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滋阴明目方调控GRP78/IRE1/ATF6通路改善视网膜色素变性的体外研究

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北京中医药大学学报 2024年第6期47卷 773-781页

作者：欧晨宋厚盼谢薇彭俊曾梅艳彭清华湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南中医药大学

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目... 详细信息

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目方含药血清及空白血清,采用液质联用技术分析滋阴明目方含药血清的化学成分。采用衣霉素干预人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞构建内质网应激损伤模型。CCK-8法筛选滋阴明目方含药血清最优体积分数。将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组,分别进行干预。干预24 h后,采用多时间动态细胞功能分析系统对细胞进行形态观察,CCK-8法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法和微滴式数字PCR法检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及mRNA表达。结果液质联用分析得到滋阴明目方含药血清中包含熊果苷、水杨酸、木犀草素、丹酚酸A、刺桐碱、牛磺酸、檞皮素、麦芽酚、黄芩苷、丹参素等主要化学成分。与模型组比较,滋阴明目方含药血清组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少;滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组的细胞存活率均升高,细胞凋亡率均下降(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组GRP78、IRE1、ATF6蛋白表达降低,牛磺熊去氧胆酸组IRE1、ATF6蛋白表达降低(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组GRP78、IRE1、ATF6 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论滋阴明目方可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的细胞凋亡,其分子机制可能与下调GRP78、IRE1、ATF6的表达,抑制细胞内质网应激反应有关。

关键词：滋阴明目方人视网膜色素上皮细胞系-19 内质网应激葡萄糖调节蛋白78/1型内质网转膜蛋白激酶/活化转录因子6通路凋亡

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吴茱萸本草考证及药理作用研究进展

中草药 2024年第16期55卷 5723-5734页

作者：唐锦程李玉丽王莎莎李卫真龙湲袁振仪湖南中医药大学湖南长沙410208

基于本草古籍和现代文献资料,厘清吴茱萸Evodiae Fructus的古今发展脉络,对其名称、基原、产地、品质、采收炮制、使用禁忌、药理作用等进行梳理,为含有吴茱萸的古代经典名方中药复方制剂的发展及吴茱萸的开发利用提供理论依据。历代本... 详细信息

基于本草古籍和现代文献资料,厘清吴茱萸Evodiae Fructus的古今发展脉络,对其名称、基原、产地、品质、采收炮制、使用禁忌、药理作用等进行梳理,为含有吴茱萸的古代经典名方中药复方制剂的发展及吴茱萸的开发利用提供理论依据。历代本草多以吴茱萸为正名,不同著作中吴茱萸及其种属的拉丁学名存在差异,经考证Tetradium ruticarpum作为其拉丁学名较为合理,且吴茱萸和食茱萸Zanthoxylum ailanthoides二者并非一物。吴茱萸以贵州、湖南所产量大、质优,为道地产区,品质以饱满、色绿、香气浓、无杂质为佳。吴茱萸多于秋季果实尚未开裂时采集,晒干或低温干燥收藏,炮制通常为沸汤浸洗、甘草水制和盐汤炒制。不宜多服久服,阴虚火旺及无寒湿滞气者禁服,不宜与丹参、硝石、白垩同用。吴茱萸在现代医学领域应用广泛,其在炮制、功效等方面仍有潜在的研究价值,值得进一步临床开发应用。

关键词：吴茱萸基原炮制禁忌道地产区本草考证

左归降糖清肝方对db/db小鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病脂质代谢的影响

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中国中药杂志 2024年第6期49卷 1587-1593页

