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寿胎丸对先兆流产肾虚证模型小鼠母胎界面糖酵解关键蛋白和凋亡相关因子表达的影响

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中国中药杂志 2024年第8期49卷 2169-2177页

作者：宋亚静李丹丹吕竞芳蒋敏杜惠兰河北中医药大学中西医结合研究所河北石家庄050091 河北省中西医结合生殖疾病协同创新中心河北石家庄050091 河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室河北石家庄050091

探究寿胎丸治疗先兆流产的作用机制。按照随机数字表法将ICR雌性小鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、寿胎丸组和地屈孕酮组,每组15只。每日9:00正常组和模型组灌胃生理盐水,寿胎丸组灌胃寿胎丸混悬液,地屈孕酮组灌胃地屈孕酮溶解剂... 详细信息

探究寿胎丸治疗先兆流产的作用机制。按照随机数字表法将ICR雌性小鼠随机分为4组,分别为正常组、模型组、寿胎丸组和地屈孕酮组,每组15只。每日9:00正常组和模型组灌胃生理盐水,寿胎丸组灌胃寿胎丸混悬液,地屈孕酮组灌胃地屈孕酮溶解剂,每日16:00正常组用等体积蒸馏水灌胃,模型组、寿胎丸组、地屈孕酮组灌胃氢化可的松溶液,连续4 d。将动情前期或动情期的ICR雌鼠与雄鼠按2∶1合笼。自妊娠第1天,按照之前给药方式继续给药,连续给药5 d。第6天灌胃米非司酮,复制肾虚流产模型。各组在妊娠第6天时随机选择10只ICR雌性小鼠,取连胎子宫,HE染色观察母胎界面滋养细胞病理形态学改变;Western blot及免疫荧光法检测糖酵解的关键酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、烯醇化酶1(enolase 1,ENO1)、丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)以及乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的蛋白表达,Western blot及实时荧光定量PCR法检测胚胎组织凋亡相关因子caspase-3、Bax、Bcl-2的表达,TUNEL法检测滋养细胞凋亡;剩余5只雌鼠孕14 d时采用台盼蓝染法计算胚胎丢失率。妊娠第14天时,正常组胚胎丢失率为5.00%,模型组与正常组相比胚胎丢失率升高,为27.78%(P<0.05);与模型组相比,地屈孕酮组及寿胎丸组胚胎丢失率降低,分别为10.26%、7.50%。妊娠第6天时,与正常组相比,模型组糖酵解的关键蛋白HK2、ENO1、PKM2、LDHA表达显著降低(P<0.05),凋亡相关因子Bcl-2表达显著降低(P<0.05),caspase-3、Bax表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,地屈孕酮组及寿胎丸组HK2、ENO1、PKM2、LDHA蛋白表达均显著升高(P<0.05),凋亡因子Bcl-2表达显著升高(P<0.05),caspase-3、Bax表达显著降低(P<0.05)。TUNEL染色显示,与正常组相比,模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与模型组相比,地屈孕酮组及寿胎丸组滋养细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。综上,寿胎丸能降低胚胎丢失率,发挥保胎作用,其机制可能是通过提高先兆流产模型小鼠母胎界面有氧糖酵解水平,抑制滋养细胞凋亡实现的。

关键词：寿胎丸先兆流产糖酵解凋亡

电针对快速老化模型小鼠骨骼肌线粒体动力学的影响

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中国中医药信息杂志 2024年第2期31卷 104-109页

作者：温若兰郭婉清董卫国陈丽敏李金全温辰光林岚王丰福建中医药大学针灸学院福建福州350122 福建中医药大学附属第三人民医院福建福州350108 福建中医药大学中西医结合学院福建福州350122

目的观察电针对快速老化模型(SAMP8)小鼠运动功能及骨骼肌线粒体动力学的影响,从线粒体动力学角度探讨电针改善阿尔茨海默病(AD)运动功能障碍的作用机制。方法18只SAMP8小鼠随机分为模型组和电针组,每组9只,另9只同龄抗快速老化(SAMR1)... 详细信息

