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苦参通过抑制MAPK/NF-κB通路改善免疫平衡缓解特应性皮炎实验研究

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：黄盼潘意王畅汪海珍胡凡湖南中医药大学第二附属医院肛肠科湖南中医药大学第二附属医院皮肤科

目的探讨苦参对特应性皮炎（AD）辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)失衡的治疗作用及其内在分子机制。方法将24只雌性C57BL/6小鼠，按体重分层随机分为正常对照组、AD模型组和AD+苦参组，每组8只。采用2,4-二硝基氯苯/粉尘螨提取物... 详细信息

目的探讨苦参对特应性皮炎（AD）辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)失衡的治疗作用及其内在分子机制。方法将24只雌性C57BL/6小鼠，按体重分层随机分为正常对照组、AD模型组和AD+苦参组，每组8只。采用2,4-二硝基氯苯/粉尘螨提取物（DNCB/DFE）诱导建立AD小鼠模型。将人表皮角质形成细胞（HaCaT）分成对照组、干扰素-γ(IFN-γ)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、IFN-γ/TNF-α+苦参组，共3组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）检测IFN-γ、TNF-α、白细胞介素（IL）-2、胸腺激活调节趋化因子（TARC）、IL-4、IL-5、IL-6 mRNA表达，Western Blot检测小鼠组织和细胞中磷酸化有丝分裂原活化蛋白激酶（p-p38）、p38、磷酸化核因子κB p65亚单位（p-p65）、p65蛋白表达，ELISA检测IL-6、TARC释放水平以及流式Th1/Th2细胞比例。结果在细胞水平方面：与对照组比较，IFN-γ/TNF-α组IL-6、TARC mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,p-p38、p-p65蛋白表达均上调（P<0.01）；与IFN-γ/TNF-α组比较，IFN-γ/TNF-α+苦参组IL-6、TARC mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）,p-p38、p-p65蛋白表达显著下调（P<0.01）。在动物水平研究中：与正常对照组比较，AD模型组小鼠皮肤组织中p-p38、p-p65蛋白表达水平显著增加（P<0.01）；耳部皮肤组织炎症细胞浸润增多，角质化过度、肥大细胞浸润增加（P<0.01），且皮肤中Th2细胞含量增加（P<0.01）；小鼠皮肤中IFN-γ、TNF-α、TARC、IL-6、IL-4、IL-5表达增加（P<0.01）；与AD模型组比较，AD+苦参治疗组小鼠皮肤组织中p-p38、p-p65蛋白表达水平均减少（P<0.01）；表皮、真皮厚度和肥大细胞数均显著降低（P<0.05）;Th2细胞数量及组织中TARC、IL-6、IL-4、IL-5表达水平显著降低（P<0.01）。结论苦参可通过抑制MAPK/NF-κB信号通路改善Th1/Th2免疫平衡从而减轻AD的症状。

关键词：苦参特应性皮炎辅助型T细胞1/辅助型T细胞2失衡有丝分裂原活化蛋白激酶/核因子κB信号通路中药

中药多糖防治非酒精性脂肪性肝病作用机制研究进展

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中草药 2024年第17期55卷 6016-6025页

作者：田晓玲蒋佳佳张彧杜珊陈斌湖南中医药大学第一附属医院

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）已成为全球最常见的慢性疾病之一，有效治疗NAFLD已被当代医学列为亟待解决的关键问题。中药多糖具有广泛的药理活性。大量临床前研究证实，中药多糖可在多个相互关联的... 详细信息

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）已成为全球最常见的慢性疾病之一，有效治疗NAFLD已被当代医学列为亟待解决的关键问题。中药多糖具有广泛的药理活性。大量临床前研究证实，中药多糖可在多个相互关联的水平上干扰NAFLD的发生发展，如改善脂质代谢与胰岛素抵抗、调控氧化应激、缓解免疫炎症反应和调节肠道菌群等，从而显示出作为新型抗NAFLD药物的巨大潜力。通过总结中药多糖对NAFLD的防治作用及作用机制，为中药多糖在植物医学和现代药物的应用提供依据，为促进中药多糖资源的开发利用和NAFLD的新药研发提供参考。

