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粉尘螨各发育阶段外部形态扫描电镜观察

中国血吸虫病防治杂志 2022年第2期34卷 179-182页

作者：湛孝东姚润汪梅青蒋峰郭伟汤非凡王澜李朝品皖南医学院医学寄生虫学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室安徽芜湖241002

目的观察粉尘螨(Dermatophagoides farinae)不同发育阶段的形态特征。方法将纯培养的粉尘螨分离后,应用扫描电子显微镜观察卵、幼螨、若螨、成螨等不同发育阶段外部形态。结果粉尘螨卵呈长椭圆形。幼螨足3对,若螨足4对,生殖孔不发达... 详细信息

目的观察粉尘螨(Dermatophagoides farinae)不同发育阶段的形态特征。方法将纯培养的粉尘螨分离后,应用扫描电子显微镜观察卵、幼螨、若螨、成螨等不同发育阶段外部形态。结果粉尘螨卵呈长椭圆形。幼螨足3对,若螨足4对,生殖孔不发达,有生殖毛和肛毛。成螨呈长圆形,表皮有细致花纹,足4对;雄成螨足Ⅰ明显加粗,足Ⅲ较足Ⅳ粗长,生殖区位于足Ⅲ、Ⅳ基节间,肛门被一圆形围肛环包围,环内有肛门吸盘和刚毛1对;雌成螨足Ⅲ、Ⅳ较细,长度相等,腹面有1个呈“人”字形的生殖孔,其前端有1个类似月牙形的生殖板,肛门为1个纵形裂缝。结论对粉尘螨进行扫描电镜观察能够清晰了解其形态结构特征,对粉尘螨分类鉴定具有重要意义。

关键词：粉尘螨扫描电镜形态特征

圣草次苷抑制肝细胞癌SMMC-7721细胞的增殖和迁移:基于激活ROS/MAPKs信号轴

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南方医科大学学报 2023年第3期43卷 412-419页

作者：周慧张雨晴甘超范喜瑞戚之琳齐世美皖南医学院活性生物大分子重点实验室安徽芜湖241002 皖南医学院生物化学与分子生物学教研室安徽芜湖241002

目的探讨圣草次苷通过ROS/MAPKs信号轴调控肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的作用机制。方法分别用0、25、50、100、150、200、250、300μg/mL圣草次苷处理肝癌SMMC-7721细胞系24 h后,CCK-8法检测细胞活性;不同浓度的圣草次苷(100、200、30... 详细信息

目的探讨圣草次苷通过ROS/MAPKs信号轴调控肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的作用机制。方法分别用0、25、50、100、150、200、250、300μg/mL圣草次苷处理肝癌SMMC-7721细胞系24 h后,CCK-8法检测细胞活性;不同浓度的圣草次苷(100、200、300μg/mL)处理细胞后,运用划痕实验分别在24、48、72 h检测划痕愈合率,Transwell实验检测细胞迁移率,克隆形成实验检测细胞增殖能力,DAPI染色观察细胞核形态变化,Western blot检测侵袭蛋白E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、MMP-9、凋亡因子PARP和Pro-caspase 3以及MAPKs通路p-JNK、p-P38、p-ERK信号分子;用(分别为2、5、10μmol/L)ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SB203580和P38抑制剂SP600125预先处理细胞2 h,再用200μg/mL圣草次苷处理细胞24 h,Western blot检测凋亡蛋白PARP的切割情况;分别用N-乙酰-半胱氨酸(NAC)(30μmol/L)或圣草次苷(100、200、300μg/mL)单独或共处理细胞后,通过DCFH-DA荧光探针法分别在15、30、60 min检测内源性活性氧(ROS)水平。结果圣草次苷在50μg/mL范围内,对细胞活力基本无影响(P>0.05);圣草次苷能够显著抑制SMMC-7721细胞的划痕愈合(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)和克隆形成(P<0.01),在300μg/mL浓度时作用最显著;圣草次苷明显减少侵袭蛋白N-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白表达量(P<0.01),上调E-cadherin的蛋白表达量(P<0.05);圣草次苷诱导SMMC-7721细胞发生显著的凋亡形态学变化,Pro-caspase 3表达降低,PARP切割增多(P<0.01);圣草次苷在300μg/mL刺激30 min时ROS表达水平较高,NAC(30μmol/L)处理后,细胞内ROS表达水平下降明显;圣草次苷能够显著诱导MAPKs信号途径JNK、P38和ERK的磷酸化(P<0.01),U0126和SB203580能够增强圣草次苷诱导的PAPR切割,而SP600125逆转圣草次苷诱导的PARP切割。结论圣草次苷通过促进细胞内ROS的合成,诱导MAPKs信号通路的活化,调控肝癌细胞系SMMC-7721的增殖、迁移和凋亡。

