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产气荚膜梭菌四环素耐药基因双重荧光定量PCR检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第10期 4630-4637页

作者：欧兰欣叶碧锦孙铭飞戚南山李娟吕敏娜林栩慧蔡海明胡俊菁宋勇乐陈祥杰朱易斌尹理君张健騑廖申权张浩吉佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室

旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA（P）和tetB（P）的双重荧光定量PCR检测方法，为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA（P）和tetB（P）的保守序列设计引物和探针，构... 详细信息

旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA（P）和tetB（P）的双重荧光定量PCR检测方法，为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA（P）和tetB（P）的保守序列设计引物和探针，构建重组质粒，对退火温度和体系进行优化，同时采用药敏纸片琼脂扩散法测定菌株对四环素类药物的敏感性加以验证。结果发现，优化后的反应程序为95℃30 s; 95℃5 s, 56℃30 s,共39个循环。使用该反应程序仅能扩增重组质粒，对照菌株无扩增曲线；组内变异系数小于1.3%,组间变异系数小于1.8%,重组质粒最低检测限度为10～2 copies·μL-1。使用本方法对33份产气荚膜梭菌临床分离株样品进行耐药基因检测，同时进行药敏试验，发现本研究建立的检测方法对四环素耐药基因的检出率均为75.8%（25/33）,且与药敏试验结果一致。综上，本研究建立了一种特异、敏感、重复性好的产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA（P）和tetB（P）的双重荧光定量PCR检测方法。

关键词：产气荚膜梭菌四环素 tetA(P) tetB(P) 双重荧光定量PCR

来源：博看期刊

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鹅星状病毒研究进展

畜牧与兽医 2024年第6期56卷 144-150页

作者：周慧孙敏华刘荣昌廖明李林林华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东省农业科学院动物卫生研究所/农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 岭南现代农业科学与技术广东省实验室广东广州510642 仲凯农业工程学院广东广州510225

鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)是近年来新发的一种传染性疾病的病原,引起我国多个省份主要养鹅地区暴发一种高致病率和高致死率的雏鹅痛风。发病的雏鹅以内脏和关节出现尿酸盐沉积为主要病变,该病可通过粪口和种蛋广泛的传播,给... 详细信息

鹅星状病毒(goose astrovirus,GAstV)是近年来新发的一种传染性疾病的病原,引起我国多个省份主要养鹅地区暴发一种高致病率和高致死率的雏鹅痛风。发病的雏鹅以内脏和关节出现尿酸盐沉积为主要病变,该病可通过粪口和种蛋广泛的传播,给养鹅业造成巨大经济损失,目前尚无有效的防治手段。本文对GAstV的流行病学、致病性、诊断方法等研究进展进行综述,以期对雏鹅痛风疫苗研究及综合防控等提供参考。

关键词：鹅星状病毒流行现状致病性诊断方法

黑龙江省扶余市麦穗鱼舌状绦虫裂头蚴的分子鉴定和系统发育分析

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中国兽医杂志 2024年第8期60卷 74-80页

作者：陈秀琴邱阳元郑敏林甦江斌王劭黄梅清福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 吉林大学人兽共患病研究所/人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062

为鉴定从黑龙江省扶余市麦穗鱼腹腔内收集的绦虫裂头蚴的种类,本试验采用PCR方法分别对其核糖体内转录间隔区(ITS)和线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因进行扩增和序列测定。运用DNASTAR软件的MegAlign程序分析核苷酸同源性,采用邻... 详细信息

为鉴定从黑龙江省扶余市麦穗鱼腹腔内收集的绦虫裂头蚴的种类,本试验采用PCR方法分别对其核糖体内转录间隔区(ITS)和线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因进行扩增和序列测定。运用DNASTAR软件的MegAlign程序分析核苷酸同源性,采用邻接法构建基于ITS和COⅠ基因序列的系统进化树,以此分析分离虫株种内与种间的系统发育关系。结果显示,各分离虫株的ITS1和ITS2基因与舌状绦虫(AY121751)的核苷酸序列同源性最高,分别为98.8%~100%和99.6%~99.7%;各分离虫株的COⅠ基因与肠舌状绦虫(EU241273)的核苷酸序列同源性最高,为91.2%~94.7%。基于ITS序列构建的系统进化树显示,舌状绦虫和双线绦虫的ITS序列具有高度的保守性,ITS区域可能不适宜作为区分舌状绦虫属内部种类的可靠分子标记。基于COⅠ基因构建的系统进化树显示,分离虫株与土耳其、俄罗斯和欧洲的肠舌状绦虫分离株进化关系最近。根据序列同源性和COⅠ基因进化树结果,初步将本试验所分离虫株鉴定为肠舌状绦虫。结果表明,COⅠ基因更适合于舌状绦虫属种类的鉴别。本试验为舌状绦虫的分子流行病学调查提供了参考。

