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多片段酶切/连接反应结合同源重组的DNA组装方法

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生物工程学报 2024年第5期40卷 1559-1570页

作者：饶欣悦崇金阳贺诚毕莹莹唐刚敏吕育财龚大春杨潇三峡大学生物与制药学院中国轻工业功能酵母重点实验室湖北宜昌443002 三峡大学生物与制药学院湖北省生物酵素工程技术研究中心湖北宜昌443002

为了寻找一种准确高效的多片段组装及多点突变方案,将目前常用的多片段组装方法进行了整合与优化,并以果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-diphosphatase 1,FBP1)基因4位点突变为例进行验证。通过引入突变位点和Bsa I识别序列连接含有突... 详细信息

为了寻找一种准确高效的多片段组装及多点突变方案,将目前常用的多片段组装方法进行了整合与优化,并以果糖-1,6-二磷酸酶1(fructose-1,6-diphosphatase 1,FBP1)基因4位点突变为例进行验证。通过引入突变位点和Bsa I识别序列连接含有突变位点的片段,经过酶切/连接反应后扩增组装成功的目的片段,并引入与线性化载体两端同源的序列,最后进行片段与线性化载体的重组并转化大肠杆菌。经筛选与测序,得到4位点突变重组质粒。该方案弥补了常规的Gibson组装和Golden Gate组装的部分缺点,是一种高效进行多片段组装和多点突变的实验方案。

关键词：定点突变多片段组装 ⅡS限制性内切酶同源重组克隆

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烟叶蛋白质降解菌的筛选及其作用效果

烟草科技 2024年第6期57卷 43-54页

作者：周艳霞赵婉杨勇向海波孙敬国陈振国孙光伟湖北大学生命科学学院省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室武汉市武昌区430062 湖北省烟草科学研究院武汉市硚口区430030

为了有效降解烟叶中的蛋白质,提高烟叶品质,从烟叶表面及内部、烟草根际土壤中分离筛选出可以降解烟叶蛋白质的菌株,在烘烤前将其喷施在烟叶表面,比较喷施前后的烟叶生理生化、外观质量与感官质量的变化,并采用扩增子测序技术和转录组... 详细信息

为了有效降解烟叶中的蛋白质,提高烟叶品质,从烟叶表面及内部、烟草根际土壤中分离筛选出可以降解烟叶蛋白质的菌株,在烘烤前将其喷施在烟叶表面,比较喷施前后的烟叶生理生化、外观质量与感官质量的变化,并采用扩增子测序技术和转录组学技术对喷施前后的烟叶微生物群落和烟叶基因表达的变化进行了分析。分离筛选得到1株特基拉芽孢杆菌YP5,初产蛋白酶活性为71.05 U/mL,经该菌处理后的烟叶烘烤后的蛋白质含量为2.87 mg/g,较对照组(4.55 mg/g)降低了36.92%,烘烤过程中过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和淀粉酶的活性均上升,多酚氧化酶(PPO)和硝酸还原酶(NR)的活性均下降,烤后烟叶化学成分协调、外观质量好、中等烟比例提高,烟叶整体质量得到明显提升。与对照组相比,菌株YP5处理组的烟叶中细菌丰度明显提升而真菌丰度显著下降。转录组学分析发现,菌株YP5处理主要影响了烟叶的苯丙烷类生物合成、氧化磷酸化和光合作用等代谢通路。

关键词：烟叶微生物蛋白质降解菌氧化还原酶扩增子测序转录组学分析

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光敏剂的转化与创新

中国激光 2024年第9期51卷 114-130页

作者：刘开宁李睿刘仁发戴志飞北京大学未来技术学院生物医学工程系北京100871 南开大学生命科学学院天津300071

以光敏剂为基础的光动力疗法已被确定为许多肿瘤、皮肤性疾病、血管性疾病等适应证的安全治疗方式。在近些年的研究中,卟啉类光敏剂、二氢卟吩类光敏剂等均投入临床使用,酞菁类光敏剂、稠环醌类光敏剂等均已开展临床研究。但是,光动力... 详细信息

