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一起聚集性疫情来源的间日疟原虫分子溯源分析

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中国热带医学 2024年第4期24卷 377-381页

作者：刘耀宝徐岁朱国鼎胡向科庄世锋高琪国家卫生健康委员会寄生虫病预防和控制技术重点实验室江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室江苏省医学重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所江苏无锡214064 南京医科大学公共卫生学院全球健康中心江苏南京211166 湖南省疾病预防控制局湖南长沙410008 湖南省疾病预防控制中心湖南长沙410153

目的对一起聚集性疫情中的间日疟原虫样本进行基因分型和分子溯源分析,为病例来源的判定提供参考依据。方法收集2018年6—7月湖南省隆回县一起间日疟聚集性疫情中4例患者的血样进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)虫... 详细信息

目的对一起聚集性疫情中的间日疟原虫样本进行基因分型和分子溯源分析,为病例来源的判定提供参考依据。方法收集2018年6—7月湖南省隆回县一起间日疟聚集性疫情中4例患者的血样进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)虫种鉴定,并采用9个微卫星分子标记对4个样本的虫株进行基因分型,基于亚太地区消除疟疾网络间日疟原虫微卫星基因型数据库(VivaxGEN-MS)对不同国家和地区的间日疟原虫株进行种群遗传学STRUCTURE分析,判定虫株所属的遗传亚群和地理来源。结果经qPCR鉴定,4个病例均为间日疟原虫感染,4个病例样本的9个微卫星位点均成功分型,4个样本的基因单体型不同,其中病例1、病例3和病例4为单一克隆虫株感染,病例2为多克隆虫株感染。用STURCTURE分析把所有间日疟原虫样本分成2个遗传亚群(K=2)时,4例湖南样本被划分为热带株遗传亚群(来源于埃塞尔比亚、伊朗、不丹、马来西亚、印度尼西亚和中国南部的虫株);用STURCTURE分析把所有间日疟原虫样本分成4个遗传亚群(K=4)时,4例湖南样本被划分为南亚/东南亚株遗传亚群(来源于不丹、马来西亚、印度尼西亚和中国南部的虫株)。结论分子溯源分析结果不支持该起疫情中4例间日疟原虫株的感染来源为中国中部种群,疟原虫分子溯源技术可为疟疾消除和消除后疟疾病例感染来源的判定提供客观证据。

关键词：消除疟疾间日疟原虫微卫星标记分子溯源

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日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白重组抗原的免疫保护性研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2005年第2期23卷 97-99,105页

作者：干小仙曾肖芃王越丁建祖沈慧英沈丽英樊晋江浙江省医学科学院寄生虫病研究所杭州310013 澳大利亚昆士兰医学研究所昆士兰

目的探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白(SVLBP)重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。方法用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原,以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂(Ni-NTA)亲和层析法纯化制备S... 详细信息

目的探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白(SVLBP)重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值。方法用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原,以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂(Ni-NTA)亲和层析法纯化制备SVLBP重组抗原;将纯化的重组抗原加福氏佐剂经皮下免疫C57BL/6小鼠,每隔2周免疫1次,在第3次免疫后10d,经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴35±1条,感染后45d剖杀,计数检获虫数和每克肝虫卵数(LEPG)。小鼠在免疫前和攻击感染后分别采眶窦血,用ELISA测定特异性IgG及其亚群抗体水平。结果相对于佐剂对照组,免疫组小鼠的减虫率为33.4%,减卵率为47.6%;免疫后小鼠产生高水平的特异性IgG(>1:6400);抗体亚类检测结果显示,免疫组小鼠IgG2a、IgG2b、IgG1明显高于免疫前和佐剂对照组。结论日本血吸虫皮层蛋白SVLBP重组抗原能诱导小鼠产生一定的保护性免疫,是潜在的疫苗候选抗原分子。

关键词：极低密度脂蛋白重组抗原结合蛋白保护性研究 C57BL/6小鼠日本血吸虫尾蚴 ELISA测定次氮基三乙酸特异性IgG 免疫保护性亲和层析法 IgG2a IgG2b 保护性免疫潜在价值候选疫苗半乳糖苷皮下免疫福氏佐剂攻击感染

日本血吸虫病人群获得性免疫与再感染IV.治后9个月人群特异性抗体水平与再感染

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中国血吸虫病防治杂志 2001年第1期13卷 4-8页

作者：李岳生李毅张新跃喻鑫玲彭先平 AGP.Ross DP.McManus 湖南省寄生虫病研究所岳阳414000 澳大利亚昆士兰大学和昆士兰医学研究所分子寄生虫学研究室

