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外周血差异显示编码3mRNA定量检测在前列腺癌患者诊断与治疗监测中的初步应用

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中华医学杂志 2006年第41期86卷 2911-2915页

作者：翁志梁余凯远毛晓露陶志华陈晓东吴秀玲胡元平王思齐李澄棣陈占国温州医学院附属第一医院泌尿外 325000 温州医学院附属第一医院检验科 325000 温州医学院附属第一医院病理科 325000 温州医学院附属第一医院超声影像科 325000

目的探讨外周血差异显示编码3（DD3）mRNA定量检测在前列腺癌诊断和治疗监测中意义。方法用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）方法对35例未治疗前列腺癌、58例内分泌治疗后前列腺癌、59例良性前列腺增生患者和10例健康男性志... 详细信息

目的探讨外周血差异显示编码3（DD3）mRNA定量检测在前列腺癌诊断和治疗监测中意义。方法用荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）方法对35例未治疗前列腺癌、58例内分泌治疗后前列腺癌、59例良性前列腺增生患者和10例健康男性志愿者外周血DD3mRNA含量进行定量检测，并对DD3mRNA诊断及疗效监测价值进行评价。结果未治疗前列腺癌组外周血DD3mRNA含量明显高于治疗后前列腺癌组、前列腺增生组和健康男性志愿者组，差异具有统计学意义（P〈0．01）。未治疗前列腺癌患者随着临床分期增加，外周血DD3mRNA含量也增高，差异具有统计学意义（P〈0．01）。当临界值为846拷贝／ml时，DD3mRNA曲线下面积为0．822（95％CI：0．725～0．919），灵敏度、特异度分别为74．3％、89．8％。结论外周血DD3mRNA定量检测是前列腺癌诊断的良好指标，可作为内分泌治疗过程疗效监测的指标。

关键词：基因 RNA 信使逆转录聚合酶链反应前列腺肿瘤

神经内分泌分化与前列腺癌生物学行为的相互关系研究

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中华医学杂志 2009年第7期89卷 472-475页

作者：吴秀玲黄卡特陈伟陈霖董磊余志贤温州医学院附属第一医院病理科 325003 温州医学院附属第一医院泌尿科 325003

目的探讨前列腺癌中神经内分泌细胞分化（NED）与抗雄激素治疗抵抗的关系。方法对55例行间歇性抗雄激素治疗的前列腺癌标本（TURP术）做单克隆嗜铬黏蛋白（CgA）抗体免疫组化染色，定期行血清PSA值及影像学检查。结果前列腺癌CgA的表达... 详细信息

目的探讨前列腺癌中神经内分泌细胞分化（NED）与抗雄激素治疗抵抗的关系。方法对55例行间歇性抗雄激素治疗的前列腺癌标本（TURP术）做单克隆嗜铬黏蛋白（CgA）抗体免疫组化染色，定期行血清PSA值及影像学检查。结果前列腺癌CgA的表达率为47．3％，神经内分泌（NE）细胞在Gleason≥7肿瘤中以巢状分布为主，而在Gleason〈7肿瘤中以单个散在分布为主，NED与Gleason分级明显相关（P〈0．05）；Ⅲ、Ⅳ期肿瘤的NED（分别为67％、71．4％）明显高于Ⅱ期肿瘤（25％）（P〈0．05）；NED与术前PSA无明显相关（P〉0．05）。中位随访时间25（5～85）个月，30例在中位治疗18（5～79）个月后转为非依赖性（A组），而25例在中位治疗31（17—85）个月后未发生疾病进展（B组），A组NED明显高于B组（P〈0．05）；单因素分析显示NE阳性、Gleason≥7、pT4期、有骨转移的肿瘤为患者PSA复发或临床进展的影响因素（P〈0．05），多因素Cox回归分析显示，NED和术前PSA值为无骨转移病例疾病进展的独立风险因素。结论NED与前列腺癌的不良生物学行为密切相关，是前列腺癌内分泌治疗产生雄激素抵抗的独立预测因子。

关键词：前列腺肿瘤神经内分泌分化预后

双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测尿液DD3／PSAmRNA比值及其应用

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中华医学杂志 2008年第4期88卷 261-264页

作者：陈凤萍陈俐丽沈默陈伟陶志华吴秀玲胡元平李澄棣陈占国陈晓东温州医学院附属第一医院实验诊断中心 325000 温州医学院附属第一医院泌尿外科 325000 温州医学院附属第一医院病理科 325000 温州医学院附属第一医院超声影像科 325000

