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基于代谢组学探究葛根素对慢性酒精性肝损伤小鼠的保护作用

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食品工业科技 2024年第16期45卷 25-35页

作者：邵仕娟王浩史雯馨曾飞陈运中湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药保健食品工程技术研究中心湖北武汉430065 湖北时珍实验室湖北武汉430065

目的:采用非靶向代谢组学技术对慢性酒精性肝损伤(alcoholic liver disease,ALD)小鼠的血清和肝脏中的代谢产物进行分析,以鉴定筛选出与酒精性肝损伤相关的差异代谢物,并构建其代谢通路,从而探究葛根素保护酒精性肝损伤小鼠的作用机制... 详细信息

目的:采用非靶向代谢组学技术对慢性酒精性肝损伤(alcoholic liver disease,ALD)小鼠的血清和肝脏中的代谢产物进行分析,以鉴定筛选出与酒精性肝损伤相关的差异代谢物,并构建其代谢通路,从而探究葛根素保护酒精性肝损伤小鼠的作用机制。方法:连续8周灌胃52°白酒建立慢性酒精性肝损伤小鼠模型;采用肝功能生化指标、病理组织切片评价葛根素对ALD小鼠的保护作用;采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法(UPLCQ-TOF-MS)代谢组学技术对小鼠肝脏及血清代谢物进行分析;采用多元统计分析对数据进行处理,以第一主成分的变量重要性投影(VIP)>1且t检验P保健食品的开发提供了有价值的参考。

关键词：慢性酒精性肝损伤葛根素代谢组学代谢途径

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基于HPLC与LC-MS/MS分析食品组合物桑瓜饮的化学成分

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现代食品科技 2024年第8期40卷 158-167页

作者：蔡羽陈运中邢琪昌刘思敏颜春潮湖北中医药大学药学院湖北省中药保健食品工程技术研究中心湖北时珍实验室湖北武汉430065

解析具有调节血糖功能的食品组合物桑瓜饮(Sang-Gua-Yin,SGY)的成分。使用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)归属桑叶总生物碱组分、苦瓜总皂苷组分、葛根总黄酮组分的色谱峰,高效液相色谱-蒸发光散射器(High ... 详细信息

解析具有调节血糖功能的食品组合物桑瓜饮(Sang-Gua-Yin,SGY)的成分。使用高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)归属桑叶总生物碱组分、苦瓜总皂苷组分、葛根总黄酮组分的色谱峰,高效液相色谱-蒸发光散射器(High Performance Liquid Chromatography-Evaporative light Scattering Detector,HPLC-ELSD)与液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry,LC-MS/MS)分析组合物桑瓜饮中的化学成分。对食品组合物桑瓜饮的色谱峰进行归属,标定了11个色谱峰,其中7种成分属于葛根总黄酮,3种成分属于苦瓜总皂苷,1种成分属于桑叶总生物碱;对16个化学成分进行了鉴定,分别为1-DNJ、苦瓜苷A、苦瓜苷K、葛根素、6′′-O-acetyldaidzin、pueroside D、染料木苷、大豆苷、大豆苷元、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、3′-氢化葛根素木糖苷、葛根素-7-木糖苷、葛根素-6′′-O-木糖苷、puerarin-7-O-glucoside、葛根素-4′-O-β-D-葡萄糖苷。该研究提示食品组合物桑瓜饮成分选择1-DNJ、苦瓜苷A与葛根素作为评价指标,为食品组合物桑瓜饮的后续开发利用提供科学依据。

关键词：桑瓜饮 HPLC LC-MS/MS 1-DNJ 苦瓜苷A 葛根素

基于网络药理学中药复方“三药三方”治疗新冠肺炎的分期治疗分析

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世界科学技术-中医药现代化 2021年第2期23卷 358-384页

作者：蔡羽曾珉陈运中湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北省中药保健食品工程技术研究中心武汉430065

