适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选
Preparation and selection of the monoclonal antibody used for kits to detect the p24 antigen of HIV-1作者机构:厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室福建省医学分子病毒学研究中心厦门361005
出 版 物:《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)
年 卷 期:2007年第23卷第6期
页 面:527-531页
核心收录:
学科分类:1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学]
基 金:国家十五攻关项目(2004BA719A08) 福建省科技重大专项(2004yz011)
摘 要:目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。