.05);肠道炎性因子表达降低,TCRαβ+IELs、TCRαβ+CD8αα+IELs与TCRαβ+CD8αβ+IELs细胞比例下降,TCRγδ+IELs占IELs比例升高,IELs总CD26/DPP4表达升高(P<0.05),以上作用在加入FXR拮抗剂Z-Gug后被明显抑制(P<0.05)。结论 CDCA可能通过激活FXR受体抑制肠道组织GLP-1表达,减少GLP-1分泌;同时可能抑制相关炎症因子表达调节IELs亚群比例,上调CD26/DPP4表达水平,促进GLP-1降解,加重胰岛素抵抗。

关键词：鹅去氧胆酸 GLP-1 FXR IELs CD26

n-3多不饱和脂肪酸调节小胶质细胞激活及极化改善APPPS1小鼠学习记忆能力

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陆军军医大学学报 2024年第9期46卷 928-939页

作者：邓梦延朱晓辉黄力白倩李韦昉王斌糜漫天陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系营养与食品安全研究中心重庆市医学营养研究中心营养与健康重庆市重点实验室重庆400038

目的建立Fat-1/APPPS1转基因小鼠的体内模型及小胶质细胞体外模型,探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acids, n-3 PUFAs)调节小胶质细胞激活及极化改善APPPS1小鼠学习记忆能力的效果和机制。方法将杂合子Fat-1雄性小... 详细信息

目的建立Fat-1/APPPS1转基因小鼠的体内模型及小胶质细胞体外模型,探讨n-3多不饱和脂肪酸(n-3 polyunsaturated fatty acids, n-3 PUFAs)调节小胶质细胞激活及极化改善APPPS1小鼠学习记忆能力的效果和机制。方法将杂合子Fat-1雄性小鼠与杂合子APPPS1雌性小鼠进行杂交,筛选子代得到WT、Fat-1、Fat-1/APPPS1以及APPPS1雄性小鼠,培育至9月龄。运用Morris水迷宫实验评估小鼠的学习记忆能力;气-质联用技术(GS-MS)测定小鼠脑组织内多不饱和脂肪酸水平;运用免疫组织化学法检测小鼠大脑海马区β淀粉样蛋白(β-amyloid protein, Aβ)沉积情况;运用组织免疫荧光、qRT-PCR及酶联免疫吸附实验检测各组小鼠中枢神经系统(central nervous system, CNS)炎症水平,小胶质细胞激活及极化水平,基因Iba-1的转录及表达小胶质细胞激活水平,基因CD86、CD206的转录及表达小胶质细胞极化水平。采用脂多糖(LPS)诱导小鼠来源的永生化BV2小胶质细胞损伤建立细胞炎症模型,用二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)对细胞预处理,运用细胞免疫荧光、qRT-PCR和蛋白免疫印迹技术检测各组小胶质细胞炎症、激活及极化水平,采用的激活与极化指标与动物实验相同。结果与APPPS1小鼠相比,内源性表达n-3 PUFAs的Fat-1/APPPS1小鼠学习记忆障碍明显改善(P<0.05),海马区Aβ沉积有效缓解(P<0.05),CNS炎症水平以及小胶质细胞激活水平显著降低(P<0.05),同时小胶质细胞激活表型从M1向M2型转化(P<0.05)。DHA+EPA预处理显著降低了LPS诱导的BV2细胞炎症水平(P<0.05),且促使细胞从M1向M2型转化(P<0.05)。结论 n-3 PUFAs可以抑制APPPS1小鼠大脑小胶质细胞激活,调节小胶质细胞由M1向M2转化,降低中枢神经炎症水平,改善APPPS1小鼠学习记忆障碍。

关键词： n-3多不饱和脂肪酸阿尔茨海默症神经炎症小胶质细胞

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一种提升大负荷运动耐力的复方营养制剂研究

陆军军医大学学报 2024年第9期46卷 962-968页

作者：张瑞良陈帅邓项元朱俊东郎和东糜漫天易龙陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系营养与食品安全研究中心重庆市医学营养研究中心营养与健康重庆市重点实验室重庆400038