目的观察电针对快速老化模型(SAMP8)小鼠运动功能及骨骼肌线粒体动力学的影响,从线粒体动力学角度探讨电针改善阿尔茨海默病(AD)运动功能障碍的作用机制。方法18只SAMP8小鼠随机分为模型组和电针组,每组9只,另9只同龄抗快速老化(SAMR1)小鼠作为对照组。电针组选取“百会”“大椎”“肾俞”,每日电针20 min,8 d为1个疗程,间隔2 d,共3个疗程,模型组和对照组不予干预。抓力测试、悬挂实验、后肢伸展实验和Morris水迷宫实验检测小鼠运动功能,HE染色观察腓肠肌组织形态,比色法检测腓肠肌组织三磷酸腺苷(ATP)含量,实时荧光定量PCR检测腓肠肌组织视神经萎缩症蛋白1(OPA1)、线粒体融合蛋白2(MFN2)和线粒体动力相关蛋白1(DRP1)mRNA表达,Western blot检测腓肠肌组织OPA1、MFN2和DRP1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠抓力、悬挂实验评分及Morris水迷宫实验平均速度和最大速度显著降低(P<0.01);腓肠肌纤维排列混乱、间隙变宽、细胞核分布不均匀,腓肠肌组织ATP含量显著降低(P<0.01),OPA1、MFN2 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),DRP1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,电针组小鼠抓力、悬挂实验评分及Morris水迷宫实验平均速度和最大速度显著升高(P<0.01);腓肠肌纤维排列较整齐、间隙变窄、细胞核分布较均匀,腓肠肌组织ATP含量显著升高(P<0.01),OPA1、MFN2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),DRP1 mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论电针可改善SAMP8小鼠骨骼肌形态结构和运动功能障碍,其机制可能与调节骨骼肌线粒体动力学失衡状态,提高骨骼肌ATP含量有关。

关键词：阿尔茨海默病电针线粒体动力学运动功能障碍快速老化模型小鼠

苁蓉舒痉颗粒对帕金森病患者黑质代谢物影响随机对照研究

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中国中西医结合杂志 2024年第3期44卷 296-302页

作者：陈诗雅李茜羽张楚天陈文洁陈茜尹鹭峰孙林娟蔡晶福建中医药大学附属第三人民医院老年病科福州350122 福建中医药大学中西医结合研究院福州350122 中国中医科学院西苑医院脑病科北京100091 福建中医药大学附属第三人民医院脑病科福州350122

目的评估苁蓉舒痉颗粒对帕金森病(PD)患者黑质代谢物影响的临床疗效及安全性。方法采用双中心分层随机化的方法,两中心分别将符合入组标准的PD患者30例,随机分2组,观察组15例予苁蓉舒痉颗粒加基础西药治疗,对照组15例予中药安慰剂加基... 详细信息

目的评估苁蓉舒痉颗粒对帕金森病(PD)患者黑质代谢物影响的临床疗效及安全性。方法采用双中心分层随机化的方法,两中心分别将符合入组标准的PD患者30例,随机分2组,观察组15例予苁蓉舒痉颗粒加基础西药治疗,对照组15例予中药安慰剂加基础西药治疗,疗程12周。治疗前后进行国际运动障碍学会帕金森病综合评定量表(MDS-UPDRS)评分、磁共振波谱检测、肌电图检查、39项帕金森病生活质量问卷(PDQ-39)、非运动症状评定量表(NMSS)评分,并检测血尿常规、肝肾功能、心电图,记录不良反应事件。结果两中心意向性分析人群60例,安全性分析人群60例,磁共振波谱符合方案人群53例,肌电图符合方案人群45例。与本组治疗前比较,对照组治疗后MDS-UPDRSⅠ、PDQ-39及NMSS评分均降低(P0.05)。结论苁蓉舒痉颗粒可改善PD患者的运动症状及非运动症状,提高生活质量,提高黑质神经元活性,其治疗PD具有较好的安全性。

关键词：帕金森病补肾益髓苁蓉舒痉颗粒随机对照试验黑质中药复方中西医结合

补中益气汤通过Nrf2/ROS通路调控线粒体途径细胞凋亡改善A549/DDP细胞顺铂耐药的分子机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第1期30卷 95-102页

作者：牟琪瑞李贺刘玥彤高原刘春英辽宁中医药大学中西医结合学院沈阳110847

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E_2相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组... 详细信息

