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正交设计探讨续苓健骨方对快速骨丢失模型大鼠的组方优化研究

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中国骨质疏松杂志 2024年第7期30卷 1006-1012页

作者：陈赛楠李生强谢丽华陈玄黄景文叶云金葛继荣福建省中医药科学院骨质疏松证候基因组学研究室福建福州350003 福建省中西医结合防治骨质疏松重点实验室(福建省中医药科学院、福建中医药大学附属康复医院) 福建福州350003 福建中医药大学中西医结合研究院福建福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建福州350122

目的通过正交设计观察续苓健骨方中的药物对卵巢切除术(ovariectomy, OVX)模型大鼠骨密度、骨微结构和骨代谢影响的主次作用,并探讨疗效较佳优化组别的潜在作用机制。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、续苓健骨方组、优化1组、优化... 详细信息

目的通过正交设计观察续苓健骨方中的药物对卵巢切除术(ovariectomy, OVX)模型大鼠骨密度、骨微结构和骨代谢影响的主次作用,并探讨疗效较佳优化组别的潜在作用机制。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、续苓健骨方组、优化1组、优化2组、优化3组、优化4组、优化5组、优化6组、优化7组和优化8组,每组10只,采用OVX制备大鼠快速骨丢失模型,连续灌胃12周后取材备检。双能X线骨密度仪检测胫骨近端骨密度,micro-CT检测胫骨微观结构,ELISA检测血清骨吸收金指标CTX和骨形成金指标PINP的含量,Real-time PCR和Western blot检测股骨OPG、RANKL mRNA和蛋白的表达水平。结果续苓健骨方组、优化4组、6组和7组骨密度均显著升高(P<0.05),优化4和7组Tb.N和BV/TV显著升高(P<0.001),续苓健骨方组和优化1~8组血清CTX、PINP均不同程度降低,续苓健骨方组和优化7组OPG mRNA和蛋白表达水平显著升高、RANKL mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论优化4组、6组和7组是治疗效果较好的组别,可通过调控OPG/RANKL发挥抗骨质疏松作用,续断、骨碎补、女贞子、红花和川芎是续苓健骨方取效的主要有效药物。

关键词：绝经后骨质疏松症续苓健骨方正交设计 OPG/RANKL 中医中药

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补肾壮筋汤多种成分的定量和定性分析

中华中医药杂志 2024年第5期39卷 2451-2455页

作者：许云腾黄思贤施颖易周萍茆敏段辛威王丽丽李西海福建中医药大学中西医结合研究院福州350122 福建中医药大学药学院福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福州350122 福建中医药大学中西医结合学院福州350122

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)对补肾壮筋汤多种活性成分进行定性定量分析。方法:冻干粉制备:制备补肾壮筋汤水提液,减压旋转浓缩,制备冻干粉。HPLC法:分析采用Agilent EC-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为水-乙腈,梯度洗脱... 详细信息

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)对补肾壮筋汤多种活性成分进行定性定量分析。方法:冻干粉制备:制备补肾壮筋汤水提液,减压旋转浓缩,制备冻干粉。HPLC法:分析采用Agilent EC-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为水-乙腈,梯度洗脱;检测波长为212 nm(梓醇)、230 nm(松脂醇二葡萄糖苷)和240 nm(莫诺苷、芍药苷、橙皮苷),流速为1 mL/min,柱温为30℃。结果:梓醇、莫诺苷、松脂醇二葡萄糖苷、芍药苷和橙皮苷线性关系良好,R^(2)均>0.9800,平均加样回收率分别为87.63%、94.11%、89.49%、86.80%、110.34%。1 g补肾壮筋汤中药复方中,梓醇含量为5.0010 mg,莫诺苷含量为1.0340 mg,松脂醇二葡萄糖苷含量为0.0772 mg,芍药苷含量为0.4224 mg,橙皮苷含量为4.5980 mg。结论:该方法可行性好、灵敏度高,适用于补肾壮筋汤的质量控制。

关键词：高效液相色谱法补肾壮筋汤化学成分含量测定

中医药调控肿瘤相关巨噬细胞在结直肠癌中的研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：郭美璇林宇星蔡梦圆沈阿灵陆雯李力福建中医药大学中西医结合研究院福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建医科大学附属省立临床医学院福建省立医院鹿特丹伊拉斯姆斯大学医学中心