关键词：中药多糖非酒精性脂肪性肝病脂质代谢氧化应激炎症反应肠道菌群

巨噬细胞激活与极化在心肌纤维化的作用及中医药干预

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 272-282页

作者：姚昆鹏蔡虎志赵祥宫克田楚宁罗云涛彭丽琪欧广洋陈青扬陈新宇湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激... 详细信息

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激活/极化在MF中占有重要地位。随着中医药研究的不断深入,学者们发现中药可通过调控肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)系统、调节炎症进程、修复细胞外基质、管理氧化应激、维护自噬平衡等方面干预MF,而这一过程与巨噬细胞的激活及M1/M2型极化密切相关。在整个MF过程中,巨噬细胞活化是有益的,但不可过度,否则将变为有害。在MF早期,适当的M1型巨噬细胞极化有利于激活免疫,清除有害物质;在MF中后期,适当的M2型巨噬细胞极化有利于重塑受损的心肌。若巨噬细胞活化过度/不足,或M1/M2型巨噬细胞极化的平衡被打破,则效应由挽救变为破坏。具有调控巨噬细胞活化/极化的中药多具有益气养阴,理气活血的功效,但也不乏清热燥湿解毒之品。因此,MF的发生可能为气阴不足、湿热蕴毒、气滞血瘀所致。通过总结巨噬细胞激活/极化在MF中涉及的生物学过程,阐述中医药从不同角度调控巨噬细胞激活及M1/M2型极化改善MF的研究进展,以期为中医药治疗MF提供借鉴。

关键词：巨噬细胞心肌纤维化中医药心力衰竭

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中医药调控线粒体功能防治肝衰竭的研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 234-243页

作者：田晓玲张彧陈斌湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义... 详细信息

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义。LF发病机制复杂,线粒体是肝细胞内较敏感的细胞器之一,作为细胞内能量代谢的中心环节,已有大量研究显示,在LF中,肝细胞内线粒体在结构和功能上发生了改变,线粒体结构和功能异常在LF疾病进程中发挥着重要作用。其中线粒体呼吸链障碍、线粒体DNA损伤、线粒体通透性转换孔开放、线粒体质量控制失衡及线粒体氧化应激等多种因素交织成网络,构成一个复杂而统一的整体,成为影响LF病程进展的关键节点。近年来,研究人员开始着力于研究能够通过调节肝脏线粒体功能,防治LF的药物。随着研究的深入,中医药在LF防治中不断有新的突破,诸多研究证实了中医药可通过保护线粒体功能来发挥防治LF的效用,其作用效果可概括为减轻肝细胞损伤、抑制肝细胞死亡及促进肝细胞再生3个方面,以有效代偿肝功能,促进肝实质质量与功能的恢复。该文对线粒体的结构与功能、LF与线粒体的关系及中医药领域干预线粒体功能防治LF的研究进行总结性梳理,以期为临床中医药治疗LF提供一定的思路及借鉴。

关键词：中医药肝衰竭线粒体作用机制

基于HGF/PI3K/Akt信号轴研究赤芍-附子药对促进慢加急性肝衰竭肝细胞再生的作用机制

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中国中药杂志 2024年第15期49卷 4188-4196页

作者：田晓玲张彧杜珊伍梦思谭年花陈斌湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

基于肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号轴研究赤芍-附子药对对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠的治疗作用及对肝细胞再生的影响。采用牛血清白蛋白皮下及尾静脉注射联合脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)+D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)腹腔注射构建ACLF大鼠模型,实验设置正常对照(NC)组、模型(vehicle)组、赤芍-附子药对(SFYD,5.85 g·kg^(-1))组、促肝细胞生长颗粒(HGFG,4.05 g·kg^(-1))组。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察大鼠肝组织病理变化。全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(alanineamino transferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transa-minase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)。ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子水平。免疫荧光染色检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞增殖相关抗原(antigen identified by monoclonal antibody,Ki67)及细胞周期蛋白(cell cycle protein B1,CyclinB1)阳性表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测HGF、结合蛋白Gab1(grb2 associated binding protein 1,Gab1)、PI3K、Akt、磷酸化PI3K(phosphorylation PI3K,p-PI3K)、磷酸化Akt(phosphorylation Akt,p-Akt)mRNA及蛋白表达水平。结果显示,与vehicle组比较,SFYD组大鼠肝组织病理评分降低,肝功能及炎症反应改善,PCNA、Ki67、CyclinB1荧光表达增强。同时与模型组相比,SFYD组HGF、Gab1蛋白表达上调,PI3K、Akt磷酸化激活。以上研究表明赤芍-附子药对通过减轻肝细胞炎症损伤以及促进肝细胞再生来达到抗肝衰竭的效应,其具体调控机制可能与激活HGF/PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：慢加急性肝衰竭赤芍-附子药对 HGF/PI3K/Akt 肝再生