目的本研究探究中药复方“三药三方”在新冠肺炎治疗发挥药理作用的多成分、多靶点和多通路的分子机理以及复方药味归经的中医联系,探究“三药三方”药理作用的异同。方法通过ETCM数据库获取“三药三方”的成分、靶点、药味归经,用STRIN... 详细信息

目的本研究探究中药复方“三药三方”在新冠肺炎治疗发挥药理作用的多成分、多靶点和多通路的分子机理以及复方药味归经的中医联系,探究“三药三方”药理作用的异同。方法通过ETCM数据库获取“三药三方”的成分、靶点、药味归经,用STRING数据库进行蛋白互作网络构建,用DAVID和Metascape数据库进行靶标功能富集分析,利用Cytoscape软件构建和分析可视化网络图。结果“三药三方”多重点作用于脾经和肺经,初期和中期复方重点作用于肺经和胃经,重症期复方重点作用于肝经和心经,通用方的温性药比例最大,初期和中期复方寒性药比例最大,“三药三方”药味均以苦味、辛味、甘味为主。共同化合物中Alexandrin(胡萝卜甙)与Nsp(N7-MTase)(非结构蛋白C端鸟嘌呤-N7甲基转移酶),Oleanolic Acid(齐墩果酸)与E protein(ion channel)(包膜小膜蛋白)有良好结合力。复方调控共同之处:包含共同子模块γ-氨基丁酸受体亚基相互作用以及细胞色素、ATP依赖转位酶和核受体的相互作用,参与调控16条生物通路涉及①神经保护作用;②免疫调节以及抗炎症风暴调节;③内分泌调节以及性激素调控;④能量代谢调控;⑤药物代谢;⑥其他通路。不同之处:“三药三方”也存在各自特异调控的通路,金花清感颗粒和莲花清瘟胶囊参与ACE2相关通路Renin-angiotensin system(肾素-血管紧张素系统)的调节,同时6种复方有各自的子模块相互作用蛋白。结论“三药三方”在治疗新冠病毒体现辨证论治、治病求因、正气存内、已病防变的中医治疗原则,并且通过网络药理学初步揭示“三药三方”功能调控以及异同之处,阐述“三药三方”通过多成分-多靶点-多通路的综合调控之间的异同关系。

关键词：新型冠状病毒网络药理学性味归经生物通路三药三方分期治疗

基于网络药理学及动物实验探讨葛根素保护慢性酒精性肝损伤的作用机制

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中国医院药学杂志 2024年第24期 2822-2828页

作者：史雯馨王浩邵仕娟周锦航陈运中湖北中医药大学药学院湖北省中药保健食品工程技术研究中心湖北时珍实验室

目的：基于网络药理学和动物实验探讨葛根素对酒精性肝损伤（alcoholic liver disease,ALD）的作用机制。方法：利用数据库收集葛根素相关靶点及ALD相关基因靶点，绘制韦恩图得到交集靶点，并构建蛋白质互作网络和“药物-靶点-通路”网... 详细信息

目的：基于网络药理学和动物实验探讨葛根素对酒精性肝损伤（alcoholic liver disease,ALD）的作用机制。方法：利用数据库收集葛根素相关靶点及ALD相关基因靶点，绘制韦恩图得到交集靶点，并构建蛋白质互作网络和“药物-靶点-通路”网络图，筛选核心靶点，利用R语言软件将靶点进行基因本体（gene ontology,GO）功能分析和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析预测葛根素治疗ALD的作用机制并建立动物模型进一步验证。结果：网络药理学分析得到葛根素治疗ALD的交集靶点199个，筛选得到AKT1、ALB、IL-6、TNF、IL-1β等45个核心靶点。GO注释分析得到2 668个生物过程信息、160个分子功能信息和34个细胞分子信息，KEGG分析涉及186条关键通路。动物实验表明，葛根素可以保护ALD小鼠的肝脏功能，改善氧化应激和脂质沉积，减少肝脏组织的炎症浸润，同时降低肝脏组织中肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、核转录因子-κB (nuclear factor kappa-B,NF-κB)、核苷酸寡聚化结构域样受体家族3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)的蛋白表达（P<0.05）。结论：葛根素可以通过改善氧化损伤、抑制炎症反应从而发挥治疗ALD的作用。

