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HSV-IgM人-鼠嵌合抗体制备及稳定细胞株构建工艺开发

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生物工程学报 2023年第9期39卷 3887-3898页

作者：崔亚敏田晓平孙静静王志强赵巧辉李桂林郑州伊美诺生物技术有限公司河南郑州450016

为实现体外大规模制备单纯疱疹病毒HSV-IgM(HSV1,HSV2)人鼠嵌合抗体,本研究通过RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends,RLM-RACE)技术获取其对应杂交瘤细胞基因序列,构建嵌合抗体至真... 详细信息

为实现体外大规模制备单纯疱疹病毒HSV-IgM(HSV1,HSV2)人鼠嵌合抗体,本研究通过RNA连接酶介导的cDNA末端快速扩增(RNA ligase-mediated rapid amplification of cDNA ends,RLM-RACE)技术获取其对应杂交瘤细胞基因序列,构建嵌合抗体至真核表达载体,在CHO-S细胞中稳定表达所需目的蛋白。同时优化稳定细胞株筛选工艺,对细胞池构建阶段和单克隆筛选阶段的加压条件进行摸索与探究,最后目的抗体采用蛋白L亲和纯化法进行纯化并进行生物活性检测;最终成功制备899 kDa和909 kDa的稳定高表达重组IgM抗体(HSV1,HSV2)细胞株。结果表明,最适筛选压力为20P200M(一轮加压)和50P1000M(二轮加压);使用加压培养基进行单克隆筛选抗体表达量较高,HSV1-IgM和HSV2-IgM单克隆最终表达量分别为1620 mg/L和623 mg/L。本研究为HSV1和HSV2的IgM系列重组抗体质控品开发以及体外高表达分泌IgM亚型抗体提供理论与实践基础。

关键词：人鼠嵌合IgM抗体 CHO-S细胞构建工艺表达

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阴离子树脂分离橄榄苦苷的过程及性能研究

天然产物研究与开发 2024年第3期36卷 512-519,477页

作者：徐锋曾小成吴学文张有发熊艳湘潭大学化工学院湘潭411105 湖南杰萃生物技术有限公司湘潭412007

目前橄榄苦苷的分离、纯化研究主要集中在大孔吸附树脂,但鲜有阴离子树脂分离、纯化橄榄苦苷的报道。为了研究阴离子树脂(LX-68M)吸附、分离过程及性能,采用吸附动力学及等温吸附模型来研究阴离子树脂静态吸附、解吸橄榄苦苷的行为。结... 详细信息

目前橄榄苦苷的分离、纯化研究主要集中在大孔吸附树脂,但鲜有阴离子树脂分离、纯化橄榄苦苷的报道。为了研究阴离子树脂(LX-68M)吸附、分离过程及性能,采用吸附动力学及等温吸附模型来研究阴离子树脂静态吸附、解吸橄榄苦苷的行为。结果表明阴离子树脂对橄榄苦苷的吸附符合准二级动力学模型(R^(2)=0.9934),Freundlich等温吸附模型(R^(2)=0.9642)。进一步通过动态实验优化阴离子树脂纯化橄榄苦苷工艺,最佳操作工艺为:上样浓度为0.25 g/mL,解吸液为45%乙醇,吸附、解吸速率均为2.0 BV/h。该条件下橄榄苦苷的吸附率、解吸率分别为86.86%、87.08%,纯度为52.33%。此外,阴离子树脂重复使用4次后吸附率为54.9%,经再生处理后,吸附率恢复到93.51%,表明其具有一定的工业化前景。阴离子树脂稳定性好、分离条件温和,适合用于橄榄苦苷及其他相似天然产物的分离纯化。

关键词：橄榄苦苷阴离子树脂吸附动力学等温吸附行为分离

不同信号肽对人鼠嵌合CMV-IgM分泌表达的影响

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生物工程学报 2020年第6期36卷 1223-1231页

作者：崔亚敏田晓平赵巧辉李桂林郑州伊美诺生物技术有限公司河南郑州450016

为了实现在体外制备巨细胞病毒-免疫球蛋白M(CMV-IgM)和探讨不同信号肽对CMV-IgM表达的影响,通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞基因序列,构建人鼠嵌合CMV-IgM表达载体,并通过PCR方法将5种不同的分泌型信号肽(SigA–SigE)代替CMV-IgM自身... 详细信息

