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大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌MLVA法基因分型研究

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中国人兽共患病学报 2015年第10期31卷 923-926页

作者：聂恒王旭东吴利先大理学院基础医学院微生物学与免疫学教研室大理671000

目的探讨MLVA基因分型法在云南大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌基因分型中的运用,初步研究其基因型特征。方法选取大理地区61株合并HIV双重感染者结核分枝杆菌临床分离株,采用聚合酶链反应(PCR)分别对VNTR位点进行检测分析,应用B... 详细信息

目的探讨MLVA基因分型法在云南大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌基因分型中的运用,初步研究其基因型特征。方法选取大理地区61株合并HIV双重感染者结核分枝杆菌临床分离株,采用聚合酶链反应(PCR)分别对VNTR位点进行检测分析,应用BioNumerics(6.6)软件进行聚类分析。结果共对61株合并HIV双重感染者的结核分枝杆菌的15个VNTR位点进行检测,呈现出明显的基因多态性。各个位点的分辨能力不同,其中MIRU26(0.839)最高,MIRU4(0.341)最低。经聚类分析,61株双重感染结核分枝杆菌菌株可分为5个基因群,61个基因型,以Ⅰ型占比例最大占51.6%(32/61);H37Rv减毒株在Ⅱ型。结论大理地区合并HIV双重感染者结核分枝杆菌VNTR基因存在明显多态性,主要流行菌群为北京家族基因型。

关键词：结核分枝杆菌基因分型双重感染 HIV MLVA

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LncRNA在固有免疫应答中的调控作用

医学研究杂志 2021年第12期50卷 21-24页

作者：宁晓县申元英郭乐大理大学基础医学院医学微生物学与免疫学教研室 671000

固有免疫是机体抵御病原微生物入侵的第一道防线,主要通过固有免疫细胞表面的模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)识别病原体/损伤/危险相关分子模式(pathogen/damage/danger associated molecular patterns,PAMPs/DAMPs),引起一系列的免疫反应,参与机体抗感染、抗肿瘤等。长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)作为非编码RNA领域中的成员之一,与固有免疫应答密切相关。现就LncRNA在固有免疫应答调控中的作用进行综述。

关键词：固有免疫 LncRNA 免疫调控

大蒜素对白色念珠菌感染小鼠神经内分泌免疫系统调节作用的研究(英文)

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天然产物研究与开发 2012年第7期24卷 888-891,919页

作者：熊延靖董群皖南医学院微生物学与免疫学教研室芜湖241002

本研究旨在探讨大蒜素对白色念珠菌感染小鼠神经内分泌免疫系统(NEI)的调节作用。将小鼠随机分为三组:正常对照组、模型组、大蒜素组。除正常对照组外,模型组、大蒜素组分别建立小鼠白色念珠菌感染模型。大蒜素组小鼠给予大蒜素灌胃,其... 详细信息

本研究旨在探讨大蒜素对白色念珠菌感染小鼠神经内分泌免疫系统(NEI)的调节作用。将小鼠随机分为三组:正常对照组、模型组、大蒜素组。除正常对照组外,模型组、大蒜素组分别建立小鼠白色念珠菌感染模型。大蒜素组小鼠给予大蒜素灌胃,其余组给予等量生理盐水。连续用药14 d后,各组小鼠取血测定促肾上腺激素(ACTH)、皮质酮(CORT)、β-内啡肽(β-EP)、5-羟色胺(5-HT)的水平,测定胸腺指数及脾脏淋巴细胞增殖活性。实验结果显示,模型组小鼠NEI功能发生紊乱,与正常对照组相比,ACTH、CORT、β-EP水平均明显升高,5-HT、胸腺指数及脾脏淋巴细胞增殖活性均明显下降,差异有显著性(P<0.05)。而大蒜素组小鼠ACTH、CORT、β-EP水平较之模型组明显下降,5-HT、胸腺指数及脾脏淋巴细胞增殖活性明显升高,差异有显著性(P<0.05)。综上所述,本研究提示大蒜素对白色念珠菌感染小鼠紊乱的NEI具有明显的调节作用。

关键词：白色念珠菌 NEI 大蒜素

小檗碱通过调控IGF-1R信号通路抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的实验

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肿瘤防治研究 2018年第6期45卷 362-366页

作者：李赛赛郭晓芳朱小飞豆巧华新乡医学院基础医学院医学微生物学教研室新乡453003 新乡医学院医学检验学院免疫学检验教研室新乡453003

目的检测小檗碱对食管癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞的增殖抑制作用;碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色法检测细胞周期进程;Annexin V-FITC和PI双染法结合流式细胞技术检测小檗碱的凋亡诱导作用;... 详细信息

