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基于^(1)H NMR代谢组学与网络药理学的复方宁神精油抗失眠组分物质基础及作用机制研究

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药学学报 2024年第8期59卷 2313-2325页

作者：柴青张宏斌吴立东王婧毅李海超刘玉红刘红燕蒋海强田振华山东中医药大学药学院山东济南250355 山东中医药大学中医药创新研究院山东济南250355 山东欣悦健康科技有限公司山东滨州256600 山东中医药大学实验中心山东济南250355 山东省中医药基础研究重点实验室山东济南250355 山东中医药大学教育部中医药经典理论重点实验室山东济南250355

本文应用GC-MS、网络药理学与^(1)H NMR代谢组学技术相结合,研究复方宁神精油抗失眠的物质基础与作用机制。通过GC-MS分析复方宁神精油的主要挥发性成分,利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及GeneCards、OMIM、Drugbank等数据... 详细信息

本文应用GC-MS、网络药理学与^(1)H NMR代谢组学技术相结合,研究复方宁神精油抗失眠的物质基础与作用机制。通过GC-MS分析复方宁神精油的主要挥发性成分,利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及GeneCards、OMIM、Drugbank等数据库预测失眠相关靶点。腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制大鼠失眠模型。动物实验经山东中医药大学动物伦理委员会批准(伦理号:SDUTCM20221025010)。以行为学相关指标评价复方宁神精油对大鼠焦虑行为的调节作用;采用酶联免疫法检测大鼠血清中促肾上腺激素释放激素(CRH)、促肾上腺激素(ACTH)、褪黑素(MT)含量;取大鼠血清、海马进行^(1)H NMR代谢组学检测大鼠血清海马中内源性代谢物变化,指认差异代谢物并构建代谢通路。结果显示,模型组大鼠旷场实验运动距离、高架十字迷宫实验进入开放臂次数及时间均显著降低(P心靶点26个。研究表明复方宁神精油干预PCPA所致失眠大鼠的作用机制可能与调节下丘脑-垂体-肾上腺轴轴相关激素,调控机体氨基酸代谢、脂质代谢和胆碱代谢有关。

关键词：复方宁神精油失眠旷场实验高架十字迷宫核磁共振代谢组学网络药理学

基于网络药理学和实验验证探讨桦褐孔菌三萜抗宫颈癌HeLa细胞的作用机制

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中国现代应用药学 2024年第3期41卷 313-323页

作者：邵骏菁杨颖王传功张晓平济宁医学院基础医学院山东济宁272067 济宁医学院药理学重点实验室山东济宁272067 山东中医药大学药学院济南250355

目的利用网络药理学和分子对接及体内验证实验探讨桦褐孔菌三萜成分抗宫颈癌HeLa细胞的潜在作用机制。方法基于文献研究结合数据库筛选桦褐孔菌三萜的主要活性成分,寻找活性成分以及HeLa细胞交集靶点,进行PPI网络构建,GO和KEGG富集分析... 详细信息

目的利用网络药理学和分子对接及体内验证实验探讨桦褐孔菌三萜成分抗宫颈癌HeLa细胞的潜在作用机制。方法基于文献研究结合数据库筛选桦褐孔菌三萜的主要活性成分,寻找活性成分以及HeLa细胞交集靶点,进行PPI网络构建,GO和KEGG富集分析,分子对接进行验证。建立HeLa裸鼠模型,桦褐孔菌三萜灌胃给药,裸鼠处死后采用Western blotting检测指标。结果经过筛选得到15个符合条件的活性成分的274个相关联靶点。与2046个HeLa细胞相关靶点取交集,获得104个桦褐孔菌三萜抗HeLa细胞的潜在靶点。通过“药物-成分-靶点-疾病”网络分析,PIK3CA、MAPK3、MDM2、AR、CCND1可能是桦褐孔菌三萜纯化物抗HeLa细胞的潜在靶点。KEGG富集分析结果显示,PI3K/Akt信号通路、Ras信号通路、MAPK信号通路等多个信号通路可能是桦褐孔菌三萜抗HeLa细胞的潜在作用途径。分子对接结果显示,核心成分与关键靶点均有较强的潜在结合能力。体内实验结果表明桦褐孔菌三萜可抑制模型小鼠肿瘤生长,调节模型小鼠的免疫功能,促进模型小鼠肿瘤凋亡,抑制PI3K和AKT的磷酸化。结论基于网络药理学、分子对接和体内验证方法,证明了桦褐孔菌三萜通过多组分、多靶点发挥抗HeLa细胞的作用,为桦褐孔菌的进一步研发及其抗肿瘤作用机制的探讨提供参考。