关键词：圣草次苷 SMMC-7721 ROS MAPKs

屋尘螨变应原Der p2 T细胞表位疫苗对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果

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中国血吸虫病防治杂志 2017年第1期29卷 59-63页

作者：湛孝东段彬彬洪勇李朝品皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室芜湖241002

目的探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(哮喘组)以及Der p2 T细胞融合肽治疗组(Der p2 T组)。用屋尘螨粗提取液致... 详细信息

目的探讨屋尘螨变应原Der p2的4个T细胞表位融合肽对哮喘小鼠的特异性免疫治疗效果。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机分为3组,分别为阴性对照组(PBS组)、阳性对照组(哮喘组)以及Der p2 T细胞融合肽治疗组(Der p2 T组)。用屋尘螨粗提取液致敏小鼠建立哮喘模型,PBS组以PBS缓冲液代替,Der p2 T组分别于小鼠致敏第25~27天雾化致敏前30 min行背部皮下注射相应治疗蛋白。最后一次雾化激发24 h后,收集各组小鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)。采用ELISA法检测小鼠BALF中IFN-γ、IL-4、IL-13以及血清中屋尘螨粗提取液致敏的特异性IgE、IgG2a抗体水平,并行肺组织切片HE染色。结果哮喘组小鼠BALF中的嗜酸性粒细胞数量为(5.57±0.64)×10~5个/ml,高于PBS组[(0.50±0.30)×10~5个/ml](P<0.01)和Der p2 T组[(3.45±0.36)×10~5个/ml](P<0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IFN-γ含量分别为(267.00±21.98)、(155.80±20.53)pg/ml和(234.40±24.46)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中产生了较高的IFN-γ水平(P<0.01)。PBS组、哮喘组、Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量分别为(23.40±5.96)、(53.28±8.26)pg/ml和(30.00±5.50)pg/ml;与哮喘组比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-4含量显著降低(P<0.01)。与哮喘组[(308.10±28.32)pg/ml]比较,Der p2 T组小鼠BALF中IL-13含量[(174.50±25.99)pg/ml]显著下降(P<0.01);PBS组鼠BALF中IL-13含量为(95.99±31.14)pg/ml。肺组织切片显示,Der p2 T组小鼠肺部炎症较哮喘组明显减轻,且炎性细胞浸润显著减少、气道上皮结构重塑。结论 Der p2 T细胞表位融合肽可有效改善哮喘小鼠变态反应性气道及肺部炎症,可作为屋尘螨哮喘患者特异性免疫治疗的候选疫苗。

关键词：屋尘螨 Der p2 T细胞表位哮喘免疫治疗

隐花色素调节cAMP-PKA信号通路及其与疾病关系的研究现状

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生命科学 2020年第11期32卷 1198-1204页

作者：郑伟姚鹏程周志强徐蕾皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室芜湖241002

隐花色素(cryptochrome, CRY)属于隐花色素/光裂解酶蛋白家族(CPF),与光裂解酶具有高度同源性。与光裂解酶不同的是,CRY在哺乳动物中主要起到调节生物钟的作用,并不具备修复紫外损伤DNA的功能。除了参与生物节律的调节外,CRY还可以调节c... 详细信息