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E_2相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组(10%空白血清)、顺铂组(10%空白血清+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤组(10%含药血清+20 mg·L^(-1)顺铂)、ML385组(10%空白血清+5μmol·L^(-1)ML385+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤联合ML385组(10%含药血清+5μmol·L^(-1)ML385+20 mg·L^(-1)顺铂)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组(10%空白血清+5μmol·L^(-1)TBHQ+20 mg·L^(-1)顺铂)、补中益气汤联合TBHQ组(10%含药血清+5μmol·L^(-1)TBHQ+20 mg·L^(-1)顺铂),应用细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测各组顺铂半数抑制浓度(IC_(50))值并计算耐药指数(RI),流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DCFH-DA荧光探针法检测各组活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组Nrf2、活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、细胞色素C(CytC)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。结果:与顺铂组比较,补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组A549/DDP细胞顺铂的IC_(50)及RI均明显降低(P<0.05);与空白组比较,顺铂组、补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组A549/DDP细胞的凋亡率均明显升高(P<0.05);与空白组比较,顺铂组细胞内Nrf2表达明显升高(P<0.05),与顺铂组比较,补中益气汤组、ML385组、补中益气汤联合ML385组Nrf2表达均明显降低(P<0.05),上述各组ROS表达量均明显升高(P<0.05),cleaved Caspase-3、CytC蛋白表达均升高、Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05),其中以补中益气汤联合ML385组效果最为明显。与顺铂组比较,TBHQ组顺铂IC_(50)值及RI明显升高(P<0.05),A549/DDP细胞凋亡率明显降低(P<0.05),Nrf2蛋白表达明显升高(P<0.05),ROS表达下降(P<0.05),cleaved Caspase-3、CytC蛋白表达降低、Bcl-2蛋白表达明显升高(P<0.05)。在补中益气汤联合TBHQ之后,与TBHQ组比较,A549/DDP细胞顺铂的IC_(50)值及RI再次明显降低(P<0.05),凋亡率再次明显升高(P<0.05),Nrf2蛋白表达再次下降(P<0.05),ROS表达再次明显升高(P<0.05),cleaved Caspase-3、CytC蛋白表达再次上调、Bcl-2蛋白表达再次下调(P<0.05)。结论:补中益气汤通过抑制Nrf2/ROS通路诱导线粒体途径细胞凋亡以改善A549/DDP细胞的顺铂耐药性。

关键词：补中益气汤非小细胞肺癌核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS) 线粒体途径细胞凋亡顺铂耐药

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持续劳损加冰敷法兔冻结肩模型的制备及评价

中国骨伤 2024年第4期37卷 392-398页

作者：刘璐程少丹程杨彭思琛葛程王世辉上海市光华中西医结合医院上海200052 上海中医药大学上海201203 上海市中医药研究院中西医结合关节炎研究所上海200052

目的:评估持续劳损加冰敷法制备兔冻结肩模型的成模情况。方法:选取质量为(2500±500)g的清洁级、健康雄性新西兰兔12只,随机分为空白组和模型组,每组6只。模型组采用持续劳损加冰敷造模,观察兔大体情况及肩关节主被动活动情况,并记录... 详细信息

目的:评估持续劳损加冰敷法制备兔冻结肩模型的成模情况。方法:选取质量为(2500±500)g的清洁级、健康雄性新西兰兔12只,随机分为空白组和模型组,每组6只。模型组采用持续劳损加冰敷造模,观察兔大体情况及肩关节主被动活动情况,并记录体重。分别于造模后第6天和第29天对兔造模侧肩关节行MRI检查,观察积液及软组织情况;采用HE染色法观察兔肱二头肌长头肌腱及关节囊滑膜的形态;采用Masson染色法观察兔肱二头肌长头肌腱及关节囊滑膜的纤维沉积情况,并用Image J软件对纤维沉积行半定量分析。结果:造模结束6 d后,模型组兔肩关节主动活动受限,被动活动受限不明显,行走跛行;造模结束29 d后,模型组兔肩关节主、被动活动均严重受限;与空白组体重(2.50±0.14)kg相比,模型组体重(2.20±0.17)kg显著降低(P<0.01)。MRI显示,造模结束后6 d,肩周肌肉外形不光滑,关节囊结构模糊,关节腔内见大量积液;造模结束后29 d,肩周肌肉外形毛糙,关节囊结构不清,关节腔内积液较造模后6 d减少。病理染色显示,模型组兔肱二头肌长头肌腱肌纤维排列紊乱,形态蜷曲,甚至断裂,关节囊滑膜组织大量血管增生,胶原纤维沉积及严重炎性细胞浸润。通过Image J软件对Masson染色结果半定量分析,模型组造模后7、30 d兔患肩肱二头肌长头肌腱纤维沉积[(23.58±3.41)%、(27.56±3.70)%]及滑膜组织纤维沉积[(41.78±5.59)%、(62.19±7.54)%]均显著高于空白组肱二头肌长头肌腱纤维沉积[(1.79±1.03)%、(1.29±0.63)%]及滑膜组织纤维沉积[(8.15±3.61)%、(11.29±7.10)%](P<0.01),且时间越长,纤维化越严重(P<0.01)。结论:行为学、影像学和病理学均显示,持续劳损加冰敷法兔冻结肩模型符合冻结肩临床表现,切合冻结肩发病机制,是一种理想的冻结肩模型。

