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应用Super SMART cDNA合成技术扩增哮喘嗜酸性粒细胞总RNA

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第一军医大学学报 2004年第9期24卷 1037-1039页

作者：赵海金蔡绍曦邹飞佟万成万为人第一军医大学南方医院呼吸科广东广州510515 第一军医大学热带军队卫生学系高温医学研究室广东广州510515

目的应用Super SMART cDNA 合成技术从嗜酸细胞微量总RNA扩增大量双链cDNA。方法利用Percoll密度梯度离心分离哮喘病人血嗜酸性粒细胞,用Trizol试剂盒提取细胞总RNA,利用Super SMART cDNA合成技术合成cDNA第1链及优化扩增第2链。通过梯... 详细信息

目的应用Super SMART cDNA 合成技术从嗜酸细胞微量总RNA扩增大量双链cDNA。方法利用Percoll密度梯度离心分离哮喘病人血嗜酸性粒细胞,用Trizol试剂盒提取细胞总RNA,利用Super SMART cDNA合成技术合成cDNA第1链及优化扩增第2链。通过梯度电泳鉴定cDNA产品质量,通过对获得的cDNA定量来评估扩增效能。结果从20 ng总RNA成功扩增出双链cDNA 7.155 μg,电泳结果显示cDNA质量及纯度较高。结论Super Smart cDNA 合成技术可实现从微量总RNA高效扩增高质量的cDNA,为进一步从基因水平研究哮喘机制奠定了基础。

关键词： Super SMART cDNA合成技术支气管哮喘/病因嗜酸性粒细胞

N-甲基-D-天门冬氨酸受体介导缺氧SD大鼠PO/AH区神经元Ca^(2+)浓度的变化

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第一军医大学学报 2004年第4期24卷 461-463,466页

作者：赵庆平邹飞陈光忠李铁林第一军医大学珠江医院神经外科广东广州510282 第一军医大学热带军队卫生学系高温医学研究室广东广州510515

目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体特性,探讨NMDA对缺氧大鼠PO/AH区神经元Ca2+浓度的影响。方法给大鼠应用NMDA受体激动剂NMDA和拮抗剂丙戊酸,观察其在正常和缺氧条件下对PO/AH区神经细胞内Ca2+浓度的影响。结果在正常条件下,细胞... 详细信息

目的研究N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体特性,探讨NMDA对缺氧大鼠PO/AH区神经元Ca2+浓度的影响。方法给大鼠应用NMDA受体激动剂NMDA和拮抗剂丙戊酸,观察其在正常和缺氧条件下对PO/AH区神经细胞内Ca2+浓度的影响。结果在正常条件下,细胞内Ca2+荧光比值为0.95,第40秒加入NMDA后[Ca2+]i的荧光强度迅速增高,25s后达到峰值2.054,并稳定在此水平,其升幅为(109±52)%,加入激动剂后30 s内达到峰值3.783,并持续稳定在此水平,加入NMDA后[Ca2+]i升高了(286±91)%;缺氧条件下神经元[Ca2+]i在加入丙戌酸后由平台向下的降幅为(103±45)%。结论[Ca2+]i的升高主要是由于NMDA受体通道开放,细胞外游离Ca2+易化扩散入胞内所致,丙戊酸可有效地降低NMDA受体活性,从而使细胞内游离Ca2+浓度明显下降,具有保护神经元免受缺氧损伤的作用。

关键词： N-甲基-D-天门冬氨酸受体缺氧 SD PO/AH区神经元 Ca^2+ 丙戌酸钠

经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的构建与评价

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中国热带医学 2023年第10期23卷 1023-1029页

作者：勒斌唐睿姜鹏月何兴范晓斌海军军医大学海军医学系热带病学教研室上海200433

目的构建经门静脉直接注射日本血吸虫虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型并评价其效果,为血吸虫肝病研究提供新的动物模型。方法将15只8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和注射虫卵组,其中对照组5只,注射虫卵组10只。第-14天将5000个活虫... 详细信息

