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苦参通过抑制MAPK/NF-κB通路改善免疫平衡缓解特应性皮炎实验研究

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：黄盼潘意王畅汪海珍胡凡湖南中医药大学第二附属医院肛肠科湖南中医药大学第二附属医院皮肤科

目的探讨苦参对特应性皮炎（AD）辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)失衡的治疗作用及其内在分子机制。方法将24只雌性C57BL/6小鼠，按体重分层随机分为正常对照组、AD模型组和AD+苦参组，每组8只。采用2,4-二硝基氯苯/粉尘螨提取物... 详细信息

目的探讨苦参对特应性皮炎（AD）辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)失衡的治疗作用及其内在分子机制。方法将24只雌性C57BL/6小鼠，按体重分层随机分为正常对照组、AD模型组和AD+苦参组，每组8只。采用2,4-二硝基氯苯/粉尘螨提取物（DNCB/DFE）诱导建立AD小鼠模型。将人表皮角质形成细胞（HaCaT）分成对照组、干扰素-γ(IFN-γ)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、IFN-γ/TNF-α+苦参组，共3组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）检测IFN-γ、TNF-α、白细胞介素（IL）-2、胸腺激活调节趋化因子（TARC）、IL-4、IL-5、IL-6 mRNA表达，Western Blot检测小鼠组织和细胞中磷酸化有丝分裂原活化蛋白激酶（p-p38）、p38、磷酸化核因子κB p65亚单位（p-p65）、p65蛋白表达，ELISA检测IL-6、TARC释放水平以及流式Th1/Th2细胞比例。结果在细胞水平方面：与对照组比较，IFN-γ/TNF-α组IL-6、TARC mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,p-p38、p-p65蛋白表达均上调（P<0.01）；与IFN-γ/TNF-α组比较，IFN-γ/TNF-α+苦参组IL-6、TARC mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）,p-p38、p-p65蛋白表达显著下调（P<0.01）。在动物水平研究中：与正常对照组比较，AD模型组小鼠皮肤组织中p-p38、p-p65蛋白表达水平显著增加（P<0.01）；耳部皮肤组织炎症细胞浸润增多，角质化过度、肥大细胞浸润增加（P<0.01），且皮肤中Th2细胞含量增加（P<0.01）；小鼠皮肤中IFN-γ、TNF-α、TARC、IL-6、IL-4、IL-5表达增加（P<0.01）；与AD模型组比较，AD+苦参治疗组小鼠皮肤组织中p-p38、p-p65蛋白表达水平均减少（P<0.01）；表皮、真皮厚度和肥大细胞数均显著降低（P<0.05）;Th2细胞数量及组织中TARC、IL-6、IL-4、IL-5表达水平显著降低（P<0.01）。结论苦参可通过抑制MAPK/NF-κB信号通路改善Th1/Th2免疫平衡从而减轻AD的症状。

关键词：苦参特应性皮炎辅助型T细胞1/辅助型T细胞2失衡有丝分裂原活化蛋白激酶/核因子κB信号通路中药

滋阴明目方调控GRP78/IRE1/ATF6通路改善视网膜色素变性的体外研究

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北京中医药大学学报 2024年第6期47卷 773-781页

作者：欧晨宋厚盼谢薇彭俊曾梅艳彭清华湖南中医药大学第一附属医院长沙410007 湖南中医药大学

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目... 详细信息

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目方含药血清及空白血清,采用液质联用技术分析滋阴明目方含药血清的化学成分。采用衣霉素干预人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞构建内质网应激损伤模型。CCK-8法筛选滋阴明目方含药血清最优体积分数。将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组,分别进行干预。干预24 h后,采用多时间动态细胞功能分析系统对细胞进行形态观察,CCK-8法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法和微滴式数字PCR法检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及mRNA表达。结果液质联用分析得到滋阴明目方含药血清中包含熊果苷、水杨酸、木犀草素、丹酚酸A、刺桐碱、牛磺酸、檞皮素、麦芽酚、黄芩苷、丹参素等主要化学成分。与模型组比较,滋阴明目方含药血清组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少;滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组的细胞存活率均升高,细胞凋亡率均下降(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组GRP78、IRE1、ATF6蛋白表达降低,牛磺熊去氧胆酸组IRE1、ATF6蛋白表达降低(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组GRP78、IRE1、ATF6 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论滋阴明目方可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的细胞凋亡,其分子机制可能与下调GRP78、IRE1、ATF6的表达,抑制细胞内质网应激反应有关。