目的　了解血吸虫病洲岛型流行区居民血清抗 AWA、重组 PMY和 Teg Ag的抗体亚类水平及其与居民再感染的关系。方法　 137例行 5 0 mg/ kg吡喹酮顿服。 7周后粪检 ,阳性者再次治疗 ,4周后经再次粪检证实为阴性。经 1个感染季节后再粪检... 详细信息

目的　了解血吸虫病洲岛型流行区居民血清抗 AWA、重组 PMY和 Teg Ag的抗体亚类水平及其与居民再感染的关系。方法　 137例行 5 0 mg/ kg吡喹酮顿服。 7周后粪检 ,阳性者再次治疗 ,4周后经再次粪检证实为阴性。经 1个感染季节后再粪检并采血 ,用 EL ISA法检测抗 3种抗原的抗体亚类水平。结果　观察对象治前感染率 2 8.5 % ,治后再感染率 6 .6 % ;抗 AWA的 Ig G4和 Ig A峰值出现在 2 0～ 2 9岁 ,Ig E的峰值在 40～ 49岁 ,Ig G2 则在 2 0～ 2 9岁和 40～ 49岁 ,抗 AWA的 Ig E与 Ig G4的水平呈正相关 ;男性抗 AWA和 PMY的抗体亚类水平显著高于女性 ;感染状态不同的 4组中 ,再感染组抗 AWA的特异性总 Ig G和 Ig G4较其他 3组高。结论　特异性抗体水平与年龄之间没有明显关系 ;抗 AWA的 Ig G4可能在易感个体内起着一种封闭性抗体的作用 ;抗 AWA的 Ig E反应伴随着 Ig G4的反应。

关键词：抗体亚型免疫日本血吸虫重组基因抗原再感染

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虱目裂化线粒体基因组研究进展

遗传 2013年第7期35卷 847-855页

作者：董文鸽郭宪国金道超薛士鹏秦凤 Simon Song Stephen C.Barker Renfu Shao 贵州大学昆虫研究所贵州省山地农业病虫害重点实验室贵阳550025 大理学院病原与媒介生物研究所大理671000 南阳医学高等专科学校南阳473061 昆士兰大学生物与化学学院寄生虫学研究室澳大利亚昆士兰阳光海岸大学科学教育工程学院种群生态学研究中心澳大利亚昆士兰

虱目是哺乳类和鸟类体表的专性寄生虫。在虱科、阴虱科、长角鸟虱科和兽羽虱科的某些寄生虱种中发现了线粒体基因组裂化现象,其线粒体基因组裂化成了多个环状的线粒体染色体,如体虱(Pediculushumanus)、头虱(pediculus capitis)和阴虱(P... 详细信息

虱目是哺乳类和鸟类体表的专性寄生虫。在虱科、阴虱科、长角鸟虱科和兽羽虱科的某些寄生虱种中发现了线粒体基因组裂化现象,其线粒体基因组裂化成了多个环状的线粒体染色体,如体虱(Pediculushumanus)、头虱(pediculus capitis)和阴虱(Pthirus pubis)的线粒体基因组分别裂化形成20个、20个和14个微环染色体。微环染色体可能是基因删除和同源重组的结果,关于线粒体基因组裂化的具体原因和机制,目前并不清楚,推测可能是进化选择或随机遗传漂变的结果或与线粒体单链DNA结合蛋白的缺失有关。鉴于线粒体基因组裂化研究对于深入理解线粒体的起源和进化方面具有重要意义,文章以虱目裂化线粒体基因组为主线,列举了动物裂化线粒体基因组和裂化特征,阐述了虱目裂化线粒体基因组的研究现状,分析了虱目线粒体基因组裂化的类型、原因和机制,并对该领域未来的研究方向进行了展望。

关键词：虱目线粒体基因组染色体进化基因组裂化

恶性疟原虫11.1基因3个重复片段的克隆及表达(英文)

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第1期19卷 15-18页

作者：胡薇山崎浩冯正杨柏林许学年王聚君中国预防医学科学院寄生虫病研究所上海200025 日本顺天堂大学医学院寄生虫学研究室东京1130033

目的　克隆和表达恶性疟原虫 (Pf) 11 1基因产物中的 3个重复片段 3R、6R和 9R。方法　利用设计的引物从培养的恶性疟原虫 3D7株的基因组DNA中扩增出 3个重复片段。PCR产物被克隆入pT7载体中以进双向测序。测序结果用GENETYX MAC软件进... 详细信息