目的构建经门静脉直接注射日本血吸虫虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型并评价其效果,为血吸虫肝病研究提供新的动物模型。方法将15只8周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和注射虫卵组,其中对照组5只,注射虫卵组10只。第-14天将5000个活虫卵注射至小鼠腹腔,第0天麻醉小鼠后剖开腹腔,经门静脉注入5000个虫卵,对照组注射等体积的磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)。分别于第10天、第30天处死虫卵组小鼠各5只,第10天处死对照组小鼠,收集小鼠血清和肝组织,通过进行苏木素-伊红染色(HE染色)、马松染色(Masson染色),微孔板分光光度计法检测丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肝脏羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量,以及实时荧光定量PCR(qPCR)法检测肝纤维化相关基因、Th1和Th2型免疫反应相关基因,分析肝损伤、虫卵肉芽肿和纤维化以及适应性免疫反应等指标,评价经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型的效果。结果经门静脉注射虫卵10 d和30 d后,小鼠肝脏出现明显的虫卵肉芽肿,第10天组虫卵肉芽肿面积与第30天组相比,差异无统计学意义(t=0.975,P=0.332)。Masson染色和肝脏羟脯氨酸含量检测显示肝脏发生明显纤维化。qPCR结果表明,与对照组相比,第10天组小鼠肝组织纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α⁃Sma)、Ⅰ型胶原(collagen type I alpha 1,Col1α1)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta 1,Tgfb1)表达水平显著升高,差异有统计学意义(t=6.380、7.533、5.314,P=0.002、0.001、0.007);在第30天时出明显下降,与对照组相比差异无统计学意义(t=0.940、1.529、1.746,P=0.778、0.543、0.457)。同时,Th1型免疫反应相关基因肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,Tnf)、干扰素-γ(interferon gamma,Ifng)和Th2型免疫反应相关基因白细胞介素5(interleu⁃kin-5,Il5)、白细胞介素13(interleukin-13,Il13)表达水平在注射虫卵10 d后显著升高,差异有统计学意义(t=6.163、4.589、5.651、5.367,P=0.003、0.018、0.020、0.009)。此外,各组小鼠血清中的AST、ALT水平无明显变化,差异无统计学意义(t=0.982、3.450,P=0.771、0.074;t=1.164、0.564,P=0.697、0.917)。结论经门静脉注射虫卵诱导血吸虫肝病小鼠模型构建成,研究结果为血吸虫病肝纤维化的机制研究提供了新的建模方法。

关键词：日本血吸虫虫卵血吸虫肝病模型门静脉肝纤维化

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一种新型丙型肝炎病毒培养方法的建立

中国生物工程杂志 2004年第1期24卷 36-37页

作者：吴英松董文其张彦明李明第一军医大学热带医学研究所广州510515

The aim was to develop a cell culture system capable of producing high titer hepatitis C virus(HCV) stocks with recombinant vaccinia viruses as *** plasmids were used for the generation of recombinant HCV:one containing the full\|length HCV cDNA cloned between the T7 promoter and T7 terminator of the pOCUS\|T7 vector;and the other containing the HCV polyprotein open reading frame(ORF) directly linked to a vaccinia late promoter in the *** two plasmids were co\|transfected into BHK 21 cells,which were then infected with vTF7\|3 recombinant vaccinia helper *** 5 days incubation,approximately 3 60±0 18×10 7 copies of HCV RNA were present per ml of cell culture supernatant,as detected by fluorescence quantitative RT\|PCR(FQ\|PCR).The yield of recombinant HCV using this cell system increased 10～100 fold compare to in vitro\| transcribed HCV genomic RNA or selectable subgenomic HCV RNA molecules *** results suggest that this cell culture system is capable of producing high titer recombinant HCV. Furthermore,it may be useful as a system for future drug screening and vaccine selection.;

关键词：丙型肝炎病毒培养方法基因操作技术体外细胞培养

硫钾皂对热区部队官兵感染性皮肤病的防治效果

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解放军预防医学杂志 2000年第6期18卷 406-408页

作者：成晓茹于娜沙张冬梅吴爱军俞守义第一军医大学南方医院皮肤科广州510515 第一军医大学热带医学研究所

目的 :研究硫钾皂对热带地区驻军官兵集训期间感染性皮肤病的防治效果 ,探讨防治皮肤病的经济有效的措施。方法 :选择驻热区夏季高强度野外训练部队官兵 10 6人为观察组 ,另选训练强度相似、驻营区的官兵 12 3人为对照组。观察组单用硫... 详细信息

