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大网膜ADSCs旁分泌HGF与加味补阳还五汤抑制腹膜间皮细胞EMT的相关性的体外研究

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中华中医药学刊 2024年

作者：郑敏麟王亚楠范文江詹倩倩福建中医药大学中西医结合学院福建中医药大学中西医结合研究院

目的：通过体外研究，探讨加味补阳还五汤抑制的腹膜间皮细胞（PMC）上皮-间充质转化（EMT）防治术后腹腔粘连（PAA）的作用，是否主要通过促进大网膜脂肪干细胞（ADSCs）旁分泌HGF。方法：实验1明确加味补阳还五汤抑制PMC的EMT作用，... 详细信息

目的：通过体外研究，探讨加味补阳还五汤抑制的腹膜间皮细胞（PMC）上皮-间充质转化（EMT）防治术后腹腔粘连（PAA）的作用，是否主要通过促进大网膜脂肪干细胞（ADSCs）旁分泌HGF。方法：实验1明确加味补阳还五汤抑制PMC的EMT作用，是该方对PMC的直接作用，还是通过调控大网膜中的脂肪干细胞（ADSCs）旁分泌的间接作用：使用加味补阳还五汤与加味补阳还五汤培养ADSCs后制取其条件培养基（以下称“中药培养基”）分别干预EMT模型的PMC，WesternBlot法检测EMT相关的蛋白E-cadherin、α-SMA的表达水平。实验2明确加味补阳还五汤抑制PMC的EMT作用，是否与大网膜中的脂肪干细胞（ADSCs）旁分泌肝细胞生长因子(HGF)相关：用低表达HGF的ADSCs条件培养基（以下称“低HGF培养基”）、正常ADSCs条件培养基（以下称“普通培养基”）、中药培养基等3种培养基干预PMC，并检测以下指标：⑴用ELISA法检测在干预PMC之前和之后，3种培养基中HGF的含量。⑵WesternBlot法、qPCR法、IF法检测干预后各组PMC的EMT相关蛋白表达水平，划痕实验检测各组PMC的迁移能力。结果：实验1加味补阳还五汤与中药培养基对EMT相关指标的影响：与模型组相比，加味补阳还五汤组上调E-Cad的蛋白表达（P＜0.05），下调α-SMA的蛋白表达（P＜0.05）；中药培养基组显著上调了E-Cad的蛋白表达（P＜0.01），显著下调α-SMA的蛋白表达（P＜0.01）。与加味补阳还五汤组相比，中药培养基组上调E-Cad的蛋白表达（P＜0.05），显著下调α-SMA的蛋白表达（P＜0.01）。实验2⑴作用于PMC前后，3种不同的培养基中HGF含量的比较：作用于PMC前，相比于普通培养基，低HGF培养基中含量显著降低（P＜0.01），中药培养基中含量显著增加（P＜0.01）。作用于PMC后，各培养基组含量均显著性下降。⑵EMT相关蛋白表达情况：综合WesternBlot、qPCR、IF结果，与模型组相比，各培养基组均可升高E-Cad表达（P＜0.05或P＜0.01），降低α-SMA、VIM表达（P＜0.05或P＜0.01），各培养基组均可抑制PMC的EMT，效果依次为中药培养基组＞普通培养基组＞低HGF培养基组。⑶发生EMT的细胞迁移能力变化情况：干预24h、48h后，与模型组相比，各组愈合率均有显著下降（P＜0.01），各组培养基均可降低EMT模型的R的迁移能力，效果依次为中药培养基组＞普通培养基组＞低HGF培养基组。⑷EMT相关蛋白表达与HGF含量相关性分析：E-Cad蛋白表达量与HGF含量呈正相关性（P＜0.05），α-SMA、VIM蛋白表达量与HGF含量呈负相关性（P＜0.05或P＜0.01）。结论：加味补阳还五汤抑制PMC的EMT防治PAA的疗效可能是多靶点的，既有对PMC的直接作用，也有通过增强大网膜中的ADSCs旁分泌HGF的间接作用，而后者更为主要。

关键词：加味补阳还五汤术后腹腔粘连腹膜间皮细胞脂肪间充质干细胞肝细胞生长因子上皮-间充质转化

皮肤黑色素瘤差异表达基因的生物信息学分析及调控中药预测

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中草药 2024年第2期55卷 551-562页

作者：王梓霞黄羽欣谢锦楠王沐瑶王文辉广州中医药大学第二临床医学院广东广州510006 广州中医药大学第一临床医学院广东广州510499 广州中医药大学东莞医院广东东莞523000

