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枇杷外泌体及细胞液基于体外水平的护肤功效研究

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热带作物学报 2023年第7期44卷 1488-1496页

作者：李惠华吴美芳王伟徐夙侠福建省亚热带植物研究所/福建省亚热带植物生理生化重点实验室福建厦门361006

探索枇杷(Eriobotrya japonica L.)外泌体及细胞液对体外人皮肤细胞的生物活性,为其在护肤品上的开发提供科学依据。采用超高速离心法和机械破碎法分别获得枇杷外泌体和细胞液,以CCK8法检测不同浓度枇杷叶来源外泌体、枇杷细胞悬浮培养... 详细信息

探索枇杷(Eriobotrya japonica L.)外泌体及细胞液对体外人皮肤细胞的生物活性,为其在护肤品上的开发提供科学依据。采用超高速离心法和机械破碎法分别获得枇杷外泌体和细胞液,以CCK8法检测不同浓度枇杷叶来源外泌体、枇杷细胞悬浮培养来源的外泌体及其细胞液对人皮肤成纤维细胞(HSF)存活率的影响;对HSF细胞采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理进行炎症造模,选取显著促进细胞存活率的浓度,后续开展添加外泌体或细胞液处理,进行细胞凋亡及迁移能力检测。对黑色素瘤细胞(A375)开展外泌体或细胞液处理,进行黑色素含量及酪氨酸酶活性检测。结果表明:每克枇杷叶含8.54×10^(9)个外泌体颗粒,粒径86.78 nm;每毫升(约1 g)枇杷悬浮细胞上清液中含8.67×10^(8)个外泌体颗粒,粒径80.39 nm。浓度为20μg/mL时,枇杷叶外泌体、枇杷悬浮细胞外泌体、枇杷悬浮细胞液均显著提高体外HSF细胞存活率(P<0.05)。与阳性对照(LPS处理)相比,枇杷叶外泌体浓度为20μg/mL,枇杷悬浮细胞外泌体浓度为20μg/mL和枇杷悬浮细胞液浓度为10μg/mL时,均极显著降低LPS处理引起的细胞凋亡(P<0.01),均显著促进细胞迁移(P<0.05)。浓度为5μg/mL的枇杷悬浮细胞外泌体和枇杷悬浮细胞液均可显著降低体外A375细胞黑色素含量,枇杷细胞液还显著降低酪氨酸酶活性(P<0.05)。

关键词：枇杷外泌体悬浮细胞细胞液护肤功效

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西番莲不同冠层叶片叶绿素荧光特性比较

中国果树 2022年第3期 50-53,73页

作者：赖瑞云林建忠张雪芹林丽霞钟赞华谢志南福建省亚热带植物研究所福建省亚热带植物生理生化重点公共实验室厦门361006

对西番莲柱状栽培模式下不同冠层叶片叶绿素荧光特性及结果量进行了比较研究。结果表明:在日变化过程中,柱状栽培西番莲3个冠层叶片叶绿素荧光参数Yield和qP值均呈早晚高、中午低的变化趋势,qN值变化趋势与其相反,外层叶片的Yield、ETR... 详细信息

对西番莲柱状栽培模式下不同冠层叶片叶绿素荧光特性及结果量进行了比较研究。结果表明:在日变化过程中,柱状栽培西番莲3个冠层叶片叶绿素荧光参数Yield和qP值均呈早晚高、中午低的变化趋势,qN值变化趋势与其相反,外层叶片的Yield、ETR、qP和qN值全天始终保持相对较高的水平;外层叶片的电子传递速率和光合热耗散能力比中层、里层高,外层叶片光响应曲线ETR值稳定且高于中层和里层,光饱和度为1000μmol·m^(-2)·s^(-1),外层受胁迫后恢复能力强,能维持较高的光合活性。柱状栽培西番莲外层叶片在适应强光、抵御光抑制破坏能力方面明显优于中层和里层,其主要结果层在外层。

关键词：西番莲冠层叶绿素荧光特性光响应曲线

留叶数对蓝莓扦插生根及叶绿素荧光参数的影响

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中国南方果树 2023年第6期52卷 166-170页

作者：赖瑞云林建忠张雪芹林丽霞钟赞华谢志南福建省亚热带植物研究所/福建省亚热带植物生理生化重点公共实验室福建厦门361006

为探明蓝莓半木质化插穗扦插繁殖时适宜的留叶数,在智能温室内,以9月采集的“维尔”蓝莓当年生枝条为试验材料,研究不同留叶数(分别留1~6片叶)半木质化插穗在珍珠岩+泥炭土(1∶1,体积比)基质中扦插100 d后的成活率、生根性状、新梢生长... 详细信息

