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RhoA亚家族与胃癌细胞恶性表型的关系

中国肿瘤临床 2006年第18期33卷 1021-1024页

作者：张国云毕锋刘娜潘阳林孙立军乔泰东樊代明第四军医大学西京医院肿瘤生物学国家重点实验室西京医院消化内科西安市710032

目的:研究RhoA亚家族成员RhoA、RhoB和RhoC对胃癌细胞恶性表型的影响。方法:系用脂质体介导法分别将编码正显性RhoA突变体(V14RhoA)与野生型RhoB(wt-RhoB)和RhoC(wt-RhoC)的真核表达载体转染入胃癌SGC7901细胞中,筛选出稳定抗性克隆,并... 详细信息

目的:研究RhoA亚家族成员RhoA、RhoB和RhoC对胃癌细胞恶性表型的影响。方法:系用脂质体介导法分别将编码正显性RhoA突变体(V14RhoA)与野生型RhoB(wt-RhoB)和RhoC(wt-RhoC)的真核表达载体转染入胃癌SGC7901细胞中,筛选出稳定抗性克隆,并检测转染细胞的生物学行为的变化。结果:RhoA活性增强可促进胃癌细胞的增殖,而降低对化疗药物的敏感性;上调RhoB表达抑制胃癌细胞的增殖,增强对化疗药物的敏感性;上调表达RhoC则对胃癌细胞的增殖及对化疗药物的敏感性无明显的影响,但可明显促进胃癌细胞的迁移。结论:RhoA亚家族分子参与了胃癌生长、耐药及转移等多个方面,其家族中不同分子作用不同。

关键词： RhoA RhoB RhoC 胃癌脂质体介导

重组融合蛋白GX1-rmhTNFα的克隆、表达及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 360-362页

作者：曹珊珊吴开春颜真万一韩宇赵丽娜樊代明第四军医大学西京医院消化内科肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032

目的构建胃癌新生血管导向性肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白。方法利用基因工程方法将胃癌血管特异性结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆... 详细信息

目的构建胃癌新生血管导向性肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白。方法利用基因工程方法将胃癌血管特异性结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆菌进行表达。对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Westernblot检测分析。结果成功构建了GX1-rmhTNF重组融合表达质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量(Mr)约18000处出现了1条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TNFα单克隆抗体特异性的结合能力。结论成功构建了GX1-rmhT-NF基因的原核表达载体并在原核细胞中表达了该产物,为下一步GX1-rmhTNF的纯化奠定了基础。

关键词：噬菌体肽段CGNSNPKSC/GX1 GX1-rmhTNFα 重组融合蛋白/表达温度诱导

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骨髓间充质干细胞对巨噬细胞极化的影响

中华肝脏病杂志 2017年第4期25卷 273-278页

作者：侯宇周霞蔡维乐郭长存韩英第四军医大学西京医院西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室西安710032 第四军医大学西京医院西京消化病医院西安710032

目的探索骨髓间充质干细胞（BM-MSC）对骨髓来源巨噬细胞极化的影响，为间充质干细胞治疗肝纤维化提供理论依据。方法分别分离小鼠BM-MSC和骨髓来源巨噬细胞，用脂多糖（LPS）和干扰素γ（IFNV）或白细胞介素4（IL-4）刺激巨噬细胞向M1... 详细信息

目的探索骨髓间充质干细胞（BM-MSC）对骨髓来源巨噬细胞极化的影响，为间充质干细胞治疗肝纤维化提供理论依据。方法分别分离小鼠BM-MSC和骨髓来源巨噬细胞，用脂多糖（LPS）和干扰素γ（IFNV）或白细胞介素4（IL-4）刺激巨噬细胞向M1或M2型巨噬细胞极化。利用Transwell小室建立BM-MSC和巨噬细胞非接触式共培养体系，通过流式细胞术分析共培养后，M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞比例变化情况，通过荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞相关分子肿瘤坏死因子α（TNFα）、白细胞介素23a（IL-23a）和M2型巨噬细胞相关分子精氨酸酶1（Arg1）、CD163表达量的变化。两样本比较采用t检验，P〈0．05为差异有统计学意义。结果巨噬细胞＋LPS＋IFNγ＋BM-MSC共培养组与巨噬细胞＋LPS＋IFNγ组比较，M1型巨噬细胞比例显著降低（62．5％±4．6％对比86．6％±6．9％，t=5．034，P=0．0073），差异有统计学意义；且M1型巨噬细胞相关分子TNFα相对表达量（3．75±0．23对比6．17±0．27）和IL23a相对表达量（2．05±0．16对比4．56±0．37），均明显降低，t值分别为11．57、10．57，P值均〈0．05，差异均具有统计学意义。巨噬细胞＋BM-MSC共培养组与巨噬细胞单独培养组相比，M2型巨噬细胞比例显著增高（89．5％±5．8％对比70．1％±6．3％，t=3．924，P=0．0172），差异有统计学意义；且M2型巨噬细胞相关分子Arg1相对表达量（14．35±1．05对比1．00±0．03）和CD163相对表达量（3．04±0．27对比1．00±0．03）均显著增高，t值分别为21．96、13．14，P值均〈0．05，差异均具有统计学意义。结论BM-MSC可通过旁分泌作用抑制巨噬细胞由LPS＋IFNγ诱导的M1型极化，促进巨噬细胞向M2型极化。