关键词：桦褐孔菌三萜 HeLa细胞网络药理学分子对接 PI3K/Akt通路 HeLa裸鼠模型

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糖尿病肾病核心基因的筛选与鉴定

安徽医科大学学报 2024年第4期59卷 610-618页

作者：吴晓俊倪飞雪徐玉雪滨州医学院药学院烟台264003 滨州医学院山东省分子靶向智能诊疗技术创新中心烟台264003 滨州医学院烟台市干细胞与再生医学重点实验室烟台264003

目的基于生物信息学筛选糖尿病肾病(DKD)核心基因,探究DKD的治疗靶点,讨论其可能的调控机制。方法提取GEO数据库(GSE30528,GSE47183)DKD患者肾小球转录组表达数据矩阵,采用生物信息学方法对差异表达基因(DEGs)进行筛选,鉴定出核心差异基... 详细信息

目的基于生物信息学筛选糖尿病肾病(DKD)核心基因,探究DKD的治疗靶点,讨论其可能的调控机制。方法提取GEO数据库(GSE30528,GSE47183)DKD患者肾小球转录组表达数据矩阵,采用生物信息学方法对差异表达基因(DEGs)进行筛选,鉴定出核心差异基因,对核心差异基因进行基因表达与富集分析(GSEA),预测有效靶点。结果通过对DKD mRNA表达矩阵的筛选和鉴定,共筛选出5个核心基因,其中C1orf21、NPHS1表达显著下调,CD48、COL1A2、TGFBI表达上调,研究得知,NPHS1、CD48与免疫差异、细胞间交流及细胞表面相互作用等有显著相关性。通过受试者工作特征曲线(ROC)分析、GSEA分析及药物靶点与miRNA预测显示,这些差异基因可能对DKD的治疗具有重要意义。结论该研究筛选的核心基因与DKD具有显著相关性,有可能作为糖尿病治疗有效标志物,为DKD的治疗与鉴定提供理论依据。

关键词：糖尿病肾病 GEO数据库转录组生物信息学基因筛选药物靶点

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甘草黄酮A对低氧条件下胃癌细胞增殖和糖酵解的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第13期30卷 120-127页

作者：董焕成苏韫龚红霞曹旺杰袁敏捷刘永琦黄勇甘肃中医药大学基础医学院甘肃省高校重大疾病分子医学与中医药防治研究省级重点实验室敦煌医学与转化教育部重点实验室兰州730000

目的:探讨低氧条件下甘草黄酮A对胃癌细胞增殖和糖酵解的影响。方法:筛选人胃癌AGS细胞予以5%O2低氧环境培养48 h,分为5组:常氧组、低氧组、甘草黄酮A高、中、低浓度组(100、50、25μmol·L^(-1))。细胞增殖与活性检测(CCK-8)法和克隆... 详细信息