目的 :研究硫钾皂对热带地区驻军官兵集训期间感染性皮肤病的防治效果 ,探讨防治皮肤病的经济有效的措施。方法 :选择驻热区夏季高强度野外训练部队官兵 10 6人为观察组 ,另选训练强度相似、驻营区的官兵 12 3人为对照组。观察组单用硫钾皂外洗 ,对照组不用任何药膏 ,采用问卷调查方式分别对二组人员集训前后感染性皮肤病发病情况进行统计学分析。结果 :集训 3个月后二组真菌性、细菌性、虫媒性皮肤病发病率均有程度不等的增高 ,其中观察组上述 3种皮肤病的发病率比野外驻训前分别增加了 16.0 3%、11.0 2 %和 10 .38% ,显著低于对照组( 2 6.0 1%、19.51%和 16.2 6% )。结论 :硫钾皂对多种感染性皮肤病具有明显防治作用 ,且造价低廉、携带方便 ,适合野外作战部队长期使用。

关键词：热区部队硫钾皂感染性皮肤病

海军某部夏季高强度训练期间皮肤病发病情况调查

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解放军预防医学杂志 2001年第1期19卷 42-43页

作者：成晓茹吴爱军张冬梅王红第一军医大学南方医院皮肤科广州510515 第一军医大学热带医学研究所

目的 :了解海军某部皮肤病发病情况及夏季高强度作战训练期间皮肤病病种变化 ,分析病因 ,为制定防治对策提供科学依据。方法 :采用流行病学调查方法对海军某部 174 7名官兵夏季高强度作战训练前后皮肤病病种变化进行调查 ,分析可能致病... 详细信息

目的 :了解海军某部皮肤病发病情况及夏季高强度作战训练期间皮肤病病种变化 ,分析病因 ,为制定防治对策提供科学依据。方法 :采用流行病学调查方法对海军某部 174 7名官兵夏季高强度作战训练前后皮肤病病种变化进行调查 ,分析可能致病因素。结果 :感染性皮肤病的发病人次为 1515,发病率 86 .7% ,占全部皮肤病的 76 .3% ,其中以真菌性皮肤病最常见 ,占4 3.1% ,训练后以日照、高温导致的物理性皮肤病显著增多 ,尤以新兵为著。驻地位于热带地区 ,训练强度大、个人卫生习惯不良、滥用激素类软膏等可能是皮肤病高发的主要因素。结论 :皮肤病已跃升为驻热带部队官兵的主要疾病 ,其中约半数为真菌性皮肤病 ,夏季强化训练后物理性皮肤病显著增多。

关键词：海军夏季高强度训练皮肤病

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复方人参制剂对热应激大鼠的保护作用研究

中国工业医学杂志 2001年第3期14卷 136-138页

作者：罗炳德邹飞万为人陈雪梅杨军第一军医大学热带军队卫生学系高温医学研究室广东广州510515

目的　观察复方人参制剂对热应激鼠的保护作用。方法　 3 4只SD大鼠被随机分为对照组 (Ⅰ组 ,n =17)、复方人参制剂组 (Ⅱ组 ,n =17)。热应激前 1h分别以水及复方人参制剂 (0 5ml/ 10 0g体重 )灌胃。动物于人工气候室内受热直至死亡。... 详细信息