目的建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测尿液DD3／PSAmRNA比值，评价其初步应用。方法分别在前列腺特异性抗原（PSA）基因外显子1和2、差异显示编码3（DD3）基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针，PSA和DD3基因的T... 详细信息

目的建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测尿液DD3／PSAmRNA比值，评价其初步应用。方法分别在前列腺特异性抗原（PSA）基因外显子1和2、差异显示编码3（DD3）基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针，PSA和DD3基因的TaqMan—MGB探针5’分别标记HEX和FAM荧光素，建立双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的方法，并对方法学进行评价。对34例前列腺癌（PCa）、44例良性前列腺增生（BPH）患者前列腺按摩后尿液中的DD3／PSAmRNA比值进行检测，评价其临床应用价值。结果扩增产物经测序证明为PSA和DD3特异性片段。以LNCaP细胞cDNA作模板，PSAmRNA和DD3mRNA最低检测限分别为0，6细胞／反应和60细胞／反应。DD3／PSAmRNA比值批内、批间变异系数分别为3．8％-4，7％和4．1％-4，9％。PCa组尿液DD3／PSAmRNA比值明显高于BPH组（P〈0．01）。尿液DD3／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．746（95％CI：0．630—0．862），当截断值为0．254时其敏感度和特异度分别为64．7％和77.3％，其阳性率与临床和病理分级均无关。结论成功建立了双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的分子生物学诊断方法。该方法对PCa诊断具有较高特异度和敏感度，且节省操作时间、降低实验成本，有望成为PCa早期诊断的有效方法。

关键词：前列腺肿瘤基因聚合酶链反应尿液

受体酪氨酸激酶基因及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义

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中华检验医学杂志 2011年第9期34卷 830-835页

作者：郭飞陈玉华刘永霞朱小丽陈伟胡王强陈占国沈默陶志华温州医学院附属第一医院检验科 325000 温州医学院附属第一医院泌尿外科 325000

目的探讨RONmRNA及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达与临床意义。方法选择63例膀胱移行上皮癌（TCCB）、7例膀胱内翻性乳头状瘤（IPB）、9例膀胱低度恶性潜能尿路上皮瘤（PUNLMP）患者和12例外伤性膀胱破裂且经病理证实无肿瘤细胞的正常... 详细信息

目的探讨RONmRNA及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达与临床意义。方法选择63例膀胱移行上皮癌（TCCB）、7例膀胱内翻性乳头状瘤（IPB）、9例膀胱低度恶性潜能尿路上皮瘤（PUNLMP）患者和12例外伤性膀胱破裂且经病理证实无肿瘤细胞的正常膀胱黏膜组织患者。其中，病理Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级患者分别为30、15和18例，临床Tis＋T1和T2＋t3＋T4期患者分别为44例和15例；用实时荧光定量RT-PCR检测其RONmRNA相对表达量，以GAPDHmRNA为内标物，用RONmRNA／GAPDHmRNA比值表示RONmRNA相对表达量；用RT—PCR检测RONmRNA选择性剪切形成的变异体；用测序检测PCR产物中可能存在的变异体，并分析变异体在不同组织问及TCCB中不同病理分级及临床分期间阳性表达率的差异。结果RONmRNA在TCCB、IPB、PUNLMP及正常膀胱黏膜组织中均见阳性表达，其RONmRNA／GAPDHmRNA比值分别为4．9×10^-3（1．8×10^-3-1．0×10^-2）、3．8X×10^-3（2．4×10^-3．1．7×10^-2）、4．9×10^-3（1．7×10^-3-1．1×10^-2）、1．0×10^-3（4．5×10^-4～2．8×10^-3），且不同组织间的表达差异均有统计学意义（zK.W^2=17．278，P〈0．05）；RONmRNA／GAPDHmRNA比值在TCCB病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3．7×10^-3（1．3×10^-3～7．5×10^-3）、4．9×10^-3（1．9×10^-3～1．1×10^-2）、8．9×10^-3（2．7×10^-3-8．0×10^-2），且差异有统计学意义（xK.W^2=7．341，P〈0．05）；RONmRNA／GAPDHmRNA比值在TCCB临床Tis＋T1、他＋13＋T4期分别为3．5×10^-3（1．2×10^-3-7．7×10^-3）、9．7×10^-3（2．9×10^-3-5．3×10^-2），差异也有统计学意义（Z=-2．306，P〈0．05）。但正常膀胱黏膜组未发现RONretINA变异体，而在膀胱肿瘤组织中外显子11剪切缺失（E11△）的阳性表达率为70％（55／79）。在TCCB、IPB、PUNLMP中E11A阳性表达率分别为71％（45／63）、57％（4／7）、67％（6／9），而不同病理组织中的E11A阳性表达率差异无统计学意义（x^2=0．620，P〉0．05）；在不同TCCB病理分级和临床分期中其阳性率差异亦无统计学意义（Z值分别为0．221、0．538，P均〉0．05）。发现1种正常黏膜组织中没有的新变异体，即RON基因外显子的3476—3539bp剪切缺失形成的变异体（E3476—3539A）。膀胱肿瘤组织中E3476～3539△的阳性表达率为56％（44／79），在TCCB、IPB、PUNLMP中E3476—3539A的阳性表达率分别为57％（36／63）、43％（3／7）、56％（5／9），但各病理组织间的阳性率差异无统计学意义（X2=0．517，P〉0．05）；在TCCB不同病理分级和临床分期中其阳性率分别为40％（12／30）、67％（10／15）、78％（14／18）、48％（21／44）、80％（12／15），差异有统计学意义（z值分别为7．285、5．041，P均〈0．05）。结论RONmRNA的表达与TCCB病理分级及临床分期相关，RON可能在TCCB发生发展的过程中发挥重要作用；在正常膀胱黏膜中未见RONmRNA剪切形成的变异体，而在膀胱肿瘤组织中都有不同程度的表达；E3476～3539△的表达与TCCB病理分级及临床分期相关，RONmRNA变异体可能参与了膀胱肿瘤的发生。