隐花色素(cryptochrome, CRY)属于隐花色素/光裂解酶蛋白家族(CPF),与光裂解酶具有高度同源性。与光裂解酶不同的是,CRY在哺乳动物中主要起到调节生物钟的作用,并不具备修复紫外损伤DNA的功能。除了参与生物节律的调节外,CRY还可以调节cAMP-PKA (环磷酸腺苷-蛋白激酶A)信号通路,从而影响多种人类疾病,如炎症、肿瘤、代谢性疾病以及睡眠障碍性疾病的发展。近来,随着研究的深入,CRY在多种疾病中发挥的作用也受到更多人的关注。该文着重介绍CRY调节c AMP-PKA信号通路的作用机制,及其与肿瘤、糖代谢紊乱、炎症以及睡眠障碍等疾病的发生发展的关系。

关键词：隐花色素 cAMP-PKA信号通路肿瘤炎症糖代谢睡眠障碍

芦荟苷可抑制胃癌细胞的增殖和迁移:基于下调STAT3/HMGB1信号通路

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南方医科大学学报 2023年第5期43卷 702-709页

作者：葛菲万梦琪程振宇陈雪雷陈芊伊戚之琳皖南医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室安徽芜湖241002 皖南医学院活性生物大分子安徽省重点实验室安徽芜湖241002 皖南医学院药学院安徽芜湖241002 皖南医学院临床学院安徽芜湖241002

目的通过体内外实验探讨芦荟苷抑制胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法胃癌MGC-803细胞分为对照组、不同浓度芦荟苷(100、200和300μg/mL)处理组。CCK-8、EdU和Transwell实验分别检测细胞活力、细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测HMGB1 m... 详细信息

目的通过体内外实验探讨芦荟苷抑制胃癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法胃癌MGC-803细胞分为对照组、不同浓度芦荟苷(100、200和300μg/mL)处理组。CCK-8、EdU和Transwell实验分别检测细胞活力、细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测HMGB1 mRNA的表达水平;Western blot检测HMGB1,Cyclin B1/E1,E-cadherin,MMP-2/9的表达以及STAT3的磷酸化。JASPAR数据库预测STAT3与HMGB1启动子的结合。MGC-803细胞(2×106/只)注射于BALB/c-Nu小鼠腋下进行皮下植瘤,裸鼠随机分为对照组和芦荟苷组(n=5)。实验组使用芦荟苷50 mg/kg/d腹腔注射,对照组注射等量PBS。每日测量瘤体大小和小鼠质量;提取肿瘤组织蛋白,Western blot检测HMGB1,Cyclin B1/E1,E-cadherin,MMP-2/9和p-STAT3的表达。HE染色检测肝、肺组织中肿瘤转移情况。结果芦荟苷能够浓度依赖性的抑制胃癌细胞活力(P<0.05),不同浓度芦荟苷处理组EdU阳性染色细胞与对照组相比显著减少(P<0.01),芦荟苷处理的胃癌细胞转移能力明显较对照组减弱(P<0.01)。芦荟苷能够浓度依赖性的下调HMGB1 mRNA和蛋白表达(P<0.01),下调Cyclin B1,E1,MMP-2/9,上调E-cadherin,明显抑制p-STAT3。JASPAR数据库预测STAT3能够与HMGB1启动子区域相结合。芦荟苷处理组瘤体大小和质量明显低于对照组(P<0.01)。芦荟苷处理组Cyclin B1/E1,MMP-2/9,HMGB1和p-STAT3的表达与对照组相比明显降低,E-cadherin的表达则显著增强(P<0.01)。结论芦荟苷通过抑制p-STAT3/HMGB1信号途径,抑制胃癌细胞的增殖和迁移。

关键词：芦荟苷高迁移族盒蛋白1 胃癌增殖迁移

金盏花苷E通过ROS介导的JAK1-stat3信号途径抑制LPS诱发的炎症反应

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南方医科大学学报 2019年第8期39卷 904-910页