目的研究一种提升大负荷运动耐力的复方营养制剂组方,并对其作用效果进行综合评估。方法 C57BL/6J雄性小鼠60只,按随机数字表法分为对照组(CON组)、低剂量复方营养制剂组(low-dose nutritional formula, LDF组)、中剂量复方营养制剂组(... 详细信息

目的研究一种提升大负荷运动耐力的复方营养制剂组方,并对其作用效果进行综合评估。方法 C57BL/6J雄性小鼠60只,按随机数字表法分为对照组(CON组)、低剂量复方营养制剂组(low-dose nutritional formula, LDF组)、中剂量复方营养制剂组(medium-dose nutritional formula, MDF组)及高剂量复方营养制剂组(high-dose nutritional formula, HDF组),每组15只。各组给予复方营养制剂干预2周,并分别在第1周和第2周进行适应性训练和大负荷运动。检测小鼠力竭运动时间、骨骼肌抗氧化指标(SOD、MDA、PC、GSH)、疲劳相关指标(血清UREA、LDH、LA)、肌糖原及血清运动损伤相关指标(ALT、AST、CK、CK-MB)水平,按照相关评价标准进行综合评估。结果 LDF组、MDF组和HDF组较CON组跑步力竭时间显著延长(P营养制剂组小鼠骨骼肌SOD、GSH活性显著上升(P营养制剂组LDH、LA、ALT、AST、CK、CK-MB水平均显著下降(P营养制剂干预可以明显提升小鼠大负荷运动耐力和骨骼肌抗氧化能力,并具有抗疲劳和损伤保护作用,可推荐用于大负荷耐力训练体能保障。

关键词：运动耐力营养配方骨骼肌氧化应激抗疲劳

磷酸化蛋白质组学联合蛋白质组学分析敲除维甲酸诱导蛋白16对人结肠癌细胞的影响

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肿瘤防治研究 2024年第10期51卷 820-830页

作者：陈奕孛苗根王文丁翠玲戚中田海军军医大学海军医学系生物医学防护教研室上海200433 海军军医大学海军医学系海军营养与食品卫生学教研室上海200433 同济大学医学院上海200092

目的分析人结肠癌HCT116细胞敲除维甲酸诱导蛋白16(RAI16)后细胞内总蛋白及磷酸化蛋白质表达的差异,探究RAI16影响HCT116细胞蛋白质功能的可能机制及相关信号通路。方法收集并提取HCT116 KO和WT细胞蛋白,SDS-PAGE检验蛋白提取效果。利... 详细信息

目的分析人结肠癌HCT116细胞敲除维甲酸诱导蛋白16(RAI16)后细胞内总蛋白及磷酸化蛋白质表达的差异,探究RAI16影响HCT116细胞蛋白质功能的可能机制及相关信号通路。方法收集并提取HCT116 KO和WT细胞蛋白,SDS-PAGE检验蛋白提取效果。利用胰蛋白酶酶解蛋白后,标记肽段并进行质谱分析。对鉴定到的差异蛋白及差异磷酸化蛋白质利用GO数据库、KEGG数据库和STRING数据库进行生物信息学分析。结果SDS-PAGE结果提示蛋白无明显降解,且实验组与对照组部分关键条带有明显差异;按Foldchange≥1.5或Foldchange≤1/1.5且P<0.05为条件进行差异蛋白的筛选,共筛选出147个上调差异蛋白和230个下调差异蛋白;并筛选到106个上调磷酸化位点和217个下调磷酸化位点。将去本底差异磷酸化位点功能GO富集分析,发现差异蛋白主要在核质、细胞核及细胞质组成,RNA、钙黏着蛋白及染色质结合,DNA修复、RNA剪接及DNA为模板转录的正调控等多个方面有显著富集趋势。KEGG富集结果显示,差异蛋白主要在核质转运、剪接体、细胞周期、细胞间紧密连接、病毒致癌作用和癌症中的微小RNA等通路具有显著富集趋势。蛋白互作网络主要以DDX17、NCL、EEF2、CDK1、SSRP1和SMARCC1为核心蛋白质。统计发现,SKP1、ORC1和BAD等两组学差异变化均上调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著,RBL1、RB1、CDK1、CDC6、MCM4、TFDP1、CHD4和SNW1等两组学差异变化均下调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著。结论RAI16可能通过SKP1、ORC1、RB1和CDK1等关键蛋白质在多方面生物功能和多条信号通路中发挥作用,影响细胞周期,进而影响癌症发生发展。