以光敏剂为基础的光动力疗法已被确定为许多肿瘤、皮肤性疾病、血管性疾病等适应证的安全治疗方式。在近些年的研究中,卟啉类光敏剂、二氢卟吩类光敏剂等均投入临床使用,酞菁类光敏剂、稠环醌类光敏剂等均已开展临床研究。但是,光动力疗法在临床转化中还面临着诸多问题,如有限的穿透深度、较低的溶解度、暗毒性、对氧气浓度的高度依赖等,新型的安全高效的光敏剂亟待被进一步开发,以实现高度特异性微创治疗。目前,新型光敏剂的研发主要聚焦于靶向修饰和智能纳米药物递送体系以及可激活/响应型光敏剂、耐乏氧肿瘤微环境的Ⅰ型光敏剂、适应深层实体瘤治疗的光敏剂等。此外,超声激发的声动力治疗也为光敏剂的临床应用开辟了新思路。随着新型光敏剂的开发与转化,将会有更多的光敏剂药物被应用于临床实践,为癌症和其他疾病患者带来福音。

关键词：医用光学光敏剂光动力疗法临床应用

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气候变迁视角下吐蕃政权覆亡及其人群流动

中国藏学 2024年第4期 17-27+212-213页

作者：许若冰湖北大学历史文化学院

西藏地方政权的兴衰及其人群流动与历史气候的冷暖干湿变化存在显著关系，吐蕃政权的衰亡与族群迁徙是气候干旱背景下由政教斗争、经济衰退以及社会矛盾激化等因素相互交织、综合作用的结果。公元8—9世纪青藏高原南部趋于干旱少雨，旱... 详细信息

西藏地方政权的兴衰及其人群流动与历史气候的冷暖干湿变化存在显著关系，吐蕃政权的衰亡与族群迁徙是气候干旱背景下由政教斗争、经济衰退以及社会矛盾激化等因素相互交织、综合作用的结果。公元8—9世纪青藏高原南部趋于干旱少雨，旱灾、疫病频发，加之长期的政教斗争与战乱，严重动摇吐蕃政权的统治根基并致其覆亡。文章认为，在此背景下，深陷战乱的卫藏地区民众逐步迁往温暖湿润的青藏高原东部或西部，特别是吐蕃族裔持续东迁至甘青川滇地带并与当地氐羌系人群交融凝聚，加速助推西藏文明东向倾斜及藏族融入中华民族共同体的历史进程，也奠定了宋元以来中国西部汉藏羌彝诸民族交往交流交融的民族格局。新时期的藏学研究应综合开展地理学、气候学、生物学与西藏考古、历史、民族等跨学科交叉研究，拓展中国藏学研究新领域与国际影响。

关键词：吐蕃藏族气候变迁人群流动民族交融

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高通量单分子定位显微成像技术进展

激光与光电子学进展 2024年

作者：林昭珺常桓梽李依明南方科技大学生物医学工程系

由于衍射极限的存在，传统的光学成像手段无法观测细胞器结构及其细胞器之间的相互作用。单分子定位显微成像技术作为三种超分辨技术中分辨率最高的成像技术，为生命科学领域的研究提供了重要手段。大视场高通量单分子成像技术具有高分... 详细信息

由于衍射极限的存在，传统的光学成像手段无法观测细胞器结构及其细胞器之间的相互作用。单分子定位显微成像技术作为三种超分辨技术中分辨率最高的成像技术，为生命科学领域的研究提供了重要手段。大视场高通量单分子成像技术具有高分辨率、成像范围大和成像时间短等特点被生物医学领域广泛用于观察和分析复杂的生物结构和功能。本文从基于硬件扫描的拼接成像技术、基于大面阵s CMOS大视场高通量成像技术、大景深单分子定位成像技术、高通量数据分析技术四个方面回顾了近年来大视场高通量单分子定位技术研究进展。最后，对大视场高通量单分子定位成像技术的发展方向进行了展望。