关键词：冻结肩模型滑膜

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基于病-证-症结合视域对方药配伍的思考

北京中医药大学学报 2024年

作者：王志斌唐文童康黄玮杰陈斌斌乔世杰韩海瑞李灿东王洋福建中医药大学中医证研究基地福建中医药大学附属人民医院

在当前疾病谱复杂多变的背景下，传统中医的方药配伍已难以全面满足临床诊疗的需要。故本文基于病-证-症结合的诊疗模式，结合西医学的发展成果，对传统方剂君臣佐使的组方原则进行探索性思考。本文提出以辨证用药为君、辨病用药为臣、... 详细信息

在当前疾病谱复杂多变的背景下，传统中医的方药配伍已难以全面满足临床诊疗的需要。故本文基于病-证-症结合的诊疗模式，结合西医学的发展成果，对传统方剂君臣佐使的组方原则进行探索性思考。本文提出以辨证用药为君、辨病用药为臣、对症用药为佐及调和用药为使的组方原则，从而形成以辨证论治、辨病论治、对症治疗与减毒增效为核心环节的治疗方案。本文致力于解决当前疾病谱增多、证候类型与症候群复杂化等临床问题，为中医临床组方用药提供新的思路，以期提高临床疗效。

关键词：病-证-症结合君臣佐使组方原则

基于网络药理学和实验验证黄芪甲苷和三七总皂苷配伍调控血管生成抗脑缺血作用机制

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中国中药杂志 2024年第4期49卷 1017-1027页

作者：李艳玲陆展辉张燕燕吴莎莎谢天浩丁煌张伟刘晓丹邓常清湖南中医药大学中西医结合学院中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室湖南长沙410208

采用网络药理学结合体内、外实验验证探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)配伍三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测ASTⅣ和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。... 详细信息

采用网络药理学结合体内、外实验验证探讨黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASTⅣ)配伍三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)调控血管生成治疗脑缺血的作用机制。运用网络药理学预测ASTⅣ和PNS通过介导血管生成治疗脑缺血的可能机制。体内实验:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、ASTⅣ(10 mg·kg^(-1))+PNS(25 mg·kg^(-1))组,大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)法建立脑缺血模型。ASTⅣ及PNS灌胃给药,每天2次。采用Longa法测定神经功能缺损症状;苏木素-伊红(HE)染色观察脑组织病理损伤;免疫组化测定血友病因子(von Willebrand factor,vWF)的表达;免疫荧光测定血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达;蛋白质印迹法检测脑组织血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)、VEGFA、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)的表达。体外实验:原代培养并鉴定脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs),取第3代rBMECs,设置对照组、模型组、ASTⅣ+PNS(50μmol·L^(-1)+30μmol·L^(-1))组、LY294002(PI3K/AKT信号通路抑制剂)组、740Y-P组(PI3K/AKT信号通路激动剂)、ASTⅣ+PNS+LY294002组及ASTⅣ+PNS+740Y-P组,氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/re-oxygenation,OGD/R)建立缺血再灌注损伤模型。CCK-8检测rBEMCs存活情况,划痕实验检测rBEMCs迁移能力;人工基底膜(matrigel)检测rBEMCs成管数;内皮细胞渗漏实验检测内皮细胞渗透率;蛋白质印迹检测rBEMCs中VEGFR2、VEGFA、p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。网络药理学结果显示,ASTⅣ及PNS可调节脑梗死血管生成的21个靶点,包括VEGFA、AKT1等,大部分涉及PI3K/AKT信号通路。体内实验发现,与模型组比较,ASTⅣ+PNS配伍能降低脑缺血后神经功能缺损评分(P研究表明,ASTⅣ和PNS在脑缺血后能促进血管生成,机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：黄芪甲苷三七总皂苷血管内皮细胞生长因子(VEGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路

