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鱼糜制品中大豆蛋白检测方法的建立

中国食品学报 2013年第12期13卷 203-209页

作者：江韬玲蔡秋凤沈建东刘光明孙海玲曹敏杰集美大学生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心福建厦门361021

利用抗大豆胰蛋白酶抑制剂的多克隆抗体建立免疫检测方法,实现对鱼糜制品中大豆蛋白的检测。采用等电点沉淀、硫酸铵盐析、离子交换柱层析等方法纯化大豆胰蛋白酶抑制剂。利用纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂制备抗大豆胰蛋白酶抑制剂多克隆抗... 详细信息

利用抗大豆胰蛋白酶抑制剂的多克隆抗体建立免疫检测方法,实现对鱼糜制品中大豆蛋白的检测。采用等电点沉淀、硫酸铵盐析、离子交换柱层析等方法纯化大豆胰蛋白酶抑制剂。利用纯化的大豆胰蛋白酶抑制剂制备抗大豆胰蛋白酶抑制剂多克隆抗体,以蛋白A琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化抗体,采用SDS-PAGE及蛋白质印迹法分别对其进行纯度及特异性分析。以制备的多克隆抗体为基础,通过蛋白质印迹、竞争性酶联免疫吸附试验分析鱼糜制品中大豆蛋白的存在情况。结果表明,制备的抗大豆胰蛋白酶抑制剂多克隆抗体纯度较高,只与大豆分离蛋白中的大豆胰蛋白酶抑制剂反应,特异性良好。以抗大豆胰蛋白酶抑制剂多克隆抗体建立的蛋白质印迹法及竞争性酶联免疫吸附试验检测市售的鱼糜制品,结果千叶豆腐中大豆胰蛋白酶抑制剂的含量最高,其次为香菇鱼丸。本研究建立的大豆胰蛋白酶抑制剂免疫检测方法,可实现对鱼糜制品中大豆蛋白的半定量检测。

关键词：鱼糜制品大豆蛋白大豆胰蛋白酶抑制剂竞争性酶联免疫吸附试验检测

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利用鲍鱼性腺制备ACE抑制肽

中国食品学报 2015年第10期15卷 91-99页

作者：伍强蔡秋凤翁凌沈建东章骞曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省水产品深加工工程研究中心福建厦门361021

采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶分步酶解鲍鱼性腺蛋白,以酶解产物分子质量及ACE抑制率为考核指标,用正交试验及响应面分析法对其制备工艺参数进行优化。结果显示,第1步碱性蛋白酶最佳工艺参数为反应p H 8.5,反应温度55℃,加酶量0.5%,酶解时... 详细信息

采用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶分步酶解鲍鱼性腺蛋白,以酶解产物分子质量及ACE抑制率为考核指标,用正交试验及响应面分析法对其制备工艺参数进行优化。结果显示,第1步碱性蛋白酶最佳工艺参数为反应p H 8.5,反应温度55℃,加酶量0.5%,酶解时间6 h;第2步木瓜蛋白酶最佳工艺参数为反应p H 6.5,反应温度57℃,酶解时间36 min,加酶量1.5%。将酶解产物用10 ku及3 ku膜超滤,采用凝胶过滤色谱法测得超滤组分中分子质量在1 ku以下的小肽含量为98.5%,IC50为0.44 mg/m L。本研究制备的低分子质量、高活性ACE抑制肽,为鲍鱼加工下脚料的高值化利用提供了理论参考。

关键词：鲍鱼性腺 ACE抑制肽制备工艺分子质量分布

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草鱼肌肉脯氨酸内肽酶的研究

中国食品学报 2015年第9期15卷 23-31页

作者：翁凌林韵张玲张凌晶颜龙杰刘光明曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省水产品深加工工程研究中心福建厦门361021