目的通过生物信息学技术分析皮肤黑色素瘤患者皮肤组织与非癌皮肤组织的基因表达微阵列数据,筛选出皮肤黑色素瘤的差异表达基因,预测可用于诊断和治疗皮肤黑色素瘤的生物标志物及潜在中药。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omni... 详细信息

目的通过生物信息学技术分析皮肤黑色素瘤患者皮肤组织与非癌皮肤组织的基因表达微阵列数据,筛选出皮肤黑色素瘤的差异表达基因,预测可用于诊断和治疗皮肤黑色素瘤的生物标志物及潜在中药。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)提取GSE3189、GSE114445、GSE46517基因芯片,使用GEO2R工具筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。利用DAVID数据库对DEGs进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析;使用String数据库构蛋白-蛋白互作网络,应用Cytoscape软件及其插件筛选PPI网络中关键基因,应用GSCA数据库进行关键基因的突变分析。通过Gepia 2.0数据库结合癌症基因组图谱数据集(Cancer Genome Atlas,TCGA)对关键基因进行生存分析。根据度(degree)值和生存分析结果综合筛选出核心基因(集),应用GSCA数据库对核心基因(集)进行泛癌分析和免疫浸润分析,并使用TIMER 2.0数据库对核心基因分别进行免疫浸润分析。使用Coremine Medical数据库预测作用于关键基因的潜在中药。结果共筛选出DEGs 114个,其中上调基因36个,下调基因78个。上调DEGs主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号等通路,下调DEGs主要富集在细胞黏附、细胞增殖的正调控等方面。15个关键基因为EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、TYMS、PKP1、SPP1、MMP1、KLF4、EPCAM、KIF23、DTL、CLDN1、LCP2、FGFR2,其中共3个基因KPNA2、AURKA、DTL被视为核心基因(集)。潜在治疗中药有丹参、人参、构皮、高良姜、甘草、蓖麻子、油桐叶等。结论皮肤黑色素瘤中关键基因的突变以FGFR2的错义突变为主,突变方式多为胞嘧啶(C)向胸腺嘧啶(T)的转换。EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、PKP1、DTL、LCP2对皮肤黑色素瘤的生存预后存在显著影响。核心基因集在多种癌症中显著上调,并与自然调节性T细胞(natural regulatory T-cells,nTreg)细胞、树突状细胞、单核细胞等免疫细胞的浸润有关。潜在调控中药包括补虚药、清热解毒药、拔毒生肌药、消肿拔毒药、温里药、健脾利湿药、利水渗湿药、活血化瘀药、安神药9类,在相关古籍中存在对应的中医内外治经验记载,其中药活性成分亦被证明对皮肤黑色素瘤存在一定的调控和抑制作用。

关键词：皮肤黑色素瘤差异表达基因核心基因中药预测生物信息学丹参人参构皮高良姜甘草蓖麻子油桐叶

从六经辨证之辨“厥阴证”论治急性肾损伤思路探赜

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环球中医药 2024年

作者：杨运劼郭明章阮诗玮福建中医药大学附属人民医院肾内科福建中医药大学中医学院福建中医药大学第一临床医学院

急性肾损伤起病急骤，进展迅速，变证多端，其病机和病势呈现出“邪盛正衰、气血逆乱、寒热难辨”的特点。建构六经辨证体系的优势在于最大化地发挥中医学“宏观思辨、整体恒动、因人而异”的特点，有利于急性肾损伤精准化辨治的实施，... 详细信息

急性肾损伤起病急骤，进展迅速，变证多端，其病机和病势呈现出“邪盛正衰、气血逆乱、寒热难辨”的特点。建构六经辨证体系的优势在于最大化地发挥中医学“宏观思辨、整体恒动、因人而异”的特点，有利于急性肾损伤精准化辨治的实施，进一步提高临床疗效。基于此，本文围绕六经辨证之“厥阴病”和急性肾损伤（衰竭期）二者的病机特点展开论述并进行比较，从理论基础、病机阐释、临床应用方面阐述从六经辨证之辨“厥阴证”论治急性肾损伤（衰竭期）的理论依据与临床价值，揭示急性肾损伤“阴阳往复，寒热错杂”的病机特点，以及“阴阳进退转化”的病机演变规律：阳进阴退，厥阴阳（风）证主导，风火相煽，转归少阳，急性肾损伤病情有向愈之机；阴进阳退，厥阴阴（血）证主导，津血亏耗，内传少阴，急性肾损伤有病情恶化之趋势。阴阳进退转化不显，急性肾损伤证情复杂，故明析急性肾损伤的“厥阴病—证”的病机内涵是治疗的关键。临证时在厥阴病“燮理阴阳”的理论指导下，采用以“燮理阴阳”为根基，以“平调寒热”为重心的治疗方略，寒胜则用温远凉，须顾护津血，可选当归芍药散加减；热复则用凉远温，重清泄相火，可予天麻钩藤饮化裁；见虚实寒热错杂者，当攻补兼施，寒温并用，选用乌梅丸加味。辨“厥阴证”不仅为急性肾损伤的辨治提供新的中医药防治思路，也对“六经辨证”体系的进一步推广与应用给予现实临床指导价值。

