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滋阴明目方调控GRP78/IRE1/ATF6通路改善视网膜色素变性的体外研究

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北京中医药大学学报 2024年第6期47卷 773-781页

作者：欧晨宋厚盼谢薇彭俊曾梅艳彭清华湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南中医药大学

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目... 详细信息

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目方含药血清及空白血清,采用液质联用技术分析滋阴明目方含药血清的化学成分。采用衣霉素干预人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞构建内质网应激损伤模型。CCK-8法筛选滋阴明目方含药血清最优体积分数。将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组,分别进行干预。干预24 h后,采用多时间动态细胞功能分析系统对细胞进行形态观察,CCK-8法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法和微滴式数字PCR法检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及mRNA表达。结果液质联用分析得到滋阴明目方含药血清中包含熊果苷、水杨酸、木犀草素、丹酚酸A、刺桐碱、牛磺酸、檞皮素、麦芽酚、黄芩苷、丹参素等主要化学成分。与模型组比较,滋阴明目方含药血清组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少;滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组的细胞存活率均升高,细胞凋亡率均下降(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组GRP78、IRE1、ATF6蛋白表达降低,牛磺熊去氧胆酸组IRE1、ATF6蛋白表达降低(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组GRP78、IRE1、ATF6 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论滋阴明目方可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的细胞凋亡,其分子机制可能与下调GRP78、IRE1、ATF6的表达,抑制细胞内质网应激反应有关。

关键词：滋阴明目方人视网膜色素上皮细胞系-19 内质网应激葡萄糖调节蛋白78/1型内质网转膜蛋白激酶/活化转录因子6通路凋亡

痹祺胶囊联合针刺治疗气滞血瘀型神经根型颈椎病的疗效评价

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中草药 2024年第14期55卷 4803-4810页

作者：张芬刘陆晨王怀泽刘豪华孙奎朱俊琛储诚煜王峰安徽中医药大学第二附属医院骨二科安徽合肥230061 安徽中医药大学第二附属医院骨一科安徽合肥230061 安徽中医药大学第一附属医院骨一科安徽合肥230031

目的评价口服痹祺胶囊联合针刺治疗对气滞血瘀型神经根型颈椎病的临床疗效。方法选取60例气滞血瘀型神经根型颈椎病患者,随机分为治疗组和对照组,两组各30例。对照组仅给予针刺治疗,1次/d,留针30 min;治疗组在针刺治疗的基础上,口服痹... 详细信息

目的评价口服痹祺胶囊联合针刺治疗对气滞血瘀型神经根型颈椎病的临床疗效。方法选取60例气滞血瘀型神经根型颈椎病患者,随机分为治疗组和对照组,两组各30例。对照组仅给予针刺治疗,1次/d,留针30 min;治疗组在针刺治疗的基础上,口服痹祺胶囊,4粒/次,2次/d;两组患者均治疗2周。观察两组的临床疗效及治疗前和治疗结束后2周、4周的疼痛视觉模拟评分(visual analogue score,VAS)、颈椎功能障碍指数(neck disability index,NDI)、中医证候积分、颈椎活动度。结果60例患者中共有3例脱落,最终纳入57例。治疗结束后2周,两组总有效率较接近(治疗组96.4%,对照组89.7%),而治疗结束后4周,治疗组总有效率(92.9%)显著优于对照组(65.5%)(P0.05),治疗结束后2周和4周两组患者的VAS评分均低于治疗前(P0.05),治疗结束后2周和4周两组患者的NDI均低于治疗前(P中医证候积分无明显差异(P>0.05),治疗结束后2周和4周两组患者的中医证候积分均低于治疗前(P中医证候积分明显低于对照组(P0.05),治疗结束后2周和4周两组患者的颈椎活动度均高于治疗前(P<0.05),且治疗组颈椎活动度明显高于对照组(P<0.05)。结论采用痹祺胶囊联合针刺治疗气滞血瘀型神经根型颈椎病临床疗效显著,改善颈椎功能更明显,疗效更加稳定持久。

关键词：痹祺胶囊气滞血瘀神经根型颈椎病针刺气滞血瘀

苦参通过抑制MAPK/NF-κB通路改善免疫平衡缓解特应性皮炎实验研究

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：黄盼潘意王畅汪海珍胡凡湖南中医药大学第二附属医院肛肠科湖南中医药大学第二附属医院皮肤科