关键词：滋阴明目方人视网膜色素上皮细胞系-19 内质网应激葡萄糖调节蛋白78/1型内质网转膜蛋白激酶/活化转录因子6通路凋亡

基于“调枢通胃”理论针刺治疗血虚肠燥型脑卒中后便秘的临床疗效观察

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中华中医药杂志 2024年第6期39卷 3221-3226页

作者：韩文华展立芬江钰鄢天涯朱墨豪谌瑶付中应刘未艾刘恋湖南中医药大学第二附属医院长沙410005 湖南中医药大学长沙410208

目的:观察“调枢通胃”理论指导下的针刺疗法治疗血虚肠燥型脑卒中后便秘的临床疗效,并探讨可能的作用机制。方法:将60例血虚肠燥型脑卒中后便秘患者随机分为针刺组(30例)和药物组(30例),在内科基础治疗和对症处理的基础上,针刺组采用... 详细信息

目的:观察“调枢通胃”理论指导下的针刺疗法治疗血虚肠燥型脑卒中后便秘的临床疗效,并探讨可能的作用机制。方法:将60例血虚肠燥型脑卒中后便秘患者随机分为针刺组(30例)和药物组(30例),在内科基础治疗和对症处理的基础上,针刺组采用“调枢通胃”理论指导下的针刺疗法,穴取百会、内关、支沟、天枢、三阴交,留针30 min,得气后每隔10分钟行针1次,每日针刺1次,7 d为1个疗程,共3个疗程;药物组口服生血通便颗粒,每日1次,每次10 g,7 d为1个疗程,连续3个疗程。观察两组治疗前后的便秘临床症状积分以及血清胃动素(MTL)、P物质(SP)、生长抑素(SS)、血管活性肠肽(VIP)水平,并比较两组治疗临床疗效差异。结果:两组患者治疗后便秘积分及SS、VIP水平均较治疗前显著降低(P<0.05),MTL、SP水平均较治疗前显著升高(P<0.05)。针刺组患者治疗3周后便秘积分及SS、VIP水平均显著低于药物组(P<0.05),MTL、SP水平均显著高于药物组(P<0.05)。治疗1周后针刺组总有效率为63.33%(19/30),药物组为60.00%(18/30),差异无统计学意义;治疗3周后针刺组总有效率为83.33%(25/30),显著高于药物组73.33%(22/30)(P<0.05)。结论:基于“调枢通胃”理论的针刺疗法对血虚肠燥型脑卒中后便秘疗效显著,短期内疗效与口服生血通便颗粒相当,坚持治疗后疗效优于口服生血通便颗粒,其作用机制可能与调节MLT、SP、SS、VIP水平有关。

关键词：调枢通胃血虚肠燥脑卒中便秘针刺生血通便颗粒

巨噬细胞激活与极化在心肌纤维化的作用及中医药干预

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 272-282页

作者：姚昆鹏蔡虎志赵祥宫克田楚宁罗云涛彭丽琪欧广洋陈青扬陈新宇湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激... 详细信息

心肌纤维化(MF)是多种心脏疾病的常见病理表现,由于心肌细胞的不可再生性,MF的发生代表心肌出现不可逆性的损伤。以往的研究认为,成纤维细胞介导的胶原沉积是心肌纤维化的主要机制。最新的研究发现,心脏本身存在免疫调控机制,巨噬细胞激活/极化在MF中占有重要地位。随着中医药研究的不断深入,学者们发现中药可通过调控肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)系统、调节炎症进程、修复细胞外基质、管理氧化应激、维护自噬平衡等方面干预MF,而这一过程与巨噬细胞的激活及M1/M2型极化密切相关。在整个MF过程中,巨噬细胞活化是有益的,但不可过度,否则将变为有害。在MF早期,适当的M1型巨噬细胞极化有利于激活免疫,清除有害物质;在MF中后期,适当的M2型巨噬细胞极化有利于重塑受损的心肌。若巨噬细胞活化过度/不足,或M1/M2型巨噬细胞极化的平衡被打破,则效应由挽救变为破坏。具有调控巨噬细胞活化/极化的中药多具有益气养阴,理气活血的功效,但也不乏清热燥湿解毒之品。因此,MF的发生可能为气阴不足、湿热蕴毒、气滞血瘀所致。通过总结巨噬细胞激活/极化在MF中涉及的生物学过程,阐述中医药从不同角度调控巨噬细胞激活及M1/M2型极化改善MF的研究进展,以期为中医药治疗MF提供借鉴。