关键词：六经辨证厥阴病厥阴阳(风)证厥阴阴(血)证阴阳往复寒热错杂阴阳进退转化风火相煽津血亏耗急性肾损伤

基于AMPK/mTOR自噬通路探讨芍药苷保护溃疡性结肠炎小鼠的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第3期30卷 45-53页

作者：代鑫李柔胡洋王宇航赵芮竹冯嘉轩娄石磊孙聪长春中医药大学药学院长春130117 长春中医药大学临床医学院长春130117

目的:探讨芍药苷通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬通路对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用机制研究。方法:自由饮用4%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立UC小鼠模型,56只BALB/c雄性小鼠,随机分为模型组、AMPK抑制剂组(... 详细信息

目的:探讨芍药苷通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)自噬通路对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的保护作用机制研究。方法:自由饮用4%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立UC小鼠模型,56只BALB/c雄性小鼠,随机分为模型组、AMPK抑制剂组(20 mg·kg^(-1))、芍药苷(50 mg·kg^(-1))+抑制剂(20 mg·kg^(-1))组、芍药苷高剂量组(50 mg·kg^(-1))、中剂量组(25 mg·kg^(-1))、低剂量组(12.5 mg·kg^(-1))药物干预7 d后,通过比较小鼠体质量、疾病活动指数(DAI)变化和苏木素-伊红(HE)染色结果判断芍药苷对UC的保护作用。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的水平,免疫荧光检测结肠中微管相关蛋白1轻链3(LC3)的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中AMPK、mTOR蛋白及其磷酸化蛋白p-AMPK、p-mTOR,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测AMPK、mTOR、Beclin1、LC3和p62的mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠体质量下降、DAI评分升高、结肠出现严重的病理学损伤,炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量上升(P<0.01),LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平下调,p-mTOR/mTOR蛋白水平上调(P<0.01);AMPK、LC3的mRNA表达水平下调,mTOR、p62的mRNA表达上调(P<0.01)。与模型组和芍药苷+抑制剂组比较,经芍药苷治疗后小鼠体质量上升、DAI评分降低、结肠组织病理损伤减轻,炎症因子TNF-α、IL-6在血清中含量下降(P<0.05),LC3和p-AMPK/AMPK在结肠组织中蛋白水平上调,p-mTOR/mTOR蛋白水平下调(P<0.01),AMPK、Beclin1、LC3的mRNA表达水平上调,mTOR、p62的mRNA表达下调(P<0.01),抑制剂组小鼠结肠组织病理损伤严重,各项指标趋势与芍药苷高剂量组完全相反。结论:芍药苷可通过激活AMPK/mTOR信号通路,增强自噬,减轻UC小鼠的炎症损伤,从而起到保护作用。

关键词：腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路自噬炎症反应芍药苷溃疡性结肠炎

加味涤痰汤调控miR-149对慢性间歇低氧大鼠肝损伤的影响

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中国中医药信息杂志 2024年第7期31卷 77-82页

作者：王春桔陈沁吴润华伍娟刘丹刘赟杨眉峰福建中医药大学临床技能教学中心福建福州350122 福建中医药大学中西医结合学院福建福州350122

目的探讨加味涤痰汤调控mi R-149对慢性间歇低氧大鼠肝损伤的影响及作用机制。方法将18只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和加味涤痰汤组,每组6只。模型组和加味涤痰汤组于低氧箱中造模,造模期间加味涤痰汤组予加味涤痰汤灌胃,连续12... 详细信息