为探明蓝莓半木质化插穗扦插繁殖时适宜的留叶数,在智能温室内,以9月采集的“维尔”蓝莓当年生枝条为试验材料,研究不同留叶数(分别留1~6片叶)半木质化插穗在珍珠岩+泥炭土(1∶1,体积比)基质中扦插100 d后的成活率、生根性状、新梢生长性状、保留叶片叶绿素含量及光合能力(叶绿素荧光参数)的差异。结果表明,插穗留3片叶处理的成活率、保留叶片叶绿素含量、新梢数、新梢量、新梢长、新梢粗等性状都处于最高水平,扦插效果优于其他留叶数处理。在相同测定时间点,与其他处理相比,插穗留3片叶处理的保留叶片荧光参数YIELD、ETR、qP都处于最高水平,qN则相反。从叶片光响应曲线来看,留3片叶处理的保留叶片ETR稳定高于其他处理,光饱和度达到1 500μmol·m^(-2)·s^(-1)。插穗留3片叶时,叶片电子传递能力相对较高,光合能力较强,可更好地为插穗提供营养,促进插穗成活和生长。

关键词：蓝莓留叶数扦插生根叶绿素荧光光响应曲线

大棚栽培下黄晶果果实生长发育规律和果实品质研究

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中国南方果树 2023年第6期52卷 109-113页

作者：张雪芹林丽霞谢志南赖瑞云林建忠钟赞华福建省亚热带植物研究所/福建省亚热带植物生理生化重点实验室福建厦门361006

为探讨大棚栽培下,黄晶果果实生长发育规律,2020年和2021年连续2年于黄晶果谢花后0、7、14、21、28、35、42、49和56 d测定果实单果质量和纵横径,计算单果质量、纵横径周增长率。果实成熟测定果实生物学性状和内在品质指标,并分析果实... 详细信息

为探讨大棚栽培下,黄晶果果实生长发育规律,2020年和2021年连续2年于黄晶果谢花后0、7、14、21、28、35、42、49和56 d测定果实单果质量和纵横径,计算单果质量、纵横径周增长率。果实成熟测定果实生物学性状和内在品质指标,并分析果实各指标间的相关性。结果表明,大棚黄晶果果实生长发育速度较快,单果质量、果实纵横径增长变化均表现为快—慢—快的双S动态变化,其增长过程可分快速生长期、缓慢生长期和快速生长期。谢花后14~21 d和28~56 d为果实生长膨大期,谢花后21~28 d为果实生长缓慢期。2021年果实成熟时,单果质量约176.81 g,总酸含量0.19%、总糖含量11.18%、可溶性固形物含量16.48%,糖酸比58.90,固酸比86.78。单果质量与纵横径密切相关,果皮色差和单果质量、纵横径、果实内在品质显著相关。

关键词：大棚栽培黄晶果生长发育规律果实品质

枇杷悬浮细胞AS基因的瞬时表达载体构建与亚细胞定位

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农业生物技术学报 2019年第11期27卷 1923-1932页

作者：李惠华曾碧玉王伟常强苏明华福建省亚热带植物研究所福建省亚热带植物生理生化重点公共实验室

枇杷(Eriobotrya japonica)细胞悬浮培养可以产生丰富的五环三萜类化合物。香树素合成酶(amyrine synthase, AS)是三萜合成途径中的关键酶,决定主要代谢和次生代谢的分支点。枇杷AS基因的功能未见报道。本研究以AS基因过表达质粒(p DONR... 详细信息

枇杷(Eriobotrya japonica)细胞悬浮培养可以产生丰富的五环三萜类化合物。香树素合成酶(amyrine synthase, AS)是三萜合成途径中的关键酶,决定主要代谢和次生代谢的分支点。枇杷AS基因的功能未见报道。本研究以AS基因过表达质粒(p DONR207-AS)为模板,经PCR扩增获得AS基因的正向开放阅读框,经酶切及与载体的连接,成功构建表达载体p BWA(V)HS-AS-GFP-Tnos。以枇杷悬浮细胞(AS分离的同源系统)为受体材料,在农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101的介导下进行瞬时表达,通过共转化的GFP在激光共聚焦显微镜下成像,分析AS蛋白的亚细胞定位;采用气相色谱-质谱联合分析AS催化产物。研究结果显示,AS在枇杷悬浮细胞中定位于内质网;枇杷悬浮细胞中AS的催化产物含α-香树素和β-香树素,AS属于多功能酶。本研究可为明确五环三萜类化合物合成途径以及枇杷悬浮细胞的转基因应用提供参考依据。