作者：周敏黎柳邹俊驹刘秀吴勇军向琴喻嵘湖南中医药大学湖南长沙410208

基于INSR/AMPK/SREBP⁃2信号通路,观察左归降糖清肝方对db/db小鼠2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)合并非酒精性脂肪肝病(non⁃alcoholic fatty liver disease,NAFLD)脂质代谢的影响,探讨其治疗T2DM合并NAFLD的作用机制。随机将24只db/db小鼠分为4组:模型组,阳性药物组,左归降糖清肝方低、高剂量组。采用6只C57小鼠作为空白组。左归降糖清肝方高、低剂量组分别予左归降糖清肝方15、7.5 g·kg^(-1)灌胃,阳性药物组予二甲双胍0.067 g·kg^(-1)灌胃,空白组和模型组予等体积蒸馏水灌胃,连续6周。灌胃结束后,检测小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),进行口服葡萄糖耐量实验以及血脂、肝功能水平,肝组织病理学分析脂质蓄积情况。Western blot检测胰岛素受体(insulin receptor,INSR)、AMP依赖的蛋白激酶[adenosine 5′⁃monophosphate(AMP)⁃activated protein kinase,AMPK]、p⁃AMPK、甾醇调节元件结合蛋白2(sterol⁃regulatory element⁃binding protein 2,SREBP⁃2)蛋白表达。结果显示,与模型组相比,经左归降糖清肝方治疗的小鼠体质量、肝重系数、空腹血糖、血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)和低密度脂蛋白(low⁃density lipopro⁃tein,LDL)以及肝功能水平降低。肝组织病理学显示,与模型组相比,经左归降糖清肝方治疗的小鼠肝组织脂滴空泡明显减少、紫红色糖原颗粒明显增加。Western blot检测结果表明,与空白组比较,模型组INSR、p⁃AMPK/AMPK蛋白表达水平均显著下调,SREBP⁃2蛋白表达水平均显著上调。与模型组比较,左归降糖清肝方高剂量组INSR、p⁃AMPK/AMPK蛋白表达水平均显著上调,SREBP⁃2蛋白表达水平显著下调;左归降糖清肝方低剂量组INSR、p⁃AMPK/AMPK蛋白表达水平有上调趋势,SREBP⁃2蛋白表达水平有下调趋势,但差异无统计学意义。上述研究表明,左归降糖清肝方可能通过激活INSR/AMPK/SREBP⁃2信号通路,改善db/db小鼠胰岛素抵抗和脂质代谢。

关键词：左归降糖清肝方 2型糖尿病非酒精性脂肪性肝病 db/db小鼠脂质代谢

基于AMPK信号通路探讨黄芪甲苷对db/db小鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第5期30卷 72-79页

作者：周敏刘秀吴勇军向琴喻嵘湖南中医药大学长沙410208

目的:基于网络药理学和实验验证研究黄芪甲苷(ASⅣ)对db/db小鼠2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制。方法:通过随机将24只db/db小鼠分为4组:模型组、二甲双胍组、黄芪甲苷低、高剂量组。采用6只C57小鼠作为空白组。... 详细信息

目的:基于网络药理学和实验验证研究黄芪甲苷(ASⅣ)对db/db小鼠2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制。方法:通过随机将24只db/db小鼠分为4组:模型组、二甲双胍组、黄芪甲苷低、高剂量组。采用6只C57小鼠作为空白组。黄芪甲苷低、高剂量组分别予黄芪甲苷0.015、0.030 g·kg^(-1)灌胃,二甲双胍组予0.067 g·kg^(-1)灌胃,空白组和模型组予等体积蒸馏水灌胃。灌胃结束后,检测小鼠空腹血糖(FBG),进行口服葡萄糖耐量试验,检测血清血脂水平及肝组织病理情况。通过网络药理学预测黄芪甲苷治疗T2DM合并NAFLD的作用靶点及富集通路,并采用分子生物学技术验证其主要相关富集通路;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织AMPK、p-AMPK、甾醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)、脂肪酸合成酶(FAS)蛋白表达。结果:与空白组比较,经ASⅣ治疗的小鼠体质量、肝质量系数、空腹血糖、血清总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平降低(P组织的病理学显示脂质蓄积情况明显改善,影像学结果显示经黄芪甲苷治疗后,脂肪肝的程度减轻。网络药理学预测结果表明血管内皮生长因子α(VEGFA),半乳糖凝集素3(LGALS3),蛋白激酶B2(Akt2),含Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1),蛋白激酶B1(Akt1),信号传导及转录激活蛋白(STAT3),间质表皮转化因子(MET)是“药物-疾病”中的关键靶点,京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集的结果显示AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)信号通路与T2DM合并NAFLD密切相关。Western blot结果显示,与空白组比较,模型组中p-AMPK/AMPK表达水平明显下调,SREBP-1、FAS蛋白表达水平明显上调(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组、黄芪甲苷高剂量组p-AMPK/AMPK表达水平明显上调,SREBP-1、FAS蛋白表达水平明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪甲苷通过激活AMPK信号通路来调控脂质类蛋白的表达,从而改善脂质代谢。