结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）是常见的消化道恶性肿瘤之一，具有腹痛、便质改变、便血以及体重减轻等临床表现，发病率和死亡率呈逐年上升趋势，其发生、发展依赖于多种机制，其中肿瘤微环境（Tumor microenvironment，TME）和... 详细信息

结直肠癌（Colorectal cancer，CRC）是常见的消化道恶性肿瘤之一，具有腹痛、便质改变、便血以及体重减轻等临床表现，发病率和死亡率呈逐年上升趋势，其发生、发展依赖于多种机制，其中肿瘤微环境（Tumor microenvironment，TME）和肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophages，TAMs）越来越受到重视。肿瘤相关巨噬细胞通过促血管新生、免疫逃逸等方式，影响肿瘤的发生发展并与肿瘤预后息息相关。近年来，中医药已被广泛研究并应用于癌症领域，研究发现中医药主要通过抑制癌细胞增殖、转移和血管生成，促进癌细胞凋亡、诱导肿瘤细胞自噬等和免疫功能等途径发挥抗结直肠癌的作用。中医药作为有效治疗手段之一，不仅能够调节TAMs起到抑制肿瘤生长的作用，且其中的有效成分及作用靶点可能会成为免疫治疗领域的新研究方向。因此，该文阐述了肿瘤相关巨噬细胞及其在结直肠癌进展中的作用，并梳理和总结不同种类的中药单体、中药复方及中药新型制剂等抗结直肠癌的分子靶标与作用机制，为中医药在结直肠癌临床治疗提供机制参考，为探索中医药防治结直肠癌及其相关疾病提供新的思路和方向。

关键词：结直肠癌肿瘤相关巨噬细胞中医药研究进展

基于网络药理学和实验验证黄芪甲苷和三七总皂苷配伍调控血管生成抗脑缺血作用机制

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中国中药杂志 2024年第4期49卷 1017-1027页

作者：李艳玲陆展辉张燕燕吴莎莎谢天浩丁煌张伟刘晓丹邓常清湖南中医药大学中西医结合学院中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室湖南长沙410208

采用网络药理学结合体内、外实验验证探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)配伍三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测ASTⅣ和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。... 详细信息

采用网络药理学结合体内、外实验验证探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)配伍三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测ASTⅣ和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。体内实验:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ASTⅣ(10 mg·kg^(-1))+PNS(25 mg·kg^(-1))组,大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法建立脑缺血模型。ASTⅣ及PNS灌胃给药,每天2次。采用Longa法测定神经功能缺损症状;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理损伤;免疫组化测定血友病因子(von Willebrand factor,vWF)的表达;免疫荧光测定血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达;蛋白质印迹法检测脑组织血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)、VEGFA、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)的表达。体外实验:原代培养并鉴定脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs),取第3代rBMECs,设置对照组、模型组、ASTⅣ+PNS(50μmol·L^(-1)+30μmol·L^(-1))组、LY294002(PI3K/AKT信号通路抑制剂)组、740Y-P组(PI3K/AKT信号通路激动剂)、ASTⅣ+PNS+LY294002组及ASTⅣ+PNS+740Y-P组,氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)建立缺血再灌注损伤模型。CCK-8检测rBEMCs存活情况,划痕实验检测rBEMCs迁移能力;人工基底膜(matrigel)检测rBEMCs成管数;内皮细胞渗漏实验检测内皮细胞渗透率;蛋白质印迹检测rBEMCs中VEGFR2、VEGFA、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。网络药理学结果显示,ASTⅣ及PNS可调节脑梗死血管生成的21个靶点,包括VEGFA、AKT1等,大部分涉及PI3K/AKT信号通路。体内实验发现,与模型组比较,ASTⅣ+PNS配伍能降低脑缺血后神经功能缺损评分(P实验发现,与模型组比较,ASTⅣ+PNS、740Y-P、ASTⅣ+PNS+LY294002及ASTⅣ+PNS+740Y-P均能增加OGD/R后rBEMCs存活率,增强rBEMCs迁移率,增加rBEMCs成管数,增强PI3K/AKT通路相关蛋白表达,降低内皮细胞渗透率(P<0.05,P<0.01);与LY294002组比较,ASTⅣ+PNS+LY294002组rBEMCs存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达显著增加,内皮细胞渗透率显著减少(P<0.05,P<0.01);与ASTⅣ+PNS组和740Y-P组比较,ASTⅣ+PNS+740Y-P组rBEMCs存活率、迁移率、成管数及PI3K/AKT通路相关蛋白表达显著增加,内皮细胞渗透率显著降低(P<0.01)。该研究表明,ASTⅣ和PNS在脑缺血后能促进血管生成,机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：黄芪甲苷三七总皂苷血管内皮细胞生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路