目的检测小檗碱对食管癌细胞增殖、周期和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞的增殖抑制作用;碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色法检测细胞周期进程;Annexin V-FITC和PI双染法结合流式细胞技术检测小檗碱的凋亡诱导作用;Western blot技术检测小檗碱对胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)的活化及下游主要信号分子AKT和p44/42MAPK(ERK)磷酸化水平的影响。结果小檗碱在体外可浓度依赖性地抑制四种食管癌细胞系的增殖,且其IC50值与细胞表面IGF-1R的表达水平呈负相关。小檗碱可使细胞阻滞在G2/M期。细胞凋亡实验结果显示,小檗碱可浓度依赖性地诱导食管癌细胞发生凋亡,并且在相同浓度下KYSE450细胞(IGF-1R高表达)的凋亡率显著高于KYSE150细胞(IGF-1R低表达)。Western blot结果显示,小檗碱处理可显著抑制IGF-1R的磷酸化,并抑制AKT和ERK的活化,且抑制作用随着小檗碱浓度的增加而增强。结论小檗碱可通过对IGF-1R及其介导的下游信号通路的调控来发挥抑制食管癌细胞增殖、阻断细胞周期进程以及诱导食管癌细胞凋亡的作用。

关键词：小檗碱食管癌细胞胰岛素样生长因子1受体细胞凋亡

鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的原核表达及其对巨噬细胞凋亡的影响

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中国病原生物学杂志 2020年第11期15卷 1257-1261页

作者：翟凯新刘丽婷陈晓文陈越高婧华吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上... 详细信息

目的构建鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白的重组质粒并诱导表达和纯化,观察其对Ana-1系巨噬细胞凋亡的影响。方法在GenBank中查找到鸟分枝杆菌编码PPE25-MAV蛋白的MAV-2928基因序列,合成全基因并构建质粒。将质粒亚克隆至表达载体pET-32a(+)上,构建重组表达质粒pET-32a-ppe25,转入感受态细胞BL21(DE3)后,通过IPTG诱导表达融合蛋白PPE25-MAV。用Ni Resin FF纯化蛋白,并作用于巨噬系Ana-1细胞,流式细胞术(FCM)检测巨噬细胞凋亡率并且分析其变化。结果鸟分枝杆菌PPE25-MAV蛋白表达载体构建成功,转化至BL21(DE3)后经IPTG诱导表达约59ku的蛋白,与预期大小相符;Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的PPE25-MAV蛋白作用小鼠巨噬系Ana-1细胞,与空白对照组相比,作用2h后细胞的早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05),细胞的晚期凋亡率和总凋亡率在0.5μg/ml与1μg/ml时均低于空白组(P学意义;作用10h细胞的早期凋亡率仅在5μg/ml时升高(P学意义(P>0.05),细胞晚期凋亡率和总凋亡率在2μg/ml和5μg/ml时显著降低(P学意义(P>0.05)。结论重组质粒诱导表达的PPE25-MAV蛋白存在于上清和包涵体中,但主要以包涵体形式表达。纯化的PPE25-MAV蛋白对巨噬细胞凋亡有抑制作用,且主要作用于巨噬细胞的晚期凋亡阶段。

关键词：鸟分枝杆菌 PPE25-MAV蛋白 Ana-1巨噬细胞细胞凋亡

非结核分枝杆菌的毒力因子及免疫机制研究进展

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中国病原生物学杂志 2020年第5期15卷 609-611,615页

作者：陈晓文吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)的病例有逐年呈上升的趋势,尤其是合并HIV感染的发病率。由于NTM菌种多样,毒力因子多样,且不同菌种毒力与耐药性不同,分为致病性和非致病性两类。致病性分枝杆菌只要寄生于巨噬细胞内,... 详细信息

非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM)的病例有逐年呈上升的趋势,尤其是合并HIV感染的发病率。由于NTM菌种多样,毒力因子多样,且不同菌种毒力与耐药性不同,分为致病性和非致病性两类。致病性分枝杆菌只要寄生于巨噬细胞内,因此目前研究宿主对NTM的免疫反应以及NTM如何能够在宿主巨噬细胞防御机制中生存对未来寻找有效治疗NTM的新型疗法至关重要。本文将对NTM毒力因子及免疫机制做一综述。

关键词：非结核分枝杆菌免疫应答巨噬细胞综述

大理地区HIV相关鸟结核分枝杆菌MLVA基因分型研究

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中国病原生物学杂志 2020年第8期15卷 929-933页

作者：翟凯新刘丽婷陈晓文陈越高婧华吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

目的对云南大理地区HIV相关的12株非结核分枝杆菌(non-Tuberculous mycobacteria,NTM)进行鉴定,了解其菌种构成;探讨MLVA法在大理地区HIV相关鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MAV)基因分型的应用,了解MAV基因型特征和耐药情况。方法对... 详细信息

