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适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

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中国人兽共患病学报 2007年第6期23卷 527-531页

作者：郭永利陈毅歆黄德党罗海峰葛胜祥程通张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双... 详细信息

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。

关键词： HIV-1 p24蛋白单克隆抗体夹心ELISA

SARS-CoV N蛋白与人冠状病毒HCoV-OC43和HCoV-229E的交叉反应表位及特异表位的确定

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病毒学报 2006年第4期22卷 248-255页

作者：闫克夏谭文杰张相民王慧娟张陵林周为民夏宁邵阮力中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 福建省医学分子病毒学研究中心厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位，对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒，并制备了相应的小鼠免疫血清。用... 详细信息

为确定SARS-CoV N蛋白的特异抗原表位，对3种人冠状病毒SARS-CoV、HCoV-OC43和HCoV-229EN蛋白之间的交叉免疫反应进行了系统研究。构建了分别表达SARS-CoV、HCoV—OC43和HCoV-229EN蛋白的重组痘苗病毒，并制备了相应的小鼠免疫血清。用间接免疫荧光方法，检测了3种N蛋白的表达及其与3种冠状病毒免疫动物血清和SARS病人恢复期血清之间的反应。与此同时，用Western blot方法分析了原核表达的39个不同区段的SARS-CoVN蛋白与3种冠状病毒动物免疫血清和SARS病人恢复期血清之间的交叉反应性。免疫荧光检测结果表明，SARS-CoV、HCov-OC43和HCoV-229E3种病毒的N蛋白在重组痘苗病毒感染的HeLa细胞中均可以特异表达；3种N蛋白之间存在明显交叉免疫反应。Western blot结果显示，SARS-CoV N蛋白的表位主要位于30～60aa、170～184aa、301～320aa和360～422aa；与HCoV-OC43的交叉反应表位主要位于30～60aa、90～120aa、204～214aa和320～360aa；与HCoV-229E的交叉反应表位主要位于30～60aa、150～160aa和301～360aa。含SARS-CoVN蛋白特异表位的重组肽N155b（60～214aa）和N185（30～214aa）只与SARS病人恢复期血清和灭活SARS-CoV免疫小鼠的血清反应，而不与灭活HCoV-OC43和HCoV-229E免疫的山羊血清产生交叉反应。上述结果为使用SARS-CoVN蛋白抗原进行特异诊断试剂的研究，提供了重要的实验依据。

关键词： SARS-CoV HCoV-OCA3 HCoV-229E N蛋白抗原表位

装载RNA“病毒样”纳米颗粒表面巯基化表达载体的构建及荧光修饰

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Acta Genetica Sinica 2005年第8期32卷 874-878页

作者：程扬健梁基选李庆阁厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 厦门大学医学院抗癌研究中心厦门361005

以本实验室构建的能够装载外源RNA片段的MS2噬菌体“病毒样”颗粒表达载体为基础,利用定点突变技术将衣壳蛋白基因的第15位密码子由编码苏氨酸突变为胱氨酸。表达产物在35%蔗糖密度梯度处有一目的产物,目的产物在透射电镜下呈球形,直径... 详细信息

以本实验室构建的能够装载外源RNA片段的MS2噬菌体“病毒样”颗粒表达载体为基础,利用定点突变技术将衣壳蛋白基因的第15位密码子由编码苏氨酸突变为胱氨酸。表达产物在35%蔗糖密度梯度处有一目的产物,目的产物在透射电镜下呈球形,直径大小约为27nm。用马来酰亚胺5′荧光素对表达产物进行化学修饰,经光谱分析、SDSPAGE分析和MALDITOFMS鉴定,证明巯基在表达产物的外表面,并能与马来酰亚胺5′荧光素进行反应。这种携带外源RNA片段的荧光修饰的天然纳米颗粒为制备各种功能性纳米材料提供了新途径。

关键词： “病毒样”颗粒 MS2噬菌体衣壳蛋白半胱氨酸残基荧光修饰

高致病性H5亚型禽流行性感冒病毒血凝素单克隆抗体的制备与初步应用

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病毒学报 2005年第6期21卷 422-427页

作者：陈毅歆罗海峰葛胜祥郭永利彭耿王嘉陈鸿霖张军管轶夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 北京万泰生物药业有限公司北京102200 汕头大学医学院汕港联合流感中心汕头515031

