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抗H5亚型禽流感病毒单链抗体在毕赤酵母中的分泌型表达和生物活性分析

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病毒学报 2011年第3期27卷 202-206页

作者：何芳萍林庆山李少伟魏旻希陈振钦罗文新陈毅歆张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果。在此研... 详细信息

在本实验室研制出的多株针对H5N1亚型禽流感血凝素单抗中,13D4单抗对所有H5亚型病毒均有血凝抑制和中和活性,具有特异性高、反应性强和识别广的特点,且在小鼠实验中显示了对各种代表株禽流感的感染和发病均具有良好的治疗效果。在此研究基础上,本实验通过基因工程构建含有13D4单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母表达载体,实现目的蛋白的分泌性表达和纯化。经过竞争法和血凝抑制检测其活性,表明获得的单链抗体具有与原始鼠源抗体相近的反应活性和相同的识别表位。H5N1广谱中和单抗13D4的单链抗体的成功构建,为进一步研制针对H5N1禽流感病毒的治疗性抗体奠定了基础。

关键词：高致病性禽流感病毒单链抗体血凝抑制毕赤酵母

H9N2亚型禽流感病毒流行特征及疫苗研究进展

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中国人兽共患病学报 2024年第4期40卷 369-376页

作者：唐宁馨陈聪洁韩玲玉陈俊煜陈毅歆厦门大学国家传染病诊断与疫苗工程技术研究中心厦门361102 厦门大学公共卫生学院厦门361102 厦门大学生命科学学院厦门361102

H9N2是一种对全球家禽业造成重要影响的低致病性禽流感病毒,1994年至今,其作为一种人畜共患病原体在我国持续流行变异,对家禽产业和人类生命健康构成严重危害。尤其是H9N2病毒与其他流感病毒间发生的基因重排或重组事件,使禽流感病毒可... 详细信息

H9N2是一种对全球家禽业造成重要影响的低致病性禽流感病毒,1994年至今,其作为一种人畜共患病原体在我国持续流行变异,对家禽产业和人类生命健康构成严重危害。尤其是H9N2病毒与其他流感病毒间发生的基因重排或重组事件,使禽流感病毒可能跨越物种屏障感染人类和其他哺乳动物,给全球公共卫生带来新的威胁。因此,本文对H9N2的流行特征及其疫苗研发进展进行综述,希望对保护禽类产业经济健康和全球公共卫生安全提供参考。

关键词：禽流感 H9N2 流行病学疫苗

流感病毒M2e与白喉毒素无毒突变体CRM197融合蛋白的抗原性和免疫原性分析

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病毒学报 2017年第4期33卷 483-493页

作者：李琼王凯航周立志陈婷婷张晓陈毅歆顾颖夏宁邵李少伟厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术中心厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室厦门361102

流感病毒严重威胁人类健康且流行株不断变化,传统疫苗对流感预防具有局限性。流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)氨基酸序列高度保守,可诱导产生特异性抗体,是通用流感疫苗研究的主要靶标之一。白喉毒素突变体(CRM197)是一种理想的蛋白载体,可... 详细信息

流感病毒严重威胁人类健康且流行株不断变化,传统疫苗对流感预防具有局限性。流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)氨基酸序列高度保守,可诱导产生特异性抗体,是通用流感疫苗研究的主要靶标之一。白喉毒素突变体(CRM197)是一种理想的蛋白载体,可增强小分子抗原的免疫原性,商业化的肺炎球菌疫苗采用CRM197结合形式提高多糖分子的免疫原性。本实验通过重组蛋白融合的方式,将M2e与CRM197(aa 1~535)、CRM197-N190(aa 1~190)、CRM197-N389(aa 1~389)的C端或N端进行融合表达,并考察融合蛋白的反应活性以及免疫原性。融合蛋白中的M2e和CRM197均具有反应活性;超速离心分析和四聚体特异构象单抗反应均表明融合蛋白(CRM197-N190)-M2e及M2e-(CRM197-N190)主要以类似M2e天然构象的四聚体形式存在;融合蛋白可与多株流感M2e特异性单抗以及CRM197特异性单抗反应,M2e融合至CRM197N末端形成的重组蛋白的反应活性高于C端融合蛋白;相比融合GST,与CRM197-N190的融合显著增强了M2e蛋白的免疫原性,为流感通用疫苗研究提供了新思路。

关键词：流感病毒 M2e蛋白 CRM197 抗原性免疫原性

新城疫病毒核蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA的初步建立

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中国人兽共患病学报 2017年第6期33卷 481-485,512页

作者：王明睿钟建平李睿王国松陈毅歆厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心生命科学学院厦门361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室公共卫生学院厦门361102