关键词：黄芪甲苷 2型糖尿病非酒精性脂肪性肝病 db/db小鼠网络药理学

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经典名方竹叶石膏汤关键信息考证

中国实验方剂学杂志 2024年第13期30卷 176-183页

作者：尹周安李玉丽袁振仪毛娅男龙玲罗成宇湖南中医药大学长沙410208

竹叶石膏汤为国家中医药管理局公布的百首经典名方之一,该研究采用溯源法和文献计量学方法对竹叶石膏汤的主治病证、功效方义、现代疾病谱等方面进行考辨分析,以进一步推进该方复方制剂的研发。考证结果表明竹叶石膏汤最早源自《伤寒杂... 详细信息

竹叶石膏汤为国家中医药管理局公布的百首经典名方之一,该研究采用溯源法和文献计量学方法对竹叶石膏汤的主治病证、功效方义、现代疾病谱等方面进行考辨分析,以进一步推进该方复方制剂的研发。考证结果表明竹叶石膏汤最早源自《伤寒杂病论》,组成为淡竹叶、石膏、半夏、麦冬、人参、甘草、粳米,古籍记载的竹叶石膏汤主治病证广涉内、外、妇、儿各科病证,包括中暑、咳喘、疮疡、汗证、呃逆、失眠、疟疾、头痛、血证、鼻渊、喉痹等,细究其病机总属“余热未尽,气阴两伤,胃气失和”。研究发现,该方还可用于治疗痘疮、麻疹、霍乱等疫病,尤其适用于疫病后期。方中竹叶、石膏清热除烦;人参、麦冬、甘草、粳米生津益气;半夏和胃降逆止呕。全方配伍精妙,共奏清热除烦,益气生津,和胃降逆之效。竹叶石膏汤的现代临床应用广泛,其中在消化系统、儿科相关病证、呼吸系统、传染病、循环系统、神经系统的应用频次较高,具体病证包括复发性口疮、呃逆、小儿肺炎、小儿夏季热、不明原因发热、上呼吸道感染、流行性出血热、麻疹后期等。

关键词：文献研究经典名方竹叶石膏汤疫病

芍药苷聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒制备工艺的优化及对心肌细胞的保护作用

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中国新药杂志 2024年第5期33卷 479-488页

作者：肖奕菲陆慧玲杜利新郭志华李雅湖南中医药大学长沙410208

目的:优化芍药苷聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒制备工艺,并探讨芍药苷PLGA纳米粒对H2O2诱导损伤的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:首先使用复乳-溶剂挥发法制备芍药苷PLGA纳米粒,采用Plackett-Burman设计实验以及Box-Behnken响应面... 详细信息

目的:优化芍药苷聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒制备工艺,并探讨芍药苷PLGA纳米粒对H2O2诱导损伤的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:首先使用复乳-溶剂挥发法制备芍药苷PLGA纳米粒,采用Plackett-Burman设计实验以及Box-Behnken响应面设计实验对其制备工艺进行优选,得出最佳处方,并对按最佳处方制备的芍药苷PLGA纳米粒进行表征分析、4℃储藏稳定性考察以及体外释放考察;最后通过H2O2诱导建立大鼠H9c2心肌细胞氧化损伤模型,考察芍药苷PLGA纳米粒对心肌细胞的保护作用,CCK-8法检测细胞存活率,试剂盒检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。结果:最佳处方:泊洛沙姆浓度为0.4%,给药量为3.1 mg,PLGA为21.4 mg;所得芍药苷PLGA纳米粒包封率为(45.49±0.29)%,载药量为(4.52±0.05)%,粒径为(115.1±3.61)nm,多分散系数(polydiseperse index,PDI)为(0.122±0.01),Zeta电位为-(23.2±0.19)mV,形态为规则圆形,体外释放12 h释放率为80%;细胞实验结果表明芍药苷PLGA纳米粒能提高心肌细胞存活率,降低LDH和MDA含量,升高SOD含量(P学模型;芍药苷PLGA纳米粒对H2O2诱导损伤的H9c2心肌细胞具有明显的保护作用。

关键词：芍药苷 PLGA纳米粒 Plackett-Burman Box-Behnken响应面法 H9c2心肌细胞氧化损伤

南五味子属植物的化学成分、药理作用及临床应用研究进展

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中国中药杂志 2024年第1期49卷 26-38页

作者：苏维王欣悦付港陈武贤申湘茹李斌王炜湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湖南中医药大学中医药民族医药国际联合实验室湖南长沙410208 湖南中医药大学期刊杂志社湖南长沙410208

