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Gene-viral vectors: a promising way to target tumor cells and express anticancer genes simultaneously

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Chinese Medical Journal 2002年第8期115卷 1213-1217,154-155页

作者：钱其军岑信棠车小燕徐建国薛惠斌崔贞福朱斌吴孟超第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中心上海200438 LaboratoryofCancerGeneTherapy

OBJECTIVE: To develop a new kind of vector system called gene-viral vector, which combines the advantages of gene and virus therapies. METHODS: Using recombinant technology, an anti-tumor gene was inserted into the genome of replicative virus specific for tumor cells. The cell killing effect, reporter gene expression of the green fluorescence protein, anti-tumor gene expression of mouse interleukin-12 (mIL-12) and replication of virus were observed by the methods of cell pathology, fluorescence microscopy, ELISA and electron microscopy, respectively. RESULTS: A new kind of gene-viral vector system of adenovirus, in which the E1b-55 kD gene was deleted but the E1a gene was preserved, was constructed. The vector system, like the replicative virus ONYX-015, replicated and proliferated in tumor cells but not in normal ones. Our vector had an advantage over ONYX-015 in that it carried different kinds of anti-tumor genes to enhance its therapeutic effect. The reporter gene expression of the green fluorescence protein in tumor cells was much better than the adenovirus vector employed in conventional gene the rapy, and the expression in our vector system was as low as or even less than that in the conventional adenovirus gene therapy system. Similar results were observed in experiments with this vector system carrying the anti-tumor gene mIL-12. Replication and proliferation of the virus carrying the mIL-12 gene in tumor cells were confirmed by electron microscopy. CONCLUSIONS: Gene-viral vectors are new vectors with an anti-tumor gene inserted into the genome of replicative virus specific for tumor cells. Because of the specific replication and proliferation of the virus in tumor cells, expression of the anti-tumor gene is increased hundreds to thousands of times. This approach takes full advantages of gene therapy and virus therapy to enhance the effect on the tumor. It overcomes the disadvantages of conventional gene therapy, such as low transfer rate, low gene expressio

关键词： Adenoviridae Adenovirus E1A Proteins Adenovirus E1B Proteins Gene Therapy Genetic Vectors Humans Interleukin-12 Neoplasms Recombination, Genetic Research Support, Non-U.S. Gov't Tumor Cells, Cultured Virus Replication

基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin治疗肝癌的实验研究

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中华医学杂志 2004年第11期84卷 943-948页

作者：李根丛聂明明杨甲梅苏长青孙立臣钱炎珍 Jonathan Sham 方国恩吴孟超钱其军第二军医大学附属东方肝胆外科医院病毒和基因治疗实验室上海200438 第二军医大学附属长海医院普外科第二军医大学附属东方肝胆外科医院肝胆外科上海200438 香港大学临床肿瘤系

目的　探讨一种新的基因病毒治疗系统CNHK30 0 murineendostatin(简称CNHK30 0 mE)对肝癌的治疗作用。方法　利用基因重组技术构建一种用人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子控制腺病毒E1A基因表达并携带内皮抑素基因的基因病毒治疗系... 详细信息

