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HBV前S1抗原下调肝细胞表面MHC-Ⅰ并促进肝癌产生

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四川大学学报（医学版） 2022年第2期53卷 285-290页

作者：饶晶晶曾凤姬满山徐祥余春芳杨靖刘龙刘志新湖北医药学院基础医学院医学微生物教研室十堰442000

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染诱发肝癌所涉及的内在机制。方法对稳定过表达HBV前S1抗原(preS1)的L02、HepG2和Huh7细胞进行流式细胞术、实时荧光定量和裸鼠成瘤等实验来评估preS1在HBV相关性肝癌发生中的作用。结果preS1诱导细胞... 详细信息

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染诱发肝癌所涉及的内在机制。方法对稳定过表达HBV前S1抗原(preS1)的L02、HepG2和Huh7细胞进行流式细胞术、实时荧光定量和裸鼠成瘤等实验来评估preS1在HBV相关性肝癌发生中的作用。结果preS1诱导细胞肿瘤干细胞(CSCs)相关因子和表面标志分子的表达上调,增强细胞的裸鼠成瘤能力;过表达preS1可以下调细胞表面组织相容性复合体Ⅰ(MHC-Ⅰ)的表达;在细胞培养过程中加入γ干扰素(IFN-γ)可以恢复细胞表面MHC-Ⅰ的表达,降低细胞的裸鼠成瘤能力。结论preS1是HBV的一个致癌因子,通过下调肝细胞表面MHC I促进肝癌产生。

关键词：乙型肝炎病毒肝癌 HBV前S1抗原组织相容性复合体Ⅰ γ干扰素

1株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌分型、耐药机制及毒力研究

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临床检验杂志 2013年第2期31卷 155-157页

作者：徐祥欧琴李蓓湖北医药学院医学微生物教研室湖北十堰442000

目的探讨1株临床分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的基因分型及耐药机制。方法用PCR法对该菌鉴定并进行荚膜血清分型以确定其多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);并用PCR对其相关毒力因子及相关耐药基因进行检测。结果确认... 详细信息

目的探讨1株临床分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的基因分型及耐药机制。方法用PCR法对该菌鉴定并进行荚膜血清分型以确定其多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);并用PCR对其相关毒力因子及相关耐药基因进行检测。结果确认该菌株为肺炎克雷伯菌,但不属于常见的高致病力K1、K2及K5型;MLST分型为ST11;PCR鉴定其携带有blaCTX-M、blaTEM、blaSHV耐药基因及wabG、uge、ureA毒力基因。结论该菌为ST11型的非K1、K2及K5菌株,致病力较弱,但可导致临床多重耐药菌株的增多。

关键词：肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯酶多位点序列分型毒力基因耐药基因

内禀无序蛋白构象与带电氨基酸残基排布关系--以精氨酸和天冬氨酸组成的随机多肽为例

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物理学报 2018年第5期67卷 264-271页

作者：康文斌王骏王炜南京大学物理学院南京210093 湖北医药学院数理教研室十堰442000 湖北医药学院Bio-X研究中心十堰442000

内禀无序蛋白的结构特征与其氨基酸序列有着密切的联系.其中一个核心问题是正负带电氨基酸残基的排列如何影响无序蛋白或者多肽的构象?为了回答这一问题,本研究以天冬氨酸和精氨酸两种带电残基组成的随机多肽为研究对象,利用全原子蒙特... 详细信息

内禀无序蛋白的结构特征与其氨基酸序列有着密切的联系.其中一个核心问题是正负带电氨基酸残基的排列如何影响无序蛋白或者多肽的构象?为了回答这一问题,本研究以天冬氨酸和精氨酸两种带电残基组成的随机多肽为研究对象,利用全原子蒙特卡罗模拟和温度副本交换采样方法,研究了随机多肽的电荷排布与结构之间的定性关系.结果表明:正负带电残基在序列上混合均匀时,由于肽链内部的静电吸引和排斥相互抵消,肽链倾向于形成无规卷曲的构象;正负带电残基分离时,由于长程静电相互吸引,多肽倾向于形成类β-发卡的形状.

