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微纳米机器人增强的抗菌治疗

化学进展 2023年第7期35卷 997-1004页

作者：刘婷庞世尧鄢晓晖厦门大学公共卫生学院分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室分子影像暨转化医学研究中心厦门361005 厦门大学深圳研究院深圳518057

细菌感染正演变为全球第二大死因,严重威胁着人类的生命健康。目前报道的抗菌疗法如抗生素治疗、光热治疗、光/声动力治疗等效率亟待提高,而微纳米机器人作为一种具有主动运动属性的小型化机器人,有望为高效抗菌提供新的治疗策略。一方... 详细信息

细菌感染正演变为全球第二大死因,严重威胁着人类的生命健康。目前报道的抗菌疗法如抗生素治疗、光热治疗、光/声动力治疗等效率亟待提高,而微纳米机器人作为一种具有主动运动属性的小型化机器人,有望为高效抗菌提供新的治疗策略。一方面,微纳米机器人能够将抗菌介质精准高效递送至病灶微区;另一方面,机器人的集群运动可引发机械效应与流体搅拌效应,机械损伤病原菌的同时促进其与抗菌介质充分反应,协同提升抗菌效率。本文综述了微纳米机器人在抗菌领域的研究进展,以抗菌微纳米机器人的驱动方式为切入点系统阐述了其在各类抗菌疗法中的作用机制与应用优势,在此基础上总结了微纳米机器人在抗菌治疗中面临的挑战,并对未来的研究方向进行展望。

关键词：微纳米机器人协同效应精准控制抗菌治疗主动递送

戊型肝炎病毒细胞吸附模型的建立及病毒吸附区域初步研究

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病毒学报 2006年第6期22卷 426-430页

作者：何水珍郑子峥吴婷谢明辉苗季张军夏宁邵厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建省医学分子病毒学研究中心福建厦门361005

***中表达的HEV衣壳蛋白片段P239（aa368～606）形成的类病毒颗粒与戊肝患者恢复期血清及中和单抗具有良好的反应性，较好地模拟了天然HEV病毒颗粒的表面空间结构。利用P239吸附HepG2细胞的模型来模拟HEV对宿主细胞的吸附，多株中和单... 详细信息

***中表达的HEV衣壳蛋白片段P239（aa368～606）形成的类病毒颗粒与戊肝患者恢复期血清及中和单抗具有良好的反应性，较好地模拟了天然HEV病毒颗粒的表面空间结构。利用P239吸附HepG2细胞的模型来模拟HEV对宿主细胞的吸附，多株中和单抗对吸附的阻断验证了吸附的特异性。P239与多株传代细胞系的吸附结果则表明了这种特异性吸附的细胞选择性。对阻断P239吸附的线性单抗进行定位，初步确定了P239与细胞相互作用的区域：ORF2上的aa423～443很可能和病毒上的细胞膜受体结合部位非常靠近，或可能直接参与构成了病毒与细胞特异性识别的表位。此本研究为进一步研究HEV与宿主细胞的相互作用提供一定的线索。

关键词：戊型肝炎病毒(HEV) 类病毒颗粒P239 HepG2 单抗阻断

血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究

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癌症 2005年第9期24卷 1096-1101页

作者：徐晓琳刘戈飞黄东阳辽宁省辽阳中医药学校辽宁辽阳111000 中国医科大学卫生部细胞生物学重点实验室细胞生物学教研室辽宁沈阳110001 汕头大学医学院分子生物学中心广东汕头515041

背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过... 详细信息

背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆状病毒表达系统表达重组的angiostatin,分析其在昆虫细胞中表达和生物活性。方法:用带有angiostatin的杆状病毒转移载体pBlueBacHis2B和病毒DNA共同转染Sf9细胞,构建重组病毒,蚀斑实验筛选,PCR分析确定后扩增产生大量高滴度的病毒贮存液;用SDS-PAGE电泳和Westernblot对感染不同时间后分泌的重组蛋白做时间表达分析;用ProBondTM纯化系统对表达的重组angiostatin进行纯化,分光光度计确定蛋白含量,SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度;采用MTT法测定重组蛋白angiostatin对原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用而后通过鸡胚尿囊膜实验进一步证实其抗血管形成作用。结果:成功构建了滴度为2×108pfu/ml的angiostatin重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中高效表达了分子量为53ku的angiostatin重组蛋白,纯度约为90%,重组angiostatin蛋白不仅在体外显著抑制内皮细胞的生长(IC50为2.3μg/ml),而且显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长。结论:此系统可制备高滴度angiostatin重组杆状病毒贮存液,并在Sf9昆虫细胞中高效表达该重组蛋白,经在体和离体细胞学实验验证其对内皮细胞的增殖具有抑制作用。