目的　探讨一种新的基因病毒治疗系统CNHK30 0 murineendostatin(简称CNHK30 0 mE)对肝癌的治疗作用。方法　利用基因重组技术构建一种用人端粒酶逆转录酶 (hTERT)启动子控制腺病毒E1A基因表达并携带内皮抑素基因的基因病毒治疗系统 ;通过 5 0 %组织培养感染剂量 (TCID5 0 )方法和细胞活性检测法四氮唑盐比色试验 (MTT法 )观察CNHK30 0 mE在 2种肝癌细胞株 (HepGII及Hep3B)及 1株正常的成纤维细胞株 (MRC 5 )中的病毒增殖能力和对细胞的杀灭能力 ;通过肝癌SMMC772 1细胞裸鼠皮下移植瘤模型观察该病毒对肝癌生长和对肿瘤血管生成的抑制作用 ;利用Western印迹法和酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测内皮抑素基因在体内和体外的表达。结果分别感染肝癌细胞株和正常细胞株 96h后病毒的增殖倍数相差 32 96倍 ,其达到半数杀伤量 (ED50 )时的感染复数 (MOI)值相差 2 5倍 ,差异有显著意义 ,且两者均明显优于ONYX 0 15 ;CNHK30 0 mE能明显抑制肝癌皮下移植瘤内血管的生成 ,对肿瘤生长的抑制作用与携带同一治疗基因的非增殖型腺病毒和不携带治疗基因的增殖型腺病毒ONYX 0 15相比均增强 (P均基因在体内和体外的表达量均与携带该基因的非增殖型腺病毒载体相比均增高 (P <0 0

关键词：基因-病毒治疗系统 CNHK300-murine endostatin 肝癌端粒酶逆转录酶 hTERT 内皮抑素

术后肝功能指标对肝内胆管癌根治性切除患者预后的影响

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第二军医大学学报 2015年第6期36卷 627-633页

作者：余漪周福平郭玲玲操跃张迁钱其军第二军医大学东方肝胆外科医院生物治疗科上海200438 第二军医大学东方肝胆外科医院基因-病毒治疗实验室上海200438

目的探讨影响肝内胆管癌术后患者生存的危险因素。方法回顾性分析本院2009年3月至2014年3月收治的行根治性切除术的肝内胆管癌患者的临床资料,选择32种临床和实验室诊断检测相关指标,分析影响肝内胆管癌根治性切除患者术后生存危险因素... 详细信息

目的探讨影响肝内胆管癌术后患者生存的危险因素。方法回顾性分析本院2009年3月至2014年3月收治的行根治性切除术的肝内胆管癌患者的临床资料,选择32种临床和实验室诊断检测相关指标,分析影响肝内胆管癌根治性切除患者术后生存危险因素,采用单因素、多因素Cox模型分析影响肝内胆管癌患者术后生存的危险因素。结果最终入选患者189例,多因素分析表明,肿瘤数目、肿瘤大小、淋巴结转移情况、术前CA19-9水平、术前γ-谷氨酰转移酶、术后第1天血总胆红素及术后第5天血丙氨酸转氨酶是肝内胆管癌根治性切除患者术后生存的独立危险因素(P治疗,改善营养状况,术中尽量减少对肝脏的创伤,均有利于改善预后。

关键词：胆管肿瘤肝内胆管癌根治性切除预后胆红素丙氨酸转氨酶

DC-CIK细胞免疫治疗肺癌脑转移病例报告一例

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中国肿瘤生物治疗杂志 2015年第2期22卷 252-254页

作者：蒋琦钱其军第二军医大学东方肝胆外科医院肿瘤生物治疗科第二军医大学东方肝胆外科医院基因-病毒治疗实验室上海200438

1病例资料患者王某,女,67岁,无吸烟史,2008年10月因发现左颈部肿块就诊于当地医院,同时伴咳少量白色泡沫痰、无痰中带血,全身无发热、胸闷、胸痛等不适症状。行胸部CT检查提示左下肺背段占位,伴纵膈、左肺门及左锁骨上窝多发淋巴结肿大... 详细信息

1病例资料患者王某,女,67岁,无吸烟史,2008年10月因发现左颈部肿块就诊于当地医院,同时伴咳少量白色泡沫痰、无痰中带血,全身无发热、胸闷、胸痛等不适症状。行胸部CT检查提示左下肺背段占位,伴纵膈、左肺门及左锁骨上窝多发淋巴结肿大。左锁骨上淋巴结穿刺活检病理诊断为转移性低分化腺癌,免疫组化结果考虑来源于肺。