关键词：肝硬化骨髓间充质干细胞巨噬细胞极化

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胃癌疫苗的研究现状

中国实用内科杂志 2006年第24期26卷 1917-1920页

作者：吴开春陈瑜第四军医大学附属西京医院消化内科肿瘤生物学国家重点实验室

1简介胃癌是世界上第二常见的癌症。近50年来,虽然在全球范围内,特别是部分发达国家中,胃癌的发病率和病死率呈下降趋势,但每年仍有约100万新发病例。由于缺乏早期诊断的手段,大部分有症状的胃癌患者在确诊时已属晚期。目前传统的治疗... 详细信息

1简介胃癌是世界上第二常见的癌症。近50年来,虽然在全球范围内,特别是部分发达国家中,胃癌的发病率和病死率呈下降趋势,但每年仍有约100万新发病例。由于缺乏早期诊断的手段,大部分有症状的胃癌患者在确诊时已属晚期。目前传统的治疗方法为手术、化疗、放疗,这些治疗为侵入性或毒副反应明显,且均不能有效解决肿瘤转移、复发等问题。化疗后常发生多药耐药现象。总之,[第一段]

关键词：胃癌患者细胞表位 CTL Ag 多表位疫苗免疫表位疫苗胃癌相关抗原抗原表位模拟表位碳水化合物抗原

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难治性炎症性肠病的治疗

中国实用内科杂志 2007年第18期27卷 1418-1422页

作者：郭长存吴开春第四军医大学附属西京医院消化内科肿瘤生物学国家重点实验室

资料显示,34%－45%溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者和43%-56%克罗恩病(Crohn's disease,CD)患者需要使用糖皮质激素治疗。尽管糖皮质激素对于80%的CD及UC患者有效,但糖皮质激素对于炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)患者长期疗效并不令人满意。初始激素治疗有效的IBD患者中,仅有30%的CD患者和50%的UC患者可以不经手术或激素维持1年以上治疗来维持临床缓解,[第一段]

关键词：炎症性肠病难治性

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T淋巴细胞亚群与慢性乙型肝炎的关系

中华肝脏病杂志 2012年第1期20卷 75-77页

作者：郑林华时永全韩英第四军医大学西京医院消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室西安710032

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者的外周血及肝组织内T淋巴细胞亚群组成发生了数量和质量上的改变，导致了细胞免疫的功能损伤，感染慢性化。深入探讨各种T淋巴细胞在HBV感染中的功能及变化，将为理解乙型肝炎巨陛化机制及临床治疗提供新... 详细信息

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者的外周血及肝组织内T淋巴细胞亚群组成发生了数量和质量上的改变，导致了细胞免疫的功能损伤，感染慢性化。深入探讨各种T淋巴细胞在HBV感染中的功能及变化，将为理解乙型肝炎巨陛化机制及临床治疗提供新的思路和方向。

关键词：肝炎乙型慢性 T淋巴细胞亚群免疫治疗

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抗CEA单链抗体与链亲和素融合基因的表达

生物化学与生物物理进展 2000年第4期27卷 390-394页

作者：任军季万胜周绍娟陈峥张学庸樊代明第四军医大学西京医院肿瘤中心西安710032 第四军医大学西京医院消化内科西安710032

克隆分泌CEA杂交瘤细胞重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL) ,以Linker连接VH 及VL 构建抗CEA单链抗体 .同时以Spacer连接单链抗体和链亲和素 ,构建成功单链抗体和链亲和素融合基因 ,克隆该融合基因至原核表达载体 ,pET2 1a(+) ,经IPTG诱... 详细信息

克隆分泌CEA杂交瘤细胞重链可变区 (VH)和轻链可变区 (VL) ,以Linker连接VH 及VL 构建抗CEA单链抗体 .同时以Spacer连接单链抗体和链亲和素 ,构建成功单链抗体和链亲和素融合基因 ,克隆该融合基因至原核表达载体 ,pET2 1a(+) ,经IPTG诱导表达出该双特异性融合蛋白 .活性鉴定表明该融合蛋白具有结合CEA及生物素的双特异性 .该融合蛋白在生物领域中有较广阔的应用前景 .