目的:探讨低氧条件下甘草黄酮A对胃癌细胞增殖和糖酵解的影响。方法:筛选人胃癌AGS细胞予以5%O2低氧环境培养48 h,分为5组:常氧组、低氧组、甘草黄酮A高、中、低浓度组(100、50、25μmol·L^(-1))。细胞增殖与活性检测(CCK-8)法和克隆形成实验检测甘草黄酮A对低氧条件下AGS细胞增殖的影响;划痕实验检测细胞迁移情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测AGS细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、己糖激酶Ⅱ(HK2)的蛋白及mRNA表达水平。试剂盒检测葡萄糖摄取和HK的活性的表达情况。结果:CCK-8法实验结果表明,与低氧组比较,24 h时,甘草黄酮A高、中浓度组AGS细胞的增殖率显著降低(P实验结果表明,与常氧组比较,低氧组AGS细胞克隆形成数显著升高(P实验表明,与常氧组比较,低氧组的AGS细胞迁移的能力升高(P<0.01);与低氧组比较,甘草黄酮A高、中、低浓度组的AGS细胞各个时间段迁移细胞的能力显著降低(P<0.01)。Real-time PCR表明,与常氧组比较,低氧组GLUT1、LDHA、PKM2和HK2 mRNA明显升高(P<0.05,P<0.01);与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组GLUT1、LDHA、PKM2、HK2 mRNA,甘草黄酮A中浓度组GLUT1、LDHA、HK2 mRNA、甘草黄酮A低浓度组HK2 mRNA明显降低(P<0.05,P<0.01)。Western blot表明,与常氧组比较,低氧组HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组的HIF-1α、GLUT1、LDHA、PKM2和HK2蛋白的表达明显降低(P<0.05,P<0.01),甘草黄酮A中、低浓度的HK2蛋白的表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。试剂盒检测葡萄糖摄取及HK活性结果表明,与常氧组比较,低氧组葡萄糖的摄取和HK的含量表达升高(P<0.01),与低氧组比较,甘草黄酮A高浓度组葡萄糖的摄取和HK的含量表达及甘草黄酮A中浓度组HK的含量表达降低(P<0.01)。结论:甘草黄酮A可以抑制低氧条件下AGS细胞的增殖,其作用机制可能与抑制胃癌的糖酵解有关。

关键词：甘草黄酮A 胃癌低氧糖酵解增殖

茵陈公英汤通过IRS/AKT/FoxO1和TLR4/NF-κB信号通路改善非酒精性脂肪肝病

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中药药理与临床 2024年

作者：宋汶轩李爽安梦娇李佳琪郭纪元蒋声赫李沙储金秀安春娜郝思钰韩小蕾胡宝丰齐亚娟华北理工大学基础医学院华北理工大学药学院唐山市新药基础研究重点实验室河北省慢性疾病基础医学重点实验室迁安中医医院

目的：基于网络药理学探讨茵陈公英汤对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的改善作用及机制。方法：通过网络药理学分析茵陈公英汤与NAFLD的差异基因，进行基因GO富集分析与KEGG通路富集分析；使用Cytoscape软件构建“茵陈公英汤入血成分-靶点... 详细信息