目的制备新城疫病毒(NDV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(单抗),并用于建立一种可定量检测NDV病毒含量的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测方法(NDV NP ELISA)。方法基于NDV病毒株F48E9获得NP基因,经原核表达方式制备出重组抗原rNP;免疫小鼠制备N... 详细信息

目的制备新城疫病毒(NDV)核蛋白(NP)的单克隆抗体(单抗),并用于建立一种可定量检测NDV病毒含量的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测方法(NDV NP ELISA)。方法基于NDV病毒株F48E9获得NP基因,经原核表达方式制备出重组抗原rNP;免疫小鼠制备NDV NP特异性单抗;单抗经HRP标记和配对筛选,建立NDV NP ELISA,分析其特异性、灵敏度、精密度、准确度和检测线性,并分析本方法定量检测的NP含量与PFU病毒滴度的定量相关性。结果建立基于单抗3C10和4E7的NDV NP ELISA,其定量检测NDV rNP的最佳线性范围为0.015~0.250μg/ml(R2=0.9974),回收率在88.4%~106.01%,变异系数小于3.4%;该方法具有良好特异性;该方法定量检测NDV抗原含量与PFU病毒感染滴度有较好的相关性(R2=0.9209)。结论建立NDV NP ELISA,可准确定量检测NDV病毒中的NP抗原含量,为NDV病毒含量的测定提供一种可靠简便的分析方法。

关键词：新城疫病毒核蛋白单克隆抗体定量检测酶联免疫吸附测定

戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用

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中国人兽共患病杂志 2002年第6期18卷 18-21页

作者：何志强葛胜祥邱艳彭耿陈毅歆何水珍张军夏宁邵厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 北京红十字血液中心北京万泰生物药业有限公司

目的　建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法　将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血... 详细信息

目的　建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法　将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果　建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论　利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。

关键词：戊型肝炎抗体检测双抗原夹心法ELISA 重组抗原 HEV

新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的溶瘤治疗作用

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中国人兽共患病学报 2019年第4期35卷 292-298,319页

作者：钟建平李睿王国松洪俊平付饶陈毅歆厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心厦门361102 厦门大学公共卫生学院分子疫苗学与分子诊断学国家重点实验室厦门361102

目的分析新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的体内外肿瘤杀伤作用和F48E9静脉注射BLAB/c小鼠的安全性数据,评估新城疫强毒株F48E9用于溶瘤治疗的潜力,为后续基于强毒株F48E9进行基因组改造提供科学依据。方法利用CCK-8试剂盒分析F48E9... 详细信息

目的分析新城疫病毒株F48E9对CT26小鼠结肠癌的体内外肿瘤杀伤作用和F48E9静脉注射BLAB/c小鼠的安全性数据,评估新城疫强毒株F48E9用于溶瘤治疗的潜力,为后续基于强毒株F48E9进行基因组改造提供科学依据。方法利用CCK-8试剂盒分析F48E9对CT26肿瘤细胞的体外杀伤效果,通过瘤内注射病毒评价F48E9对CT26荷瘤小鼠的溶瘤治疗效果,以及通过尾静脉注射病毒评估F48E9对健康BALB/c小鼠的潜在毒副作用。结果 MOI为0.1的F48E9对CT26细胞生长可表现出明显的抑制作用,随着MOI的升高,F48E9对细胞生长的抑制作用明显增强;0.1 mL浓度为2×10~7pfu/mL的F48E9对BALB/c小鼠CT26皮下移植瘤的生长有显著抑制作用,治疗组的平均生存期为38.4 d,未治疗组的平均生存期为15.2 d;免疫组化分析显示F48E9对CT26小鼠移植瘤细胞的增殖有明显抑制作用;F48E9尾静脉注射正常BALB/c小鼠的安全性评估实验显示,该毒株对小鼠无明显副作用。结论新城疫强毒株F48E9对CT26小鼠结直肠癌有较好的溶瘤治疗潜力,可作为候选病毒株通过后续的反向遗传学改造建立更安全有效的溶瘤病毒株,为肿瘤研究与治疗提供新手段。

关键词：新城疫病毒(NDV) 结肠癌溶瘤治疗安全性评价

分子对接预测H5亚型禽流感病毒的广谱中和表位

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科学通报 2008年第2期53卷 210-219页

作者：颜渊清李少伟杨春燕罗文新王明桥陈毅歆罗海峰吴婷张军夏宁邵国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心(厦门大学) 厦门大学生命科学院厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005

H5N1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的H5N1代表株均有良好中和活性的、识别H5亚型血凝素(hemagglutinin,HA)的广谱单克隆抗体8H5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、... 详细信息

