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斯氏按蚊转录因子Relish基因克隆、定位及不同食源条件下表达

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第5期23卷 257-261页

作者：杨松黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室

目的对斯氏按蚊转录因子Relish基因进行克隆、定位和差异分析,初步探讨转录因子Relish在前酚氧化酶(PPO)级联与疟原虫卵囊黑化中的信号调控作用。方法设计简并引物,对全蚊cDNA模板进行RT-PCR扩增,产物纯化、克隆、测序和鉴定,利用特异... 详细信息

目的对斯氏按蚊转录因子Relish基因进行克隆、定位和差异分析,初步探讨转录因子Relish在前酚氧化酶(PPO)级联与疟原虫卵囊黑化中的信号调控作用。方法设计简并引物,对全蚊cDNA模板进行RT-PCR扩增,产物纯化、克隆、测序和鉴定,利用特异引物分别从血细胞或中肠扩增目的基因,于不同食源条件下进行半定量分析和原位核酸分子杂交定位。结果获得了1种斯氏按蚊RelishcDNA部分序列,与冈比亚按蚊Relish基因很相似,并存在于中肠和血细胞,半定量分析显示,感染约氏疟原虫6、12、24和48h或吸硝喹糖水12和24h,于诱导约氏疟原虫卵囊黑化之前表达明显增强,原位核酸分子杂交证实血细胞和中肠有表达。结论斯氏按蚊转录因子Relish可能在疟原虫感染或/和约氏疟原虫卵囊黑化调控中发挥重要作用。

关键词：斯氏按蚊转录因子信号调控

大鼠生后发育期皮肤及毛囊Nexin 1的研究

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中国医学科学院学报 1998年第2期20卷 127-132页

作者：向明明杨恬第三军医大学西南医院重庆400038 第三军医大学细胞生物学教研室

目的对生后大鼠组织切片上皮肤及毛囊的Nexin 1的mRNA的变化进行研究,希望进一步了解Nexin 1在毛发生长及周期调节中可能的作用。方法取生后第1～61天Wistar大鼠96只,分为38组,确定毛发周期后,用放射标记的原位杂交方法对大鼠皮肤和毛... 详细信息

目的对生后大鼠组织切片上皮肤及毛囊的Nexin 1的mRNA的变化进行研究,希望进一步了解Nexin 1在毛发生长及周期调节中可能的作用。方法取生后第1～61天Wistar大鼠96只,分为38组,确定毛发周期后,用放射标记的原位杂交方法对大鼠皮肤和毛囊石蜡切片上Nexin 1 n1RNA的分布和含量进行了研究。结果 Nexin 1 mRNA在大鼠新生后第4天首次在毛乳头中出现。在各个毛发周期中Nexin 1 mRNA信号均出现于毛囊生长早期并逐渐增强,峰值在生长中晚期(Ⅳ期),以后逐渐减弱,在毛囊退化期和静止期中信号完全消失。Nexin 1 mRNA仅见于生长期毛乳头细胞,在皮肤和毛囊的其他细胞,包括真皮成纤维细胞、肥大细胞、脂肪细胞、平滑肌细胞以及皮肤和毛囊各层的角质形成细胞中均未发现Nexin 1 mRNA。结论 Nexin 1作为已被证明在多个器官的细胞生长分化调节中具有重要作用的蛋白酶抑制剂对毛发生长和周期的调节可能有重要作用。

关键词： Nexin1 毛发周期毛乳头生后发育

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Wnt10b在小鼠毛囊周期中的表达

第三军医大学学报 2009年第10期31卷 891-894页

作者：张坤连小华李玉红杨珂徐伟星懿展杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的初步探讨Wnt10b在小鼠毛囊生长周期中的表达变化规律及其意义。方法首先用RT-PCR检测Wnt10b在小鼠皮肤中的表达情况,然后以免疫组化检测Wnt10b在毛囊生长周期各阶段的表达定位及变化,同时检测了核增殖抗原Ki67在毛母质中的表达情况... 详细信息

目的初步探讨Wnt10b在小鼠毛囊生长周期中的表达变化规律及其意义。方法首先用RT-PCR检测Wnt10b在小鼠皮肤中的表达情况,然后以免疫组化检测Wnt10b在毛囊生长周期各阶段的表达定位及变化,同时检测了核增殖抗原Ki67在毛母质中的表达情况。结果Wnt10b在生后第1周期生长期皮肤的mRNA表达量显著高于退化期和静止期(P细胞,第2周期生长早期表达于毛母质细胞的祖细胞次级毛芽,提示Wnt10b可能对毛母质细胞增殖起作用,进而调控毛囊的生长并维持毛囊周期。