目的探讨苦参对特应性皮炎（AD）辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)失衡的治疗作用及其内在分子机制。方法将24只雌性C57BL/6小鼠，按体重分层随机分为正常对照组、AD模型组和AD+苦参组，每组8只。采用2,4-二硝基氯苯/粉尘螨提取物... 详细信息

目的探讨苦参对特应性皮炎（AD）辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)失衡的治疗作用及其内在分子机制。方法将24只雌性C57BL/6小鼠，按体重分层随机分为正常对照组、AD模型组和AD+苦参组，每组8只。采用2,4-二硝基氯苯/粉尘螨提取物（DNCB/DFE）诱导建立AD小鼠模型。将人表皮角质形成细胞（HaCaT）分成对照组、干扰素-γ(IFN-γ)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、IFN-γ/TNF-α+苦参组，共3组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）检测IFN-γ、TNF-α、白细胞介素（IL）-2、胸腺激活调节趋化因子（TARC）、IL-4、IL-5、IL-6 mRNA表达，Western Blot检测小鼠组织和细胞中磷酸化有丝分裂原活化蛋白激酶（p-p38）、p38、磷酸化核因子κB p65亚单位（p-p65）、p65蛋白表达，ELISA检测IL-6、TARC释放水平以及流式Th1/Th2细胞比例。结果在细胞水平方面：与对照组比较，IFN-γ/TNF-α组IL-6、TARC mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,p-p38、p-p65蛋白表达均上调（P<0.01）；与IFN-γ/TNF-α组比较，IFN-γ/TNF-α+苦参组IL-6、TARC mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）,p-p38、p-p65蛋白表达显著下调（P<0.01）。在动物水平研究中：与正常对照组比较，AD模型组小鼠皮肤组织中p-p38、p-p65蛋白表达水平显著增加（P<0.01）；耳部皮肤组织炎症细胞浸润增多，角质化过度、肥大细胞浸润增加（P<0.01），且皮肤中Th2细胞含量增加（P<0.01）；小鼠皮肤中IFN-γ、TNF-α、TARC、IL-6、IL-4、IL-5表达增加（P<0.01）；与AD模型组比较，AD+苦参治疗组小鼠皮肤组织中p-p38、p-p65蛋白表达水平均减少（P<0.01）；表皮、真皮厚度和肥大细胞数均显著降低（P<0.05）;Th2细胞数量及组织中TARC、IL-6、IL-4、IL-5表达水平显著降低（P<0.01）。结论苦参可通过抑制MAPK/NF-κB信号通路改善Th1/Th2免疫平衡从而减轻AD的症状。

关键词：苦参特应性皮炎辅助型T细胞1/辅助型T细胞2失衡有丝分裂原活化蛋白激酶/核因子κB信号通路中药

巨噬细胞激活与极化在心肌纤维化的作用及中医药干预

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 272-282页

作者：姚昆鹏蔡虎志赵祥宫克田楚宁罗云涛彭丽琪欧广洋陈青扬陈新宇湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激... 详细信息

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激活/极化在MF中占有重要地位。随着中医药研究的不断深入,学者们发现中药可通过调控肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)系统、调节炎症进程、修复细胞外基质、管理氧化应激、维护自噬平衡等方面干预MF,而这一过程与巨噬细胞的激活及M1/M2型极化密切相关。在整个MF过程中,巨噬细胞活化是有益的,但不可过度,否则将变为有害。在MF早期,适当的M1型巨噬细胞极化有利于激活免疫,清除有害物质;在MF中后期,适当的M2型巨噬细胞极化有利于重塑受损的心肌。若巨噬细胞活化过度/不足,或M1/M2型巨噬细胞极化的平衡被打破,则效应由挽救变为破坏。具有调控巨噬细胞活化/极化的中药多具有益气养阴,理气活血的功效,但也不乏清热燥湿解毒之品。因此,MF的发生可能为气阴不足、湿热蕴毒、气滞血瘀所致。通过总结巨噬细胞激活/极化在MF中涉及的生物学过程,阐述中医药从不同角度调控巨噬细胞激活及M1/M2型极化改善MF的研究进展,以期为中医药治疗MF提供借鉴。