关键词：免疫治疗肺恶性肿瘤脑转移 DC-CIK

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肝癌靶向基因治疗的载体选择及其优化

中华肝脏病杂志 2011年第8期19卷 563-565页

作者：徐增辉钱其军第二军医大学东方肝胆外科医院基因病毒治疗实验室上海200438

肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新增原发性肝癌患者25万例。我国是肝癌的高发区，目前患者数约占全球的55％，在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌。临床上肝癌治疗以手术为主，然而肝癌发病者大多数已处于晚期，常伴随肝内外多处... 详细信息

肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新增原发性肝癌患者25万例。我国是肝癌的高发区，目前患者数约占全球的55％，在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌。临床上肝癌治疗以手术为主，然而肝癌发病者大多数已处于晚期，常伴随肝内外多处转移，不适合手术。常规的化疗、放疗、介入等方法也只是辅助治疗，且会对患者造成较大身心伤害。

关键词：癌肝细胞基因疗法组织疗法

肝动脉化疗栓塞术联合自体DC-CIK细胞治疗BCLC C期肝癌的随机对照研究

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介入放射学杂志 2015年第5期24卷 434-438页

作者：刘丽钟嘉明陈晓霞丁宁钱其军曲增强第二军医大学附属东方肝胆外科医院放射介入二科上海200438 第二军医大学附属东方肝胆外科医院基因与病毒治疗实验室上海200438

目的探讨肝动脉化疗栓塞(TACE)联合DC-CIK细胞治疗BCLC C期肝细胞癌的疗效。方法 60例BCLC C期HCC患者随机分为治疗组与对照组,治疗组患者采用TACE联合DC-CIK治疗,对照组患者只行TACE治疗,比较两组患者的免疫功能、半年和1年生存率。结... 详细信息

目的探讨肝动脉化疗栓塞(TACE)联合DC-CIK细胞治疗BCLC C期肝细胞癌的疗效。方法 60例BCLC C期HCC患者随机分为治疗组与对照组,治疗组患者采用TACE联合DC-CIK治疗,对照组患者只行TACE治疗,比较两组患者的免疫功能、半年和1年生存率。结果治疗组全血T细胞亚群CD3+CD8+明显升高,CD3+CD4+明显下降,较治疗前差异有统计学意义(P治疗比单纯TACE治疗效果更好,是BCLC C期肝细胞癌的一种有效的治疗方法。

关键词：肝细胞癌肝动脉化疗栓塞 DC-CIK 免疫功能 T淋巴细胞亚群

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不同肿瘤细胞株CD133抗体的筛查

第二军医大学学报 2010年第12期31卷 1366-1367页

作者：周育宏方国恩薛绪潮钱其军姜梨华第二军医大学长海医院普通外科上海200433 第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室上海200438

目的对42个常见的肿瘤细胞株进行筛选,明确细胞株中是否存在CD133+可能的肿瘤干细胞。方法取对数生长期的肿瘤细胞株,CD133抗体标记后用流式细胞仪检测,观察CD133+细胞的比例。结果 42个肿瘤细胞株中,肝癌细胞株SK-HEP-1、HepG2、Hep3B... 详细信息

目的对42个常见的肿瘤细胞株进行筛选,明确细胞株中是否存在CD133+可能的肿瘤干细胞。方法取对数生长期的肿瘤细胞株,CD133抗体标记后用流式细胞仪检测,观察CD133+细胞的比例。结果 42个肿瘤细胞株中,肝癌细胞株SK-HEP-1、HepG2、Hep3B、L2-2-15、PLC/PRF5,胰腺癌细胞株PANC-1、BXPC-1,结肠癌细胞株SW620、HT29,鼻咽癌细胞株CNE-2,共10个细胞株CD133+细胞数与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 42个肿瘤细胞株中检出10个细胞株存在CD133+可能的肿瘤干细胞亚群。