关键词：血管内皮细胞血管抑制素/拮抗和抑制剂杆状病毒基因转染草地贪夜蛾(Sf9) 昆虫细胞

江苏省部分农村地区戊型肝炎血清流行病学研究

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中国自然医学杂志 2007年第1期9卷 53-55页

作者：张雪峰张军刘社兰吴扬生孟繁岳朱凤才江苏省疾病预防控制中心南京210009 厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

目的调查江苏省部分农村地区一般人群戊型肝炎的感染情况以及流行特征,为防治工作提供依据。方法利用分层整群抽样的方法,按不同的地区抽取若干个行政村的4139名自然人群,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该人群中HEV-IgG,HEV-IgM抗体... 详细信息

目的调查江苏省部分农村地区一般人群戊型肝炎的感染情况以及流行特征,为防治工作提供依据。方法利用分层整群抽样的方法,按不同的地区抽取若干个行政村的4139名自然人群,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测该人群中HEV-IgG,HEV-IgM抗体水平。结果在调查的4139名自然人群中,抗HEV-IgG和抗HEV-IgM平均阳性率分别为52.0%和2.5%,男性和女性间的抗HEV-IgG和抗HEV-IgM阳性率差异有统计学意义,男性抗HEV-IgG阳性率(56.1%)高于女性(49.0%),而女性抗HEV-IgM阳性率(3.0%)高于男性(1.8%);同时戊肝感染可见于各个年龄段,但流行分布不平衡,差异有统计学意义,随着年龄的增长感染率呈上升的趋势。结论江苏省部分农村地区人群戊型肝炎病毒感染率明显高于国内已报道其他地区,各个年龄组均有感染。为降低感染率,探讨针对性的防治措施对策已刻不容缓。

关键词：戊型肝炎感染率血清流行病学

酵母双杂交筛选与单剪接型2．2kb乙型肝炎病毒剪接特异性新蛋白相互作用的肝细胞蛋白

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第3期30卷 228-233页

作者：陈婉南陈金烟黄清玲林建银林旭福建医科大学分子医学研究中心福建省高校感染与肿瘤重点实验室福州350004

目的筛选与单剪接型2．2kb乙型肝炎病毒（HBV）剪接特异性新蛋白相互作用的肝细胞蛋白。方法PCR扩增单剪接型2．2kbHBV剪接特异性新基因TPss并克隆于诱饵载体pGBKT7，在证实TPss蛋白不具有自激活作用的前提下，以酵母双杂交系统筛查与T... 详细信息

目的筛选与单剪接型2．2kb乙型肝炎病毒（HBV）剪接特异性新蛋白相互作用的肝细胞蛋白。方法PCR扩增单剪接型2．2kbHBV剪接特异性新基因TPss并克隆于诱饵载体pGBKT7，在证实TPss蛋白不具有自激活作用的前提下，以酵母双杂交系统筛查与TPss蛋白相互作用的肝细胞蛋白，进而通过哺乳动物细胞双杂交实验验证候选肝细胞蛋白与TPss蛋白在Huh7和HepG2肝细胞中的相互作用。结果构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-TPss，Westernblot显示其在酵母中表达TPss蛋白。酵母双杂交筛选及哺乳动物细胞双杂交证实TPss蛋白可与4种肝细胞蛋白相互作用，即组织蛋白酶B、微粒体环氧化物水解酶、组织蛋白酶D与纤维蛋白原γ链。结论TPss可与多种肝细胞蛋白相互作用。