关键词：结肠癌维甲酸诱导蛋白16 HCT116细胞磷酸化蛋白质组学

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吲哚-3-丙酸通过调节脂肪组织代谢改善高脂饮食诱导代谢相关脂肪性肝病的作用及机制研究

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陆军军医大学学报 2024年第9期46卷 919-927页

作者：姚宇候鹏飞周敏郎和东刘明华易龙糜漫天陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系营养与食品安全研究中心重庆市医学营养研究中心营养与健康重庆市重点实验室重庆400038

目的探索吲哚-3-丙酸(indole-3-propionic acid, IPA)在高脂饮食诱导代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease, MAFLD)发生发展中的作用,揭示脂肪组织代谢在其中的作用及相关机制。方法建立高脂饮食(high-fat di... 详细信息

目的探索吲哚-3-丙酸(indole-3-propionic acid, IPA)在高脂饮食诱导代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease, MAFLD)发生发展中的作用,揭示脂肪组织代谢在其中的作用及相关机制。方法建立高脂饮食(high-fat diet, HFD)喂养诱导的MAFLD动物模型,6~7周龄的雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为3组,即对照组(CON)、高脂饮食组(HFD)、高脂+IPA干预组(HFD+IPA)。CON组以对照饲料喂养,HFD组和HFD+IPA组均以60%高脂饲料喂养,实验周期为12周,第7周开始HFD+IPA组以20 mg/(kg·d)IPA灌胃6周。每周监测各组小鼠体质量与摄食量。干预结束后使用动物体成分分析仪检测小鼠体成分。小鼠处死后,HE染色观察肝脏和脂肪组织形态学和结构变化,全自动血生化仪和生化试剂盒检测血清及肝脏和脂肪组织中脂代谢相关指标,qRT-PCR检测脂代谢和炎性相关基因mRNA的表达。结果与CON组相比,HFD组小鼠体质量和体脂肪比例显著增加,肝脏出现明显的脂质沉积,血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转氨酶以及肝脏甘油三酯和总胆固醇水平显著升高(P<0.05),肝组织脂肪酸转运分子CD36的mRNA水平明显升高(P<0.05),IPA干预显著逆转了上述变化(P<0.05)。IPA干预能够显著抑制高脂饮食诱导的内脏和棕色脂肪细胞增大,降低内脏脂肪组织(visceral adipose tissue, VAT)和血清中游离脂肪酸含量(P<0.05),增加VAT脂解基因(HSL、CGI58)和棕色化(Cidea、ND5、UCP1、Prdm16)以及棕色脂肪组织(brown adipose tissue, BAT)脂肪酸β氧化(Cpt1a、PPARα)相关基因的mRNA表达水平(P<0.05),同时降低VAT炎性因子TNF-α以及BAT中TNF-α、IL-1β、CXCL1、CCL2的mRNA表达水平(P<0.05)。结论 IPA可以改善高脂饮食诱导的MAFLD的发生,其机制可能与调节白色和棕色脂肪组织结构、代谢功能及炎性相关基因的表达有关。

关键词：吲哚-3-丙酸代谢相关脂肪性肝病肝脏内脏脂肪棕色脂肪

等能量高脂饮食对SD大鼠能量代谢及耐力运动能力的影响

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陆军军医大学学报 2024年第9期46卷 940-951页