作者：汤托王胜男蔡田雨程振宇齐世美戚之琳皖南医学院生物化学与分子生物学教研室皖南医学院安徽省活性生物大分子重点实验室安徽芜湖241002

目的探讨金盏花苷E对脂多糖(LPS)诱导炎症反应的抑制作用及可能的分子机制。方法 CCK-8实验检测不同浓度(0、2、4、6、8、10、20、25、30μg/mL)的金盏花苷E对RAW264.7细胞活力的影响;不同浓度的金盏花苷E(0、6、8、10μg/mL)预处理RAW2... 详细信息

目的探讨金盏花苷E对脂多糖(LPS)诱导炎症反应的抑制作用及可能的分子机制。方法 CCK-8实验检测不同浓度(0、2、4、6、8、10、20、25、30μg/mL)的金盏花苷E对RAW264.7细胞活力的影响;不同浓度的金盏花苷E(0、6、8、10μg/mL)预处理RAW264.7细胞2 h,然后用LPS(100 ng/mL)刺激细胞特定的时间,ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β释放;Western blotting检测iNOS、COX-2的表达水平及JAK-stats、MAPKs及NF-кB信号途径的磷酸化;ROS检测试剂盒检测RAW264.7细胞内ROS含量;激光共聚焦实验检测转录因子stat3的核转位。结果 CCK-8结果显示,金盏花苷E浓度在低于20μg/mL时对RAW264.7细胞无明显毒性作用;金盏花苷E浓度依赖性地下调LPS诱导的iNOS和COX-2的表达(P<0.01 vs LPS组);抑制LPS诱导的促炎细胞因子TNF-α及IL-1β的释放,且1 0μg/mL组抑制作用尤为显著(P<0.01 vs LPS组);抑制LPS诱导的JAK1-stat3信号途径激活及stat3的核转位;降低LPS诱发的ROS产生(P<0.01 vs LPS组)。结论金盏花苷E通过抑制ROS介导的JAK1-stat3信号途径,抑制LPS诱导的炎症反应。

关键词：金盏花苷E 脂多糖 RAW264.7细胞炎症 JAK1-stat3信号途径

萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡

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南方医科大学学报 2022年第2期42卷 201-206页

作者：吴旭何俊杰李萍王毅颜亮马金珠皖南医学院活性生物大分子安徽省重点实验室安徽芜湖241002 南京大学化学化工学院江苏南京210000

目的探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮(XX0335)抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法实验分为4组:对照组(含0.1%DMSO的培养液)、另外3组为不同浓度(6.25、12.5、25μg/mL)的XX0335(该化合物需DMSO溶解,但工作浓度中DMS... 详细信息

目的探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮(XX0335)抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法实验分为4组:对照组(含0.1%DMSO的培养液)、另外3组为不同浓度(6.25、12.5、25μg/mL)的XX0335(该化合物需DMSO溶解,但工作浓度中DMSO的终浓度均低于0.1%)。通过CCK-8和EdU实验分别测定各组对A549细胞活力及增殖的影响,通过流式细胞术测定上述浓度的XX0335对A549细胞凋亡及周期的影响;通过免疫印迹实验测定不同浓度的XX0335对增殖相关蛋白Akt、mTOR、Akt/mTOR磷酸化水平、凋亡相关蛋白cleaved PARP及细胞周期相关蛋白CyclinD1表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验探究XX0335对A549增殖的影响,动物实验使用4周龄小鼠共10只,随机均分为2组。将2×106A549细胞植入小鼠左侧腋下,待26 d后瘤体长径长至1 cm时,对照组小鼠注射无菌生理盐水(200μL),对实验组注射化合物XX0335(12.5μg/mL,200μL),隔天注射1次,共5次之后取肿瘤观察每组瘤体大小。结果CCK-8实验表明,A549细胞活力在XX0335的作用下比对照组呈剂量依赖性下降(P实验发现XX0335能显著抑制A549细胞增殖(P实验结果显示注射XX0335后肿瘤体积明显减小(P<0.01)。结论XX0335抑制了肺癌A549细胞增殖并诱导细胞发生了凋亡,且细胞周期阻滞于G1期,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。