目的　观察复方人参制剂对热应激鼠的保护作用。方法　 3 4只SD大鼠被随机分为对照组 (Ⅰ组 ,n =17)、复方人参制剂组 (Ⅱ组 ,n =17)。热应激前 1h分别以水及复方人参制剂 (0 5ml/ 10 0g体重 )灌胃。动物于人工气候室内受热直至死亡。测定直肠温度、下丘脑hsp70含量等指标。结果 (1)体温的变化 :Ⅱ组动物热应激过程肛温各时点的测定值均较对照组低 ,其中热至 40min时低 0 18℃ ,热至 60min、 80min、 10 0min时则分别低 0 5 6℃、 0 70℃、0 71℃ (P <0 0 5 )。Ⅰ、Ⅱ组肛温的平均上升速率分别为 (0 0 44± 0 0 2 2 )℃ /min、 (0 0 2 9± 0 0 15 )℃ /min (P <0 0 5 )。(2 )动物热耐受时间和死亡率 :Ⅰ、Ⅱ组动物的平均热耐受时间分别为 (162 8± 62 9)min、 (2 17 4± 5 9 3 )min ,后者比前者延长 5 4 6min (P <0 0 5 ) ;其动物死亡率 ,在热暴露 2小时、 3小时、 4小时时Ⅰ组分别为 41 2 %、 5 2 9%和82 4% ,Ⅱ组则分别为 11 8%、 2 3 5 %和 5 2 9% ,P值均小于 0 0 5。 (3 )下丘脑hsp70含量的变化 :Ⅰ、Ⅱ组动物分别热暴露至死亡时 ,其下丘脑hsp70的含量为 (47 72± 19 0 3 ) μg/mg、 (5 4 3 2± 18 5 4) μg/mg (P <0 0 5 ) ,且hsp70含量与动物的热耐受时间呈高度正相关 (r

关键词：热应激热耐受人参热休克蛋白70 中暑

寄生虫感染所致肝纤维化的疾病负担及病理特征

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中国热带医学 2023年第10期23卷 1058-1062,1098页

作者：何兴海军军医大学热带病学教研室上海200433

血吸虫、肝吸虫、包虫等寄生虫以肝脏为主要寄生或致病脏器,肝纤维化是这些寄生虫感染后宿主的主要病理特征以及宿主致病致死的主要原因。寄生虫感染所致肝纤维化在全球仍有较重的疾病负担,并由于其独特的疾病特征使得寄生虫感染所致肝... 详细信息

血吸虫、肝吸虫、包虫等寄生虫以肝脏为主要寄生或致病脏器,肝纤维化是这些寄生虫感染后宿主的主要病理特征以及宿主致病致死的主要原因。寄生虫感染所致肝纤维化在全球仍有较重的疾病负担,并由于其独特的疾病特征使得寄生虫感染所致肝纤维化动物模型在肝纤维化研究中具有独特地位。寄生虫感染所致肝纤维化区别于其他类型肝纤维化的最本质特征就是寄生虫分泌的各类虫源分子是肝纤维化的始动因素,虫源致病分子包括蛋白、核酸、脂质、代谢小分子等类型。虫源致病分子在宿主肝脏内诱导形成2型免疫或炎症微环境,虽然对寄生虫感染后肝脏内2型免疫的启动、维持及消退过程进行了深入研究,但诸多核心机制仍不明确。慢性炎症最终激活星状细胞等类型细胞转分化为肌成纤维细胞(myofibroblast,MF)并促使肝纤维化的形成;清除寄生虫后MF可能发生逆分化、凋亡、衰老等转归过程,肝纤维有可能发生逆转。深入研究MF的激活及转归过程是有效预防和治疗肝纤维化的基础。本文综述了寄生虫感染所致宿主肝纤维化的疾病负担及病理特征。

关键词：寄生虫肝纤维化致病机制

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NO调控下丘脑钙激活钾通道的机制研究

中国应用生理学杂志 2002年第1期18卷 5-8页

作者：王帅王政刚张旭东邹飞白求恩国际和平医院神经外科河北石家庄050082 第一军医大学高温医学研究室广东广州510515

目的 :研究NO对下丘脑神经元钙激活钾通道 (KCa)的作用及其机制。方法 :采用膜片钳技术内面向外式及细胞贴附式。结果 :NO可直接或通过升高cGMP来提高KCa通道的开放概率 (Po) ,这种增强作用是因为通道开放时间延长及开放频率增加。结论 ... 详细信息

目的 :研究NO对下丘脑神经元钙激活钾通道 (KCa)的作用及其机制。方法 :采用膜片钳技术内面向外式及细胞贴附式。结果 :NO可直接或通过升高cGMP来提高KCa通道的开放概率 (Po) ,这种增强作用是因为通道开放时间延长及开放频率增加。结论 :下丘脑神经元中NO可通过不同机制激活KCa。

关键词： NO 下丘脑神经元钙激活钾通道膜片钳技术机制神经信号转导