关键词：香树素合成酶(AS) 枇杷悬浮细胞瞬时表达亚细胞定位

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不同干燥方式对茉莉花茶挥发性成分的影响

食品工业科技 2024年

作者：叶秋萍余雯谢基雄曾新萍应梦云华祥苑茶业股份有限公司福建省亚热带植物研究所福建省亚热带植物生理生化重点实验室

为了研究不同干燥方式对茉莉花茶挥发成分的影响，本文采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用的方法，结合电子鼻技术，对经过四种干燥方式包括热泵干燥、热风干燥、微波干燥和冷冻干燥等处理的茉莉花茶挥发组分进行定性、定量分析... 详细信息

为了研究不同干燥方式对茉莉花茶挥发成分的影响，本文采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用的方法，结合电子鼻技术，对经过四种干燥方式包括热泵干燥、热风干燥、微波干燥和冷冻干燥等处理的茉莉花茶挥发组分进行定性、定量分析。电子鼻分析结果显示：传感器响应值排名前三的是W1W、W2W、W5S，在不同的干燥处理下，能较好地体现茉莉花茶的挥发性物质的差别。HS-SPME-GC-MS 的分析结果显示：茉莉花茶在四种不同的干燥方式处理下，鉴定出包括烯烃类、醇类、酯类、醛类、酮类、其他类等 96 种挥发性组分，烯烃类种类最多可达 37 种。冷冻干燥的茉莉花茶挥发性成分含量的总量最高达到47.382μg/g，其次是热泵干燥的 44.429μg/g，其中烯烃类和醇类成分含量较高。热泵干燥处理下茉莉花茶香气指数最高，达到4.766。因此，HS-SPME-GC-MS结合电子鼻技术可用于区分不同干燥方式下茉莉花茶品质的优劣，为茉莉花茶生产干燥方法选择提供理论参考。

关键词：茉莉花茶干燥方式挥发性成分顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用电子鼻

基于转录组测序的枇杷五环三萜合成途径差异基因的分析

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农业生物技术学报 2018年第2期26卷 222-233页

作者：李惠华常强王伟曾碧玉徐剑苏明华福建省亚热带植物研究所/福建省亚热带植物生理生化重点实验室

枇杷(Eriobotrya japonica)叶是中国传统药用植物资源,五环三萜类化合物(pentacyclic triterpenoids)作为枇杷的主要活性成份具有广泛的药理作用和重要的生物活性,同时也是枇杷三萜类物质的主要组成。经细胞悬浮培养产生的五环三萜类化... 详细信息

枇杷(Eriobotrya japonica)叶是中国传统药用植物资源,五环三萜类化合物(pentacyclic triterpenoids)作为枇杷的主要活性成份具有广泛的药理作用和重要的生物活性,同时也是枇杷三萜类物质的主要组成。经细胞悬浮培养产生的五环三萜类化合物含量远高于原植株。本研究以原植株枇杷叶片、愈伤组织(悬浮培养的必经阶段)、2个富含五环三萜类化合物的调控,共4个样品进行了转录组测序,用生物信息学方法进行Unigene的从头测序拼接,蛋白质功能注释,代谢通路分析。结果共获得123 685个Unigene,平均长度为804.44 bp。三萜合成相关途径中,叶片(样本Ⅰ)分别与培养细胞(样本Ⅱ,样本Ⅲ,样本Ⅳ)的基因表达差异较大,愈伤组织阶段(样本Ⅱ)与富含五环三萜类目标产物的不同调控(样本Ⅲ,样本Ⅳ)之间的基因表达模式相近。在三萜骨架形成和修饰代谢途径中,以样本之间差异基因的交集结合已报道的重要基因进行筛选,从整体上分析了枇杷五环三萜类化合物代谢途径中的关键性酶为乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-CoA acetyltransferase,AACT),鲨烯合成酶(squalene synthase,SQS),鲨烯环氧酶(squalene monooxygenase,SQE),香树素合酶(amyrin synthase,AS),细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450),糖基化转移酶(UDP-glycosyltransferase,UGT),这些酶相关基因或不同家族基因成员的表达水平与目标产物的含量有一定相关性,为进一步深入研究此物种三萜合成途径提供理论依据。同时,枇杷愈伤组织阶段五环三萜类化合物合成途径已经大量开启,是枇杷细胞悬浮培养的重要中间阶段。本研究通过Illumina HiSeq 4000平台,首次利用转录组测序技术对枇杷细胞悬浮培养后五环三萜类活性成分富集的遗传基础进行分析,为进一步完善植物体五环三萜类化合物的合成机制提供理论依据,同时也为枇杷细胞悬浮培养生产萜类物质的人工调控提供基础资料。

关键词：枇杷细胞悬浮培养五环三萜转录组

白芨外泌体的分离及对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的凋亡保护研究

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中国农学通报 2024年第6期40卷 122-127页

作者：施建羽李惠华吴美芳王伟福建省亚热带植物研究所福建省亚热带植物生理生化重点实验室福建厦门361006

探索鲜白芨(Bletilla striata)外泌体对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的生物活性,为其在护肤品上的开发提供数据。聚乙二醇(PEG)沉淀法提取白芨外泌体,透射电镜鉴定,BCA法测蛋白浓度;细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测Ha... 详细信息

