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现代免疫学 1991年第2期11卷 119-120页

作者：张尚明孙去病李小玲湖南医科大学肿瘤研究所湖南医科大学肿瘤研究所华北煤炭医学院免疫病理研究室唐山市 06300

单克隆抗体(下称单抗)由于仅有唯一特异抗原结合位点,其标记较多克隆抗体困难,尤其应用IgM单抗则更为困难。作者用戊二醛二步法,过碘酸钠氧化法。和戊二醛-过碘酸钠氧化法标记IgM单抗均未成功。而用改良过碘酸钠氧化法得到满意效果。

关键词：标记抗体戊二醛 HRP 交联胶醛脂肪族醛碘酸钠氧化法电炉炼钢克分子比

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亚硒酸钠对羟自由基的清除作用

湖南医科大学学报 1997年第3期22卷 275-276页

作者：曹兆丰王秋菊郭平罗玲周晓燕华北煤炭医学院免疫病理及细胞毒理研究室

亚硒酸钠对羟自由基的清除作用①曹兆丰⒇王秋菊②郭平②罗玲②周晓燕（生理教研室长沙４１００７８）关键词自由基类；亚硒酸钠＊中图号Ｏ６１３．５２一般认为，非酶硒化物具有一定的抗氧化作用［１］。研究表明，亚硒酸钠对红细胞膜... 详细信息

亚硒酸钠对羟自由基的清除作用①曹兆丰⒇王秋菊②郭平②罗玲②周晓燕（生理教研室长沙４１００７８）关键词自由基类；亚硒酸钠＊中图号Ｏ６１３．５２一般认为，非酶硒化物具有一定的抗氧化作用［１］。研究表明，亚硒酸钠对红细胞膜的氧化损伤，对辐射损伤均有一定的保...

关键词：亚硒酸钠抗氧化剂自由基清除

利用人天然Fab段抗体库从肾细胞癌中筛选抗gp96抗体

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现代预防医学 2010年第18期37卷 3511-3513页

作者：马小兵畅继武李慧忠李成文华北煤炭医学院病理教研室天津医科大学第二医院天津市泌尿外科研究所

[目的]构建人天然Fab段抗体库,并用从肾细胞癌组织中提取纯化的gp96,并以此来筛选抗gp96特异性抗体,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。[方法]取健康新鲜血液50ml,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体... 详细信息

[目的]构建人天然Fab段抗体库,并用从肾细胞癌组织中提取纯化的gp96,并以此来筛选抗gp96特异性抗体,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。[方法]取健康新鲜血液50ml,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和噬粒载体pComb3经SacⅠ和XbaⅠ酶切,由T4DNA连接酶连接,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,扩增后提取噬粒,构建轻链库。轻链库和重链Fd段PCR产物经XhoⅠ和SpeⅠ酶切,以同样方法连接后转化XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13,产生噬菌体抗体全库。提取噬粒酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。分别以噬菌体全库和提取的噬粒为模板,以轻、重链不同引物组合进行PCR扩增。应用亲和层析和离子交换层析从肾细胞癌组织中提取纯化gp96,并以此为抗原对构建的抗体库进行3轮筛选。[结果]提取的淋巴细胞总RNA及逆转录合成的cDNA质量好,部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab库容为1.2×106,酶切和PCR显示有插入片段。用从肾细胞癌组织中提取出的gp96进行3轮筛选,抗体库得到71.5倍的富集。[结论]本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体,用于免疫治疗打下基础。

关键词：噬菌体抗体库抗体Fab段 gp96 肾细胞癌

基因工程技术制备抗IL-2蛋白抗体Fab片段及其鉴定方法的建立

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解放军医学杂志 2008年第5期33卷 534-536页

作者：李常颖李宏杰畅继武天津医科大学第二医院天津市泌尿研究所天津300211 华北煤炭医学院基础部病理生理学教研室

目的利用基因工程技术制备人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab抗体片段,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的IL-2蛋白从人天然噬菌体抗体库中筛选出表达抗IL-2蛋白Fab抗体片段的阳性克隆,酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒转化至... 详细信息

目的利用基因工程技术制备人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab抗体片段,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的IL-2蛋白从人天然噬菌体抗体库中筛选出表达抗IL-2蛋白Fab抗体片段的阳性克隆,酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,并用SDS-PAGE鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果成功筛选并表达了抗IL-2蛋白的Fab段抗体,在SDS-PAGE中形成47kD的条带,Western blot证明为抗人Fab段抗体;ELISA证实该抗体片段具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与牛血清白蛋白、IL-4无交叉反应。结论成功表达并鉴定了人源性抗IL-2蛋白的可溶性Fab片段,构建了一种制备基因工程抗体的有效途径,为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础。