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探讨补阳还五汤通过AMPK/ULK1线粒体自噬通路抑制细胞焦亡治疗糖尿病周围神经病变

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中国实验方剂学杂志 2024年第15期30卷 1-10页

作者：安静文宋林春陈蝶张旺田佳鑫张天雅贲莹河北中医药大学中西医结合学院河北省中西医结合肝肾病证重点实验室石家庄050091

目的:观察补阳还五汤通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/UNC-51样激酶1(ULK1)线粒体自噬通路抑制细胞焦亡治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的作用机制。方法:动物实验采用雄性SPF级SD雄性大鼠(6~7周)60只,按体质量进行编号,计算机产生随机数字... 详细信息

目的:观察补阳还五汤通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/UNC-51样激酶1(ULK1)线粒体自噬通路抑制细胞焦亡治疗糖尿病周围神经病变(DPN)的作用机制。方法:动物实验采用雄性SPF级SD雄性大鼠(6~7周)60只,按体质量进行编号,计算机产生随机数字法随机分为4组,分别为正常组、模型组、α-硫辛酸组(60 mg·kg^(-1))、补阳还五汤组(15 g·kg^(-1)),每组15只。通过注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型。造模成功后α-硫辛酸组和补阳还五汤组分别给与相应药物,正常组和模型组给予生理盐水。给药12周结束后检测感觉神经传导速度(SNCV)和机械性痛阈(PWT)。免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测背根神经节(DRG)中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、磷酸化UNC-51样激酶1(p-ULK1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬受体(p62/SQSTM1)、Beclin1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。免疫荧光检测gasdermin D的N端(N-GSDMD)表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖显著升高(P<0.01),SNCV、PWT显著降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1显著降低(P<0.01),p62、NLRP3、N-GSDMD/GSDMD、IL-1β、剪切的(cleaved)Caspase-1/Caspase-1显著升高(P<0.01);与模型组比较,各用药组SNCV、PWT显著升高(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1明显升高(P<0.05,P<0.01),p62、N-GSDMD/GSDMD、cleaved Caspase-1/Caspase-1、NLRP3、IL-1β明显降低(P<0.05,P<0.01);与α-硫辛酸组比较,补阳还五汤组SNCV、PWT明显升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-ULK1/ULK1明显升高(P<0.05),NLRP3、N-GSDMD/GSDMD明显降低(P<0.05)。结论:补阳还五汤通过AMPK/ULK1通路调节线粒体自噬抑制细胞焦亡,防治DPN,其治疗效果较α-硫辛酸可能更好。

关键词：糖尿病周围神经病变线粒体自噬焦亡补阳还五汤

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清解扶正颗粒调控Cathepsin B/NLRP3通路减轻大肠癌小鼠5-FU化疗性肠黏膜炎的机制研究

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康复学报 2024年

作者：袁颖绯林久茂林明和赵锦燕陈旭征刘锦洪朱晓勤福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建省高校中西医结合基础重点实验室福建中医药大学中西医结合研究院

目的基于Cathepsin B/NLRP3通路探讨清解扶正颗粒对大肠癌小鼠经5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗后所致的肠黏膜炎的治疗作用及作用机制。方法将24只雄性BALB/c小鼠采取右前肢腋部皮下接种CT26细胞的方法构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型，待瘤... 详细信息