目的　克隆和表达恶性疟原虫 (Pf) 11 1基因产物中的 3个重复片段 3R、6R和 9R。方法　利用设计的引物从培养的恶性疟原虫 3D7株的基因组DNA中扩增出 3个重复片段。PCR产物被克隆入pT7载体中以进双向测序。测序结果用GENETYX MAC软件进行分析。扩增的片段亚克隆入pET32a(+ )或pET32b(+ ) ,并由IPTG诱导在大肠杆菌BL2 1中表达重组蛋白。结果　用PCR方法成功地扩增出 3R、6R和 9R片段 ,大小分别为 5 5 2、630和44 4bp。测序结果显示 ,3D7株的Pf11 1基因比PaloAlto株的Pf11 1基因多 4个 3AA和 1个 6AA重复单元 ,两原虫株的 3R和 6R片段的同源性分别 92 8%和 95 1%。扩增出的 9R片段含有 13个 9AA重复单元。在BL2 1菌株中表达出三个重组蛋白 ,分子量分别为 45、60和 42kDa。结论　用PCR方法分别获得 3R、6R和 9R重复片段并在大肠杆菌中成功表达。 3D7株的Pf11

关键词：恶性疟原虫阻断传播疫苗 Pf11.1 聚合酶链反应基因片段克隆基因表达

日本血吸虫重组22kD表膜蛋白免疫水牛的效果观察

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中国血吸虫病防治杂志 2001年第2期13卷 90-93,F003页

作者：周金春易新元曾宪芳曾庆仁张顺科 GJ Waine DP McManus 湖南医科大学寄生虫学教研室长沙410078 澳大利亚昆士兰医学研究所

目的　用重组日本血吸虫 2 2 k D表膜蛋白 (r Sj2 2 )免疫水牛 ,检测特异性 Ig G抗体的应答水平 ,并观察抗血吸虫的保护效果。方法　用抗原 (r Sj2 2 )加佐剂 (Quil- A)肌肉注射免疫水牛 ,以10 0 0条日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,感染后 5 ... 详细信息

目的　用重组日本血吸虫 2 2 k D表膜蛋白 (r Sj2 2 )免疫水牛 ,检测特异性 Ig G抗体的应答水平 ,并观察抗血吸虫的保护效果。方法　用抗原 (r Sj2 2 )加佐剂 (Quil- A)肌肉注射免疫水牛 ,以10 0 0条日本血吸虫尾蚴攻击感染 ,感染后 5 5 d剖杀 ,计算减虫和减卵率。用免疫印斑和 EL ISA方法测定抗体反应。结果　免疫组每头牛血清均能特异地识别 r Sj2 2 k D抗原和成虫抗原中的 2 2 k D分子 ,特异性 Ig G抗体滴度达 1:2 5 6 0 0。与 Quil- A对照组相比 ,减虫率仅 8.5 % ,肝卵 EPG减少12 .3% ,粪卵 EPG减少 2 6 .8% ,但均无统计学意义。结论　用 r Sj2 2 k D抗原免疫水牛诱导的特异性Ig

关键词：日本血吸虫表膜蛋白免疫水牛

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Chinese Medical Journal 2001年第8期114卷 54-57,107页

作者：陈观今郭虹吕芳丽郑焕钦中山医科大学寄生虫学研究所广州510089

目的　构建含编码弓形虫棒状体蛋白 1基因的重组质粒 ,将该重组质粒DNA免疫小鼠 ,观察其所诱导的免疫保护性反应。方法　用PCR技术从弓形图ZS2分离株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白 1(ROP1)的基因片段 ,重组入pUC18 ROP1中的ROP1外源... 详细信息