H5N1禽流感病毒已经在亚洲、欧洲和非洲广泛传播,造成了巨大损失.最近我们鉴定出一株对多种来源的H5N1代表株均有良好中和活性的、识别H5亚型血凝素(hemagglutinin,HA)的广谱单克隆抗体8H5,它对寻找克服禽流感高变性的广谱治疗性抗体、疫苗和药物具有重要价值.本研究应用分子模拟技术,采用"典范结构"方法对8H5抗体Fab片段进行结构模建,并通过能量分析、SAS值分析、"拉曼强传图"检验、profile-3D分析等理论验证,获得较为合理的8H5Fab的三维空间结构.8H5Fab与3种HA蛋白晶体结构的分子对接结果表明,8H5抗体与HA蛋白的作用模式与HA宿主来源无关,但与HA结构的亚型相似性相关.综合抗原同源比对结果,推测8H5抗体识别的广谱中和表位是由HA上的Asp68,Asn72,Glu112,Lys113,Ile114,Pro118,Ser120,Tyr137,Tyr252不连续氨基酸残基组成的构象表位.这一模型将为H5亚型禽流感病毒广谱疫苗和治疗性药物的分子设计提供依据。

关键词： H5N1禽流感病毒分子对接血凝素蛋白中和表位

高通量测序技术的发展及其在临床检测中的应用

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厦门大学学报（自然科学版） 2021年第5期60卷 811-820页

作者：王玉静陆梓涔陈俊煜陈毅歆尤瑞娈厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室福建厦门361102 厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361102 厦门国际旅行卫生保健中心福建厦门361100

如今的高通量测序技术已经历不同代次的更迭,性能和技术日趋成熟与稳定,在临床样本的病原体鉴定、肿瘤检测、疾病诊断、遗传病检测等领域为精准医疗提供了一个高效的分析检测工具.通过对DNA或RNA序列的测定与拼接,能够发掘更多与疾病、... 详细信息

如今的高通量测序技术已经历不同代次的更迭,性能和技术日趋成熟与稳定,在临床样本的病原体鉴定、肿瘤检测、疾病诊断、遗传病检测等领域为精准医疗提供了一个高效的分析检测工具.通过对DNA或RNA序列的测定与拼接,能够发掘更多与疾病、肿瘤、微生物相关的基因组学信息,迅速把握病情的原因以及与患者临床特征相关的感染情况,对于疾病的快速精准诊断、治疗效果与预后情况的预测都有十分重要的帮助.本文对测序技术的发展、不同高通量测序技术平台的特点及其在临床中的应用进行综述.

关键词：高通量测序二代测序三代测序临床检测

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EB病毒糖蛋白中和抗体研究进展

中国科学:生命科学 2024年第12期54卷 2385-2398页

作者：洪俊平钟玲张琬琳郑清炳徐淼陈毅歆夏宁邵张晓重庆医科大学药学院厦门大学传染病疫苗研发全国重点实验室厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心华南恶性肿瘤防治全国重点实验室广东省鼻咽癌诊治研究重点实验室广东省恶性肿瘤临床医学研究中心中山大学肿瘤防治中心

EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)属于人类疱疹病毒γ亚科,是首个被鉴定的人类致瘤病毒. EBV感染与人传染性单核细胞增多症、多种淋巴瘤及上皮细胞肿瘤的发生发展密切相关,每年全球因EBV相关肿瘤新增病例超过20万,死亡病例超14万,造成... 详细信息

EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)属于人类疱疹病毒γ亚科,是首个被鉴定的人类致瘤病毒. EBV感染与人传染性单核细胞增多症、多种淋巴瘤及上皮细胞肿瘤的发生发展密切相关,每年全球因EBV相关肿瘤新增病例超过20万,死亡病例超14万,造成巨大的公共卫生和经济负担.然而,目前尚无有效药物和疫苗获批上市.靶向病毒的特异性抗体是病毒学研究的重要工具. EBV中和抗体主要针对病毒包膜表面的糖蛋白,这些糖蛋白在感染过程中发挥关键作用.对中和抗体的特性和功能研究,不仅有助于深入理解病毒感染机制,还为疫苗的理性设计提供了指导.此外,因其优异的体内外中和活性,这些抗体有望应用于EBV感染及相关疾病的治疗和预防.本文系统综述了靶向EBV不同包膜糖蛋白的中和抗体,归纳其功能活性、结合表位及中和机制,为EBV治疗性药物和疫苗的研发提供理论依据.

关键词： EB病毒糖蛋白中和抗体优势表位中和机制

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