关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接酵母双杂交

乙型肝炎病毒458nt-1308nt剪接特异性蛋白抗α-干扰素作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第4期28卷 314-319页

作者：王林黄清玲郭丹华陈婉南林建银林旭福建医科大学分子医学研究中心福建省高校感染与肿瘤重点实验室福建福州350004

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）458nt-1308nt剪接特异性蛋白TSR′r′（源于HBVDNA聚合酶读码框，T代表TP区，S为Spacer区，R′为截短的RT区，r′为截短的RNaseH区）抗α-干扰素（IFN-α）作用并分析其功能区域。方法PCR扩增获得HBV458nt-1... 详细信息

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）458nt-1308nt剪接特异性蛋白TSR′r′（源于HBVDNA聚合酶读码框，T代表TP区，S为Spacer区，R′为截短的RT区，r′为截短的RNaseH区）抗α-干扰素（IFN-α）作用并分析其功能区域。方法PCR扩增获得HBV458nt-1308t剪接变异体剪接特异性基因TSR′r′及其缺失突变体，并克隆于pcDNA3.1／HisC。重组载体以FuGENE6转染Huh7肝细胞，通过融合表达的多肽表位抗体，Western blot检测目的蛋白表达。TSR′r′及其缺失突变体重组载体分别与IFN-α反应报告载体p6-16CAT共转染Huh7肝细胞，转染后48h给予终浓度为100IU／ml的IFN-α2a刺激，作用24h后裂解细胞，检测胞内氯霉素乙酰基转移酶（CAT）含量。所有实验数据采用单因素方差分析法进行统计分析。结果构建TSR′r′及其缺失突变体重组真核表达载体，Western blot显示各基因片段在Huh7细胞中均表达相应蛋白。06-16CAT共转染结果显示，随着TSR′r′重组表达载体转染量的递增，Huh7胞内CAT值逐渐降低。此外，转染TP＋Spacer区的缺失突变体可导致Huh7胞内CAT值显著下降，而其他各类TSR′r′缺失突变体共转染后胞内CAT值无变化。结论HBV458nt-1308nt剪接特异性蛋白抑制Huh7细胞对IFN-α的反应性，其活性与N端的TP及Spacer区有关。

关键词：乙型肝炎病毒 RNA剪接 α-干扰素 DNA聚合酶

分枝杆菌经宿主GPR84促进感染诱导的脂滴生成并加速传染进程

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现代免疫学 2025年第1期 7-13页

作者：周静热孜亚·吾买尔陈紫涵刘建新王德成晏博三峡大学基础医学院肿瘤微环境与免疫治疗湖北省重点实验室三峡大学基础医学院宜昌市感染与炎症损伤研究所上海市复旦大学附属公共卫生临床中心结核病研究中心复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室西藏民族大学医学部生命科学高校重点实验室

为探讨G蛋白偶联受体84(G-protein-coupled receptor 84,GPR84)基因在分枝杆菌感染中的作用，研究首先构建GPR84基因突变型斑马鱼，观察海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)感染后斑马鱼体内细菌的增殖情况及宿主生存期表型，机制上首先... 详细信息

为探讨G蛋白偶联受体84(G-protein-coupled receptor 84,GPR84)基因在分枝杆菌感染中的作用，研究首先构建GPR84基因突变型斑马鱼，观察海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)感染后斑马鱼体内细菌的增殖情况及宿主生存期表型，机制上首先采用中性红染色及苏丹黑染色分别排除了GPR84对巨噬细胞和中性粒细胞发育的影响，并通过斑马鱼切尾实验评估GPR84缺失对中性粒细胞募集的影响。进一步通过油红O染色评估了染菌斑马鱼体内脂滴生成情况，并通过qRT-PCR检测感染后斑马鱼脂质代谢相关基因及炎性因子基因的转录水平。以上实验结果显示，斑马鱼瞬时敲除GPR84后能抑制体内分枝杆菌的增殖，延长宿主生存期，但GPR84缺失不影响巨噬细胞和中性粒细胞的发育，且不影响中性粒细胞的募集；GPR84突变型斑马鱼在分枝杆菌感染后脂滴生成减少，并且伴随着胆固醇的外排泵ATP结合盒转运蛋白G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)基因表达下调，而炎性因子的mRNA表达上调。该研究提示分枝杆菌可能通过宿主GPR84诱导脂滴生成以抑制分枝杆菌感染过程中宿主炎性因子的表达，最终促进细菌传染进程。

