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河豚毒素DNA适配子的制备及应用

食品科学 2014年第24期35卷 205-208页

作者：邵碧英陈彬陈文炳杨方缪婷玉彭娟福建出入境检验检疫局检验检疫技术中心福建省检验检疫技术研究重点实验室福建福州350001

人工合成78个碱基的随机ss DNA文库,采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)结合的方法,通过筛选富集、克隆、测序,获得了与河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配... 详细信息

人工合成78个碱基的随机ss DNA文库,采用指数富集配基的系统进化技术与诱变聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)结合的方法,通过筛选富集、克隆、测序,获得了与河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)特异结合的单克隆DNA适配子A3。DNA适配子A3的二级结构主要为茎环结构,与TTX的亲和力为1.254。对适配子和TTX结合的磷酸盐缓冲液p H值、荧光染料结合时间进行优化,结果表明,最适p H值为7.5,最佳结合时间为10 min。建立的快速筛选检测TTX的DNA适配子-荧光染料法对TTX的检出限为10-6 mo1/L。

关键词：河豚毒素适配子荧光染料检测

数字聚合酶链式反应技术在食品安全检测领域的研究应用进展

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食品科学 2016年第17期37卷 275-280页

作者：刘津刘二龙谢力李志勇相大鹏高东微广东检验检疫技术中心广东省动植物与食品进出口技术措施研究重点实验室广东广州510623 黄埔出入境检验检疫局广东广州510700 广东出入境检验检疫局广东广州510623

数字聚合酶链式反应(digital polymerase chain reaction,dPCR)作为一项新兴的基于单分子目标基因扩增的绝对定量技术,促进了现代分子生物学在精准定量检测方面的发展和应用。本文综述了商业化dPCR技术在转基因成分、动物源性成分、食... 详细信息

数字聚合酶链式反应(digital polymerase chain reaction,dPCR)作为一项新兴的基于单分子目标基因扩增的绝对定量技术,促进了现代分子生物学在精准定量检测方面的发展和应用。本文综述了商业化dPCR技术在转基因成分、动物源性成分、食源性致病微生物定量检测等食品安全领域的研究进展,讨论了dPCR应用中技术难题的解决,并在此基础上展望了该技术在食品安全检测领域的发展前景。

关键词：数字聚合酶链式反应食品安全绝对定量检测

以色列急性麻痹病毒(IAPV)RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2018年第6期38卷 1105-1108页

作者：张体银李丹丹郑腾白泉阳张志灯王武军于师宇福建出入境检验检疫局福建省检验检疫技术研究重点实验室福建福州350001 海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心海南海口570311

为建立以色列急性麻痹病毒（Israeli acute paralysis virus，IAPV）特异性核酸检测方法，本研究以IAPV polvmerase polyprotein基因为靶基因设计合成1对特异性引物，建立了IAPV的RTPCR检测方法。结果显示，对蜜蜂的5种不同病毒进行RT-... 详细信息

为建立以色列急性麻痹病毒（Israeli acute paralysis virus，IAPV）特异性核酸检测方法，本研究以IAPV polvmerase polyprotein基因为靶基因设计合成1对特异性引物，建立了IAPV的RTPCR检测方法。结果显示，对蜜蜂的5种不同病毒进行RT-PCR检测，只有IAPV病毒检测结果为阳性，具有良好的特异性；对IAPV的最低检测限为10^3拷贝／μL，具有较高的灵敏度；利用该检测方法对来自福建省不同养蜂场的8份蜜蜂样品进行检测，3份样品为阳性，通过序列比对分析，同源性超过99％，进一步证实为IAPV。结果表明，所建立的IAPV RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，具有良好的实用性。

关键词：以色列急性麻痹病毒 RT-PCR polymerase polyprotein基因蜜蜂

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肠炎沙门氏菌gDNA标准物质的研究

食品与生物技术学报 2015年第8期34卷 891-895页

作者：柯璐黄晓蓉林杰戴晓丽曾维扬张温玲福建出入境检验检疫局福建福州350001 福建省检验检疫技术研究重点实验室福建福州350001

作者对制备肠炎沙门氏菌核酸标准物质(g DNA)进行初探,共制备200支样品,每支约含有肠炎沙门氏菌g DNA 1μg。方差分析结果显示,F值为0.835 7,小于F0.05(14,30)=1.68,表明在95%显著性水平时,样品的g DNA含量均匀;稳定性试验表明样品在-2... 详细信息