目的基于Cathepsin B/NLRP3通路探讨清解扶正颗粒对大肠癌小鼠经5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗后所致的肠黏膜炎的治疗作用及作用机制。方法将24只雄性BALB/c小鼠采取右前肢腋部皮下接种CT26细胞的方法构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型，待瘤体生长至100-300 mm3时，按照瘤体体积将小鼠随机分为对照组（Control组）、5-FU组、5-FU+清解扶正颗粒组（5-FU+QFG组），每组8只。对照组给予生理盐水灌胃和腹腔注射，其他每组小鼠腹腔注射5-FU(50 mg/kg·d-1)每日1次，连续5 d;5-FU+QFG组在化疗的同时灌胃给予清解扶正颗粒（1.0 g/kg·d-1），每日1次，连续7 d。每天观察小鼠的腹泻情况，记录体质量及瘤体积等情况。第7 d末次给药后禁食12 h，动物取材，进行实验检测。HE染色观察小鼠空肠组织病理变化；ELISA法检测各组小鼠血清中二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（D-LA）、内毒素（ET）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达；免疫组化检测空肠组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B)的阳性表达；实时荧光定量PCR法检测空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA的表达，Western blot检测空肠组织中ZO-1、Occludin、Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白的表达。结果在实验周期内，清解扶正颗粒能够显著减轻5-FU化疗引起的腹泻症状（P0.05），对5-FU抑制瘤体生长没有显著的协同效应（P>0.05）；清解扶正颗粒可显著改善5-FU化疗引起的肠黏膜绒毛变短、隐窝变深、炎性细胞浸润等肠黏膜损伤症状；与5-FU组比较，清解扶正颗粒可以显著降低大肠癌小鼠血清中DAO、D-LA、ET以及促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量（P<0.05）；显著降低空肠组织中Cathepsin B蛋白的表达（P<0.05），降低空肠组织中NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白的表达（P<0.05）；增加空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论清解扶正颗粒通过调控Cathepsin B/NLRP3通路，减少促炎细胞因子释放，抑制肠黏膜炎症反应，修复肠黏膜屏障损伤，从而减轻5-FU引起的化疗性肠黏膜炎。

关键词：清解扶正颗粒 5-氟尿嘧啶肠黏膜炎 Cathepsin B NLRP3

基于抗坏血酸调控氧化铈纳米酶催化活性的抗坏血酸氧化酶检测研究

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分析科学学报 2024年 389-394页

作者：潘蕊黄伟华李佳娜王丽丽朱希许惠凤福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福建中医药大学中西医结合研究院福建中医药大学药学院福建农林大学生命科学学院

纳米酶是一类既有纳米材料的独特性能又有催化功能的模拟酶,它既有天然酶的高催化活性,又有模拟酶稳定经济的特点,在生物传感检测领域的应用十分广泛。本研究采用水热法合成具有辣根过氧化物酶样活性的氧化铈纳米酶。该纳米氧化铈同时具... 详细信息

纳米酶是一类既有纳米材料的独特性能又有催化功能的模拟酶,它既有天然酶的高催化活性,又有模拟酶稳定经济的特点,在生物传感检测领域的应用十分广泛。本研究采用水热法合成具有辣根过氧化物酶样活性的氧化铈纳米酶。该纳米氧化铈同时具有+4价和+3价两种形态,其中Ce4+能与过氧化氢反应,使3,3',5,5’-四甲基联苯胺（TMB）氧化,溶液显蓝色。由于抗坏血酸（AA）能还原Ce4+,抑制其催化活性以及TMB的氧化,从而使溶液的颜色较浅。而抗坏血酸氧化酶可催化氧化AA,阻碍了其对Ce4+的还原,使纳米氧化铈的催化性能恢复。利用这种方法,实现对抗坏血酸氧化酶的定量检测,在12 U/L～400 U/L范围内呈良好的线性关系（R2=0.9704）,检测限为3.2 U/L。该研究为基于氧化铈纳米酶的比色方法在抗坏血酸氧化酶活性检测及相关应用提供基础。

关键词：氧化铈抗坏血酸氧化酶纳米酶比色分析

清咳平喘颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重(痰热郁肺证)的临床疗效及对血清IL-6、PCT的影响

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中草药 2024年第11期55卷 3768-3773页

作者：于向艳闫红倩宿英豪聂佳马蕴蕾刘云康增路郭勇英刘新发耿立梅河北省中医院呼吸一科河北省中西医结合肺病重点实验室河北石家庄050011

目的通过开展清咳平喘颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)(痰热郁肺证)的临床研究,观察其对AECOPD临床症状的改善情况及炎症指标的调节作用,评价清咳平喘颗粒治疗A... 详细信息