关键词：巨噬细胞心肌纤维化中医药心力衰竭

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中医药调控线粒体功能防治肝衰竭的研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第2期30卷 234-243页

作者：田晓玲张彧陈斌湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院长沙410007

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义... 详细信息

肝衰竭(LF)作为一种肝细胞严重损害及肝脏功能障碍的临床综合征,其高死亡率、高发病率与高医疗资源耗竭呈现出三重叠加,成为阻碍人类健康的重大疑难重症。深入研究其疾病发生的核心因素及补充治疗手段以提高LF生存率具有十分重大的意义。LF发病机制复杂,线粒体是肝细胞内较敏感的细胞器之一,作为细胞内能量代谢的中心环节,已有大量研究显示,在LF中,肝细胞内线粒体在结构和功能上发生了改变,线粒体结构和功能异常在LF疾病进程中发挥着重要作用。其中线粒体呼吸链障碍、线粒体DNA损伤、线粒体通透性转换孔开放、线粒体质量控制失衡及线粒体氧化应激等多种因素交织成网络,构成一个复杂而统一的整体,成为影响LF病程进展的关键节点。近年来,研究人员开始着力于研究能够通过调节肝脏线粒体功能,防治LF的药物。随着研究的深入,中医药在LF防治中不断有新的突破,诸多研究证实了中医药可通过保护线粒体功能来发挥防治LF的效用,其作用效果可概括为减轻肝细胞损伤、抑制肝细胞死亡及促进肝细胞再生3个方面,以有效代偿肝功能,促进肝实质质量与功能的恢复。该文对线粒体的结构与功能、LF与线粒体的关系及中医药领域干预线粒体功能防治LF的研究进行总结性梳理,以期为临床中医药治疗LF提供一定的思路及借鉴。

关键词：中医药肝衰竭线粒体作用机制

两样本双向孟德尔随机化探究银屑病与炎症性肠病的因果关系

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中国皮肤性病学杂志 2024年第9期38卷 982-988页

作者：贺守炎潘燎陈瑶王真权湖南中医药大学第二附属医院肛肠三科湖南长沙410000 湖南中医药大学第二附属医院皮肤科湖南长沙410000

目的运用孟德尔随机化(MR)探究炎症性肠病(IBD)与银屑病(PsO)的因果关系。方法选取炎症性肠病2个亚型克罗恩病(CD)及溃疡性结肠炎(UC)样本进行分析,克罗恩病和溃疡性结肠炎样本量分别为20883例和47745例。银屑病样本量为44161例。MR分... 详细信息

目的运用孟德尔随机化(MR)探究炎症性肠病(IBD)与银屑病(PsO)的因果关系。方法选取炎症性肠病2个亚型克罗恩病(CD)及溃疡性结肠炎(UC)样本进行分析,克罗恩病和溃疡性结肠炎样本量分别为20883例和47745例。银屑病样本量为44161例。MR分析以逆方差加权(IVW)法为主要分析方法,以比值比(OR)评价炎症性肠病与银屑病风险的因果关系。分别采用IVW和MR Egger法进行Cochran Q异质性检验,MR pleiotropy test函数、MR Egger回归截距进行多效性检验,MR leave one out plot函数进行敏感性分析,并计算F值(F0.05),也不是溃疡性结肠炎的风险因素(OR=1.09,95%CI:0.95~1.25;P>0.05);克罗恩病是银屑病的风险因素(OR=1.21,95%CI:1.09~1.34;P0.05)。结论克罗恩病是银屑病的风险因素,银屑病并非克罗恩病的风险因素,而溃疡性结肠炎与银屑病发病无关。

关键词：炎症性肠病银屑病孟德尔随机化因果关系

基于HGF/PI3K/Akt信号轴研究赤芍-附子药对促进慢加急性肝衰竭肝细胞再生的作用机制

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中国中药杂志 2024年第15期49卷 4188-4196页

作者：田晓玲张彧杜珊伍梦思谭年花陈斌湖南中医药大学湖南长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院湖南长沙410007