为了实现在体外制备巨细胞病毒-免疫球蛋白M(CMV-IgM)和探讨不同信号肽对CMV-IgM表达的影响,通过RLM-RACE技术钓取杂交瘤细胞基因序列,构建人鼠嵌合CMV-IgM表达载体,并通过PCR方法将5种不同的分泌型信号肽(SigA–SigE)代替CMV-IgM自身信号肽(SigF),利用中国仓鼠卵巢细胞(CHO)作为宿主细胞进行体外表达。对纯化后的CMV-IgM进行SDS-PAGE、SEC-HPLC和酶联免疫吸附试验(ELISA)确定其蛋白表达水平与免疫反应性,最终成功制备出910 kDa的重组蛋白,且研究表明,5种信号肽(SigA–SigE)的人鼠嵌合CMV-IgM表达量较CMV 6#细胞株自身信号肽SigF相比,分别提高了6.72、5.19、1.44、1.85、1.98倍。这将对人鼠嵌合CMV-IgM的开发提供理论基础,且为提高CMV-IgM表达量的研究工作提供了新思路。

关键词：巨细胞病毒-免疫球蛋白M 人鼠嵌合信号肽表达

rhGM-CSF/IL-3融合蛋白的细菌内毒素测定及其干扰因子的研究

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中国药学杂志 1999年第6期34卷 411-413页

作者：陈敏邱雪莲华茵生物工程公司生物技术研究所

目的：ｒｈＧＭＣＳＦ／ＩＬ３融合蛋白（简称Ｇ３）的细菌内毒素检查及干扰因子（如凝血酶，透析袋，Ｔｒｉｓ等）的研究。方法：分别作了两种鲎试剂（普通鲎试剂和特异性鲎试剂）的对比实验。结果：发现几种干扰因子对两种鲎试剂... 详细信息

目的：ｒｈＧＭＣＳＦ／ＩＬ３融合蛋白（简称Ｇ３）的细菌内毒素检查及干扰因子（如凝血酶，透析袋，Ｔｒｉｓ等）的研究。方法：分别作了两种鲎试剂（普通鲎试剂和特异性鲎试剂）的对比实验。结果：发现几种干扰因子对两种鲎试剂的影响程度不同，特异性鲎试剂受影响程度较小。结论：说明了Ｇ３样品的细菌内毒素检查使用特异性鲎试剂更合适，并建议适用于在生产过程中存在以上几种干扰因子的生物制品的内毒素检查。

关键词：融合蛋白细菌内毒素干扰因子生物制品

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高粱在饲料中的应用

中国饲料 2013年第4期 39-41页

作者：唐茂妍陈旭东上海正正生物技术有限公司北京中农颖泰生物技术有限公司

针对高粱的生物学、营养学特性及提高其营养价值的措施作一综述。

关键词：高粱生物学特性饲用价值

具有乳腺导管再生能力的小鼠乳腺原基细胞群黏附因子的表达特点

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生物化学与生物物理进展 2010年第5期37卷 490-495页

作者：宋嘉哲薛恺李松李宁中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193 北京济普霖生物技术有限公司北京100193

乳腺干细胞是研究器官形成、细胞增殖、分化、生存和凋亡等信号通路的理想模型,而近来的研究发现许多成体干细胞的特异性表面标记都与细胞黏附分子(celladhesion molecule,CAM)家族相关.因此,研究胚胎期乳腺干/祖细胞群的黏附分子基因... 详细信息

乳腺干细胞是研究器官形成、细胞增殖、分化、生存和凋亡等信号通路的理想模型,而近来的研究发现许多成体干细胞的特异性表面标记都与细胞黏附分子(celladhesion molecule,CAM)家族相关.因此,研究胚胎期乳腺干/祖细胞群的黏附分子基因表达特点,对于纯化和鉴定胚胎期乳腺干/祖细胞具有重要指导意义.用成年小鼠乳腺上皮干细胞的标记CD24和CD49f来分选小鼠胚胎期14天乳腺原基细胞群,发现CD24+和CD49f+双阳性的乳腺原基细胞包含两个细胞群:CD24hiCD49f+细胞群和CD24medCD49f+细胞群.它们占乳腺原基总细胞的比例分别为16%和47%.在随后的细胞培养实验和体内移植再生实验中发现,CD24medCD49f+细胞群可以贴壁,而且具有再生乳腺导管的能力,相反,CD24hiCD49f+细胞群既不能贴壁也不具有移植再生能力.这些结果表明,这两个细胞群分别代表不同的细胞类型,而CD24medCD49f+细胞群有可能包含具有自我更新能力的乳腺原基干/祖细胞.挑选了可能与乳腺相关的19个黏附分子,并对这两群细胞进行了定量PCR检测.结果表明,具有乳腺导管重建能力的CD24medCD49f+细胞群的黏附分子基因表达明显区别于CD24hiCD49f+细胞群,而且其中几个与成体干细胞相关的标记基因在CD24medCD49f+细胞群中的表达显著高于CD24hiCD49f+细胞群.