关键词：巨噬细胞心肌纤维化中医药心力衰竭

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中医药调控线粒体功能防治肝衰竭的研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 234-243页

作者：田晓玲张彧陈斌湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义... 详细信息

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义。LF发病机制复杂,线粒体是肝细胞内较敏感的细胞器之一,作为细胞内能量代谢的中心环节,已有大量研究显示,在LF中,肝细胞内线粒体在结构和功能上发生了改变,线粒体结构和功能异常在LF疾病进程中发挥着重要作用。其中线粒体呼吸链障碍、线粒体DNA损伤、线粒体通透性转换孔开放、线粒体质量控制失衡及线粒体氧化应激等多种因素交织成网络,构成一个复杂而统一的整体,成为影响LF病程进展的关键节点。近年来,研究人员开始着力于研究能够通过调节肝脏线粒体功能,防治LF的药物。随着研究的深入,中医药在LF防治中不断有新的突破,诸多研究证实了中医药可通过保护线粒体功能来发挥防治LF的效用,其作用效果可概括为减轻肝细胞损伤、抑制肝细胞死亡及促进肝细胞再生3个方面,以有效代偿肝功能,促进肝实质质量与功能的恢复。该文对线粒体的结构与功能、LF与线粒体的关系及中医药领域干预线粒体功能防治LF的研究进行总结性梳理,以期为临床中医药治疗LF提供一定的思路及借鉴。

关键词：中医药肝衰竭线粒体作用机制

基于HGF/PI3K/Akt信号轴研究赤芍-附子药对促进慢加急性肝衰竭肝细胞再生的作用机制

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中国中药杂志 2024年第15期49卷 4188-4196页

作者：田晓玲张彧杜珊伍梦思谭年花陈斌湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

基于肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号轴研究赤芍-附子药对对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠的治疗作用及对肝细胞再生的影响。采用牛血清白蛋白皮下及尾静脉注射联合脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)+D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)腹腔注射构建ACLF大鼠模型,实验设置正常对照(NC)组、模型(vehicle)组、赤芍-附子药对(SFYD,5.85 g·kg^(-1))组、促肝细胞生长颗粒(HGFG,4.05 g·kg^(-1))组。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察大鼠肝组织病理变化。全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(alanineamino transferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transa-minase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)。ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子水平。免疫荧光染色检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞增殖相关抗原(antigen identified by monoclonal antibody,Ki67)及细胞周期蛋白(cell cycle protein B1,CyclinB1)阳性表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测HGF、结合蛋白Gab1(grb2 associated binding protein 1,Gab1)、PI3K、Akt、磷酸化PI3K(phosphorylation PI3K,p-PI3K)、磷酸化Akt(phosphorylation Akt,p-Akt)mRNA及蛋白表达水平。结果显示,与vehicle组比较,SFYD组大鼠肝组织病理评分降低,肝功能及炎症反应改善,PCNA、Ki67、CyclinB1荧光表达增强。同时与模型组相比,SFYD组HGF、Gab1蛋白表达上调,PI3K、Akt磷酸化激活。以上研究表明赤芍-附子药对通过减轻肝细胞炎症损伤以及促进肝细胞再生来达到抗肝衰竭的效应,其具体调控机制可能与激活HGF/PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：慢加急性肝衰竭赤芍-附子药对 HGF/PI3K/Akt 肝再生

基于“引经理论”探讨中药调控SDF-1/CXCR4信号通路影响骨髓间充质干细胞归巢及分化的科学内涵

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中草药 2024年第20期55卷 7172-7179页

作者：孙钰刘恩旭李兆勇杨少锋湖南中医药大学湖南中医药大学第一附属医院

“引经理论”为中医基础理论的重要内容与“归经理论”同源发展。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)广泛分布于骨髓及各种结缔组织中,具有极强的多向分化、自我复制与自我更新能力。基质细胞衍生因子-1 (stromal cel... 详细信息