关键词：内禀无序蛋白构象序列分子模拟

3-芳基-2-亚胺-苯并[e]-1,3-噁嗪-4-醇衍生物的合成及活性评价

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有机化学 2023年第2期43卷 763-770页

作者：廖楚婕阮洪瑶姜峻峰罗伦胡扬根湖北医药学院药学院湖北十堰442000 湖北医药学院武当特色中药研究湖北省重点实验室湖北十堰442000

苯并噁嗪是一类重要的稠合杂环,其衍生物具有不同的生物活性而被广泛地应用于医药、农药等领域.本研究在温和的条件下,以简单易得的原料,应用aza-wittig反应高效地合成了3-芳基-2-亚胺-苯并[e]-1,3-噁嗪-4-醇衍生物4a~4k,其结构通过^(1)... 详细信息

苯并噁嗪是一类重要的稠合杂环,其衍生物具有不同的生物活性而被广泛地应用于医药、农药等领域.本研究在温和的条件下,以简单易得的原料,应用aza-wittig反应高效地合成了3-芳基-2-亚胺-苯并[e]-1,3-噁嗪-4-醇衍生物4a~4k,其结构通过^(1)HNMR,^(13)CNMR和高分辨质谱确认.通过单晶X射线衍射对3-苯基-2-(3,4-二乙氧基羰基-5-甲基-呋喃-2-亚胺)-苯并[1,3]噁嗪-4-醇(4a)进行了结构分析,确认了化合物结构中碳氮双健(C=N)为Z式构型.运用CCK8方法对目标化合物4a~4k进行了体外抗肿瘤活性评价,其中3-(4-氟-苯亚胺-2-(3,4-二乙氧基羰基-5-甲基-呋喃-2-亚胺)-6-氯-苯并[1,3]噁嗪-4-醇(4e)在浓度为0.01mg/m L时对Hep G2和Hela两种细胞系的抑制率分别为45.83%和42.76%,略低于对照药物吉非替尼(68.56%和79.76%),表现出潜在的抗肿瘤活性.通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基裂解法测试了目标化合物的抗氧化性,结果显示3-苯基-2-(3,4-二乙氧基羰基-5-甲基-呋喃-2-亚胺)-6-硝基-苯并[1,3]噁嗪-4-醇(4d)、4e和3-苯基-2-(3,4-二乙氧基羰基-5-甲基-呋喃-2-亚胺)-6,8-二氯-苯并[1,3]噁嗪-4-醇(4j)的自由基的清除率IC50值分别为0.294、0.255和0.338 mmol/L,与对照抗坏血酸的IC50值稍大.

关键词：苯并[e]-1 3-噁嗪-4-醇合成 aza-Wittig反应抗肿瘤抗氧化性

布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9免疫原性检测

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中华地方病学杂志 2013年第3期32卷 263-266页

作者：范金明王发兴张波江玲李蓓湖北医药学院基础医学院微生物教研室十堰442000 湖北医药学院基础医学院第一临床学院十堰442000

目的检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性，寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标。方法采用双酶切的方法，将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上，将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21（... 详细信息