作者：陈帅邓项元郎和东张瑞良饶昕袁家奇朱俊东秦玉糜漫天陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系营养与食品安全研究中心重庆市医学营养研究中心营养与健康重庆市重点实验室重庆400038

目的探讨等能量的45%高脂饮食对SD大鼠代谢及耐力运动能力的影响。方法 24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为:常规喂养组(CON组)、高脂喂养组(HFD组)、常规喂养+训练组(CONT组)、高脂喂养+训练组(HFDT组)。其中CON组、CONT组给予常规... 详细信息

目的探讨等能量的45%高脂饮食对SD大鼠代谢及耐力运动能力的影响。方法 24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为:常规喂养组(CON组)、高脂喂养组(HFD组)、常规喂养+训练组(CONT组)、高脂喂养+训练组(HFDT组)。其中CON组、CONT组给予常规饲料喂养,HFD组、HFDT组给予等能量的45%高脂饲料喂养;HFDT组和CONT组同时进行中等强度跑步耐力训练,持续6周。每周测量体质量、脂肪体质量和瘦体质量。用Pheno Master/Calo Treadmill系统测量静息和运动状态下的能量消耗和基础代谢率。在大鼠进行力竭测试后,检测血糖、血脂、血清肌酸激酶等指标。结果干预6周后,HFDT组耐力运动能力较CONT组增强(P<0.05)。等能量喂养的各组大鼠体质量和体成分没有明显差异。静息时,各组大鼠总能量消耗与基础代谢率无明显差异,但在4周以前,CON组以碳水化合物为主要能量底物,HFD组则以脂肪为主,而碳水代谢率降低后升高,最终两组底物代谢率于第5~6周时达到相似水平。HFDT组以脂肪为主要代谢底物,CONT组以碳水化合物为主要代谢底物,在训练6周后仍存在统计学差异(P<0.05)。高脂饮食升高了HFD组大鼠血清胆固醇、TG、HDL-C等指标水平,但经历耐力训练的高脂饮食大鼠(HFDT组)血脂水平有所降低,且HFDT组β羟基丁酸(βHB)水平升高(P<0.05)。等能量不同饮食对肝肾功能及肌肉损伤指标的影响没有明显差别。结论等能量高脂饮食可通过提高大鼠脂肪利用的能力,从而延长耐力运动时间,而不改变体成分或影响肝肾功能。

关键词：高脂饮食耐力训练能量代谢

《军人食物定量》标准（GJB 826C—2022）的主要变化及其依据

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军事医学 2024年第8期48卷 561-564页

作者：蒋与刚沈慧杜鹏郭长江杜曙光姜战伟军事科学院军事医学研究院海军军医大学海军医学系营养与食品卫生学教研室空军特色医学中心军委后勤保障部军需能源局

《军人食物定量》标准（GJB 826C—2022）是对国家军用标准《军人食物定量》标准（GJB 826B—2010）进行修订后形成的新标准。其主要变化包括：（1）归并统一各灶别定量标准，同时规定了空（潜）、直接接触核材料等特殊岗位人员食物定... 详细信息

《军人食物定量》标准（GJB 826C—2022）是对国家军用标准《军人食物定量》标准（GJB 826B—2010）进行修订后形成的新标准。其主要变化包括：（1）归并统一各灶别定量标准，同时规定了空（潜）、直接接触核材料等特殊岗位人员食物定量及食物品质方面的特殊要求；（2）调整了食物结构，主要是适当调低了粮食、动物性食物尤其是畜禽肉的定量标准，提高了水果和奶类的定量标准，同时增加了对全谷物供应量的要求，并细化了瘦肉、牛羊肉、海产品等动物性食物的比例要求；（3）新增了坚果的定量标准。新标准更加贴近实战要求、更加突出膳食质量、更为简便实用，对于提高官兵膳食营养水平、打造提高战斗力的军人新膳食模式、构建联合作战军需能源保障体系以及提高我军给养保障能力具有重要意义。

关键词：军人食物定量国家军用标准修订