目的探讨加味涤痰汤调控mi R-149对慢性间歇低氧大鼠肝损伤的影响及作用机制。方法将18只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组和加味涤痰汤组,每组6只。模型组和加味涤痰汤组于低氧箱中造模,造模期间加味涤痰汤组予加味涤痰汤灌胃,连续12周。HE染色观察肝组织病理变化,透射电镜观察肝组织超微结构,TUNEL染色观察肝细胞凋亡情况,检测肝组织丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,RT-qPCR和Western blot检测肝组织miR-149、转录激活因子(ATF)6、葡萄糖调节蛋白-78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA和蛋白表达。分析肝组织ATF6 mRNA与miR-149 mRNA表达相关性。结果与对照组比较,模型组大鼠肝组织少量炎性细胞浸润,肝细胞排列不规则、不同程度水肿,内质网扩张,核糖体脱落,线粒体膜破裂,肝细胞凋亡率升高(P<0.05),肝组织ALT、AST、MDA含量升高(P<0.05),SOD含量降低(P<0.05),miR-149 mRNA表达降低(P<0.05),ATF6、GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,加味涤痰汤组大鼠肝组织未见明显水肿及炎性细胞浸润,肝细胞排列规则,内质网稍扩张,核糖体分布较均匀,线粒体膜相对完整,肝细胞凋亡率降低(P<0.05),肝组织ALT、AST、MDA含量降低(P<0.05),SOD含量升高(P<0.05),miR-149m RNA表达升高(P<0.05),ATF6、GRP78、CHOPmRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。ATF6 mRNA与miR-149 mRNA水平呈显著负相关(r=-0.766)。结论加味涤痰汤可能通过调控miR-149/ATF6通路抑制慢性间歇低氧大鼠肝脏氧化应激反应,改善肝损伤。

关键词：加味涤痰汤慢性间歇低氧肝损伤 miR-149 内质网应激

中药及有效成分靶向M1/M2巨噬细胞极化平衡治疗炎症性肠病的研究进展

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中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 276-286页

作者：刘艺刘源孙志其鲁明源山东中医药大学济南250300 山东中医药大学第一临床医学院济南250300

炎症性肠病(IBD)分为溃疡性结肠炎和克罗恩病,是一种与免疫功能紊乱密切相关的慢性复发性炎症性胃肠道疾病。IBD的发病机制与遗传易感性、免疫功能障碍、环境改变和肠道微生物群紊乱密切相关。现代研究发现,巨噬细胞极化在IBD发生发展... 详细信息

炎症性肠病(IBD)分为溃疡性结肠炎和克罗恩病,是一种与免疫功能紊乱密切相关的慢性复发性炎症性胃肠道疾病。IBD的发病机制与遗传易感性、免疫功能障碍、环境改变和肠道微生物群紊乱密切相关。现代研究发现,巨噬细胞极化在IBD发生发展中占有重要地位,能够影响炎症反应水平、肠道黏膜修复及肠道微生物群平衡等,是治疗IBD的潜在靶点。越来越多的研究表明,中药及其有效成分能够通过多途径调节巨噬细胞极化,平衡M1/M2巨噬细胞比率,从而抑制炎症反应,促进肠黏膜修复,减缓IBD的进一步发展。该文通过总结巨噬细胞极化的生物学过程与涉及靶点,详述其在IBD中的影响。同时对中药及其有效成分能够通过调控巨噬细胞极化改善IBD的最新研究作简要综述,以期为中医药治疗IBD更好应用于临床提供新方向与新策略。

关键词：中药有效成分巨噬细胞极化炎症性肠病研究进展

基于古籍挖掘的糖尿病中医食疗方调制规律研究

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军事护理 2024年第6期41卷 39-43页

作者：邓丽金王昶王章林龚舒婷鲍中元卢铎朵福建中医药大学护理学院福建福州350122 福建中医药大学中医学院遵义医科大学珠海校区护理学院广东珠海519040

目的探究糖尿病中医食疗方的调制规律,为糖尿病的临床辨证施食和食疗研究提供参考。方法收集《中医方剂大辞典》《中医食疗方全录》《中国药膳大辞典》三本纸版古籍中收载的糖尿病食疗方,提取方名、组成、剂型等信息,应用SPSS 26.0进... 详细信息

目的探究糖尿病中医食疗方的调制规律,为糖尿病的临床辨证施食和食疗研究提供参考。方法收集《中医方剂大辞典》《中医食疗方全录》《中国药膳大辞典》三本纸版古籍中收载的糖尿病食疗方,提取方名、组成、剂型等信息,应用SPSS 26.0进行频数分析及聚类分析,采用SPSS Modeler 18.0开展食物配伍关联分析。结果共纳入食疗方264首,涉及191种食物。古代糖尿病中医食疗方多用补虚类(47.91%)食药物质及保健食品药材,清热类(11.84%)次之;多以平性(36.65%)、温性(31.41%)为主;味多甘味(55.38%);归经则以脾经(18.99%)、肾经(17.51%)、胃经(16.46%)、肺经(15.40%)居多;汤剂为常见剂型(32.58%);五谷类食物使用较多(25.25%);其主治证型以气阴亏虚(32.07%)为主。结论古代医家重视由调治中焦入手,灵活应用中医食疗方调治糖尿病,讲究补虚辅以清热利湿,善于理气和中祛湿化浊,妙用“温”品,遵循辨证原则,选材多味,组方多样,为临床进行中医食疗干预糖尿病提供了有益借鉴与思路启发。