目的检测布鲁杆菌Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9的免疫原性，寻找潜在的、新的布鲁杆菌亚单位疫苗靶标。方法采用双酶切的方法，将布鲁埃希菌VirB9基因全长克隆至原核表达载体pET32a上，将克隆后载有VirB9基因的pET32a质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，异丙基-13-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）诱导重组VirB9蛋白在大肠埃希菌中的表达。利用重组VirB9蛋白所携带的His标签，通过Ni—NAT层析，纯化在大肠杆菌中重组表达的VirB9蛋白．再通过十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶（SDS—PAGE）电泳和二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量试剂盒对纯化的蛋白进行纯度及浓度检测。用布鲁杆菌疫苗株S19株免疫BALB／c小鼠，并以磷酸盐缓冲液（PBS）为对照。在免疫4周后，鼠尾取血，血清虎红平板凝集试验、试管凝集试验检查小鼠血清抗体；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测$19株免疫小鼠体内抗VirB9抗体滴度。在免疫后第35天，取小鼠脾脏，分离脾细胞，利用Elispot技术，检测VirB9蛋白体外再刺激后分泌细胞因子（干扰素-1，IFN-1）的脾细胞数，酶联斑点图像仪计数斑点，每个斑点代表1个抗原特异性T淋巴细胞，分析VirB9刺激机体产生细胞免疫反应的情况。结果通过酶切克隆的方法成功地将VirB9全长基因741bp克隆至pET32a载体上。SDS—PAGE显示，VirB9蛋白的相对分子质量约43×103，纯度超过97％；BCA法检测，蛋白浓度为1．6异／L。免疫组小鼠血清虎红平板凝集试验阳性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度〉1：800；对照组小鼠血清虎红平板凝集试验阴性，试管凝集试验小鼠血清抗体滴度阴性。免疫组检测到抗VirB9蛋白抗体，抗体滴度均〉1：3200，对照组小鼠体内未检测到抗VirB9蛋白抗体的存在。酶联斑点图像分析显示，用VirB9蛋白体外刺激，免疫组小鼠5×10s个脾细胞中有147个细胞可以分泌IFN-r，对照组仅有38个细胞。结论在布鲁杆菌感染过程中，Ⅳ型分泌系统蛋白VirB9具有免疫原性．能够刺激小鼠产生体液免疫反应与细胞免疫反应。

关键词：布鲁杆菌 IV型分泌系统免疫原性疫苗

DIGFA-kit和Dot-ELISA检测斯氏狸殖吸虫抗体的研究

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现代预防医学 2013年第6期40卷 1092-1093页

作者：朱敬郑东朱名胜卫荣华杨树国湖北医药学院生物学教研室湖北医药学院口腔学院湖北医药学院寄生虫学教研室

目的探索用肺吸虫病金标渗滤试剂盒(DIGFA-kit)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测斯氏狸殖吸虫抗体的敏感性和特异性。方法采用DIGFA-kit和Dot-ELISA检测流行区人群和病鼠血清抗体。结果斯氏狸殖吸虫病流行区人群和病鼠血清特异性... 详细信息

目的探索用肺吸虫病金标渗滤试剂盒(DIGFA-kit)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测斯氏狸殖吸虫抗体的敏感性和特异性。方法采用DIGFA-kit和Dot-ELISA检测流行区人群和病鼠血清抗体。结果斯氏狸殖吸虫病流行区人群和病鼠血清特异性抗体两种方法阳性率为5.1%、5.0%和100%、97.5%。用此两种血清学方法检测正常大鼠、旋毛虫病大鼠、血吸虫病兔和蛔虫病人血清,除1例血吸虫病兔血清DIGFA-kit出现阳性反应外,其他血清两种方法均为阴性反应。实验动物从感染后第2周两种方法开始抗体检测阳性,第4周阳性率均达90%以上,持续至8周。结论两种方法对斯氏狸殖吸虫特异性IgG抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。

关键词：斯氏狸殖吸虫抗体血清学试验

Krüppel样转录因子3在肺腺癌中表达的意义

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中国肿瘤临床 2012年第15期29卷 1087-1090页

作者：朱艳霞朱敬杨贤义肖敏湖北医药学院附属太和医院急诊科湖北省十堰市442000 湖北医药学院生物学教研室

目的:探讨Kruippel样转录因子3(Kruippel-like factor 3,KLF3)在肺腺癌中的表达及其与临床特征的关系,为探索KLF3在肺腺癌中的作用提供依据。方法:荧光定量PCR及Western blot分析KLF3的mRNA及蛋白在肺腺癌细胞株中的表达。收集72例肺腺... 详细信息