探索鲜白芨(Bletilla striata)外泌体对体外人永生化角质形成细胞(Hacat)的生物活性,为其在护肤品上的开发提供数据。聚乙二醇(PEG)沉淀法提取白芨外泌体,透射电镜鉴定,BCA法测蛋白浓度;细胞计数试剂(Cell Counting Kit-8,CCK8)法检测Hacat细胞存活率,流式双染检测凋亡,蛋白印迹法检测凋亡相关通路蛋白。白芨外泌体呈茶杯状具双层膜,平均粒径69.63 nm,每克鲜白芨含外泌体浓度为5.24E+8 Particles,内含蛋白19.53μg;白芨外泌体(≥5μg/mL)可显著提高体外Hacat细胞存活率(P<0.05);10μg/mL白芨外泌体处理48h,可显著降低H_(2)O_(2)氧化造模引起的Hacat细胞早凋亡、晚凋亡和总凋亡的细胞比例(P<0.01),同时,模型组caspase-9和caspase-3表达显著上升,外泌体处理能显著降低其表达,而Bcl-2表达在组间无差异(P<0.05)。PEG沉淀法分离的白芨外泌体,可促进体外Hacat生长,抑制H_(2)O_(2)引起的细胞凋亡且与蛋白caspase-9和caspase-3相关。

关键词：白芨外泌体人永生化角质形成细胞凋亡通路蛋白

1株海洋草酸青霉HY181-2的分离鉴定及其对金线莲茎腐病病原菌的生防能力

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西南农业学报 2021年第8期34卷 1649-1656页

作者：林文珍郭迟鸣郭莺林志楷陈菲刘黎卿福建省亚热带植物研究所福建厦门361006 福建省亚热带植物生理生化重点实验室福建厦门361006

【目的】从海洋来源生物样本中筛选对金线莲茎腐病病原菌具有拮抗作用的菌株,并对其展开生防能力研究,为开发相应的生防菌制剂提供理论依据。【方法】通过稀释涂板法,从福建东山珊瑚自然保护区的珊瑚样本中分离、纯化菌株。利用菌落对... 详细信息

【目的】从海洋来源生物样本中筛选对金线莲茎腐病病原菌具有拮抗作用的菌株,并对其展开生防能力研究,为开发相应的生防菌制剂提供理论依据。【方法】通过稀释涂板法,从福建东山珊瑚自然保护区的珊瑚样本中分离、纯化菌株。利用菌落对峙试验筛选出对金线莲茎腐病病原菌具有较明显抑制效果的菌株,并根据菌株的形态特征和rDNA-ITS区域的序列分析,明确其分类地位。再通过平板对峙试验、GC-MS和生长速率法,验证和测定该菌株对金线莲茎腐病病原菌的生防能力。【结果】分离得到1株对金线莲茎腐病病原菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)JXL具有拮抗作用的草酸青霉(Penicillium oxalicum)HY181-2。为排除菌落生长的竞争性影响,对HY181-2进行了小量发酵试验,获取发酵萃取物。GC-MS分析表明,菌株HY181-2的发酵萃取物具有抗氧化、抑菌等作用。同时采用菌丝生长速率法,室内比对分析菌株HY181-2发酵萃取物和4种杀菌剂对尖孢镰刀菌JXL的抑制作用。室内毒力测定结果表明,同一浓度下,相较其他4种化学杀菌剂,菌株HY181-2发酵萃取物对菌株JXL菌丝的抑制作用不是最佳的。但随着浓度升高,菌株HY181-2发酵萃取物对菌株JXL菌丝的抑制效果十分显著。当浓度为100 mg/L时,菌株HY181-2发酵萃取物对菌株JXL的菌丝抑制率高达85.03%。【结论】以毒力指数为指标,菌株HY181-2发酵萃取物在此次室内毒力测定试验中效果仅次于10%苯醚甲环唑,EC_(50)值为2.72 mg/L。但菌株HY181-2发酵萃取物为微生物生长代谢所得,相较于化学杀菌剂而言,来源安全、健康、无农残,而且可以随着微生物的生长源源不断的获取。并且菌株HY181-2还具有生防菌所特有的生长速度快的特点。若将菌株HY181-2开发成相应的微生物制剂应用于实际生产,不仅可以减少化学农药的使用量和使用频率,进一步减低农残,还可以减少种植户的生产成本。因此本研究为开发利用海源草酸青霉(Penicillium oxalicum)HY181-2作为生防菌剂奠定基础。

关键词：草酸青霉HY181-2 金线莲茎腐病拮抗作用室内毒力测定