关键词：萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮细胞增殖细胞凋亡 Akt/mTOR信号通路

高校实验动物信息化管理平台和虚拟仿真实验教学中心建设构想

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医学动物防制 2023年第10期39卷 981-984页

作者：孙洪计沙蕊王惠王佳慧裴文俊李祥子皖南医学院活性生物大分子研究安徽省重点实验室安徽芜湖241002 皖南医学院弋矶山医院皖南医学院医学信息学院

建立实验动物信息化管理平台和虚拟仿真实验教学中心是新时代高等医学院校高质量发展必不可少的重要环节,可有效提升其管理效率和服务水平,实现实验动物资源信息实时开放存取和协同共享;同时打破传统实验教学方式,突破时空限制,拓展实... 详细信息

建立实验动物信息化管理平台和虚拟仿真实验教学中心是新时代高等医学院校高质量发展必不可少的重要环节,可有效提升其管理效率和服务水平,实现实验动物资源信息实时开放存取和协同共享;同时打破传统实验教学方式,突破时空限制,拓展实验教学空间,激发学生学习的积极性,提升学生的实践能力和自主创新能力,为培养符合社会发展和需求的高素质医学专业技术人才提供有力支撑。

关键词：实验动物信息化虚拟仿真实验教学调查

芦荟苷通过降低热休克蛋白70的表达增强顺铂诱导的胃癌细胞凋亡

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中国病理生理杂志 2022年第11期38卷 2021-2027页

作者：程振宇陈雪雷葛菲程锦吴晓明戚之琳皖南医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室活性生物大分子安徽省重点实验室安徽芜湖241002 皖南医学院临床医学院安徽芜湖241002 皖南医学院药学院安徽芜湖241002

目的:探讨芦荟苷能否通过降低热休克蛋白70(HSP70)的表达,增强顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。方法:胃癌HGC-27细胞分为对照组、200 mg/L芦荟苷组、5 mg/L顺铂组和两者联合组(200 mg/L芦荟苷+5 mg/L顺铂)。DAPI染色和流式细胞术分别检测细胞... 详细信息

目的:探讨芦荟苷能否通过降低热休克蛋白70(HSP70)的表达,增强顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。方法:胃癌HGC-27细胞分为对照组、200 mg/L芦荟苷组、5 mg/L顺铂组和两者联合组(200 mg/L芦荟苷+5 mg/L顺铂)。DAPI染色和流式细胞术分别检测细胞凋亡形态改变及凋亡率;RT-qPCR检测HSP70 mRNA的表达水平;Western blot检测HSP70和凋亡相关蛋白的表达;免疫沉淀(IP)检测HSP70的泛素化水平。结果:DAPI染色结果显示,与药物单独刺激组相比,联合组细胞核浓缩与核碎裂现象显著增强。流式细胞术分析细胞凋亡率表明,顺铂组细胞凋亡率为16.71%,显著高于对照组的6.95%(P<0.01)。虽然芦荟苷组与对照组相比,凋亡率无显著差异,但是其与顺铂联合作用后,细胞凋亡率为33.74%,显著高于顺铂和芦荟苷单独刺激组(P<0.01)。RT-qPCR显示,芦荟苷能够显著下调顺铂诱导的HSP70 mRNA表达(P<0.01)。Western blot结果表明,联合组cleaved PARP和cleaved caspase-3/-7的表达均高于单独作用组(P<0.05或P<0.01),pro-caspase-3的水平则呈现出相反的变化(P<0.01);芦荟苷组与联合组HSP70的蛋白表达与对照组相比显著下降(P<0.01),而顺铂组其表达则无显著变化。IP结果显示,顺铂可诱导HSP70泛素化,但芦荟苷对HSP70的泛素化水平并无显著影响。结论:芦荟苷通过降低HSP70的表达,增强顺铂诱导的胃癌细胞凋亡。

关键词：芦荟苷顺铂热休克蛋白70 细胞凋亡胃癌