作者对制备肠炎沙门氏菌核酸标准物质(g DNA)进行初探,共制备200支样品,每支约含有肠炎沙门氏菌g DNA 1μg。方差分析结果显示,F值为0.835 7,小于F0.05(14,30)=1.68,表明在95%显著性水平时,样品的g DNA含量均匀;稳定性试验表明样品在-20℃下保存12个月,g DNA含量维持在1μg/支,0.8 g/d L的琼脂糖凝胶电泳的目标条带清晰,以inv A基因为引物的PCR反应产物电泳条带清晰,样品均具有较好的稳定性。

关键词：肠炎沙门氏菌核酸标准物质

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数字PCR技术在猪病检测中的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2022年第24期 35-38,43页

作者：郑腾张体银李宋钰王武军张志灯林素洁于师宇福州海关技术中心/福建省检验检疫技术研究重点实验室福州350003

数字PCR(digital PCR,dPCR)技术是继常规PCR、实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qPCR)之后的第三代PCR基因检测技术,该技术不需要设置标准曲线,可实现绝对定量分析,具有敏感性和准确性高等特点,越来越多地被用... 详细信息

数字PCR(digital PCR,dPCR)技术是继常规PCR、实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qPCR)之后的第三代PCR基因检测技术,该技术不需要设置标准曲线,可实现绝对定量分析,具有敏感性和准确性高等特点,越来越多地被用于动物疫病的快速、准确检测。笔者主要介绍了dPCR技术的演变、原理、优缺点,尤其是在非洲猪瘟(African swine fever,ASF)、猪圆环病毒病(porcine circovirus disease,PCVD)、猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)、猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)、布鲁氏菌病(brucellosis)等常见猪病检测中的应用,以期为dPCR在动物疫病诊断中的推广应用提供参考。

关键词：数字PCR 猪病检测非洲猪瘟猪圆环病毒病伪狂犬病猪繁殖与呼吸综合征布鲁氏菌病

茶树秃房与茸房种质花器官差异表达基因的WGCNA分析

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园艺学报 2023年第3期50卷 620-634页

作者：王泽涵于文涛王鹏杰刘财国樊晓静谷梦雅蔡春平王攀叶乃兴福建农林大学园艺学院福州350002 福州海关技术中心福建省检验检疫重点实验室福州350001

以福建野生茶群体中的秃房和茸房种质为试验材料,对其花苞期和开放期花器官进行转录组测序分析,以期探明两种不同类型种质花器官在分子层面的差异。结果表明,两者之间的差异表达基因为2086~4733个,这些差异基因主要涉及植物与病原体的... 详细信息

以福建野生茶群体中的秃房和茸房种质为试验材料,对其花苞期和开放期花器官进行转录组测序分析,以期探明两种不同类型种质花器官在分子层面的差异。结果表明,两者之间的差异表达基因为2086~4733个,这些差异基因主要涉及植物与病原体的相互作用、类黄酮生物合成和谷胱甘肽代谢等途径。通过加权基因共表达网络(Weighted Gene Co-expression Network Analysis,WGCNA)方法鉴定到18个共表达基因模块,筛选出3个与茶树花器性状相关性最高的模块。通过计算模块内基因的连通性,挖掘网络中的核心基因并进行功能注释。研究结果表明秃房和茸房茶树花器官主要在应对胁迫和次生代谢产物的合成方面存在差异;秃房种质没有子房表皮茸毛,易受病原体入侵和逆境胁迫,通过调控GST(谷胱甘肽-S-转移酶)来提高自身应对胁迫的能力;CsLTP(脂质转运蛋白基因)可能是调控茶树子房茸毛发育起始的关键基因。

关键词：茶树秃房子房茸毛加权基因共表达网络分析转录组学

固定化离子液体固相萃取-电化学联用测定痕量双酚A

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分析化学 2015年第3期43卷 313-318页

作者：黄良樑黄燕陈言凯丁云花张伟峰李小晶吴晓苹食品安全分析与检测技术教育部重点实验室福建出入境检验检疫局技术中心

以咪唑改性的苯乙烯型大孔树脂填料制备固相萃取小柱,进行固定化离子液体固相萃取,结合β-环糊精修饰离子液体碳糊电极,发展痕量双酚A的电化学联用快速检测技术。实验优化影响萃取效率的因素,获得最佳萃取条件（萃取填料用量0.4 g,样品... 详细信息