关键词：分枝杆菌 G蛋白偶联受体84 脂滴斑马鱼

115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者HEV RNA检测与基因分型研究

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检验医学 2008年第6期23卷 625-629页

作者：谈春荣胡梅张京孙焕英朱旭夏宁邵张曼北京世纪坛医院临床检验中心北京100038 厦门大学福建省医学分子病毒学研究中心福建厦门361005

目的对戊型肝炎暴发人群中115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者进行病毒RNA检测和基因分型研究，探讨其临床意义。方法对收集的暴发人群中115例抗．HEV E2-IgM、IgG均阳性人员血清和23例戊型肝炎患者粪便标本，采用通用引物进行逆转录-... 详细信息

目的对戊型肝炎暴发人群中115例抗-HEV E2-IgM、IgG阳性感染者进行病毒RNA检测和基因分型研究，探讨其临床意义。方法对收集的暴发人群中115例抗．HEV E2-IgM、IgG均阳性人员血清和23例戊型肝炎患者粪便标本，采用通用引物进行逆转录-酶链聚合反应（RT-PCR）扩增戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅳ型基因片段，并进行测序和同源进化分析。结果从被检血清中扩增出8例戊型肝炎病毒阳性RNA基因片段，阳性毒株之间核苷酸同源性在97．3％～100％之间，进化树分析提示阳性毒株与戊型肝炎病毒基因Ⅳ型距离最近，与日本株和中国原型株的同源性分别为93．3％～95．3％和86．7％～87．3％；粪便标本中未能检测到戊型肝炎病毒RNA。结论本次急性戊型肝炎暴发流行由戊型肝炎病毒基因型Ⅳ型导致，暴发毒株与日本株有更近的亲缘关系；高灵敏度引物和取样时机是提高戊型肝炎病毒RNA检出率的前提。

关键词：肝炎病毒,戊型基因Ⅳ型聚合酶链反应

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双筛选标记打靶载体的构建及其功能鉴定

生物工程学报 2010年第12期26卷 1696-1703页

作者：李军华韩翠芹邓捷王华岩西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室杨凌712100

利用DNA同源重组方法(基因打靶)对动物基因组进行修饰是转基因研究的重要手段之一。为了构建一个高效的通用型基因打靶载体,本研究以pBS246质粒为骨架,在两个LoxP序列之间插入正筛选标记新霉素磷酸转移酶(neo)基因和绿色荧光蛋白(EGFP)... 详细信息

利用DNA同源重组方法(基因打靶)对动物基因组进行修饰是转基因研究的重要手段之一。为了构建一个高效的通用型基因打靶载体,本研究以pBS246质粒为骨架,在两个LoxP序列之间插入正筛选标记新霉素磷酸转移酶(neo)基因和绿色荧光蛋白(EGFP)基因;在两个LoxP序列外侧分别插入两组携带"8碱基"酶切位点的多克隆位点序列(MCS-1和MCS-2)和负筛选标记单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因,构建成通用型基因打靶载体pGT-V1,并且在C2C12细胞中验证了载体中各个元件的功能。该载体具有如下特点:1)在载体中引入绿色荧光标记,可以实时监控载体的转染效率,而转染效率的提高为高效基因打靶提供了保证;2)在两个LoxP位点间插入绿色荧光标记,可以直观监测打靶后遗留的筛选标记的去除情况,并且可以通过流式细胞仪或免疫磁珠法,将最终去除了筛选标记的阳性细胞(即丢失绿色荧光的细胞)分选出来,降低筛选标记在中靶细胞中可能产生的负面影响;3)采用"8碱基"酶切位点的MCS序列,便于DNA大片段的连接和重组,极大提高了该载体的通用性。总之,该载体优化了基因打靶的技术手段,为有效开展基因打靶和转基因动物研究提供了新平台。

关键词：同源重组绿色荧光标记打靶载体 Cre-LoxP