关键词： Wnt10b 毛囊周期毛母质增殖

pEGFPC1-uPAR重组质粒的构建及对细胞增殖和侵袭性的影响

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第三军医大学学报 2005年第19期27卷 1928-1930页

作者：高强国符刚曾益军杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的构建含人uPAR基因片断的真核表达绿色荧光蛋白质粒,并进行初步的细胞生物学研究。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人全长uPAR基因,并导入真核表达载体绿色荧光蛋白质粒pGFPC1中,测序确认后转染Pam212细胞,使之在细胞中表... 详细信息

目的构建含人uPAR基因片断的真核表达绿色荧光蛋白质粒,并进行初步的细胞生物学研究。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人全长uPAR基因,并导入真核表达载体绿色荧光蛋白质粒pGFPC1中,测序确认后转染Pam212细胞,使之在细胞中表达,检测其细胞生长特性和侵袭能力的变化。结果测序证实构建的含uPAR的绿色荧光蛋白质粒,其uPARcDNA阅读框完整,连接部位序列正确;转染Pam212细胞后,能促进细胞的生长并能增强细胞的侵袭能力。结论成功构建了含pEGFPC1-uPAR质粒,确认uPAR能促进Pam212细胞的生长和侵袭,为进一步在体定位研究打下了基础。

关键词： uPAR pEGFPC1 Pare 212细胞

Β-CATENIN和COX-2在大鼠毛囊隆突区细胞中的表达及意义

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 324-326页

作者：张艺王韵曾益军杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的通过观察Β-CATENIN和COX-2在体外培养的毛囊隆突区细胞中的表达,探讨其对隆突区细胞增殖的作用及相互关系。方法在体外分离培养毛囊隆突区细胞的基础上,采用免疫细胞化学方法分别检测不同时相Β-CATENIN和COX-2在毛囊隆突区细胞中... 详细信息

目的通过观察Β-CATENIN和COX-2在体外培养的毛囊隆突区细胞中的表达,探讨其对隆突区细胞增殖的作用及相互关系。方法在体外分离培养毛囊隆突区细胞的基础上,采用免疫细胞化学方法分别检测不同时相Β-CATENIN和COX-2在毛囊隆突区细胞中的表达。结果Β-CATENIN和COX-2在毛囊隆突区细胞呈强表达,并表现出与培养时间的相关性;同时Β-CATENIN可见于细胞质与细胞核中,而COX-2仅见于细胞核。结论Β-CATENIN和COX-2对毛囊隆突区细胞具有促增殖作用,COX-2可能是Β-CATENIN途径发挥作用的核内靶基因。

关键词： β-连环蛋白环氧合酶-2 毛囊隆突区增殖

Targeted migration and differentiation of engrafted neural precursor cells in amyloid β-treated hippocampus in rats

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Neuroscience Bulletin 2007年第5期23卷 263-270页

作者：唐军徐海伟范晓棠李志方李达兵杨丽周光纪第三军医大学基础医学部生理学教研室第三军医大学基础医学部生理学敦研室第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆400038

Objective To observe the migration and differentiation of the neural precursor cells （NPCs） that derived from murine embryonic stem cells （ESCs） when they were transplanted into amyloid β （Aβ）-treated rat hippocampus. Methods MESPU35, a murine ESC cell line that express the enhanced green fluorescent protein （EGFP）, was induced differentiation into nestin-positive NPCs by modified serum-free methods. The Aβ plaques and the differentiation of the grafted cells were observed by immunofluorescent staining. Results Comparing 16 weeks with 4 weeks post-transplantation, the migration distance increased about 5 times; the rate of migratory NPCs differentiating into glial fibrillary acidic protein （GFAP）-positive cells kept rising from （30.41 ± 1.45）% to （49.25± 1.23）%, and the rate of NPCs differentiating into neurofilament 200 （NF200） positive cells increased from （16.68±0.95）% to （27.94± 1.21）%. Meanwhile, the GFAP-positive cells targeting to the ipsilateral side of Aβ plaques increased from 60.2% to 81.3 %, while the NF200-positive cells increased from 61.3% to 84.1%. The migration distance had significant positive linear correlations to the neuronal differentiation rate （r = 0.991） and to the astrocytic differentiation rate （r = 0.953）. Conclusion Engrafted NPCs migrate targetedly to the Aβ injection site and differentiate into neurons and astrocytes.