以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析... 详细信息

以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断。

关键词：禽流行性感冒病毒H5N1 血凝素单克隆抗体酶联免疫吸附试验胶体金免疫试验

MAPK4表达对黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响

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山西医科大学学报 2025年 8-14页

作者：赵晟辰邓朝伟刘乐凡郑琪张珂浛赵凌宇吴锋西安交通大学医学部第一临床医学院西安交通大学医学部基础医学院细胞生物学与遗传学系陕西省肿瘤医院肿瘤内科西安交通大学医学部研究生教学实验中心

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶4(MAPK4)在黑色素瘤中的表达及影响细胞增殖、细胞周期和凋亡的分子机制。方法采用qRT-PCR和免疫组织化学法检测人黑色素瘤组织和毗邻癌旁组织中MAPK4表达变化。A2058细胞分为阴性对照组、siRNA-1组、siRN... 详细信息

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶4(MAPK4)在黑色素瘤中的表达及影响细胞增殖、细胞周期和凋亡的分子机制。方法采用qRT-PCR和免疫组织化学法检测人黑色素瘤组织和毗邻癌旁组织中MAPK4表达变化。A2058细胞分为阴性对照组、siRNA-1组、siRNA-2组，分别转染NC-siRNA、MAPK4 siRNA1和MAPK4 siRNA2。于转染12,36,60,84 h通过MTT法观察各组细胞增殖活力的变化，采用细胞克隆实验检测细胞增殖。应用流式细胞技术分析细胞周期和细胞凋亡的变化。应用Western blotting检测各组MAPK4、AKT的蛋白表达。结果与毗邻癌旁组织比较，黑色素瘤组织中MAPK4 mRNA和蛋白表达均显著增加（P细胞增殖明显降低（P细胞显著增加（P细胞显著减少（P细胞数量显著增加（P瘤细胞增殖、周期转换，促进细胞凋亡。

关键词： MAPK4 黑色素瘤细胞增殖细胞周期细胞凋亡 AKT信号通路

双链置换探针实时PCR用于DNA池的等位基因频率测定

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厦门大学学报（自然科学版） 2004年第B8期43卷 113-118页

作者：程金平梁基选李庆阁厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建厦门361005 厦门大学医学院抗癌研究中心福建厦门361005

结合荧光双链置换探针的特异性和实时PCR的准确定量能力,建立了一种新颖、准确、价廉且高通量的测定DNA池等位基因频率的方法.该方法采用不同荧光标记的双链置换探针1次PCR反应即可测定出等位基因频率.实验以β 地中海贫血CDs41 42( TC... 详细信息

结合荧光双链置换探针的特异性和实时PCR的准确定量能力,建立了一种新颖、准确、价廉且高通量的测定DNA池等位基因频率的方法.该方法采用不同荧光标记的双链置换探针1次PCR反应即可测定出等位基因频率.实验以β 地中海贫血CDs41 42( TCTT)突变为对象,分别用荧光染料FAM和ROX标记野生型和突变型探针,由实时PCR检测建立的等位基因浓度与循环阈值的响应曲线计算DNA池的等位基因频率.结果表明,建立的系列等位基因浓度与循环阈值呈线性关系,线性相关系数分别为0.9977(野生型等位基因)和0.9938(突变型等位基因),可检测的最低等位基因频率达1%,等位基因频率在1%～90%范围内测定误差小于4%.该方法可广泛用于流行病学调查、遗传连锁分析以及全基因组连锁不平衡扫描等领域.

关键词：双链置换探针实时PCR DNA池等位基因频率测定

人成骨肉瘤MG-63细胞在HMBA诱导分化后核基质蛋白表达的变化

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分子细胞生物学报 2006年第2期39卷 169-176页

作者：赵春红李祺福李智星陈晋安厦门大学生命科学学院细胞生物学研究室厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 厦门大学生命科学学院细胞生物学研究室厦门大学生命科学学院分析测试中心厦门361005

HMBA诱导处理人成骨肉瘤MG-63细胞分化后,选择性抽提核基质蛋白,经双向凝胶电泳技术分析．共有12个蛋白点表达发生变化,经肽指纹图谱分析鉴定了9个蛋白质,其中,MHCⅡ类抗原、IFN刺激的基因因子3α蛋白、DKFZp434M2221．1蛋白、8-羟基-... 详细信息