目的通过开展清咳平喘颗粒治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)(痰热郁肺证)的临床研究,观察其对AECOPD临床症状的改善情况及炎症指标的调节作用,评价清咳平喘颗粒治疗AECOPD(痰热郁肺证)的有效性和安全性。方法采用前瞻性、随机、平行、对照的临床研究设计,将2022年3月-2023年4月就诊于河北省中医院呼吸科病房的痰热郁肺证AECOPD患者100例,使用随机数字表法分成对照组、试验组各50例。对照组给予常规西医对症治疗,试验组在常规治疗基础上给予清咳平喘颗粒治疗,疗程14 d。观察两组的临床疗效,比较两组患者慢阻肺评估测试(COPD assessment test,CAT)评分、改良版英国医学研究委员会呼吸困难问卷(modified medical research council,mMRC)评分和中医证候量表评分,血气指标、6 min步行试验(6 min walking test,6MWT)距离、血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和降钙素原(procalcitonin,PCT)水平、实际住院天数及不良反应发生情况。结果试验组总有效率(97.92%)高于对照组的93.62%,但差异不具有显著性(P>0.05)。治疗后,两组中医证候积分和CAT、mMRC评分均较治疗前降低(P0.05),治疗第2周末,试验组血清PCT、IL-6水平下降更明显(P<0.05)。两组比较试验组实际住院天数明显短于对照组(P<0.05)。在不良反应方面,观察期间,两组均未发现明显的严重不良反应,安全性良好。结论清咳平喘颗粒可有效改善AECOPD(痰热郁肺证)的临床症状及各项试验指标,且具有较好的安全性,值得在临床进一步研究推广。

关键词：清咳平喘颗粒慢性阻塞性肺疾病急性加重痰热郁肺证慢阻肺评估测试评分改良版英国医学研究委员会呼吸困难问卷中医证候量表白细胞介素-6 降钙素原

健骨颗粒正丁醇极性部位对去卵巢大鼠OPG/RANKL的影响

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中华中医药杂志 2024年第7期39卷 3724-3728页

作者：王志强周芬陈翔黄云梅魏振朴孙攀林燕萍福建中医药大学中西医结合研究院福州350122 福建中医药大学针灸推拿学院福州350122 福建省中西医结合老年性疾病重点实验室福州350122 上海中医药大学附属市中医医院上海200071

目的:观察健骨颗粒正丁醇极性部位对去卵巢大鼠骨保护素(OPG)和核因子-kB配体受体致活剂(RANKL)的影响,探讨其治疗绝经后骨疏松症(PMOP)的作用机制。方法:切除雌性SD大鼠双侧卵巢制造PMOP模型,运用双能X线骨密度仪测定骨密度(BMD);ELIS... 详细信息

目的:观察健骨颗粒正丁醇极性部位对去卵巢大鼠骨保护素(OPG)和核因子-kB配体受体致活剂(RANKL)的影响,探讨其治疗绝经后骨疏松症(PMOP)的作用机制。方法:切除雌性SD大鼠双侧卵巢制造PMOP模型,运用双能X线骨密度仪测定骨密度(BMD);ELISA法检测血清中雌二醇(E_(2))、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、OPG和RANKL的含量,并计算OPG/RANKL比值;Western Blot法测定骨组织中TRAP、OPG和RANKL蛋白表达,并计算OPG/RANKL比值。结果:与生理盐水组比较,正丁醇组术后第12周BMD显著增高(P<0.01),术后第8、12周血清E_(2)和OPG水平显著升高(P<0.01);术后8周TRAP在血清中的含量和在骨组织中的蛋白表达均显著降低(P<0.01);术后第8周骨组织0PG蛋白表达显著升高(P<0.01);术后第4、8周骨组织中RANKL蛋白表达均显著降低(P<0.01);术后3个时间点血清中OPG/RANKL比值都显著升高(P<0.01)。结论:健骨颗粒正丁醇极性部位可调节OPG与RANKL之间的代谢平衡,提高血清中OPG/RANKL的比值,降低骨吸收,改善去卵巢大鼠骨骼的代谢水平,提高BMD。

关键词：健骨颗粒正丁醇极性部位去卵巢大鼠骨代谢绝经后骨质疏松症骨保护素核因子-κB配体受体致活剂机制