脯氨酸内肽酶（Prolylendopeptidase，PEP）是一类能够特异性水解低分子质量多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的内切酶，与胶原蛋白的后期降解有密切关系。以淡水鱼草鱼为原料。采用硫酸铵分级沉淀。DEAE—Sephacel阴离子交换，Phenyl—Sep... 详细信息

脯氨酸内肽酶（Prolylendopeptidase，PEP）是一类能够特异性水解低分子质量多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的内切酶，与胶原蛋白的后期降解有密切关系。以淡水鱼草鱼为原料。采用硫酸铵分级沉淀。DEAE—Sephacel阴离子交换，Phenyl—Sepharose疏水层析和羟基磷灰石层析等方法从草鱼肌肉中分离纯化得到一种脯氨酸内肽酶。SDS—PAGE结果显示，草鱼PEP的分子质量为75ku。酶学性质分析表明，其最适pH为6．0，在pH5．5～7．5间有较好的稳定性。酶的最适温度为30℃，其热稳定性较差。PEP能够特异性分解肽链羧基端为脯氨酸残基的荧光底物，PEP的特异性抑制剂SUAM以及丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟对其有强烈的抑制作用。酶动力学研究表明，草鱼PEP的k为19．23μmol／L，kca为2．5s-1。肽指纹质谱分析结果表明，草鱼PEP与青锵鱼、罗非鱼、斑马鱼PEP的序列同源性分别为98-3％．96．1％和94．4％。

关键词：脯氨酸内肽酶草鱼纯化性质分析

皱纹盘鲍酶促溶性胶原蛋白的性质研究及抗体制备

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水产学报 2016年第2期40卷 267-277页

作者：游银川麻金花段雪昆章骞沈建东刘光明曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心

针对加工副产物鲍鱼外套膜利用率低的现象,对鲍鱼腹足和外套膜胶原蛋白相关性质进行比较研究,以期为鲍鱼的综合加工提供一定的理论依据。本研究以皱纹盘鲍为原料分别提取得到腹足酶促溶性胶原蛋白(pepsin-soluble collagen of abalone a... 详细信息

针对加工副产物鲍鱼外套膜利用率低的现象,对鲍鱼腹足和外套膜胶原蛋白相关性质进行比较研究,以期为鲍鱼的综合加工提供一定的理论依据。本研究以皱纹盘鲍为原料分别提取得到腹足酶促溶性胶原蛋白(pepsin-soluble collagen of abalone adductor,PSC1)和外套膜酶促溶性胶原蛋白(pepsin-soluble collagen of abalone mantle,PSC2),对PSC1和PSC2相关特性进行比较分析,并利用PSC1制备得到兔抗鲍鱼胶原蛋白多克隆抗体。SDS-PAGE显示,PSC1和PSC2分子组成均为(α1)3,且α1的分子量为140 ku,与水产无脊椎动物Ⅰ型胶原蛋白特征相似。对PSC1进行肽指纹图谱分析,获得6个肽段、含75个氨基酸残基,与盘鲍螺的胶原蛋白前肽α链和欧洲鲍螺的纤维状胶原一致性分别达100%和88%,证明纯化的PSC1为胶原蛋白。氨基酸组成分析表明,PSC1和PSC2的组成基本一致,但脯氨酸和羟脯氨酸含量均低于牛酸溶性胶原蛋白。圆二色谱分析结果显示,PSC1和PSC2溶液均在220和197 nm分别有一正、负峰,具有典型胶原蛋白三股螺旋结构特征。FTIR光谱分析结果提示PSC1和PSC2具有相似的三螺旋结构。利用兔抗皱纹盘鲍PSC1多克隆抗体对皱纹盘鲍、尼罗罗非鱼、鲤和仿刺参胶原蛋白进行免疫印迹分析发现,该抗体只与皱纹盘鲍PSC1和PSC2的α、β和γ链产生反应,表明该抗体具有良好的特异性。