目的：基于网络药理学探讨茵陈公英汤对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的改善作用及机制。方法：通过网络药理学分析茵陈公英汤与NAFLD的差异基因，进行基因GO富集分析与KEGG通路富集分析；使用Cytoscape软件构建“茵陈公英汤入血成分-靶点-通路”分析，从而预测茵陈公英汤对NAFLD作用机制；给予60%高脂饲料构建小鼠NAFLD模型，并随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸吡格列酮0.002 g/kg组和茵陈公英汤1.5、3.0、6.0 g/kg组，药物干预6周，称小鼠体质量、肝质量；于试验结束后检测天冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力，血清甘油三脂（TG）和血糖含量；HE染色观察肝脏病理情况，油红O染色观察肝脏脂质沉积；实时定量PCR法检测肝脏糖脂代谢和炎症因子在基因水平的表达；Western Blot检测肝脏胰岛素和炎症信号通路蛋白的表达。结果：网络药理学分析表明茵陈公英汤治疗NAFLD的潜在治疗靶点共224个，其核心靶点包括AKT、FoxO、TLR4、NF-κB等，富集分析显示这些靶点可能通过胰岛素抵抗、FoxO、脂代谢、炎症、AKT等信号通路改善NAFLD；经NAFLD模型小鼠验证发现，茵陈公英汤可降低NAFLD小鼠的体质量，减轻肝脏脂质沉积，改善肝功能，降低血清TG，改善糖代谢异常；茵陈公英汤上调肝脏Glut4 mRNA表达，下调G6pase、Pepck、Acc、Scd1、Fasn、Il1β、Il6、Il8和Il11 mRNA表达；茵陈公英汤上调IRS1、IRS2、p-AKT/AKT和Glut4蛋白表达，同时下调FoxO1、TLR4、p-NF-κB/NF-κB、IL-1β、IL-6和IL-17A在肝脏的表达。结论：茵陈公英汤可改善NAFLD，其机制涉及改善胰岛素的IRS1/IRS2/AKT/FoxO1和抑制炎症TLR4/NF-κB信号通路。

关键词：茵陈公英汤网络药理学非酒精性脂肪性肝病糖代谢脂代谢胰岛素抵抗炎症

基于实时无标记细胞分析技术时间维度特征的体外抗肿瘤活性评价新策略

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中国药理学通报 2024年第3期40卷 592-598页

作者：刘芳彤邢淑雁刘孝云叶冬雪杨佳张国英容蓉杨勇山东中医药大学中医药创新研究院山东济南250355 山东中医药大学药学院山东济南250355 山东中医药大学实验中心山东济南250355 山东中医药大学中医药经典理论教育部重点实验室山东济南250355 山东中医药大学中医药基础研究山东省重点实验室山东济南250355 山东中医药大学山东省中医药抗病毒工程研究中心山东济南250355

目的基于实时无标记细胞分析(real time cellular analysis,RTCA)技术,以黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂为例进行抗A549、H1299肺腺癌活性分析,建立一种反映时间维度变化特征的EC_(50)评价新策略。方法应用RTCA Software Pro数据分析及... 详细信息

目的基于实时无标记细胞分析(real time cellular analysis,RTCA)技术,以黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂为例进行抗A549、H1299肺腺癌活性分析,建立一种反映时间维度变化特征的EC_(50)评价新策略。方法应用RTCA Software Pro数据分析及GraphPad Prism、Origin Pro做图,分别采用终点法和时间维度表征黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷、顺铂受试液/药的体外抗A549、H1299肺腺癌活性。结果①受试液/药对A549及H1299细胞在24 h、48 h终点法中的EC_(50)值有的存在较大差异。②采用四参数方程拟合曲线的相关系数>0.9,EC_(50)动态变化相对稳定期(相邻4点EC_(50)线性拟合|斜率|≤1)计算此时间维度内的EC_(50)值。黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂对A549细胞的EC_(50)分别为52.97±1.75μmol·L^(-1)(16~48 h)、62.88±2.91μmol·L^(-1)(32.25~48 h)、78.84±0.33μmol·L^(-1)(21.5~29.75 h)、13.57±1.54μmol·L^(-1)(27.5~48 h);黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂对H1299细胞的EC_(50)分别为43.71±1.26μmol·L^(-1)(19.5~48 h)、47.23±1.19μmol·L^(-1)(14~48 h)、39.45±0.24μmol·L^(-1)(12.75~46.25 h)、25.97±4.76μmol·L^(-1)(10.25~48 h)。显示受试液/药抗肿瘤起效的时间窗口期不同。结论基于RTCA技术,选用拟合度好、稳定并带有时间维度特征的EC_(50)数据用于抗肿瘤活性评价将更加精确和合理。此外,这种区分开不同有效时间的抗肿瘤药物方法可为临床联合用药的给药时机提供参考,本思路也将为其他体外相关研究提供借鉴。