关键词：乳腺原基乳腺干细胞细胞黏附分子再生

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谷物及制品中修饰型真菌毒素的风险与防控

中国农业科学 2022年第6期55卷 1213-1226页

作者：杨虹曹文明陈何妍卫学青束莉丹李彤丰益(上海)生物技术研发中心有限公司

修饰型真菌毒素是重要的食品安全危害因子。通过综述修饰型真菌毒素的形成机制、种类、污染水平、毒理研究、代谢规律、分析检测、脱毒方法等方面的进展，识别已知风险、潜在风险以及分析风险防控措施。已知风险包括：谷物及制品中修饰... 详细信息

修饰型真菌毒素是重要的食品安全危害因子。通过综述修饰型真菌毒素的形成机制、种类、污染水平、毒理研究、代谢规律、分析检测、脱毒方法等方面的进展，识别已知风险、潜在风险以及分析风险防控措施。已知风险包括：谷物及制品中修饰型真菌毒素的阳性检出率高，浓度跨度大，其存在会增加人群真菌毒素膳食暴露的风险。毒理学研究表明，有的修饰型真菌毒素在体内代谢转化为原型而产生与原型同等毒性，有的本身则具有毒性。潜在风险包括：代谢转化而成的多种修饰型真菌毒素共存时会引起毒性机制和毒性作用不明。在农作物代谢或食品加工中也可产生结构、性质、毒性均未知的修饰型真菌毒素。受分析技术和质量控制手段的制约，难以获得其准确可靠的定性定量结果，使毒理学数据十分匮乏，导致毒理学性质引起争议。风险防控措施包括：从源头抓起，培育抗病品种，规范标准体系和检测体系，严把农产品收购、储藏、生产及产品加工关。另外，在生产加工环节中，要加强产后脱毒技术的研究。

关键词：修饰型真菌毒素原型谷物及制品风险防控措施

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银耳百合复合乳饮料的研制

食品与发酵工业 2020年第1期46卷 210-214页

作者：侯莹哈尔滨美华生物技术股份有限公司

以银耳、百合和乳粉为原料,研究开发银耳百合复合乳饮料。通过单因素试验和正交试验对银耳百合复合乳饮料的配方及稳定性进行研究。结果表明,当银耳汁液、百合汁液、复原乳和白砂糖的添加量分别为质量分数30%、25%、20%、5.0%时,所得到... 详细信息

以银耳、百合和乳粉为原料,研究开发银耳百合复合乳饮料。通过单因素试验和正交试验对银耳百合复合乳饮料的配方及稳定性进行研究。结果表明,当银耳汁液、百合汁液、复原乳和白砂糖的添加量分别为质量分数30%、25%、20%、5.0%时,所得到的银耳百合复合乳饮料品质最优;在以上产品中添加质量分数0.03%的黄原胶时,产品稳定性最好。研制的银耳百合复合乳饮料均匀一致无沉淀,无分层,色泽呈乳白色,味道可口,清爽细腻,营养丰富,具有百合、银耳、乳相协调的独特风味。

关键词：银耳百合乳饮料配方稳定性

高效液相色谱法测定红葡萄酒中白藜芦醇的四种异构体

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色谱 2004年第4期22卷 424-427页

作者：孙狄章震兴王轶男时卫萍北京迪尔塔金生物技术有限公司北京100085

将红葡萄酒用 β 葡萄糖苷酶水解处理 ,使其中的白藜芦醇甙转换成白藜芦醇。采用高效液相色谱法测定水解前后顺、反式白藜芦醇含量的变化 ,从而计算出葡萄酒中白藜芦醇的 4种异构体的含量。色谱柱为SymmetryC18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm... 详细信息

将红葡萄酒用 β 葡萄糖苷酶水解处理 ,使其中的白藜芦醇甙转换成白藜芦醇。采用高效液相色谱法测定水解前后顺、反式白藜芦醇含量的变化 ,从而计算出葡萄酒中白藜芦醇的 4种异构体的含量。色谱柱为SymmetryC18柱 (3 9mmi.d .× 15 0mm) ,流动相为乙醇 0 0 5 %乙酸水溶液 (体积比为 2 3∶77) ,紫外检测波长为 30 6nm。实验结果表明 :白藜芦醇的 4种异构体在其质量浓度为 0 2～ 5 0 .0mg/L时均有良好的线性关系 (r >0 999) ,白藜芦醇及其甙的顺、反异构体的最小检出量分别为 :0 81,1 2 0 ,0 4 0和 0 4 6ng ,白藜芦醇回收率大于 98% ,相对标准偏差 (RSD)为 0 5 %～ 8 5 %。 11种被测干红葡萄酒中白藜芦醇总醇含量为 0 84～ 7 33mg/L,3种被测葡萄汁中白藜芦醇总醇含量为 0 12～ 6 .0 0mg/L。该方法操作简单 ,精密度高 ,重复性好 ,可用于葡萄酒 (汁 )中白藜芦醇及其甙的顺、反异构体的测定。

关键词：高效液相色谱法白藜芦醇白藜芦醇甙红葡萄酒 β-葡萄糖苷酶