关键词：皱纹盘鲍酶促溶性胶原蛋白圆二色谱多克隆抗体

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海参内脏胶原降解酶的纯化及性质研究

水产学报 2015年第7期39卷 1062-1070页

作者：麻金花翁凌颜龙杰张凌晶刘光明曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心

针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱... 详细信息

针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析、Phenyl Sepharose FF疏水柱层析及M ini Q离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30℃,最适p H为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA完全抑制,亦可被PM SF、Pefabloc SC等丝氨酸蛋白酶抑制剂完全抑制。底物特异性表明,该酶只对金属蛋白酶荧光底物有分解作用,推测其为金属蛋白酶。该酶在4和37℃下均能有效地分解海参体壁胶原蛋白,表明其在海参自溶过程中起重要作用。

关键词：海参内脏明胶酶谱金属蛋白酶分离纯化

鲫鱼MBSP的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

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食品与生物技术学报 2017年第8期36卷 877-883页

作者：李婷李欢陈海英杜翠红集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省水产品深加工工程研究中心福建厦门361021

构建鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)的原核表达菌株Rosetta(pET28aMBSP),获得重组MBSP,以制备MBSP多克隆抗体。将鲫鱼MBSP全长基因(MBSP)借助表达载体pET-28a构建重组表达菌株Rosetta(pET28a-MBSP),并进行诱导表达后获得重组MBS... 详细信息

构建鲫鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)的原核表达菌株Rosetta(pET28aMBSP),获得重组MBSP,以制备MBSP多克隆抗体。将鲫鱼MBSP全长基因(MBSP)借助表达载体pET-28a构建重组表达菌株Rosetta(pET28a-MBSP),并进行诱导表达后获得重组MBSP。利用Ni-NTA agarose亲和层析柱纯化重组蛋白并进行质谱鉴定。以纯化后的重组MBSP作为抗原免疫新西兰兔,获得MBSP多克隆抗体。分别采用ELISA和Western blot技术测定其效价和特异性。诱导表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析、Western blot检测及质谱鉴定,结果表明该蛋白质为重组MBSP,其相对分子质量约为28×10~3,与天然MBSP大小一致,主要以包涵体形式存在。将其免疫兔子后,从血清中获得了与MBSP发生特异性反应的高效价多克隆抗体。本研究中成功表达和纯化了重组MBSP蛋白,制备了高效价的特异性MBSP多克隆抗体,为MBSP的相关研究奠定基础。

关键词：肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶原核表达蛋白纯化 Western blot 多克隆抗体

鲢小清蛋白的cDNA克隆及在大肠杆菌中的原核表达

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中国水产科学 2014年第4期21卷 669-675页

作者：王慈曹敏杰郑晓江詹春兰刘光明蔡秋凤集美大学生物工程学院福建省水产品深加工工程研究中心

以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肌肉cDNA为模板,利用小清蛋白特异性引物进行PCR扩增,克隆得到β小清蛋白两种不同亚型,即Ⅰ型、Ⅱ型编码区基因。将目的基因片段连接到pET28a(+)表达载体,并在大肠杆菌[*** BL21(DE3)]中诱导表达。结... 详细信息

以鲢(Hypophthalmichthys molitrix)肌肉cDNA为模板,利用小清蛋白特异性引物进行PCR扩增,克隆得到β小清蛋白两种不同亚型,即Ⅰ型、Ⅱ型编码区基因。将目的基因片段连接到pET28a(+)表达载体,并在大肠杆菌[*** BL21(DE3)]中诱导表达。结果表明,经诱导的小清蛋白重组质粒菌株有特异的蛋白表达。SDS-PAGE分析显示,目的蛋白的分子量约为13 kD,与预期大小一致。菌体超声破碎后发现2种亚型的小清蛋白均为可溶表达。利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,得到高纯度的重组小清蛋白PVⅠ和PVⅡ。经Western Blot鉴定,重组小清蛋白PVⅠ和PVⅡ均能与抗鲢小清蛋白单克隆抗体反应。本研究为进一步分析小清蛋白的结构与致敏性的关系提供了重要的基础。