关键词： RTCA技术时间维度特征抗肿瘤活性 EC_(50) 肺腺癌新策略

探讨自噬相关基因介导乳腺癌预后及免疫浸润的潜在机制及干预中药预测

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中草药 2024年第13期55卷 4463-4477页

作者：钟悦王志宇杨博文王能广州中医药大学基础医学院广东广州510006 广东省中医证候临床研究重点实验室广东广州510120 粤港澳中医药与免疫疾病研究联合实验室广东广州510120 省部共建中医湿证国家重点实验室(广州中医药大学第二附属医院) 广东广州510120

目的利用生物信息学研究乳腺癌自噬相关分子模式和肿瘤微环境免疫细胞浸润特征,同时预测具有潜在治疗作用的中药。方法从TCGA和GEO数据库下载乳腺癌数据,从UCSC Xena数据库获得乳腺癌拷贝数相关数据。使用R语言和Perl分析乳腺癌自噬相... 详细信息

目的利用生物信息学研究乳腺癌自噬相关分子模式和肿瘤微环境免疫细胞浸润特征,同时预测具有潜在治疗作用的中药。方法从TCGA和GEO数据库下载乳腺癌数据,从UCSC Xena数据库获得乳腺癌拷贝数相关数据。使用R语言和Perl分析乳腺癌自噬相关基因在肿瘤组织和癌旁组织表达以及自噬相关基因的拷贝数情况。通过单因素Cox分析、Kaplan-Meier生存分析、最小绝对收缩和选择算子(logistic least absolute shrinkage and selection operator,Lasso)分析、受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)、列线图构建自噬相关预后模型并评估其预后价值。利用基因集变异分析(gene set variation analysis,GSVA)、京都百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、单样本基因集富集分析(single-sample gene set enrichment analysis,ssGSEA)和CIBERSORT算法,探索其在乳腺癌中的潜在生物学功能和免疫细胞浸润情况。在此基础上,将关键基因导入SymMap数据库获取相关中药,采用Cytocaspe构建“中药-成分-靶点”网络图,并通过体外实验验证代表性自噬相关中药对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响。结果大部分自噬相关基因在乳腺癌肿瘤组织和癌旁组织中有表达差异和拷贝数变异,其中肿瘤蛋白P53(tumor protein P53,TP53)的突变频率最高。构建的自噬相关预后模型提示高风险乳腺癌患者预后更差。通过ssGSEA、ESTIMATE和CIBERSORT进一步表明,所建立的模型可能对免疫细胞丰度、免疫细胞类型等产生影响。此外,预测结果提示调控乳腺癌自噬的中药功效以清热解毒、活血化瘀、补阳类为主,药性以辛、苦、甘、寒为主,主要归肝、肺、胃经。实验验证进一步表明,清热解毒药白花蛇舌草、活血化瘀药郁金、补阳药肉苁蓉/淫羊藿可通过调控自噬活性抑制乳腺癌发展。结论自噬指示乳腺癌不良预后,并与肿瘤免疫浸润密切相关。调控乳腺癌自噬的中药以清热解毒、活血化瘀、补阳类为主,为乳腺癌的免疫和中医药治疗提供新的方向。

关键词：生物信息学自噬调控乳腺癌预后肿瘤微环境白花蛇舌草郁金肉苁蓉淫羊藿

基于网络药理学及实验验证探讨萆苓止带方治疗外阴阴道假丝酵母菌病的作用机制

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中草药 2024年第20期55卷 6995-7005页

作者：陈志霞陈思琪冯淑仪广州中医药大学第二临床医学院广东省中医院广东省中医证候临床研究重点实验室

目的采用网络药理学方法探究萆苓止带方治疗外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginalcandidiasis,VVC)的作用机制,并进行体内实验验证。方法运用TCMSID数据库获取萆苓止带方中活性成分,并预测药物作用靶点;运用GEO、MelaCards和CTD数据库获... 详细信息