关键词：网络药理学葛根素酒精性肝损伤氧化应激信号通路

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基于NF-κB/NLRP3通路和代谢组学的复方枳葛饮对慢性酒精性肝损伤的保护作用及机制研究

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中华中医药杂志 2024年第5期39卷 2297-2307页

作者：王浩史雯馨邵仕娟周锦航陈运中湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北省中药保健食品工程技术研究中心武汉430065 湖北时珍实验室武汉430065

目的:探讨复方枳葛饮对慢性酒精性肝损伤的治疗作用,并通过核因子κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)通路和代谢组学的方法探究其发挥作用的机制。方法:将小鼠分为空白组,模型组,联苯双酯组,复方枳葛饮水提物高、低剂量... 详细信息

目的:探讨复方枳葛饮对慢性酒精性肝损伤的治疗作用,并通过核因子κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)通路和代谢组学的方法探究其发挥作用的机制。方法:将小鼠分为空白组,模型组,联苯双酯组,复方枳葛饮水提物高、低剂量组,醇提物高、低剂量组。除空白组外,其余各组予以酒精灌胃制备慢性酒精性肝损伤模型,并同时给予相应的药物治疗,8周后,检测小鼠肝脏谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)指标,HE染色来观察小鼠肝脏病理改变,ELISA法检测小鼠血清炎症因子白介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平,qRT-PCR检测小鼠肝脏TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA表达,Western Blot检测肝脏NF-κB和NLRP3蛋白表达,采用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)非靶向代谢组学技术分析血清及肝脏内源性代谢产物变化及复方枳葛饮的作用途径。结果:与模型组比较,复方枳葛饮水提物和醇提物均能显著降低小鼠肝脏ALT、AST、TC、TG,血清TNF-α水平、肝脏炎症基因IL-1β mRNA水平表达、肝脏NF-κB蛋白及NLRP3蛋白的表达(P<0.05,P<0.01);水提物还能显著升高小鼠SOD活力,显著降低小鼠肝脏MDA、TNF-α mRNA表达(P<0.05,P<0.01);醇提物还能显著降低血清IL-18水平(P<0.05);血清代谢组学筛选出10种与醇提物治疗酒精性肝损伤相关的血清代谢物,其中可上调6个、下调4个,12种与水提物治疗酒精性肝损伤相关的血清代谢物,其中可上调6个、下调6个;肝脏代谢组学筛选出21种与水提物治疗酒精性肝损伤相关的肝脏代谢物,其中可上调13个、下调8个,涉及的代谢途径主要为抗坏血酸和醛酸代谢、嘌呤代谢、精氨酸生物合成等途径;筛选出21种与醇提物治疗酒精性肝损伤相关的肝脏代谢物,其中可上调2个、下调19个,涉及的代谢通路主要为淀粉和蔗糖代谢、牛磺酸和低牛磺酸代谢、抗坏血酸盐和醛酸盐代谢等途径,水提物和醇提物均可调节的肝脏代谢物有8个;水提物和醇提物均可作用的代谢途径有抗坏血酸和醛酸代谢、鞘脂代谢、淀粉和蔗糖代谢。结论:复方枳葛饮水提物及醇提物均具有治疗酒精性肝损伤的作用,其作用机制可能通过调节NF-κB/NLRP3信号通路减轻炎症因子水平,以及调节血清及肝脏代谢紊乱发挥作用。

关键词：复方枳葛饮酒精性肝损伤 NF-κB/NLRP3 血清代谢组学肝脏代谢组学机制

基于Keap1/Nrf2/HO-1通路探讨虎杖苷对衰老小鼠学习认知障碍的作用机制

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中国药理学通报 2024年第7期40卷 1287-1295页

作者：马晓轩刘毅蔡羽颜春潮陈运中湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药保健食品工程技术研究中心湖北武汉430065 湖北时珍实验室湖北武汉430060 湖北省药用植物研发中心湖北武汉430065