目的　构建含编码弓形虫棒状体蛋白 1基因的重组质粒 ,将该重组质粒DNA免疫小鼠 ,观察其所诱导的免疫保护性反应。方法　用PCR技术从弓形图ZS2分离株的基因组DNA中扩增编码棒状体蛋白 1(ROP1)的基因片段 ,重组入pUC18 ROP1中的ROP1外源基因片段经酶切 ,连接等反应 ,亚克隆入pcDNA3真核表达载体 ,再经含氨苄LB培养基筛选 ,酶切 ,PCR鉴定 :获取阳性克隆并大量制备 ,肌注法DNA免疫BALB/C小鼠 ,每只鼠 10 0 μg ,两周后同量加强免疫一次 ,以pcDNA3空质粒及生理盐水组为对照。分别于加强免疫后 30d ,5 0d ,70d ,用MTT法测定小鼠睥脏NK细胞活性 ,T淋巴细胞增殖活性 ,间接免疫荧光法记数T细胞亚群及ELISA检测血清IgG抗体。结果　从ZS2株基因DNA中扩增出特异的ROP1基因片段并经TaqI酶切鉴定 :克隆成功pcROP1重组质粒。用该质粒免疫小鼠 30天后 ,脾脏明显增大 ;三次测定结果免疫组脾T淋巴细胞增值活性明显高于生理盐水及空质粒对照组。NK细胞杀伤活性免疫组钧高于对照组。T细胞亚群 ,CD4 + 细胞数与对照组相比 ,无明显变化 ,而CD8+ 细胞数显著增高 (P <0 0 5 )。血清抗体IgG 70d内检测结果 8,与对照相比 ,无明显增高 ;而免疫后 90d检测 ,明显增高。抗体滴度为本 :1∶10 0。结论　构建成功弓形虫pcROP1重组质粒 ,

关键词：弓形虫棒状体蛋白1 pcROP1重组质粒克隆 DNA免疫

日本血吸虫Mf1和胞质氨基肽酶基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定

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中国人兽共患病杂志 2003年第2期19卷 38-41页

作者：王庆林易新元曾宪芳罗新松何永康彭兴华 Larry Me Reynolds 中南大学湘雅医学院寄生虫学研究室湖南省寄生虫病研究所中南大学湘雅医学院分子生物学中心 New England Biolabs

目的　在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Mf1蛋白和胞质氨基肽酶 (cytosolaminopeptidase ,CA) ,并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法　将SjMf1基因和SjCA基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3载体 ,转化入感受态... 详细信息

目的　在大肠杆菌中高效表达日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)Mf1蛋白和胞质氨基肽酶 (cytosolaminopeptidase ,CA) ,并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法　将SjMf1基因和SjCA基因亚克隆至 pGEX - 5X - 3载体 ,转化入感受态大肠杆菌ER2 688,在IPTG诱导下进行表达 ,表达产物免疫小鼠 ,免疫用抗原剂量为 50 μg/次 /鼠 ,免疫 3次后进行攻击感染 ,观察诱导产生的减虫效果。结果　在IPTG诱导下 ,表达载体中的SjGST基因与重组的SjMf1基因和SjCA基因在大肠杆菌中获得了高效表达 ,形成SjGST -Mf1和SjGST -CA融虫蛋白 ,用这两种融合蛋白免疫小鼠 ,分别诱导产生了 39 1 5 %和 2 6 57%的减虫率。结论　SjMf1和SjCA基因亚克隆至pGEX - 5X - 3载体后可在大肠杆菌中高效表达。

关键词：日本血吸虫 Mf1 胞质氨基肽酶基因亚克隆表达免疫保护测定

日本血吸虫未成熟卵单链抗体库的构建、筛选及初步应用

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生物化学与生物物理进展 2008年第8期35卷 921-928页

作者：何卓汪世平肖小芹曾少华刘明社李林周帅锋中南大学湘雅医学院寄生虫学系长沙410078 湖南师范大学第三附属医院长沙410006 山西省长治医学院寄生虫学教研室长治046000

运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28k... 详细信息

运用噬菌体展示技术构建日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA)单链抗体(scFv)表达文库,以天然分子候选疫苗SIEA26～28ku为靶抗原筛选SIEA单链抗体库,获得特异性单链抗体.并将该scFv基因亚克隆至原核高效表达载体PET32a,诱导SIEA26～28ku特异性scFv大量表达.随后以此为探针筛选日本血吸虫尾蚴cDNA文库,以期获得SIEA26～28ku天然分子候选疫苗相关的编码基因.结果显示,所获得的SIEA26～28ku特异性scFv,表达量高,采用该探针初步筛选出相关基因核糖体蛋白***26～28ku特异性scFv的获得,为进一步筛选、分析鉴定抗日本血吸虫病天然分子候选疫苗SIEA26～28ku的编码基因奠定了基础.

关键词：日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原(SIEA) 单链抗体(scFv) 噬菌体展示抗体库 cDNA文库