关键词：舌状绦虫分子鉴定系统发育分析核糖体内转录间隔区线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ

山东某规模化鸡场鸡毒支原体的分离鉴定、基因分型、耐药性和致病性分析

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微生物学通报 2024年第10期 4230-4244页

作者：周峰王晨燕侯博郭锦玥福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心佛山科学技术学院生命科学与工程学院

【背景】鸡毒支原体（Mycoplasma galliscepticum, MG）主要引起家禽慢性呼吸道疾病，不同地区MG菌株的耐药性和致病性差异大，给临床防控增加了难度。【目的】明确山东省烟台市某规模化鸡场MG分离株的基因分型、耐药情况及致病力，为... 详细信息

【背景】鸡毒支原体（Mycoplasma galliscepticum, MG）主要引起家禽慢性呼吸道疾病，不同地区MG菌株的耐药性和致病性差异大，给临床防控增加了难度。【目的】明确山东省烟台市某规模化鸡场MG分离株的基因分型、耐药情况及致病力，为该地区MG防控提供科学依据。【方法】从MG阳性鸡群上腭裂拭子分离、纯化获得MG分离株，利用atpG、plsC、mraW、ugpA、DUF3196、lgT和dppC共7个管家基因进行多位点序列分型（multilocus sequence typing, MLST）并构建系统发育树。测定分离株对金霉素、大观霉素、林可霉素、泰乐菌素、泰万菌素、泰妙菌素、沃尼妙林和多西环素的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC），并对相关耐药基因23S rRNA基因V结构域、L4及L22蛋白基因进行测序分析。通过点眼攻毒和气管攻毒两种方式感染28日龄SPF鸡，评价感染10、20和30 d后气囊炎的发病率、气管组织MG载量和病理损伤。【结果】分离纯化获得9株MG，并首次发现菌株YTX2、YTX5.6、YTX11、YTX12、YTX13、YTX14和YTX15的管家基因plsC和mraW为新的等位基因，ID号分别为33和31，这7株MG分离株属于ST97型，而菌株YTX9和YTX10属于ST16型。所有MG分离株对沃尼妙林和泰妙菌素敏感（MIC≤0.25μg/mL），对泰万菌素和多西环素次之（MIC≤4μg/mL），对金霉素和林可霉素有一定程度耐药（MIC≥16μg/mL）；属于ST97的7个MG分离株对泰乐菌素存在中等程度耐药（MIC:4-8μg/mL）；选取菌株YTX5.6、YTX2和YTX10对耐药性相关的23S rRNA基因V结构域、L4和L22蛋白基因测序分析，菌株YTX5.6和YTX2在23S rRNA基因V结构域发生A2069G突变；菌株YTX5.6和YTX2的L4蛋白基因出现G568T突变，在L22蛋白基因上出现T102C、T129C、T252C、C336T和G404A突变；对泰万菌素、泰乐菌素、泰妙菌素、沃尼妙林和多西环素敏感的YTX10株与对照菌株MG Rlow株序列一致，未发生突变。在感染后10、20和30 d，菌株YTX5.6气管攻毒组气囊炎发病率分别为80%、60%和80%；菌株YTX10气管攻毒组仅在感染后20 d和30 d出现气囊炎，发病率分别为40%和20%，其余组在整个实验过程中均未发现明显气囊炎。气管攻毒组的鸡在整个感染过程中气管黏膜增厚情况均比点眼攻毒组严重（P研究从山东省烟台市某规模化鸡群共分离出9株MG菌株，分别属于ST97和ST16基因型，分离株对目前常用抗生素存在不同程度的耐药性，动物感染试验表明不同基因型菌株存在不同致病力。

关键词：鸡毒支原体耐药性多位点序列分型 MIC测定致病性

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鸭疫里默氏菌噬菌体宿主谱的拓宽

动物医学进展 2024年第5期45卷 34-38页

作者：程龙飞江南松刘荣昌傅秋玲梁齐章万春和黄瑜傅光华陈红梅福建省禽病防治重点实验室福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建省畜禽疫病防控产业技术创新研究院福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013

为建立一种拓宽鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱的方法,将6株噬菌体混合液分别与6株宿主菌、18株多重耐药鸭疫里默氏菌(不能被6株噬菌体中的任何1株裂解)培养,收获培养液中的噬菌体,混合后同样进行30次传代。噬斑分析法测定30代混合液及混合... 详细信息