目的研究虎杖苷对D-半乳糖致衰老模型小鼠的调节作用。方法将56只ICR小鼠(雌雄各半)分为正常组、模型组、阳性组、虎杖苷低、中、高治疗组,通过每日颈后部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1))建立衰老模型。造模期间,阳性组灌胃盐酸多奈... 详细信息

目的研究虎杖苷对D-半乳糖致衰老模型小鼠的调节作用。方法将56只ICR小鼠(雌雄各半)分为正常组、模型组、阳性组、虎杖苷低、中、高治疗组,通过每日颈后部皮下注射D-半乳糖(500 mg·kg^(-1))建立衰老模型。造模期间,阳性组灌胃盐酸多奈哌齐片(0.75 mg·kg^(-1)),治疗组灌胃虎杖苷(40、70、100 mg·kg^(-1)),正常组给予等量生理盐水。通过筑巢实验、新型物体识别实验与Morris水迷宫实验评估小鼠学习认知能力;取小鼠心、肝、脾、肾、胸腺计算脏器指数;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠全脑组织病理变化;ELISA检测小鼠血清与全脑组织中T-SOD、MDA、GSH-Px、AchE水平;Western blot检测小鼠海马组织Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果较模型组相比,阳性组与虎杖苷低、中、高剂量组小鼠的筑巢能力、对新物体的识别能力与水下寻找站台的能力有所上升;脏器指数增加;大脑皮层与海马组织的神经元损伤明显改善;血清与脑组织中T-SOD、GSH-Px活性升高,MDA、AchE活性下降;海马组织中Nrf2、HO-1蛋白表达水平上升,Keap1蛋白表达水平降低。结论虎杖苷对D-半乳糖致衰老模型小鼠的学习认知障碍具有改善作用,其机制可能与Keap1/Nrf2/HO-1通路有关。

关键词：虎杖苷 D-半乳糖学习认知障碍抗衰老抗氧化应激 Keap1/Nrf2/HO-1通路

三相分配法提取青稞β-葡聚糖工艺优化及其分子量分布研究

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食品工业科技 2023年第14期44卷 220-228页

作者：陈阳王鹏潘凯进王喆徐剑周俊强廖子蔚劲牌有限公司中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室湖北大冶435100 劲牌持正堂药业有限公司湖北黄石435000 湖北省中药配方颗粒工程技术研究中心湖北黄石435000

采用超声波结合酶法预处理辅助三相分配法(UCWEPATPP)同时提取青稞中的青稞β-葡聚糖、青稞蛋白和青稞油。在单因素实验的基础上,以青稞β-葡聚糖提取率为指标,通过响应面试验优化UCWEPATPP的提取工艺条件。再使用扫描电镜(SEM)观察青... 详细信息

采用超声波结合酶法预处理辅助三相分配法(UCWEPATPP)同时提取青稞中的青稞β-葡聚糖、青稞蛋白和青稞油。在单因素实验的基础上,以青稞β-葡聚糖提取率为指标,通过响应面试验优化UCWEPATPP的提取工艺条件。再使用扫描电镜(SEM)观察青稞提取过程中表面结构的变化,初步分析UCWEPATPP的提取机制。最后,使用高效凝胶排阻色谱仪对得到的青稞β-葡聚糖分子量范围进行测定。结果表明,最佳的UCWEPATPP工艺条件为酶添加量1.0%、超声时间9 min、超声功率140 W、硫酸铵添加量0.5 g/mL、三相提取温度35℃、三相提取时间1.5 h、料液比1:14 g/mL、叔丁醇与水相体积比1.3:1,酶解时间2.0 h。在此最优条件下,青稞β-葡聚糖提取率为66.96%±0.05%,青稞油提取率为81.42%±0.15%,青稞蛋白提取率为50.31%±0.23%。扫描电镜结果表明,UCWEPATPP使青稞表面组织结构变得通透、多孔。UCWEPATPP不仅能够同时提取青稞β-葡聚糖、青稞蛋白和青稞油,而且能够降低生产成本,提高青稞资源的利用率。该提取工艺的实际值与预测值拟合度较高,可用于预测青稞β-葡聚糖的提取,且得到的青稞β-葡聚糖分子量范围分布较为集中(1.7×10^(5)~3.0×10^(5)Da)。