目的:探讨Kruippel样转录因子3(Kruippel-like factor 3,KLF3)在肺腺癌中的表达及其与临床特征的关系,为探索KLF3在肺腺癌中的作用提供依据。方法:荧光定量PCR及Western blot分析KLF3的mRNA及蛋白在肺腺癌细胞株中的表达。收集72例肺腺癌患者的肿瘤组织标本,免疫组织化学法分析KLF3在肺腺癌组织中表达并分析KLF3表达与患者临床特征的关系。结果:KLF3在肺腺癌细胞株中表达下调。大部分肺腺癌组织中KLF3低表达(50/72),其表达主要定位于胞浆及胞核内。KLF3表达与肺腺癌临床病理分期(P<0.000 1)及T分期(P=0.004)、N分期(P<0.000 1)、M分期(P<0.000 1)明显相关。结论:KLF3可能是一个重要的肺腺癌抑癌基因,并有望成为新的抗肿瘤治疗靶点。

关键词： KLF3 肺腺癌抑癌基因

DIGFA-kit和IEST检测人、鼠斯氏狸殖吸虫抗体的研究

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中国人兽共患病学报 2011年第7期27卷 645-646,652页

作者：朱名胜朱敬王绍基宋明华湖北医药学院寄生虫学教研室十堰442000 湖北医药学院生物学教研室

目的探索用肺吸虫病金标渗滤试剂盒(DIGFA-kit)和免疫酶染色试验(IEST)检测斯氏狸殖吸虫抗体的敏感性和特异性。方法采用DIGFA-kit和IEST检测流行区人群和病鼠血清抗体。结果斯氏狸殖吸虫病流行区人群和病鼠血清特异性抗体两种方法均为5... 详细信息

目的探索用肺吸虫病金标渗滤试剂盒(DIGFA-kit)和免疫酶染色试验(IEST)检测斯氏狸殖吸虫抗体的敏感性和特异性。方法采用DIGFA-kit和IEST检测流行区人群和病鼠血清抗体。结果斯氏狸殖吸虫病流行区人群和病鼠血清特异性抗体两种方法均为5.08%和100%。用此二种血清学方法检测正常大鼠、旋毛虫病大鼠、血吸虫病兔和蛔虫病人血清,除1例血吸虫病兔血清DIGFA-kit出现阳性反应外,其它血清两种方法均为阴性反应。实验动物从感染后第2周两种方法开始抗体检测阳性,第4周阳性率均达100%,持续至8周。结论二种方法对斯氏狸殖吸虫特异性IgG抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。

关键词：斯氏狸殖吸虫抗体血清学试验

乙酰胆碱抑制去甲肾上腺素诱导的心肌H9c2细胞凋亡

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中国病理生理杂志 2019年第3期35卷 393-399页

作者：罗斌郑茜王林琪邰烨唐俊明陈晋湖北医药学院生理学教研室湖北十堰442000 湖北医药学院药护学院湖北十堰442000 湖北医药学院口腔学院湖北十堰442000 湖北医药学院公共卫生与管理学院湖北十堰442000

目的:探讨乙酰胆碱(ACh)对去甲肾上腺素(NE)诱导心肌H9c2细胞凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度(0、5、10和20μmol/L)NE诱导心肌H9c2细胞凋亡,用ACh预处理细胞观察其作用,用MTT法检测细胞存活率,选出最适NE和ACh剂量。其次,分别加入... 详细信息

目的:探讨乙酰胆碱(ACh)对去甲肾上腺素(NE)诱导心肌H9c2细胞凋亡的作用及机制。方法:用不同浓度(0、5、10和20μmol/L)NE诱导心肌H9c2细胞凋亡,用ACh预处理细胞观察其作用,用MTT法检测细胞存活率,选出最适NE和ACh剂量。其次,分别加入与凋亡密切相关的4种信号分子阻断剂与ACh共同干预,用激光共聚焦成像JC-1法检测线粒体膜电位水平,DCFH-DA染色及流式细胞术检测胞内活性氧簇的水平,Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:10μmol/L NE可明显诱导H9c2细胞凋亡(P<0.05);经10μmol/L ACh预处理后,可减弱NE诱导的H9c2细胞凋亡(P<0.05);在ACh预处理前分别预先加入4种分子阻断剂,发现加入PDTC后可减弱ACh的抑制作用。结论:ACh具有抑制NE诱导的心肌H9c2细胞凋亡的作用,其机制可能与NF-κB信号分子有关。

关键词：心力衰竭去甲肾上腺素乙酰胆碱细胞凋亡 NF-κB信号通路