五味子科南五味子属Kadsura植物有29种,主产于亚洲东部和东南部。在我国分布的南五味子属植物有10种,也是主要的药用植物资源类群之一,具有活血止痛、祛风除湿功效,其所含化学成分主要包括木脂素类和三萜类化合物。现代药理和临床研究证... 详细信息

五味子科南五味子属Kadsura植物有29种,主产于亚洲东部和东南部。在我国分布的南五味子属植物有10种,也是主要的药用植物资源类群之一,具有活血止痛、祛风除湿功效,其所含化学成分主要包括木脂素类和三萜类化合物。现代药理和临床研究证明,该属植物的提取物及化学成分具有抗类风湿关节炎、保肝、抗氧化、抗炎等生物活性,也可用于治疗风湿性疾病、肝病等。该文对我国南五味子属植物2012年至今新报道的化合物,以及近年来该属植物的药理作用和临床应用进行综述,以期为其进一步的研究开发提供理论基础。

关键词：南五味子属五味子科木脂素三萜抗类风湿关节炎保肝抗炎

基于HGF/PI3K/Akt信号轴研究赤芍-附子药对促进慢加急性肝衰竭肝细胞再生的作用机制

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中国中药杂志 2024年第15期49卷 4188-4196页

作者：田晓玲张彧杜珊伍梦思谭年花陈斌湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

基于肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号轴研究赤芍-附子药对对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠的治疗作用及对肝细胞再生的影响。采用牛血清白蛋白皮下及尾静脉注射联合脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)+D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)腹腔注射构建ACLF大鼠模型,实验设置正常对照(NC)组、模型(vehicle)组、赤芍-附子药对(SFYD,5.85 g·kg^(-1))组、促肝细胞生长颗粒(HGFG,4.05 g·kg^(-1))组。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察大鼠肝组织病理变化。全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(alanineamino transferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transa-minase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)。ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子水平。免疫荧光染色检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞增殖相关抗原(antigen identified by monoclonal antibody,Ki67)及细胞周期蛋白(cell cycle protein B1,CyclinB1)阳性表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测HGF、结合蛋白Gab1(grb2 associated binding protein 1,Gab1)、PI3K、Akt、磷酸化PI3K(phosphorylation PI3K,p-PI3K)、磷酸化Akt(phosphorylation Akt,p-Akt)mRNA及蛋白表达水平。结果显示,与vehicle组比较,SFYD组大鼠肝组织病理评分降低,肝功能及炎症反应改善,PCNA、Ki67、CyclinB1荧光表达增强。同时与模型组相比,SFYD组HGF、Gab1蛋白表达上调,PI3K、Akt磷酸化激活。以上研究表明赤芍-附子药对通过减轻肝细胞炎症损伤以及促进肝细胞再生来达到抗肝衰竭的效应,其具体调控机制可能与激活HGF/PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：慢加急性肝衰竭赤芍-附子药对 HGF/PI3K/Akt 肝再生

巨噬细胞激活与极化在心肌纤维化的作用及中医药干预

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 272-282页

作者：姚昆鹏蔡虎志赵祥宫克田楚宁罗云涛彭丽琪欧广洋陈青扬陈新宇湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激... 详细信息

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激活/极化在MF中占有重要地位。随着中医药研究的不断深入,学者们发现中药可通过调控肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)系统、调节炎症进程、修复细胞外基质、管理氧化应激、维护自噬平衡等方面干预MF,而这一过程与巨噬细胞的激活及M1/M2型极化密切相关。在整个MF过程中,巨噬细胞活化是有益的,但不可过度,否则将变为有害。在MF早期,适当的M1型巨噬细胞极化有利于激活免疫,清除有害物质;在MF中后期,适当的M2型巨噬细胞极化有利于重塑受损的心肌。若巨噬细胞活化过度/不足,或M1/M2型巨噬细胞极化的平衡被打破,则效应由挽救变为破坏。具有调控巨噬细胞活化/极化的中药多具有益气养阴,理气活血的功效,但也不乏清热燥湿解毒之品。因此,MF的发生可能为气阴不足、湿热蕴毒、气滞血瘀所致。通过总结巨噬细胞激活/极化在MF中涉及的生物学过程,阐述中医药从不同角度调控巨噬细胞激活及M1/M2型极化改善MF的研究进展,以期为中医药治疗MF提供借鉴。

关键词：巨噬细胞心肌纤维化中医药心力衰竭