基于“引经理论”探讨中药调控SDF-1/CXCR4信号通路影响骨髓间充质干细胞归巢及分化的科学内涵

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中草药 2024年第20期55卷 7172-7179页

作者：孙钰刘恩旭李兆勇杨少锋湖南中医药大学湖南中医药大学第一附属医院

“引经理论”为中医基础理论的重要内容与“归经理论”同源发展。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)广泛分布于骨髓及各种结缔组织中,具有极强的多向分化、自我复制与自我更新能力。基质细胞衍生因子-1 (stromal cel... 详细信息

“引经理论”为中医基础理论的重要内容与“归经理论”同源发展。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)广泛分布于骨髓及各种结缔组织中,具有极强的多向分化、自我复制与自我更新能力。基质细胞衍生因子-1 (stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC型趋化因子受体4 (C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路为目前学界公认的影响BMSCs归巢及分化的热点通路。基于SDF-1/CXCR4信号通路,以BMSCs归巢及分化为切入点,将中医“引经理论”与细胞靶向迁移学说相结合、使宏观中医理论具体化,进而从分子生物学角度深入探讨中医“引经理论”的科学性与可行性,为引经药物靶向干预BMSCs的临床应用提供充分的理论依据。

关键词：引经理论骨髓间充质干细胞 SDF-1/CXCR4 细胞归巢及分化细胞靶向迁移学说

不同氧浓度下髓核细胞中PI3K/Akt/HIF-1α信号通路表达对延缓椎间盘退变的意义

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中国组织工程研究 2024年第28期28卷 4491-4497页

作者：周明瀚张慧郑先波徐无忌湖南中医药大学第二附属医院骨伤二科湖南省长沙市410208

背景:椎间盘退变是一种由于细胞凋亡、氧化应激、炎症反应等多种因素共同作用导致的疾病,目前认为其核心在于髓核细胞退变与凋亡,然而具体病理机制尚不明确。目的:通过探究不同氧浓度下髓核细胞中磷脂酰激醇-3-激酶(phosphatidylinosito... 详细信息

背景:椎间盘退变是一种由于细胞凋亡、氧化应激、炎症反应等多种因素共同作用导致的疾病,目前认为其核心在于髓核细胞退变与凋亡,然而具体病理机制尚不明确。目的:通过探究不同氧浓度下髓核细胞中磷脂酰激醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF-1α)信号通路的表达及髓核细胞凋亡情况,明确不同氧浓度下髓核细胞的生物学特性,探讨椎间盘退变的机制。方法:取人正常及退变髓核细胞,取第2代细胞用于影像学鉴定,取第3代细胞分别采用37℃、空气、100%湿度环境,100μmol/L CoCl_(2)浓度的Leibovitz’s培养基、100μmol/L H_(2)O_(2)浓度的10%胎牛血清培养基构建常氧、低氧及氧化应激环境,将细胞分为正常髓核细胞+低氧环境、正常髓核细胞+常氧环境、正常髓核细胞+氧化应激环境、退变髓核细胞+低氧环境、退变髓核细胞+常氧环境、退变髓核细胞+氧化应激环境6组;采用CCK-8法检测细胞活力及增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR、Western-blot检测PI3K、AKT、HIF-1α的蛋白及mRNA表达情况。结果与结论:①在不同的氧浓度下,正常及退变髓核细胞的增殖率随氧浓度升高而下降,凋亡率随氧浓度升高而上升(P二者交互作用对髓核细胞增殖率与凋亡率影响显著(P二者交互作用对3项指标的蛋白和mRNA表达影响极为显著(P<0.001)。③结果表明,髓核细胞的增殖、凋亡与氧浓度和细胞自身功能状态密切相关,PI3K/Akt/HIF-1α信号通路在不同细胞功能状态及不同氧浓度环境下具有拮抗调节作用,其机制可能与PI3K/Akt信号通路被激活,并翻译转录HIF-1α,从而维持活性氧自由基代谢平衡有关。该通路对于抑制氧化应激,拮抗髓核细胞凋亡,进而延缓椎间盘退变具有重要意义。