关键词：青稞超声波结合酶法三相分配法同时提取分子量范围

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UPLC-QTOF-MS联用技术分析苦瓜醇提物中多肽的化学组成

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时珍国医国药 2020年第4期31卷 781-784页

作者：张静王忠萍蔡羽陈运中湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药保健食品工程技术研究中心湖北武汉430065

目的基于超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱联用技术(Ultra High performance Liquid Chromatography-High Resolution Time-of-flight Mass Spectrometry,UPLC-QTOF-MS/MS)对苦瓜醇提物中多肽的化学组成进行研究,建立快速准确的分析方法。方法采用Welch Ultimate UPLC XB-C18色谱柱(100mm×2.1mm, 1.8μm),以0.1%TFA水溶液-乙腈为流动相以0.3ml/min流速梯度洗脱,电喷雾源(ESI)、QTOF作检测器,正离子模式检测。质谱产生的原始数据采用Mascot软件进行分析。结果通过检索***数据库,共检测出了来自苦瓜的62种蛋白质的86种肽段。结论建立了苦瓜醇提物中多肽类成分的快速检测方法,为其质量控制提供参考。

关键词：苦瓜醇提物多肽超高效液相色谱-高分辨飞行时间质谱

磷酸化大豆多肽螯合钙的制备工艺优化及其对成骨细胞的活性影响

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食品工业科技 2023年第4期44卷 209-217页

作者：廖子蔚陈阳陈秀云黄茜茜龙林孙代华胡辉劲牌持正堂药业有限公司湖北黄石435000 湖北省中药配方颗粒工程技术研究中心湖北黄石435000

为了探究磷酸化大豆多肽螯合钙(PSPCC)的生理活性,提高磷酸化大豆多肽螯合钙的钙螯合量,本研究通过单因素实验和响应面试验相结合的方式优化磷酸化大豆多肽螯合钙的制备工艺,并通过体外实验评价了磷酸化大豆多肽螯合钙对成骨细胞的活性... 详细信息

为了探究磷酸化大豆多肽螯合钙(PSPCC)的生理活性,提高磷酸化大豆多肽螯合钙的钙螯合量,本研究通过单因素实验和响应面试验相结合的方式优化磷酸化大豆多肽螯合钙的制备工艺,并通过体外实验评价了磷酸化大豆多肽螯合钙对成骨细胞的活性影响。结果表明,制备磷酸化大豆多肽螯合钙的最佳工艺条件为:三聚磷酸钠与大豆多肽的质量比1:2,磷酸化反应温度52℃,磷酸化反应pH7.0,磷酸化反应时间9.7 h,磷酸化大豆多肽与氯化钙的质量比2:1,螯合反应pH8.0,螯合反应温度50℃,螯合反应时间1.5 h,钙螯合量最大为107.25±0.10 mg/g;MTT法结果显示,磷酸化大豆多肽螯合钙组(D组)成骨细胞相对增殖率是大豆多肽组(A组)的1.6倍(第3 d);ALP染色实验表明,D组染色阳性率是空白组的33.6倍。采用ALP试剂盒对各样品第7 d的ALP活性进行检测,结果显示D组ALP活力是空白组的6.2倍。通过茜素红染色实验发现,D组钙结节数量是空白组的94倍。本研究使用响应面法对磷酸化大豆多肽螯合钙的制备工艺优化合理,并初步证明了磷酸化大豆多肽螯合钙对成骨细胞具有显著的促增殖、分化作用(P<0.05),且作用效果高于其它样品,为后续磷酸化大豆多肽螯合钙的进一步开发利用提供了一定的理论基础。

关键词：大豆多肽磷酸化螯合钙成骨细胞功能活性