HMBA诱导处理人成骨肉瘤MG-63细胞分化后,选择性抽提核基质蛋白,经双向凝胶电泳技术分析．共有12个蛋白点表达发生变化,经肽指纹图谱分析鉴定了9个蛋白质,其中,MHCⅡ类抗原、IFN刺激的基因因子3α蛋白、DKFZp434M2221．1蛋白、8-羟基-鸟嘌呤糖基化酶同功酶oggl和波形蛋白表达上调,hnRNP A2/B1和肌动蛋白表达下调,60S核糖体蛋白L21和ST2蛋白仅在分化的MG-63细胞中表达。研究结果表明肿瘤细胞增殖分化过程中伴随核基质蛋白表达的变化,并为深入揭示核基质蛋白与细胞癌变和逆转的关系以及阐明细胞增殖分化的基因表达调控原理提供了依据。

关键词：核基质蛋白细胞分化人成骨肉瘤细胞 HMBA

一株抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的广谱中和活性

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病毒学报 2007年第2期23卷 85-90页

作者：罗海峰陈毅歆陈自敏郭永利王嘉张军陈鸿霖管轶夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005 汕头大学医学院汕港联合流感中心汕头515031

以H5N1禽流感病毒株Ck／HK／Yu22／02作为抗原，应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5，单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002～2006年不同地域，不同宿主中分离的不同遗传... 详细信息

以H5N1禽流感病毒株Ck／HK／Yu22／02作为抗原，应用常规杂交瘤技术和血凝抑制实验筛选出抗H5亚型禽流感病毒血凝素蛋白的单抗8H5，单抗8H5经免疫荧光鉴定具有很好的H5特异性。选择33株2002～2006年不同地域，不同宿主中分离的不同遗传变异亚系的H5N1病毒代表株，对单抗8H5分别进行血凝抑制实验及中和试验分析，结果显示单抗8H5对所有H5亚型病毒均有较强反应，而对非H5亚型标准病毒株均不反应，说明8H5是一株广谱性抗H5特异性中和单抗，并提示单抗8H5的HA识别表位可能是一个相当保守的中和表位。并且单抗8H5双抗夹心系统的初步评价显示了其在诊断应用上的前景。

关键词：禽流感病毒 H5N1 单克隆抗体血凝素中和

工程化间充质干细胞来源外泌体在靶向递送抗肿瘤药物中的应用与问题

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4975-4983页

作者：王双敏汪显耀何志旭遵义医科大学免疫学教研室贵州省遵义市563000 遵义医科大学附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州省遵义市563000 遵义医科大学组织损伤修复与再生医学省部共建协同创新中心贵州省遵义市563000 遵义医科大学附属医院儿科贵州省遵义市563000

背景:间充质干细胞来源外泌体具有免疫原性低且肿瘤归巢能力强等优点,在靶向递送药物方面备受关注。但外泌体在到达靶细胞前易被体内循环迅速清除,此外,由于外泌体表面性质和摄取机制复杂,其靶向性并不十分明显,需要一定的工程化策略提... 详细信息

背景:间充质干细胞来源外泌体具有免疫原性低且肿瘤归巢能力强等优点,在靶向递送药物方面备受关注。但外泌体在到达靶细胞前易被体内循环迅速清除,此外,由于外泌体表面性质和摄取机制复杂,其靶向性并不十分明显,需要一定的工程化策略提高递送效率。目的:通过综述间充质干细胞来源外泌体工程化修饰的不同策略,了解提高外泌体递送效率的相关机制、临床前应用和面临的问题,为进一步临床应用提供理论依据。方法:检索中国知网、维普、万方、PubMed数据库从建库至2024年的相关文献,检索词为“间充质干细胞,外泌体,工程化外泌体,靶向递送,抗肿瘤药物”和“mesenchymal stem cells,exosomes,engineered exosomes,targeted delivery,antineoplastic agents”,筛选工程化间充质干细胞来源外泌体靶向递送抗肿瘤药物的文献,共计纳入85篇文献进行综述分析。结果与结论:(1)间充质干细胞来源外泌体的工程化修饰复杂多样,可通过显著增强外泌体对器官或组织靶向能力,增加血液循环中停留时间,以及降低外泌体中促肿瘤分子的表达,以此达到提高外泌体递送效率的效果;(2)间充质干细胞外泌体在目前的抗肿瘤治疗研究中递送传统和新型药物具有巨大前景;(3)当前仍然存在一些安全问题不能将其转化在临床中,未来的研究将进一步改进和深入研究递送机制,有望开发出更为高效和安全的治疗策略。

关键词：间充质干细胞外泌体工程化外泌体靶向递送抗肿瘤药