关键词：氧浓度髓核细胞细胞凋亡氧化应激生物学特性信号通路

线粒体衍生肽MOTS-c调节骨稳态机制及运动适应性研究

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中国骨质疏松杂志 2024年第10期 1499-1505页

作者：孙钰刘恩旭段嘉豪李兆勇杨雷杨少锋湖南中医药大学湖南中医药大学第一附属医院

骨稳态包括成骨细胞与破骨细胞介导的骨形成与骨吸收，骨组织的完整性依赖二者间的动态平衡。MOTS-c作为一种新型线粒体衍生肽(mitochondria-derived peptides, MDPs)是“线粒体-细胞”间信息交流的重要媒介，在维持机体能量转换和代谢... 详细信息

骨稳态包括成骨细胞与破骨细胞介导的骨形成与骨吸收，骨组织的完整性依赖二者间的动态平衡。MOTS-c作为一种新型线粒体衍生肽(mitochondria-derived peptides, MDPs)是“线粒体-细胞”间信息交流的重要媒介，在维持机体能量转换和代谢稳态等方面发挥关键作用。研究表明，MOTS-c能调控成骨与破骨细胞活性，从而调节骨代谢平衡。而运动作为外源性刺激，在“细胞-环境”范畴内，通过影响MOTS-c表达参与多种疾病的发展。这表明运动能成为宏观与微观刺激的桥梁，在疾病演变过程中发挥关键作用。然而，罕有文献对MOTS-c调控骨稳态机制进行系统性回顾与总结。此外，运动对骨组织MOTS-c表达调控的详细机制尚不清晰。基于此，本文全面综述了MOTS-c的分布及功能，总结了其影响骨稳态的详细机制，同时对MOTS-c、运动及骨稳态3者间的潜在关联进行了探索性研究，为代谢性骨病的防治提供了新视角。

关键词： MOTS-c 骨稳态运动线粒体

基于代谢组学和网络药理学研究五虎汤干预RSV诱导哮喘的效应物质及作用机制

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中国中药杂志 2024年

作者：姚冰刘靖雷王孟清罗银河谢静荀春铮李凡黄婷曾庆佳湖南中医药大学湖南中医药大学第一附属医院

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒（RSV）诱发哮喘的效应物质及作用机制。使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分；借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及基因本体（GO）功... 详细信息

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒（RSV）诱发哮喘的效应物质及作用机制。使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分；借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及基因本体（GO）功能分析。同时将靶点蛋白及代谢物-靶点-通路等信息导入STRING数据库，构建蛋白互作网络，明确五虎汤核心成分及关键通路。体内实验部分使用RSV联合鸡卵清蛋白（OVA）建立哮喘模型，通过肺功能、苏木精-伊红（HE）染色、酶联免疫吸附实验（ELISA）、蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法验证五虎汤对RSV诱导哮喘小鼠的干预作用。结果显示，五虎汤入血成分以黄酮类、苯丙素类、木脂素类、萜类等化合物为主，作用于儿童哮喘的核心成分有(－)-表没食子儿茶素、山柰素、异甘草素、香叶木素、桦木酸、熊果酸、瑞香素、七叶素等，钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、NOD样受体信号通路、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路等是其靶点主要作用通路。体内实验结果表明，五虎汤能够改善肺功能指标，下调白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17((IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，并且能够降低肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、核因子-κB亚基1（NFKB1）等蛋白的表达，减轻中性粒细胞炎症浸润及肺淤血。结果表明，五虎汤通过多组分、多靶点、多途径的协同作用干预病毒诱发哮喘，体内实验证明其能抑制NOD样受体信号通路的激活，减轻哮喘小鼠气道炎症与气道损伤。

关键词：代谢组学网络药理学五虎汤中药入血成分 RSV 儿童哮喘 NOD样受体信号通路