基于肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)/磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号轴研究赤芍-附子药对对慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)大鼠的治疗作用及对肝细胞再生的影响。采用牛血清白蛋白皮下及尾静脉注射联合脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)+D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)腹腔注射构建ACLF大鼠模型,实验设置正常对照(NC)组、模型(vehicle)组、赤芍-附子药对(SFYD,5.85 g·kg^(-1))组、促肝细胞生长颗粒(HGFG,4.05 g·kg^(-1))组。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察大鼠肝组织病理变化。全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(alanineamino transferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transa-minase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)。ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子水平。免疫荧光染色检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞增殖相关抗原(antigen identified by monoclonal antibody,Ki67)及细胞周期蛋白(cell cycle protein B1,CyclinB1)阳性表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测HGF、结合蛋白Gab1(grb2 associated binding protein 1,Gab1)、PI3K、Akt、磷酸化PI3K(phosphorylation PI3K,p-PI3K)、磷酸化Akt(phosphorylation Akt,p-Akt)mRNA及蛋白表达水平。结果显示,与vehicle组比较,SFYD组大鼠肝组织病理评分降低,肝功能及炎症反应改善,PCNA、Ki67、CyclinB1荧光表达增强。同时与模型组相比,SFYD组HGF、Gab1蛋白表达上调,PI3K、Akt磷酸化激活。以上研究表明赤芍-附子药对通过减轻肝细胞炎症损伤以及促进肝细胞再生来达到抗肝衰竭的效应,其具体调控机制可能与激活HGF/PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：慢加急性肝衰竭赤芍-附子药对 HGF/PI3K/Akt 肝再生

乌梅丸通过调控NLRP3炎症小体改善溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡

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中国免疫学杂志 2024年第1期40卷 97-102,109页

作者：李克亚王真权王军文湖南中医药大学第二附属医院肛肠科长沙410005 湖南中医药大学国际教育学院长沙410208

目的:研究乌梅丸通过调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体改善溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡的作用及机制。方法:选择雄性SD大鼠进行动物实验,采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠的方式建立UC模型,造模后给予不同剂量... 详细信息

目的:研究乌梅丸通过调控NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)炎症小体改善溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡的作用及机制。方法:选择雄性SD大鼠进行动物实验,采用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠的方式建立UC模型,造模后给予不同剂量乌梅丸灌胃,阴性对照(NC)-慢病毒(LV)或NLRP3-LV尾静脉注射。评价各组大鼠疾病活动指数(DAI),测量结肠长度,检测病理改变及组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达。结果:UC组大鼠结肠黏膜出现典型UC病理改变,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达高于对照组,结肠长度短于对照组(P<0.05);不同浓度乌梅丸组大鼠结肠黏膜UC病理改变改善,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达低于UC组,结肠长度长于UC组(P<0.05);高剂量乌梅丸灌胃同时注射LV,NLRP3-LV+UC+高剂量乌梅丸组大鼠结肠黏膜UC病理改变加重,DAI、组织病理评分、结肠组织IL-1β、IL-18含量及GSDMD-N、NLRP3、Cleaved caspase-1表达高于NC-LV+UC+高剂量乌梅丸组,结肠长度短于NC-LV+UC+高剂量乌梅丸组(P<0.05)。结论:乌梅丸通过抑制NLRP3炎症小体改善UC大鼠肠黏膜炎症反应及细胞焦亡。

关键词：溃疡性结肠炎乌梅丸 NLRP3炎症小体炎症反应细胞焦亡

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探讨子午流注与DNA甲基化节律在冠心病时空发生发展中的作用

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中华中医药杂志 2024年第7期39卷 3807-3811页

作者：周江敏朱洁陈杏于子璇张书萌陈伶利李杰湖南中医药大学长沙410208 湖南中医药大学第二附属医院长沙410005

子午流注理论以“天人相应”的整体观念为核心,强调因人而异、因时制宜,体现了古代原始的时间医学理念,其悠长的应用历史也充分体现其理论的合理性。DNA甲基化作为新兴的表观遗传学研究方向之一,在解释复杂的疾病病理机制方面具有独特... 详细信息

子午流注理论以“天人相应”的整体观念为核心,强调因人而异、因时制宜,体现了古代原始的时间医学理念,其悠长的应用历史也充分体现其理论的合理性。DNA甲基化作为新兴的表观遗传学研究方向之一,在解释复杂的疾病病理机制方面具有独特的优势,其节律特点也为子午流注的客观性提供了佐证。冠心病因逐年增长的发病率与病死率受到广泛关注,其复杂多样的病机是人们急需攻克的难关。文章以子午流注及DNA甲基化节律为切入点,从宏观及微观角度探讨冠心病时空发生发展中的节律性改变,寻找冠心病的时空发病机制,为未来精准治疗冠心病提供新的理论依据。

关键词：子午流注 DNA甲基化冠心病时间医学节律