关键词：肿瘤细胞系 CD133 筛选肿瘤干细胞

新型的病毒-基因治疗系统CNHK500-hγ的构建

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中华实验外科杂志 2006年第1期23卷 57-59页

作者：孙立臣张柏和苏长青李根丛吴孟超钱其军第二军医大学东方肝胆外科医院胆道一科东方肝胆外科医院病毒和基因治疗实验室

目的研制出一种新的基因-病毒治疗系统。方法通过基因操作技术将主要晚期启动子(MLP)调控的人干扰素-γ基因插入腺病毒E1A基因受hTERT启动子调控、E1B基因受HRE启动子调控的增殖病毒载体质粒PXC70-HRE-TP的E1A上游,得到腺病毒质粒pSG50... 详细信息

目的研制出一种新的基因-病毒治疗系统。方法通过基因操作技术将主要晚期启动子(MLP)调控的人干扰素-γ基因插入腺病毒E1A基因受hTERT启动子调控、E1B基因受HRE启动子调控的增殖病毒载体质粒PXC70-HRE-TP的E1A上游,得到腺病毒质粒pSG500-hγ。通过pSG500-hγ与质粒pBHGE3在293细胞中同源重组得到重组病毒CNHK500-hγ。用TCID50方法测定病毒滴度。通过增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力。利用ELISA法检测人干扰素-γ抗癌基因的表达。结果CNHK500-hγ的病毒滴度为4×109pfu/ml,增殖实验结果证实CNHK500-hγ可以选择性地在端粒酶阳性的肝癌细胞中增殖,CNHK500-hγ所携带的人干扰素-γ基因在肝癌细胞株中的表达量(442μg/L)明显高于携带该基因的非增殖型腺病毒载体(120μg/L)Ad-hγ(P治疗肝癌潜力的新型基因-病毒治疗系统。

关键词：病毒-基因治疗系统 CNHK500-hγ 干扰素-γ 抗癌基因肝癌

基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin的构建及体外研究

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中华实验外科杂志 2006年第1期23卷 45-48页

作者：聂明明方国恩王星华苏长青崔贞福李林芳钱其军第二军医大学附属长海医院普外科上海200433 第二军医大学附属东方肝胆外科医院病毒和基因治疗实验室

目的构建一种新型的肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin(CNHK300-mE),以肿瘤增殖病毒为载体,携带抗肿瘤新生血管生成的基因。方法利用基因重组技术将人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子插入腺病毒E1A基因上游,将小鼠内皮抑素... 详细信息

目的构建一种新型的肿瘤基因-病毒治疗系统CNHK300-murine endostatin(CNHK300-mE),以肿瘤增殖病毒为载体,携带抗肿瘤新生血管生成的基因。方法利用基因重组技术将人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子插入腺病毒E1A基因上游,将小鼠内皮抑素基因表达盒插入到腺病毒包装信号和hTERT启动子之间,通过病毒增殖试验、电镜技术、Western blot分析、酶联免疫吸附实验(ELISA)、鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)试验,观察CNHK300-mE的复制情况、mE的表达情况及对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制情况。结果成功构建了基因-病毒治疗系统CNHK300-mE,该系统为hTERT启动子调控腺病毒E1A基因表达并携带小鼠内皮抑素基因的重组腺病毒。该病毒可以在端粒酶阳性的胃癌细胞株SGC-7901和肝癌细胞株HepGII中大量增殖及复制,而在端粒酶阴性的正常纤维细胞中不增殖。电镜证实该重组病毒在胃癌细胞株SGC-7901中复制及增殖。ELISA检测表明SGC-7901感染CNHK300-mE后7d,小鼠内皮抑素的表达量为1000μg/L。CAM实验证实该病毒感染胃癌细胞后的培养液上清具有抗新生血管生成的生物活性。结论基因-病毒治疗系统CNHK300-mE能在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性增殖复制,并大量表达具有抗新生血管生成生物活性的小鼠内皮抑素。

关键词：基因-病毒治疗系统 CNHK300-murine endostatin 肿瘤基因血管生成端粒酶肿瘤细胞