目的对云南大理地区HIV相关的12株非结核分枝杆菌(non-Tuberculous mycobacteria,NTM)进行鉴定,了解其菌种构成;探讨MLVA法在大理地区HIV相关鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MAV)基因分型的应用,了解MAV基因型特征和耐药情况。方法对初步鉴定的NTM通过16SrRNA、hsp65和rpoB靶基因片段测序分析进行菌种鉴定;对鉴定后的HIV相关MAV进行MLVA基因分型。采用MLVA法选取15个数目可变串联重复序列(VNTR)特异位点,运用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳技术检测MAV的DNA指纹图谱。运用Quantity One和BioNumerics(6.6)软件对结果进行数字化处理,采用UPGMA法和MST法进行聚类分析;通过比例法对HIV相关MAV进行6种二线抗结核药物的药敏试验。结果大理地区12株HIV相关NTM中,9株为MAV,1株为帕拉分枝杆菌,1株为戈登菌,1株为脓肿分枝杆菌。9株HIV相关MAV通过MLVA法进行基因分型,15个VNTR位点呈多态性,不同位点的HGDI值存在差异,其中MATR-14为0.75,MATR-14、MATR-9等13个位点均≥0.5。9株双感MAV经UPGMA法聚类分析分为3个基因群、8个基因型,用MST法聚类分析则分为3个簇;HIV相关MAV对丙硫异烟胺(TH1321)均敏感,阿米卡星(AK)耐药率为100%(9/9),左氧氟沙星(LFX)耐药率为77.8%(7/9),莫西沙星(MFX)耐药率为66.7%(6/9),卷曲霉素(CPM)耐药率为55.6%(5/9),利福布丁(RBU)耐药率为11.1%(1/9)。结论大理地区12株HIV相关NTM分为MAV、帕拉分枝杆菌和戈登菌,其中以MAV占多数。MATR-VNTR分析,不同MAV菌株同一位点的基因片段差异明显,有多态性。MATR-14、MATR-9等13个位点分辨力高,可作为大理地区HIV相关MAV的基因分型首选位点;MAV对丙硫异烟胺(TH1321)敏感,对阿米卡星耐药率高,而且出现多药耐药。

关键词：鸟分枝杆菌菌种鉴定非结核分枝杆菌可变串联重复序列药敏试验

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嗜血分枝杆菌病的研究进展

中国病原生物学杂志 2020年第5期15卷 605-608页

作者：陈越王国富吴利先大理大学基础医学院微生物与免疫学教研室云南大理671000

嗜血分枝杆菌属非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM),主要感染免疫受损的成年人以及免疫功能正常的儿童。病变累及皮肤、淋巴结、四肢等部位。但至今对嗜血分枝杆菌的病原学检测、流行病学研究、诊断以及治疗标准等方面的... 详细信息

嗜血分枝杆菌属非结核分枝杆菌(Nontuberculous mycobacteria,NTM),主要感染免疫受损的成年人以及免疫功能正常的儿童。病变累及皮肤、淋巴结、四肢等部位。但至今对嗜血分枝杆菌的病原学检测、流行病学研究、诊断以及治疗标准等方面的认识仍存在缺陷,常导致临床的误诊、漏诊、延误治疗,为此对嗜血分枝杆菌做一综述。

关键词：嗜血分枝杆菌非结核分枝杆菌综述

学生参与式医学微生物学实验示教品的制作与应用

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基础医学教育 2022年第2期24卷 100-102页

作者：宋姗姗杨艾华王小敏王微微遵义医科大学基础医学院医学微生物学与免疫学实验室遵义563000 遵义医科大学基础医学院微生物学教研室

示教品作为教学资源在实验教学中发挥积极作用,但在实验示教品的制作过程中,学生的参与度很低。因此,项目组秉承以学生为中心的教学理念,为充分发挥学生的主观能动性,共同完成了由学生全程参与的七个生化实验示教品的制作,并将这些示教... 详细信息

示教品作为教学资源在实验教学中发挥积极作用,但在实验示教品的制作过程中,学生的参与度很低。因此,项目组秉承以学生为中心的教学理念,为充分发挥学生的主观能动性,共同完成了由学生全程参与的七个生化实验示教品的制作,并将这些示教品作为实验教学资源应用于医学微生物学实验课。问卷调查显示,该教学模式提高了学生的实验操作能力、分析与处理实验结果的能力以及团队协作能力,为促进学生全面发展提供了宝贵意见。

关键词：医学微生物学实验教学参与式教学