关键词：高通量大视场单分子定位显微镜超分辨成像技术

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高通量单分子定位显微成像技术进展（特邀）

激光与光电子学进展 2024年第6期 82-96页

作者：林昭珺常桓梽李依明南方科技大学生物医学工程系

由于衍射极限的存在，传统的光学成像手段无法观测细胞器结构及细胞器之间的相互作用。单分子定位显微成像技术作为三种超分辨技术中分辨率最高的成像技术，为生命科学领域的研究提供了重要手段。大视场高通量单分子成像技术具有分辨率... 详细信息

由于衍射极限的存在，传统的光学成像手段无法观测细胞器结构及细胞器之间的相互作用。单分子定位显微成像技术作为三种超分辨技术中分辨率最高的成像技术，为生命科学领域的研究提供了重要手段。大视场高通量单分子成像技术具有分辨率高、成像范围大和成像时间短等特点，在生物医学领域广泛用于观察和分析复杂的生物结构和功能。从基于硬件扫描的拼接成像技术、基于大面阵sCMOS的大视场高通量成像技术、大景深单分子定位成像技术、高通量数据分析技术4个方面回顾近年来大视场高通量单分子定位技术的研究进展。最后，对大视场高通量单分子定位成像技术的发展方向进行展望。

关键词：高通量大视场单分子定位显微镜超分辨成像

云南产生姜UHPLC指纹图谱及4种成分定量分析研究

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天然产物研究与开发 2024年第4期36卷 597-606,735页

作者：胡力飞王冰清吴涛梅菊杨烨辉廖香莲殷涛孙代华湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430068 湖北省中药配方颗粒工程技术研究中心黄石435100 湖北师范大学生命科学学院黄石435002

采用超高效液相色谱法(ultra-high performance liquid chromatography,UHPLC)建立20批云南不同产地生姜的指纹图谱,并对4个姜辣素类成分进行定量分析。建立了生姜UHPLC指纹图谱并对20批样本的18个共有峰进行了化学计量学分析;聚类分析(... 详细信息

采用超高效液相色谱法(ultra-high performance liquid chromatography,UHPLC)建立20批云南不同产地生姜的指纹图谱,并对4个姜辣素类成分进行定量分析。建立了生姜UHPLC指纹图谱并对20批样本的18个共有峰进行了化学计量学分析;聚类分析(cluster analysis,CA)可将样本分为4类,色谱峰则被分为3组,红河与文山样本比较相近且被聚为2类,曲靖样本被聚为2类;主成分分析(principal component analysis,PCA)结果表明,红河与文山(云南东南部)样本间的差异相对较小,同时两地与曲靖(云南东部)样本的差异相对较大,主成分得分及各变量的载荷分布情况与聚类分析分类结果基本一致;正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)可实现对云南东南部、云南东部的有效区分,并筛选了8个差异性标志物。含量测定结果表明,红河与文山生姜样本含量较为相近,两地与曲靖生姜样本存在一定差异,差异成分主要为6-姜辣素、8-姜酚和6-姜烯酚。本研究可为药用生姜的产地选择、质量综合评价研究提供参考。

关键词：生姜指纹图谱姜辣素化学计量学含量测定

反复/连续湿热制备淀粉-脂质复合物及其性质分析

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中国食品学报 2024年第5期24卷 313-320页

作者：封永婷许美娟赵晓冬杨佩瑜邹建周彬湖北工业大学生物工程与食品学院武汉430000 河南牧业经济学院食品与生物工程学院郑州450000

为了解决目前制备淀粉-脂质复合物存在的复合率低、工艺复杂、产生工业废液污染物等问题,本研究利用反复/连续交替湿热技术制备高复合率的高直链玉米淀粉-大豆卵磷脂复合物,并对优化的复合物进行结构、理化和预测血糖指数的测定。结果表... 详细信息