以咪唑改性的苯乙烯型大孔树脂填料制备固相萃取小柱,进行固定化离子液体固相萃取,结合β-环糊精修饰离子液体碳糊电极,发展痕量双酚A的电化学联用快速检测技术。实验优化影响萃取效率的因素,获得最佳萃取条件（萃取填料用量0.4 g,样品体积200 m L,上样液p H 7.0,5 m L甲醇为洗脱溶剂,萃取流速4.5 m L/min）。测得固定化离子液体树脂对双酚A的最大吸附容量为10.1 mg/g,富集倍数为40倍。双酚A的浓度线性范围在2.3;28μg/L,检出限为0.95μg/L。联用方法灵敏、实用性强,用于实际样品中双酚A分析,结果与HPLC方法一致。

关键词：固定化离子液体固相萃取离子液体碳糊电极双酚A 电化学检测

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应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫

昆虫学报 2016年第6期59卷 692-698页

作者：张体银刘蓓郑腾白泉阳田国宁王武军张志灯于师宇福建出入境检验检疫局福建省检验检疫技术研究重点实验室福州350001 福建农林大学蜂学学院福州350002 潍坊出入境检验检疫局山东潍坊261041

【目的】近年来,熊蜂作为温室作物的理想授粉者在国外已被广泛利用,并且获得很好的经济效益和生态效益,所以国外熊蜂经常被进口用于设施农业。熊蜂短膜虫Crithidia bombi是熊蜂的一种重要寄生虫病,一旦随进口熊蜂传入,将给国内熊蜂蜂群... 详细信息

【目的】近年来,熊蜂作为温室作物的理想授粉者在国外已被广泛利用,并且获得很好的经济效益和生态效益,所以国外熊蜂经常被进口用于设施农业。熊蜂短膜虫Crithidia bombi是熊蜂的一种重要寄生虫病,一旦随进口熊蜂传入,将给国内熊蜂蜂群带来严重危害,因此迫切需要建立一种熊蜂短膜虫检测方法。【方法】基于熊蜂短膜虫基因内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)基因序列设计了一对引物(Cri-F/R),建立了熊蜂短膜虫的PCR检测方法,并对退火温度、引物浓度和循环个数等反应条件进行了优化,同时验证了该PCR方法的灵敏性、特异性和稳定性。【结果】以熊蜂短膜虫ITS基因保守区设计特异性引物建立的熊蜂短膜虫PCR检测方法是可行的。优化的PCR反应条件为:退火温度59℃,引物浓度0.5μmol/L,扩增循环数35次。对感染熊蜂短膜虫的熊蜂总DNA的灵敏度达到13.24×10-5ng/μL,并具有良好的特异性和稳定性。将该方法应用于熊蜂短膜虫的检测,整个检测过程不超过4 h,具有良好的适用性。【结论】研究建立了熊蜂短膜虫检测方法,能用于疫情监测和进境熊蜂的检验检疫。

关键词：熊蜂短膜虫 PCR技术内转录间隔区熊蜂检疫

高效液相色谱-串联质谱法快速检测鳗鱼及烤鳗中硝基呋喃类代谢物残留

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食品与发酵工业 2007年第7期33卷 132-134页

作者：余孔捷刘正才黄杰杨方李耀平卢声宇张琼徐敦明福建出入境检验检疫局

研究并建立了鳗鱼及烤鳗中硝基呋喃类代谢物残留的快速检测方法,样品经酸解、衍生后以混合酸碱指示剂监控调节pH值,再提取净化,HPLC-MS/MS测定。应用混合酸碱指示剂直接监控pH值的调节,终点直观,操作简便快速,明显提高实验室工效,所选... 详细信息

研究并建立了鳗鱼及烤鳗中硝基呋喃类代谢物残留的快速检测方法,样品经酸解、衍生后以混合酸碱指示剂监控调节pH值,再提取净化,HPLC-MS/MS测定。应用混合酸碱指示剂直接监控pH值的调节,终点直观,操作简便快速,明显提高实验室工效,所选指示剂对pH值的监控能力满足要求,采用该法,4种硝基呋喃类代谢物在鳗鱼肌肉中添加(1.0～2.0μg/kg)回收率范围为62.7%～120%,RSD≤19.9%。AOZ、SEM、AHD、AMOZ检测限分别为0.1、0.5、0.5、0.1μg/kg,符合残留分析要求。

关键词：混合酸碱指示剂硝基呋喃类残留鳗鱼高效液相-串联质谱(HPLC-MS/MS)