关键词：鲢小清蛋白 cDNA克隆原核表达

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激光技术在食品3D打印中的应用及发展趋势

食品科学 2025年第1期46卷 315-321页

作者：童强肖帅磊姜宇董秀萍庞桂兵大连工业大学机械工程与自动化学院辽宁大连116034 海洋食品加工与安全控制全国重点实验室国家海洋食品工程技术研究中心辽宁省海产品精深加工产业共性技术创新平台大连市中式预制食品技术创新中心辽宁大连116034 大连工业大学食品交叉科学研究院辽宁大连116034

随着食品3D打印技术的快速发展,各种辅助技术与其结合的创新应用越来越受关注。激光技术具有精确、高能量和快速实现材料成型等特点,与食品3D打印技术的个性化定制优势高度契合,两者的结合在食品加工领域展现出巨大的应用前景。本文在... 详细信息

随着食品3D打印技术的快速发展,各种辅助技术与其结合的创新应用越来越受关注。激光技术具有精确、高能量和快速实现材料成型等特点,与食品3D打印技术的个性化定制优势高度契合,两者的结合在食品加工领域展现出巨大的应用前景。本文在介绍食品3D打印技术和激光技术发展现状的基础上,着重阐述激光技术在食品3D打印中的应用,包括激光参数(如波长、功率、脉冲等)和工艺优势。同时,指出激光技术在食品3D打印应用中所面临的挑战,如激光照射下的食品安全、应用局限等问题。最后,对激光技术和食品3D打印技术深度融合的发展趋势进行总结与展望,指明未来发展方向,为激光技术在食品3D打印领域的创新应用提供理论参考。

关键词：食品3D打印增材制造激光技术食品加工

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蓝圆鲹骨骼肌脯氨酸内肽酶的分离纯化及其对胶原肽的作用

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现代食品科技 2016年第6期32卷 122-129页

作者：唐俊颜龙杰翁凌孙乐常刘光明曹敏杰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省水产品深加工工程研究中心福建厦门361021

以蓝圆鲹为研究对象,探讨脯氨酸内肽酶（Prolyl endopeptidase,PEP）对鱼类肌肉胶原蛋白的作用及其机理。通过硫酸铵分级盐析,DEAE-Sephacel阴离子交换,Phenyl-Sepharose疏水层析和Q-Sepharose阴离子交换,从蓝圆鲹骨骼肌中分离纯化得到... 详细信息

以蓝圆鲹为研究对象,探讨脯氨酸内肽酶（Prolyl endopeptidase,PEP）对鱼类肌肉胶原蛋白的作用及其机理。通过硫酸铵分级盐析,DEAE-Sephacel阴离子交换,Phenyl-Sepharose疏水层析和Q-Sepharose阴离子交换,从蓝圆鲹骨骼肌中分离纯化得到一种脯氨酸内肽酶。SDS-PAGE结果显示,PEP的分子量为82 ku,肽质量指纹图谱分析得到16个肽片段,共169个氨基酸残基。片段序列与墨西哥鲷鱼（Neolamprologus brichardi）PEP的同源性达98.8%,证明纯化得到的酶是PEP。PEP的最适温度为35℃,但热稳定性较差;最适p H为6.0,在p H 5.0~7.5之间有较好的稳定性。将PEP与合成的鱼胶原蛋白小肽反应,利用反相高效液相色谱对产物进行分离,电喷雾质谱分析结果显示PEP的水解位点在脯氨酸残基的羧基端。以上结果表明,鱼类肌肉中的PEP能够协同金属蛋白酶,通过切割脯氨酸残基进一步降解胶原小肽从而参与到鱼肌肉胶原蛋白的新陈代谢中,是鱼死后参与胶原蛋白降解的重要酶类。

关键词：蓝圆鲹骨骼肌脯氨酸内肽酶纯化胶原蛋白小肽液相色谱-电喷雾质谱联用法