为了解决目前制备淀粉-脂质复合物存在的复合率低、工艺复杂、产生工业废液污染物等问题,本研究利用反复/连续交替湿热技术制备高复合率的高直链玉米淀粉-大豆卵磷脂复合物,并对优化的复合物进行结构、理化和预测血糖指数的测定。结果表明,通过单因素实验和正交试验确定最高复合率条件为:湿热处理温度140℃,连续湿热处理时间4 h,反复湿热处理6次,交替周期为2周期,得到复合率最大(59.05%)的淀粉-卵磷脂复合物。傅里叶红外光谱测定表明大豆卵磷脂特有的2个吸收峰(2710 cm-1和2680 cm-1)在复合物中未出现,验证了此改性技术成功地将大豆卵磷脂复合在淀粉的螺旋空腔中,通过X-射线衍射图谱观察到复合物在衍射角20°时衍射峰强度明显增加。此外,复合物冻融稳定性明显提升,预测血糖指数显著降低。结论:反复/连续交替湿热技术作为一种绿色安全、操作简单的物理改性技术,提高了淀粉-卵磷脂复合物的复合率,并显著降低了淀粉的预测血糖指数,为淀粉复合物的发展提供了新思路。

关键词：高直链玉米淀粉卵磷脂复合物湿热处理预测血糖指数

低浓度TBBPA长期暴露对乳腺癌细胞增殖效应研究

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山西大学学报(自然科学版) 2024年第3期47卷 647-656页

作者：庞晶贾斌朱慧瑞姚杰弓韬刘志贞李卓玉山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西大学生物技术研究所化学生物学与分子工程教育部重点实验室

四溴双酚A （Tetrabromobisphenol A,TBBPA）是生产量最高的反应型和添加型溴代阻燃剂，具有持久性有机污染物的特征，可通过多种途径对人体进行暴露。关于TBBPA暴露与人体健康风险等问题亟待研究，其中TBBPA作为一种潜在的环境雌激素... 详细信息

四溴双酚A （Tetrabromobisphenol A,TBBPA）是生产量最高的反应型和添加型溴代阻燃剂，具有持久性有机污染物的特征，可通过多种途径对人体进行暴露。关于TBBPA暴露与人体健康风险等问题亟待研究，其中TBBPA作为一种潜在的环境雌激素干扰物，对于雌激素敏感性乳腺癌细胞的促癌机制尚不明确。因此，在本研究中将人源乳腺癌细胞MCF-7 （ER+）细胞系和MDA-MB-231 （ER-）细胞系分别连续5代暴露于环境浓度下人体血浆中残留的TBBPA (10-8mol/L)以模拟长期暴露模式，观察细胞的增殖效应并探讨可能的作用机制。CCK8和集落形成实验的结果表明，10-8mol/L TBBPA长期暴露可以显著促进MCF-7细胞增殖。活性氧（ROS）生成实验表明，MCF-7细胞在10-8mol/L TBBPA长期暴露下ROS水平升高。蛋白印迹结果表明，10-8mol/L TBBPA长期暴露于MCF-7细胞后，上调了Ras信号通路中Cyclin D1、c-Myc、p-ERK1/2和Ras的蛋白表达水平。Ras蛋白抑制剂（FTS）干预后阻断了Ras/p-ERK1/2/Cyclin D1/c-Myc并降低了细胞的增殖效应。此外，CCK8实验结果表明ERα的抑制剂Fulvestrant预处理MCF-7细胞可减弱TBBPA诱导的细胞增殖活性，证明TBBPA促进MCF-7细胞增殖与ER的存在有直接关联。同时选取ER-的MDA-MB-231细胞株进行了研究，在相同浓度的TBBPA长期暴露下，其增殖活性、ROS水平及Ras信号通路相关蛋白均无显著影响。研究结果表明10-8mol/L TBBPA长期暴露可以通过激活Ras信号通路促进雌激素受体阳性的MCF-7细胞的增殖。

关键词： TBBPA 乳腺癌 Ras信号通路增殖效应

来源：博看期刊