为建立一种拓宽鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱的方法,将6株噬菌体混合液分别与6株宿主菌、18株多重耐药鸭疫里默氏菌(不能被6株噬菌体中的任何1株裂解)培养,收获培养液中的噬菌体,混合后同样进行30次传代。噬斑分析法测定30代混合液及混合液中单一噬菌体的噬菌谱。结果表明,30代噬菌体混合液可裂解79.2%(19/24)的鸭疫里默氏菌试验菌株;30代噬菌体混合液中分离出的单一噬菌体能裂解的试验菌株数量为2~9株;裂解数最多的5株单一噬菌体,以各自宿主菌传代10次,噬菌谱没有发生变化;将裂解谱互补的单一噬菌体混合,4株噬菌体即可裂解19株试验菌株,与30代噬菌体混合液相同。说明建立的方法可以拓宽噬菌体混合液、单一噬菌体的噬菌谱,为噬菌体鸡尾酒制剂的毒株选择奠定了基础。

关键词：鸭疫里默氏菌噬菌体噬菌谱拓宽

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干扰素刺激基因20的研究进展

畜牧与兽医 2024年第8期56卷 121-124页

作者：沈海燕王梦璐王松祺聂晶晶瞿云芝刘志成张春红廖明张建峰广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 华南农业大学兽医学院广东广州510642

干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)属于DEDDh外切核酸酶家族,具有3′-5′端外切核酸酶活性,能降解RNA和DNA。ISG20在宿主抗病毒天然免疫应答中起着重要作用。此外,ISG20在特定疾病中的作用以及将其作为疾病的生物... 详细信息

干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)属于DEDDh外切核酸酶家族,具有3′-5′端外切核酸酶活性,能降解RNA和DNA。ISG20在宿主抗病毒天然免疫应答中起着重要作用。此外,ISG20在特定疾病中的作用以及将其作为疾病的生物标志物等方面的研究同样具有重要生物学意义。本文综述了ISG20的概况,阐述了近些年来ISG20的抗病毒研究进展及其在疾病标记中的潜在用途,以期为ISG20抗病毒免疫研究和治疗疾病药物的开发提供参考。

关键词：干扰素刺激基因20 核酸外切酶抗病毒机制生物标志物

白藜芦醇调控畜禽脂质代谢作用机制及应用研究进展

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中国畜牧杂志 2024年第2期60卷 113-117页

作者：赵国朵张相伦刘晓牧杨赵军赵红波林雪彦山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室农业农村部畜禽生物组学重点实验室山东济南250100 山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东美事达农牧科技有限公司济南市反刍动物营养与饲料重点实验室山东济南251400

脂质代谢是动物机体能量转化代谢的重要生理过程,与畜禽生长发育、脂肪沉积等密切相关。白藜芦醇是一种广泛存在于自然界中的芪类多酚化合物,可通过腺苷酸活化蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物激活受体等多条途径调节畜禽脂质代谢。目前的... 详细信息

脂质代谢是动物机体能量转化代谢的重要生理过程,与畜禽生长发育、脂肪沉积等密切相关。白藜芦醇是一种广泛存在于自然界中的芪类多酚化合物,可通过腺苷酸活化蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物激活受体等多条途径调节畜禽脂质代谢。目前的研究发现,白藜芦醇对畜禽不同类型脂肪组织的脂质代谢存在差异影响。本文综述了白藜芦醇调控脂质代谢的机制途径及在畜禽生产中的应用研究进展,以期为白藜芦醇的精准化开发与应用提供参考。

关键词：白藜芦醇脂质代谢作用机制畜禽生产

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鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析

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畜牧兽医学报 2024年

作者：倪君丽刘欣超孙栋方肆云王定爱申翰钦严专强戚南山孙铭飞顾有方广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室温氏食品集团股份有限公司安徽科技学院动物科技学院

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒，同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及... 详细信息

为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒，同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位，分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA，通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因，构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体，构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven；将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞，利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达；以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化，间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示：成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven，RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达，质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后，检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达，其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明，pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功，在鸡体内有良好的免疫原性，为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。

关键词：柔嫩艾美耳球虫多表位重组质粒真核表达 DNA疫苗

H9N2亚型禽流感病毒感染鸡呼吸道应答模式研究

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中国畜牧兽医 2024年第9期51卷 3970-3979页

作者：池周颖李天旭吴亚鑫瞿孝云李思婕孙敏华张建峰廖明杜寿文华南农业大学兽医学院人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室广州510642 广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广州510640 仲恺农业工程学院广州510550

【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡... 详细信息

【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡的临床特征,采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品;感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化,收集气管灌洗液、气管和肺脏组织;通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量;应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律,通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性;通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平。【结果】H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征,但感染后1~5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸,且感染3 d后病毒载量最高,感染5 d后检测不到病毒核酸;感染5 d时,在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸,其中前两者载量高于肺脏;血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多,感染后5~9 d维持较高水平,且具有较强的病毒中和活性;血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势;但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低,且感染前后无明显变化。【结论】本研究成功建立了H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型,确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位,H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子,可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素。本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒呼吸道感染免疫应答模型评价

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