关键词：膀胱肿瘤受体蛋白质酪氨酸激酶类选择性剪接

他达拉非对自发性高血压大鼠阴茎海绵体的影响

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中华医学杂志 2009年第24期89卷 1717-1720页

作者：武志刚王文兰蔡健吴秀玲吴伟李湘斌李澄棣翁志梁温州医学院附属第一医院泌尿外科 325000 温州医学院附属第一医院病理科 325000 温州医学院附属第一医院检验科 325000 浙江省人民医院妇科

目的观察持续小剂量应用他达拉非对自发性高血压大鼠（SHR）血浆内皮素1（ET-1）浓度影响及阴茎海绵体组织形态学变化。方法40只SHR随机分为4组（各10只）：空白对照组、安慰剂组、持续小剂量组、间歇剂量组；分别给予不同剂量药物他达... 详细信息

目的观察持续小剂量应用他达拉非对自发性高血压大鼠（SHR）血浆内皮素1（ET-1）浓度影响及阴茎海绵体组织形态学变化。方法40只SHR随机分为4组（各10只）：空白对照组、安慰剂组、持续小剂量组、间歇剂量组；分别给予不同剂量药物他达拉非。4周后观察SHR阴茎海绵体细胞形态学及其血浆ET-1浓度变化情况，并用免疫组化SABC法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在各组阴茎海绵体中的表达。结果血浆ET-1浓度（pg／m1）在持续小剂量组（12．0±1．6）、间歇剂量组（14．3±1．7）比空白对照组（18．0±1．9）、安慰剂组（17．6±2．2）显著低（均P〈0．01），且持续小剂量组与间歇剂量组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；α—SMA阳性A值在持续小剂量组（0．29±0．03）、间歇剂量组（0．38±0．03）与空白对照组（0．53±0．03）、安慰剂组（0．52±0．05）差异有统计学意义（P〈0．01），而在持续小剂量组则明显低于间歇剂量组（P〈0．05）；光镜下空白组、安慰剂组SHR阴茎海绵体内皮细胞、血管平滑肌细胞分布杂乱，血管内皮细胞连续性被破坏，而持续小剂量组与间歇剂量组有不同程度的改善，前者尤为明显；电镜下见持续小剂量组SHR阴茎海绵体内皮细胞多数恢复正常，其超微结构表明组织形态改善。结论持续小剂量应用他达拉非能有效改善阴茎海绵体血管内皮功能和结构，为长期小剂量5型磷酸二酯酶（PDE5）抑制剂治疗勃起功能障碍提供依据。

关键词：内皮缩血管肽类大鼠,近交SHR 刚萎他达拉非

子宫切除术后膀胱功能障碍患者的尿动力学分析

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中华妇产科杂志 2005年第11期40卷 778-779页

作者：张文淼施铮铮吴雪清吴爱珍温州医学院附属第一医院妇产科 325000 温州医学院附属第一医院泌尿科 325000

子宫切除术后,由于支配膀胱的神经损伤和膀胱解剖位置的改变,常常引起膀胱功能的障碍,但因其表现出来的症状如尿频、尿急、排尿困难等与尿路感染非常相似,妇科医师常常将其作为慢性尿路感染反复给予抗感染治疗,不但治疗效果甚微,还延误... 详细信息