关键词：数据挖掘关联规则聚类分析中医食疗饮食护理糖尿病

基于miR-155/TLR4/MyD88信号通路探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤的抗炎作用

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中国急救医学 2024年第5期44卷 397-401页

作者：王世军沈芳华张美吉詹雪晶王友前蔡佳清林奕丽福建中医药大学附属人民医院福建福州350004 福建中医药大学福建福州350122

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h... 详细信息

目的探讨蛇伤胶囊对竹叶青蛇伤miR-155/Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路及炎症的影响。方法将18只雄性新西兰大白兔分为对照组、模型组和蛇伤胶囊组,每组6只。对照组正常饮食饮水,另两组注射7.5 mg/kg竹叶青蛇毒液6 h后,模型组灌胃348 mg/(kg·d)生理盐水,蛇伤胶囊组灌胃348 mg/(kg·d)蛇伤胶囊,均连续灌胃1周。观察实验兔的一般行为学,qRT-PCR检测外周血中miR-155a-5p、TLR4和MyD88表达,ELISA检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)含量。结果与对照组比较,模型组精神和食欲变差,排便稀软带血,伤口溃烂,miR-155-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达均显著增加(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著下降(均P<0.01)。蛇伤胶囊组较模型组情况明显好转,miR-155a-5p、TLR4 mRNA、MyD88 mRNA、IL-6和TNF-α表达显著下降(均P<0.01),IFN-γ和IL-4表达显著增加(均P<0.01)。结论蛇伤胶囊抑制竹叶青蛇伤造成的炎症反应,维持Th1/Th2细胞平衡,其作用机制可能与抑制miR-155/TLR4/MyD88轴的表达有关。

关键词：蛇伤胶囊竹叶青蛇伤炎症 miR-155/Toll样受体4/髓样分化因子88信号通路白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α γ干扰素白细胞介素-4

2型糖尿病对主观认知下降患者认知功能及海马结构的影响

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中国康复医学杂志 2024年第4期39卷 505-514页

作者：王雅君徐姝蕊罗佳蔡桂燕陈瑞琳刘娇福建中医药大学康复医学院福建省福州市350122 首都医科大学中医药学院福建省康复技术重点实验室福建中医药大学康复产业研究院中医骨伤及运动康复教育部重点实验室

目的:探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)疾病状态对主观认知下降(subjective cognitive decline,SCD)患者认知功能的影响,并基于海马结构特征探讨可能机制。方法:招募福建省福州市社区内自愿参加且符合要求的SCD受试者,按照... 详细信息

目的:探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)疾病状态对主观认知下降(subjective cognitive decline,SCD)患者认知功能的影响,并基于海马结构特征探讨可能机制。方法:招募福建省福州市社区内自愿参加且符合要求的SCD受试者,按照T2DM疾病状态分为合并T2DM的SCD患者和不伴T2DM的SCD患者。比较不同糖尿病疾病状态对SCD患者认知功能表现评分、海马体积、海马亚区体积及旁海马表面积的影响,并将具有显著差异的认知功能表现评分与海马体积、海马亚区体积及旁海马表面积进行相关性分析。结果:与不伴T2DM的SCD患者相比,合并T2DM的SCD患者的Stroop促进效应(SFE)反应时更长、SFE正确数更少,Go/No go错误数更多,分散性注意力视觉反应时更长,差异有显著性意义(P<0.05)。磁共振数据分析发现合并T2DM的SCD患者的左侧海马亚区海马伞的体积和旁海马表面积较不伴T2DM的SCD患者显著减小。相关性分析结果显示SCD患者旁海马表面积与SFE正确数显著正相关(P<0.001)。结论:T2DM疾病状态加重SCD患者Stroop促进效应、执行抑制控制功能和视觉分散性注意力认知加工领域认知功能损害,且可能与海马系统部分脑区灰质结构萎缩有关。

关键词：主观认知下降糖尿病海马海马亚区执行功能注意力