关键词：噬菌体抗体库免疫球蛋白类,Fab 白细胞介素2

基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体(英文)

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中国现代医学杂志 2009年第14期19卷 2081-2084页

作者：李常颖李宏杰张婷畅继武天津医科大学第二医院泌尿外科研究所天津300211 华北煤炭医学院基础部病理生理学教研室河北唐山063000

目的利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可... 详细信息

目的利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性。方法用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性。结果成功筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47kD的条带;Westernblot分析证实表达的蛋白即Fab抗体。ELISA筛选出2株抗体(TA-04,TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应。结论成功表达并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体,构建了一种基因工程抗体的有效制备途径,为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础。

关键词：噬菌体抗体库Fab TNF-α 制备鉴定

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细胞因子与溃疡性结肠炎

中国煤炭工业医学杂志 2001年第6期4卷 411-412页

作者：李琪佳徐敏宫恩聪华北煤炭医学院北京医科大学病理系

溃疡性结肠炎(Ulcerative ColitisUC)与克隆病(Crohn'sDisease)同属炎症性肠病(IBD)，UC在我国有逐年增多的趋势。然而，其病因及发病机制至今尚不清楚，其免疫学机制越来越多地被人们所关注。肠道粘膜免疫系统起着重要作用。有许多细... 详细信息

溃疡性结肠炎(Ulcerative ColitisUC)与克隆病(Crohn'sDisease)同属炎症性肠病(IBD)，UC在我国有逐年增多的趋势。然而，其病因及发病机制至今尚不清楚，其免疫学机制越来越多地被人们所关注。肠道粘膜免疫系统起着重要作用。有许多细胞因子参与了结肠粘膜的炎症反应，并构成了复杂的网络结构，相互作用[1]。一般认为，异常的免疫反应或正常免疫调节的破坏是UC发病的重要环节。大量淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞、中性粒细胞均可在UC的结肠粘膜中查到，而上述免疫细胞的功能是受细胞因子的调节。白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF)是在过去的几年中被公认的由单核巨噬细胞产生的能介导UC发病的细胞因子，它们均可以产生对中性粒细胞等炎细胞的趋化作用，吸引其进入肠道病变部位，而引起一系列的肠道病变，如结肠上皮的损伤、小血管炎、隐窝脓肿等，最终造成UC的发病。

关键词：溃疡性结肠炎病因发病机制细胞因子 IL-6 IL-1 IL-8 TNFα

手术切除联合ALA-PDT治疗Fisher大鼠9L胶质瘤的实验研究

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中国激光医学杂志 2009年第4期18卷 213-217,270-272页

作者：张雪鹏杨方张祥宏张柳河北医科大学外科学研究室石家庄市050017 河北医科大学病理研究室华北煤炭医学院实验中心华北煤炭医学院附属医院外科

目的观察手术切除联合ALA-PDT治疗Fisher344大鼠9L脑胶质瘤的效果并探讨其作用机制。方法32只Fisher344大鼠颅内种植9L脑胶质瘤细胞7d后,随机分为对照组(未治疗)、手术组(近全切除颅内肿瘤)、PDT组(5-ALA300mg/kg,激光能量密度80J/cm2)... 详细信息

目的观察手术切除联合ALA-PDT治疗Fisher344大鼠9L脑胶质瘤的效果并探讨其作用机制。方法32只Fisher344大鼠颅内种植9L脑胶质瘤细胞7d后,随机分为对照组(未治疗)、手术组(近全切除颅内肿瘤)、PDT组(5-ALA300mg/kg,激光能量密度80J/cm2)和联合治疗组(手术切除+PDT),每组8只鼠。治疗后7d处死所有动物并取出脑组织,常规石蜡包埋切片,HE染色分析肿瘤体积和浸润瘤灶,以Ki67免疫组化染色和TUNEL染色方法分别分析胶质瘤细胞的增殖和凋亡。结果与对照组比较,手术组和PDT组的肿瘤体积明显减小。与手术组和PDT组相比,联合治疗既能缩小肿瘤体积又可以减少浸润瘤灶。无论是否联合手术,PDT均能增加凋亡的肿瘤细胞数,单纯手术对凋亡的肿瘤细胞无影响。各组之间肿瘤细胞的增殖(Ki67阳性表达率)无显著性差异。结论PDT通过增加凋亡的肿瘤细胞数,杀灭浸润的肿瘤病灶,提高手术的治疗效果。

关键词：脑胶质瘤手术光动力疗法

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食管胃交界神经内分泌肿瘤的病理形态观察

山东医药 2011年第42期51卷 75-76页

作者：王占东杨杰王占红王永军杨会钗陈砚凝丁妍王小玲吴国祥郭明河北医科大学第四医院石家庄050011 河北体育学院华北煤炭医学院附属医院路南分院

目的观察食管胃交界神经内分泌肿瘤的病理形态。方法对216例食管胃交界肿瘤分别用Synapto-physin、Chromogranin、CD56和Neuron-specific enolase(NSE)四种抗体进行免疫组化检测,筛选出51例神经内分泌肿瘤,进行病理形态学观察。结果 51... 详细信息