“引经理论”为中医基础理论的重要内容与“归经理论”同源发展。骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)广泛分布于骨髓及各种结缔组织中,具有极强的多向分化、自我复制与自我更新能力。基质细胞衍生因子-1 (stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC型趋化因子受体4 (C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路为目前学界公认的影响BMSCs归巢及分化的热点通路。基于SDF-1/CXCR4信号通路,以BMSCs归巢及分化为切入点,将中医“引经理论”与细胞靶向迁移学说相结合、使宏观中医理论具体化,进而从分子生物学角度深入探讨中医“引经理论”的科学性与可行性,为引经药物靶向干预BMSCs的临床应用提供充分的理论依据。

关键词：引经理论骨髓间充质干细胞 SDF-1/CXCR4 细胞归巢及分化细胞靶向迁移学说

基于代谢组学和网络药理学研究五虎汤干预RSV诱导哮喘的效应物质及作用机制

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中国中药杂志 2024年

作者：姚冰刘靖雷王孟清罗银河谢静荀春铮李凡黄婷曾庆佳湖南中医药大学湖南中医药大学第一附属医院

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒（RSV）诱发哮喘的效应物质及作用机制。使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分；借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及基因本体（GO）功... 详细信息

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒（RSV）诱发哮喘的效应物质及作用机制。使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分；借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析及基因本体（GO）功能分析。同时将靶点蛋白及代谢物-靶点-通路等信息导入STRING数据库，构建蛋白互作网络，明确五虎汤核心成分及关键通路。体内实验部分使用RSV联合鸡卵清蛋白（OVA）建立哮喘模型，通过肺功能、苏木精-伊红（HE）染色、酶联免疫吸附实验（ELISA）、蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法验证五虎汤对RSV诱导哮喘小鼠的干预作用。结果显示，五虎汤入血成分以黄酮类、苯丙素类、木脂素类、萜类等化合物为主，作用于儿童哮喘的核心成分有(－)-表没食子儿茶素、山柰素、异甘草素、香叶木素、桦木酸、熊果酸、瑞香素、七叶素等，钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、NOD样受体信号通路、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路等是其靶点主要作用通路。体内实验结果表明，五虎汤能够改善肺功能指标，下调白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17((IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平，并且能够降低肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、核因子-κB亚基1（NFKB1）等蛋白的表达，减轻中性粒细胞炎症浸润及肺淤血。结果表明，五虎汤通过多组分、多靶点、多途径的协同作用干预病毒诱发哮喘，体内实验证明其能抑制NOD样受体信号通路的激活，减轻哮喘小鼠气道炎症与气道损伤。

关键词：代谢组学网络药理学五虎汤中药入血成分 RSV 儿童哮喘 NOD样受体信号通路

基于铁死亡探讨慢性肾脏病的发病机制及中医药干预进展

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中国中药杂志 2024年第10期49卷 2629-2639页

作者：杨璧英刘相胡爽彭亚军张伟宁刘丙龙何泽云湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410021

慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)起病隐匿,因其发病率高、知晓率低、诊断率低、预后差和医疗费用高等特点,已成为危害人类健康的重要公共卫生问题。目前已有多项研究表明CKD在其发生发展过程中会出现不同程度的铁死亡特征,而中... 详细信息

慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)起病隐匿,因其发病率高、知晓率低、诊断率低、预后差和医疗费用高等特点,已成为危害人类健康的重要公共卫生问题。目前已有多项研究表明CKD在其发生发展过程中会出现不同程度的铁死亡特征,而中药可以通过靶向铁代谢、脂质过氧化及抗氧化系统等抑制铁死亡来延缓CKD的进展,铁死亡干预机制逐渐成为CKD研究的重点领域之一。中医药宝库集数千年传统中医经验与智慧于一身,注重人体功能的整体调节,能够激发人体的抗病和康复能力,对治疗CKD具有一定优势,但目前尚缺乏中医药干预铁死亡治疗CKD及铁死亡与CKD发病机制的总结性综述。该文汇总国内外最新研究进展,简述铁死亡主要的作用机制,对铁死亡与CKD发病机制的最新研究进展进行了系统综述,融合了与CKD铁死亡相关的“虚”“瘀”“痰浊”“毒”等中医理论,总结了中药活性成分、中药复方干预铁死亡治疗CKD的研究现状,以期从铁死亡角度为中医药防治CKD提供新靶点和新方向。

关键词：铁死亡慢性肾脏病铁代谢脂质过氧化抗氧化系统中药活性成分中药复方