目的采用网络药理学方法探究萆苓止带方治疗外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginalcandidiasis,VVC)的作用机制,并进行体内实验验证。方法运用TCMSID数据库获取萆苓止带方中活性成分,并预测药物作用靶点;运用GEO、MelaCards和CTD数据库获取VVC疾病基因,将萆苓止带方作用靶点与VVC疾病相关基因取交集。运用STRING在线工具构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-proteininteraction,PPI)网络,使用Cytoscape软件进行可视化处理;使用WebGestalt工具进行基因本体(gene ontology,GO)功能及京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析;运用MCODE插件筛选关键基因,运用CB-DOCK2对关键靶点和成分进行分子对接。采用雌激素注射联合阴道接种白色念珠菌法制备VVC小鼠模型,给予萆苓止带方干预后,对阴道灌洗液进行涂片染色,观察阴道真菌载量;采用苏木素-伊红(hemato xylin-eo sin,HE)染色观察阴道组织病理观变化;采用免疫组化法检测阴道组织雄激素受体(androgen receptor,AR)表达。结果萆苓止带方与VVC疾病的共有靶点共43个,涉及代谢、炎症调节、激素等相关生物过程,富集于氮代谢、雌激素信号传导通路、卵巢类固醇生成、缺氧诱导因子-1 (hypoxia-induciblefactor-1,HIF-1)信号通路、内分泌抵抗等信号转导通路。共有靶点网络的核心基因为AR、基质金属蛋白酶1 (matrixmetallopeptidase 1,MMP1)、聚二磷酸腺苷-核糖聚合酶1 [poly (adenosine diphosphate-ribose)polymerase 1,PARP1]和一氧化氮合酶3 (nitric oxide synthase 3,NOS3),核心子网络共3个,均与多种卵巢类固醇激素相关蛋白及其合成代谢、细胞炎症调控等密切相关。动物实验结果显示,萆苓止带方能够有效降低VCC小鼠阴道灌洗液中真菌载量,改善阴道黏膜病理,并下调阴道组织AR表达(P心靶点可能是AR。

关键词：萆苓止带方外阴阴道假丝酵母菌病网络药理学雄激素受体落新妇苷京尼平苷酸毛蕊花糖苷 23-乙酰泽泻醇B 23-乙酰泽泻醇C 芍药苷白术内酯Ⅰ 白术内酯Ⅱ 白术内酯Ⅲ 绿原酸槲皮苷

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原儿茶醛的神经保护作用机制研究进展

中草药 2024年第7期55卷 2463-2471页

作者：杨世瑜肖雨安春娜邱昌龙李继安储金秀华北理工大学基础医学院河北省慢性疾病基础医学重点实验室河北唐山063210 华北理工大学中医学院河北省中西医结合防治糖尿病及其并发症重点实验室河北唐山063210

原儿茶醛是一种存在于常用中药及一些草本植物中的酚酸类化合物,已被证明具有多种药理活性,如抗动脉粥样硬化、抗血栓形成、保护心肌细胞等。近年来的研究结果显示原儿茶醛对多种神经系统疾病具有改善作用,表明其在神经病变方面具有潜... 详细信息

原儿茶醛是一种存在于常用中药及一些草本植物中的酚酸类化合物,已被证明具有多种药理活性,如抗动脉粥样硬化、抗血栓形成、保护心肌细胞等。近年来的研究结果显示原儿茶醛对多种神经系统疾病具有改善作用,表明其在神经病变方面具有潜在的开发应用前景。结合国内外最新报道,综述了近25年原儿茶醛的神经保护作用及其机制的研究进展,为原儿茶醛用于神经系统疾病的进一步研究提供依据和思路。

关键词：原儿茶醛神经保护抗动脉粥样硬化抗血栓形成保护心肌细胞药动学帕金森病阿尔茨海默病缺血性脑卒中