关键词：单链抗体融合蛋白基因表达

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丙酮酸羧化酶在胃腺癌中的表达及临床意义

细胞与分子免疫学杂志 2013年第1期29卷 85-88页

作者：康建琴汤善宏赵国宏徐光辉王飙落梁树辉丁杰第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032

目的检测丙酮酸羧化酶(PC)在胃腺癌组织中的表达并分析其临床意义。方法应用免疫组织化学方法及Westernblot法检测PC蛋白在胃腺癌及其对应癌旁组织的表达情况,分析其在肿瘤中表达水平与患者年龄、性别、TNM分期及病理分级等临床病理资... 详细信息

目的检测丙酮酸羧化酶(PC)在胃腺癌组织中的表达并分析其临床意义。方法应用免疫组织化学方法及Westernblot法检测PC蛋白在胃腺癌及其对应癌旁组织的表达情况,分析其在肿瘤中表达水平与患者年龄、性别、TNM分期及病理分级等临床病理资料之间的关系,并用Western blot法检测PC蛋白在不同分化胃癌细胞系及永生化胃黏膜上皮细胞系的表达情况。结果免疫组化及Western blot法均显示PC在胃腺癌组织表达水平显著高于其对应癌旁组织(P0.05)。Western blot法显示PC在不同分化胃癌细胞系表达水平显著高于永生化胃黏膜上皮细胞(P肿瘤的恶性进展密切相关,提示PC有可能作为胃癌生物治疗的潜在靶点。

关键词：丙酮酸羧化酶胃腺癌免疫组织化学 Western blot TNM分期

分化抑制因子1在环氧合酶2介导的胃癌血管生成中的作用及机制研究

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中华医学杂志 2007年第22期87卷 1570-1575页

作者：雷婷韩霜郭雪艳丁锐李颖谢华红白飞虎吴开春丁杰兰州军区乌鲁木齐总医院消化内科 830002 第四军医大学西京医院全军消化病研究所肿瘤生物学国家重点实验室

目的验证分化抑制因子1(Id-1)在环氧合酶2(COX-2)介导的胃癌血管生成中的作用及机制。方法建立高表达 COX-2和表达 COX-2特异性 siRNA 的胃癌 SGC7901细胞,通过Western 印迹和逆转录 PCR 方法检测两种亚细胞系中 Id1的表达,ELISA 方法... 详细信息

目的验证分化抑制因子1(Id-1)在环氧合酶2(COX-2)介导的胃癌血管生成中的作用及机制。方法建立高表达 COX-2和表达 COX-2特异性 siRNA 的胃癌 SGC7901细胞,通过Western 印迹和逆转录 PCR 方法检测两种亚细胞系中 Id1的表达,ELISA 方法分析两种细胞上清中血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异。通过四唑盐比色(MTY)实验分析两种细胞亚系的上清对体外脐静脉内皮细胞(HU-LT)增殖的影响,并在 SGC7901/COX-2中抑制 Id1后观察培养上清中 VEGF 的变化以及对脐静脉内皮细胞(HU-LT)增殖的影响。裸鼠成瘤实验观察转染细胞的成瘤性及肿瘤新生微血管密度(MVD)。结果成功建立高表达 COX-2以及表达特异性 COX-2小干扰 RNA(siRNA)的稳定克隆,并鉴定了不同克隆的转染效率。高表达 COX-2的胃癌 SGC7901细胞中 Id1的蛋白及mRNA 表达水平增高,而转染 COX-2-siRNA 的 SGC7901细胞中 Id1的表达则均低于对照组。COX-2高表达的 SGC7901/COX-2细胞上清中 VEGF 的蛋白含量高于对照组(2060±42 vs 1248±28,P=0.000),而 SGC7901/COX-2-siRNA 细胞上清中 VEGF 的蛋白含量低于对照组(1024±20,2033±27 vsP=0.000)。在 SGC7901/COX-2细胞条件培养基中,HU-LT 细胞生长较对照组快;在 SGC7901/COX-2-SiRNA 细胞条件培养基中,HU-LT 细胞生长较对照组缓。在 SGC7901/COX-2中抑制 Id1后,培养上清中 VEGF 的含量增加以及对 HU-LT 促进增殖的作用均被逆转。裸鼠成瘤试验显示抑制 Id1后SGC7901/COX-2细胞成瘤性降低[(353±12)mg vs(1020±91)mg,P=0.038],MVD 降低(8.8±1.6vs 20±1.7,P=0.001)。结论 COX-2可以上调 SGC7901细胞中 Id1的表达,并通过此途径影响内皮细胞的体外增殖能力。因此在胃癌发生发展中 Id1参与了 COX-2所介导的促血管生成过程,有可能成为胃癌抗血管治疗的新靶标。

关键词：胃肿瘤环氧化合物血管生成