目的观察食管胃交界神经内分泌肿瘤的病理形态。方法对216例食管胃交界肿瘤分别用Synapto-physin、Chromogranin、CD56和Neuron-specific enolase(NSE)四种抗体进行免疫组化检测,筛选出51例神经内分泌肿瘤,进行病理形态学观察。结果 51例神经内分泌肿瘤中包括单纯性神经内分泌癌9例,混合性外分泌—内分泌癌42例。Synaptophysin、Chromogranin、CD56和NSE四种抗体在单纯性神经内分泌癌中呈弥漫强阳性表达,而在混合性外分泌—内分泌癌中的神经内分泌癌区域呈不同强度表达。51例神经内分泌肿瘤中溃疡型39例、局部浸润型6例、弥漫浸润型4、黏膜局部隆起型2例,侵及网膜37例、浆膜层7例、肌层5例、黏膜下层2例,肿瘤长径2.0～7.0 cm。结论食管胃交界神经内分泌肿瘤病理形态比较复杂,需要依据免疫组化检查与其他肿瘤进行鉴别诊断。

关键词：食管胃交界肿瘤神经内分泌肿瘤肿瘤病理形态

CD-147在骨肉瘤中的表达及其与临床病理指标的相关性实验研究

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中国矫形外科杂志 2010年第7期18卷 588-590页

作者：逯强吕刚王岩峰王玉峰薛义军华北煤炭医学院附属骨科医院唐山063000 中国医科大学附属第一医院骨科沈阳110001 中国医科大学附属第一医院泌尿外科沈阳110001

[目的]验证CD-147在骨肉瘤组织中的表达及与临床病理指标的相关性。[方法]SABC法免疫组化分析55例骨肉瘤组织中CD-147基因的表达,并对其与骨肉瘤临床病理的关系进行统计学分析。[结果]作者的研究提示CD-147基因在骨肉瘤组织有高表达,并... 详细信息

[目的]验证CD-147在骨肉瘤组织中的表达及与临床病理指标的相关性。[方法]SABC法免疫组化分析55例骨肉瘤组织中CD-147基因的表达,并对其与骨肉瘤临床病理的关系进行统计学分析。[结果]作者的研究提示CD-147基因在骨肉瘤组织有高表达,并且与其外科分级具有明显相关性。[结论]骨肉瘤CD-147蛋白的表达与肿瘤恶性程度密切相关,对骨肉瘤诊断和预后评估具有重要价值。

关键词： CD-147 骨肉瘤骨巨细胞瘤免疫组化

人天然噬菌体抗体库的构建及抗gp96抗体的初步筛选

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中国综合临床 2009年第2期25卷 124-127页

作者：马小兵畅继武李成文李慧忠王馨华北煤炭医学院病理教研室唐山063000 天津医科大学第二医院天津市泌尿外科研究所

目的构建人天然Fab段抗体库，并用从膀胱尿路上皮癌组织中提取纯化的gp96筛选抗gp96特异性抗体，为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml，分离淋巴细胞，提取总RNA，经逆转录合成cDNA，设计多对引物，以... 详细信息

目的构建人天然Fab段抗体库，并用从膀胱尿路上皮癌组织中提取纯化的gp96筛选抗gp96特异性抗体，为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml，分离淋巴细胞，提取总RNA，经逆转录合成cDNA，设计多对引物，以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和噬粒载体pComb3经Sac Ⅰ和Xba Ⅰ酶切，由T4 DNA连接酶连接，电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue，扩增后提取噬粒，构建轻链库。轻链库和重链Fd段PCR产物经Xho Ⅰ和Spe Ⅰ酶切，以同样方法连接后转化XL1-Blue，加入辅助噬菌体VCSM13，产生噬菌体抗体全库。提取噬粒酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。分别以噬菌体全库和提取的噬粒为模板，以轻、重链不同引物组合进行PCR扩增。应用亲和层析和离子交换层析从膀胱癌组织中提取纯化gp96，并以此为抗原对构建的抗体库进行3轮筛选。结果提取的淋巴细胞总RNA及逆转录合成的cDNA质量好，部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab全库库容达6．6×10^6，酶切和PCR显示有插入片段。用从膀胱尿路上皮癌组织中提取出的gp96进行3轮筛选，抗体库得到68倍的富集。结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体、肿瘤免疫治疗打下基础。

关键词：噬菌体抗体库抗体Fab段 gp96 膀胱尿路上皮癌