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基于中医证候的大肠癌粪便宏代谢特征研究

中华中医药杂志 2024年第2期39卷 968-973页

作者：赵玲周晔禄贾茹饶希午张兆洲王炎李琦上海中医药大学中西医结合研究院上海201203 上海中医药大学附属曙光医院上海201203

目的:从宏代谢层面阐释大肠癌及其常见中医证型的生物学特征。方法:收集107例大肠癌湿热证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证患者和35名健康人晨便,通过液相色谱质谱联用技术及多元统计方法分析粪便细菌代谢物。结果:肠癌组粪便中17种代谢小分子... 详细信息

目的:从宏代谢层面阐释大肠癌及其常见中医证型的生物学特征。方法:收集107例大肠癌湿热证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证患者和35名健康人晨便,通过液相色谱质谱联用技术及多元统计方法分析粪便细菌代谢物。结果:肠癌组粪便中17种代谢小分子[氨基酸、有机酸、(短链)脂肪酸、肉碱类代谢物]异于健康组;湿热证粪便胆汁酸明显异于健康及其他证候人群,其中次级胆汁酸显著降低,初级胆汁酸显著增加;肝肾阴虚证和脾肾阳虚证两组粪便长链不饱和脂肪酸水平升高而有机酸水平降低。结论:大肠癌患者粪便宏代谢表型明显异于健康人,大肠癌常见证候的粪便宏代谢特征也不尽相同,其中湿热证以胆汁酸代谢异常为特征,肝肾阴虚证的不饱和脂肪酸异常代谢尤为明显,而脾肾阳虚证的食物发酵、营养供应不足。

关键词：大肠癌湿热证肝肾阴虚证脾肾阳虚证肠道菌群宏代谢组学粪便生物学特征

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红景天苷对缺血性脑损伤大鼠的作用

中国药理学通报 2024年第5期40卷 873-880页

作者：吴青青吴慧玲周彬彬余正双杨泽霖赖文芳洪桂祝福建中医药大学药学院福建福州350122

目的基于超高效液相色谱-电喷雾-串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)技术研究红景天苷(salidroside,Sal)的血脑屏障(blood brain barrier,BBB)穿透性,并通过网络药理学、分子对接技术和动物实验探讨Sal治疗缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)的作... 详细信息

目的基于超高效液相色谱-电喷雾-串联质谱(UPLC-ESI-MS/MS)技术研究红景天苷(salidroside,Sal)的血脑屏障(blood brain barrier,BBB)穿透性,并通过网络药理学、分子对接技术和动物实验探讨Sal治疗缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)的作用靶点及机制。方法利用UPLC-ESI-MS/MS技术研究Sal的BBB穿透性;运用多个数据库预测Sal的作用靶点和IS的疾病靶点,构建PPI网络并筛选核心靶点,进行GO和KEGG富集分析,并通过分子对接技术和动物实验进行验证。结果Sal给药正常大鼠和MCAO大鼠后,血浆和脑组织中均检测到Sal原形和代谢物酪醇;网络药理学共筛选出Sal治疗IS的作用靶点191个,GO功能富集分析主要涉及蛋白水解、细胞迁移的正调控等生物过程;KEGG通路分析提示PI3K-Akt、MAPK、FOXO等信号通路在Sal治疗IS过程中发挥关键作用;分子对接结果显示,Sal与对接的核心靶点均有良好的结合能力;动物实验结果表明,Sal可以明显改善MCAO大鼠的神经功能损伤,明显增加缺血侧Nissl阳性细胞的数量,促进核心靶点VEGF、EGFR和IGF1蛋白的表达,抑制IL-6和MMP9蛋白的表达。结论Sal能够穿透BBB,进入中枢神经系统发挥药理作用;网络药理学预测了Sal治疗IS的核心靶点,包括VEGFA、EGFR、IL-6、MMP9、IGF1、CASP3、ALB、SRC,通过动物实验验证了Sal对部分核心靶点的作用,为今后临床进一步探讨Sal治疗IS的作用机制提供参考依据。

关键词：红景天苷缺血性脑卒中网络药理学分子对接 VEGF

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