子宫切除术后,由于支配膀胱的神经损伤和膀胱解剖位置的改变,常常引起膀胱功能的障碍,但因其表现出来的症状如尿频、尿急、排尿困难等与尿路感染非常相似,妇科医师常常将其作为慢性尿路感染反复给予抗感染治疗,不但治疗效果甚微,还延误了膀胱功能的康复治疗.本研究对子宫全切除或广泛切除术后3至8个月,长期存在非感染原因的尿路症状者68例,行自由尿流率和尿动力学检查,并以子宫切除术前无尿路症状者和子宫全切除或广泛切除术后相同时间内的无尿路症状者为对照,以探讨子宫切除术后膀胱功能障碍者尿动力学检查的必要性和异常类型。

关键词：术后膀胱功能障碍子宫切除术后尿动力学分析慢性尿路感染尿动力学检查子宫全切除尿路症状患者抗感染治疗自由尿流率

淋巴毒素β受体和核转录因子-κB经典通路P65在膀胱组织中表达的实验研究

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中华检验医学杂志 2012年第5期35卷 436-442页

作者：段秀枝沈默韩秀翠吴秀玲万丽翁志梁沈龙捷陈映鹤蔡健余志贤郑元财陶志华温州医学院附属第一医院实验诊断中心 325000 温州医学院附属第一医院病理科 325000 温州医学院附属第一医院泌尿外科 325000 温州医学院附属第一医院移植科 325000 温州医学院附属第二医院泌尿外科浙江大学医学院附属第二医院检验科

目的探讨淋巴毒素β受体（LTβR）和核转录因子（NF）-κB经典通路因子P65在膀胱癌（BCa）和膀胱炎组织中的表达情况及与BCa临床病理指征的关系。方法采用实时荧光定量PcR检测108份新鲜膀胱组织标本（按照病理检查结果分为BCa组75份、... 详细信息

目的探讨淋巴毒素β受体（LTβR）和核转录因子（NF）-κB经典通路因子P65在膀胱癌（BCa）和膀胱炎组织中的表达情况及与BCa临床病理指征的关系。方法采用实时荧光定量PcR检测108份新鲜膀胱组织标本（按照病理检查结果分为BCa组75份、膀胱炎组10份和正常膀胱黏膜组23份）中的LT[3R和P65的mRNA相对含量；采用免疫组织化学方法检测118份病理石蜡切片（BCa切片组73份、膀胱炎切片组30份和正常膀胱黏膜切片组15份）中的LTβR与磷酸化蛋白P65（p-P65）表达水平，并分析其表达与BCa分级分期和淋巴结转移等因素的关系。采用Kruskal-Wallis H验和χ2检验等比较不同膀胱组织间的LTBR与P65的mRNA和蛋白表达水平。结果（1）LTβR和P65mRNA相对含量在膀胱癌组中高于正常组[LTβR：29．4（14．2～46．7）×10-3、1．2（0．3～7．0）×10-3，Z=-5．508；P65：9．7（2．7～21．1）×10-3、1．0（0．8～1．8）×10-3，Z=-5．030，P均〈0．05]，两者在BCa进展[病理分级各组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）：LTBR：18．2（2．1～31．3）×10-3、28．4（16．6—36．2）×10-3、47．9（34．3～70．5）×10-3，χ2K-W=20．378；P65：4．9（1．3—12．0）×10-3、7．4（3．0～21．9）×10-3、17．0（10．0～28．3）×10-3，χ2K-W=15．219，P均〈0．05]和淋巴结转移各组（阴性、阳性）[LTβR：27．2（9．7～40．1）×10-3、39．4（26．7—52．6）×10-3，Z=-2．552；P65：7．4（2．3～15．6）×10-3、13．4（6．7～23．3）×10-3，Z=-2．026，P均〈0．05]比较差异均有统计学意义。（2）IJTpR和p-P65蛋白阳性率在膀胱癌组中高于正常组（LTpR：69．8％、13．3％，χ2=16．600；P65：56．2％、6．7％，χ2=12．220，P均〈0．05）。LTBR和p-P65蛋白阳性率也在BCa进展（病理分级各组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级）：LTBR：56．3％、70．0％、90．4％，χ2=7．055；p-P65：40．6％、60．0％、76．2％，χ2=6．679，P均〈0．05）和淋巴结转移各组（阴性、阳性）（L113R：58．3％、92．0％，χ2=8．849；p-P65：52．1％、64．0％，χ2=5．088，P均〈0．05）比较差异均有统计学意义。（3）相关性分析显示，LTBR与P65的表达在膀胱癌组中呈正相关（mRNA：r=0．654，P〈0．05；蛋白：r=0．399，P〈0．05），LTpR与P65蛋白表达在膀胱炎组中呈正相关（r=0．521，P〈0．05）。结论LTpR和P65在膀胱癌组织中高表达，LTBR的表达可能与膀胱癌的发生发展和转移有关，且LTβR可能通过P65的激活参与经典的NF—κB通路。