关键词： embryonic stem cells amyloid β peptide cell transplantation differentiation migration rat

小鼠皮肤器官培养模型的建立及存活状况的研究

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第三军医大学学报 2004年第18期26卷 1690-1692页

作者：崔志鸿杨恬高强国第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的　检测皮肤器官培养模型中细胞的生长及存活状况 ,建立稳定的小鼠皮肤体外培养模型。方法　将小鼠皮肤培养于transwell的内室 ,培养液加至皮肤的表真皮交界处 ,于培养后的 2 ,4,8d取皮片固定、切片后于光镜、共聚焦显微镜及透射式... 详细信息

目的　检测皮肤器官培养模型中细胞的生长及存活状况 ,建立稳定的小鼠皮肤体外培养模型。方法　将小鼠皮肤培养于transwell的内室 ,培养液加至皮肤的表真皮交界处 ,于培养后的 2 ,4,8d取皮片固定、切片后于光镜、共聚焦显微镜及透射式电镜下进行观察。结果　培养 2 ,4d的皮片与未经培养的皮片在形态结构与细胞的存活数量上没有显著差异 ;培养 8d的皮片光镜下的形态结构没有发生明显改变 ,但共聚焦显微镜下 ,细胞存活数量有所下降 ,透射式电镜下细胞的超微结构显示胞质及线粒体肿胀 ,溶酶体增多等退化性改变。结论　体外培养 4d以下的皮肤与在体生长的皮肤在形态结构及细胞生长方面没有显著差异。

关键词：皮肤器官培养激光共聚焦显微镜透射式电镜

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角蛋白14在胎儿表皮发育中表达的研究

第三军医大学学报 2000年第12期22卷 1159-1161页

作者：宋川杨恬曾益军第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的　了解角蛋白 14 (K14 )在人胎儿表皮发育中的变化及意义。方法　早、中、晚期胎儿皮肤做冰冻切片 ,进行K14的免疫细胞化学染色 (Immunocytochemistry ,ICC)和原位杂交染色 (insituhybridization ,ISH) ,通过图像分析和统计学处理分... 详细信息

目的　了解角蛋白 14 (K14 )在人胎儿表皮发育中的变化及意义。方法　早、中、晚期胎儿皮肤做冰冻切片 ,进行K14的免疫细胞化学染色 (Immunocytochemistry ,ICC)和原位杂交染色 (insituhybridization ,ISH) ,通过图像分析和统计学处理分析K14的变化及规律。结果　人胚胎 12周表皮已表达K14 ,中期表达量最高 ,晚期也有较高表达 ,但主要局限于表皮基底层细胞。结论　胎儿表皮基底层角朊细胞 (KC)表达K14 ,对维持KC形态。

关键词：角蛋白14 人胚胎角朊细胞表皮发育

人表皮角质形成细胞中PAI-3/PCI的表达及作用

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 294-297页

作者：张诚李习玲连小华王韵杨珂余谨高强国杨恬第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038

目的探讨人表皮角质形成细胞(KERATINOCYTE,KC)中,PAI-3/PCI的表达及作用。方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高CA2+浓度作用下,培养的人分化表皮KC及KC提取物角质壳中PAI-3的表达变化。结果高CA2+浓度下培养24H后,分化标记物K10... 详细信息

目的探讨人表皮角质形成细胞(KERATINOCYTE,KC)中,PAI-3/PCI的表达及作用。方法利用免疫细胞化学、RT-PCR方法,检测高CA2+浓度作用下,培养的人分化表皮KC及KC提取物角质壳中PAI-3的表达变化。结果高CA2+浓度下培养24H后,分化标记物K10弱阳性表达,PAI-3呈阳性表达;培养48H后,K10强阳性表达,而PAI-3的阳性表达明显增加,72H后,表达开始降低,在低CA2+浓度下阳性染色主要位于细胞核膜周围而高CA2+浓度下主要位于细胞质,同时,PAI-3存在终末分化KCS角质壳中。结论人表皮KC分化过程中,PAI-3的表达随着分化的增加而增加,PAI-3存在终末分化KCS角质壳蛋白中,表明PAI-3参与KC分化的作用。

关键词：角质形成细胞分化 PAI-3 角质壳 PCI