关键词：膀胱肿瘤膀胱炎淋巴毒素β受体转录因子RelA

前列腺癌患者外周血DD3 mRNA的检测及临床意义

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中华检验医学杂志 2005年第5期28卷 489-491页

作者：陈占国陶志华陈晓东李澄棣李湘斌杨建荣温秀姝林晓梅朱燕英温州医学院附属第一医院检验科 325000 温州医学院附属第一医院泌尿外科 325000

目的　探讨检测前列腺癌(PC)患者外周血DD3mRNA在诊断和治疗监测中的意义。方法　用巢式逆转录聚合酶链反应(nRT PCR)检测44例不同分期PC患者和30例良性前列腺增生(BPH)患者及18名健康男性志愿者外周血中DD3mRNA,并进行对比分析。结果　... 详细信息

目的　探讨检测前列腺癌(PC)患者外周血DD3mRNA在诊断和治疗监测中的意义。方法　用巢式逆转录聚合酶链反应(nRT PCR)检测44例不同分期PC患者和30例良性前列腺增生(BPH)患者及18名健康男性志愿者外周血中DD3mRNA,并进行对比分析。结果　BPH患者和健康男性志愿者外周血中DD3mRNA均阴性;未治疗PC组外周血DD3mRNA100%阳性(11 /11),而经内分泌治疗PC组阳性率30. 3% ( 10 /33 ),两组差异有统计学意义(P<0. 01 )。结论　外周血DD3mRNA是PC诊断和内分泌治疗监测的良好指标,有望成为PC特异性肿瘤标志物。

关键词： mRNA 外周血前列腺癌患者临床意义检测良性前列腺增生(BPH) 巢式逆转录聚合酶链反应特异性肿瘤标志物治疗监测健康男性 BPH患者内分泌治疗对比分析志愿者 PC 阳性率统计学诊断 C组

前列腺癌特异性基因DD3在前列腺癌患者外周血中表达的意义

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中华泌尿外科杂志 2005年第12期26卷 806-808页

作者：陈占国陶志华陈晓东李澄棣余志贤李湘斌杨建荣温州医学院附属第一医院检验科 325000 温州医学院附属第一医院泌尿外科 325000

目的探讨前列腺癌特异性基因DD3在前列腺癌患者外周血中表达及临床意义。方法采集44例中晚期前列腺癌(PCa)患者、20例良性前列腺增生(BPH)患者及18例健康男子外周血,分离单个核细胞,提取总RNA。RT-PCR琼脂糖电泳法检测DD3 mRNA,以β-ac... 详细信息

目的探讨前列腺癌特异性基因DD3在前列腺癌患者外周血中表达及临床意义。方法采集44例中晚期前列腺癌(PCa)患者、20例良性前列腺增生(BPH)患者及18例健康男子外周血,分离单个核细胞,提取总RNA。RT-PCR琼脂糖电泳法检测DD3 mRNA,以β-actin为内参照,以出现311 bp和184 bp片段为DD3 mRNA阳性,仅出现184 bp片段为DD3 mRNA阴性。结果20例BPH患者和18例健康青年男子外周血标本中均无DD3 mRNA表达,44例PCa血标本中DD3mRNA表达13例(29.5%)。B期、C期及D期患者DD3 mRNA阳性率分别为0%(0/3)、18%(2/11)及37%(11/30),各期之间差异无统计学意义(P>0.05)。PCa伴骨转移患者外周血中DD3 mRNA阳性率为44%(10/22),而无骨转移者其阳性率为14%(3/22),组间差异有统计学意义(P<0.05)。PCa未治疗组、去势治疗组的DD3 mRNA阳性率分别为64%(7/11)、18%(6/33),组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论PCa患者外周血中可检测到DD3 mRNA表达,DD3 mRNA可望作为诊断PCa血行转移和治疗监测的良好标志物。

关键词：前列腺肿瘤癌基因