双重实时荧光逆转录聚合酶链反应检测尿液DD3／PSAmRNA比值及其应用

作     者：陈凤萍 陈俐丽 沈默 陈伟 陶志华 吴秀玲 胡元平 李澄棣 陈占国 陈晓东 CHEN Feng-ping;CHEN Li-li;SHEN Mo;CHEN Wei;TAO Zhi-hua;WU Xiu-ling;HU Yuan-ping;LI Cheng-di;CHEN Zhan-guo;CHEN Xiao-dong

作者机构：温州医学院附属第一医院实验诊断中心325000 温州医学院附属第一医院泌尿外科325000 温州医学院附属第一医院病理科325000 温州医学院附属第一医院超声影像科325000 

出 版 物：《中华医学杂志》 (National Medical Journal of China)

年 卷 期：2008年第88卷第4期

页      面：261-264页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

主　　题：前列腺肿瘤 基因 聚合酶链反应 尿液 

摘      要：目的建立双重实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测尿液DD3／PSAmRNA比值，评价其初步应用。方法分别在前列腺特异性抗原（PSA）基因外显子1和2、差异显示编码3（DD3）基因外显子1和3之间设计一对引物和一条探针，PSA和DD3基因的TaqMan—MGB探针5’分别标记HEX和FAM荧光素，建立双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的方法，并对方法学进行评价。对34例前列腺癌（PCa）、44例良性前列腺增生（BPH）患者前列腺按摩后尿液中的DD3／PSAmRNA比值进行检测，评价其临床应用价值。结果扩增产物经测序证明为PSA和DD3特异性片段。以LNCaP细胞cDNA作模板，PSAmRNA和DD3mRNA最低检测限分别为0，6细胞／反应和60细胞／反应。DD3／PSAmRNA比值批内、批间变异系数分别为3．8％-4，7％和4．1％-4，9％。PCa组尿液DD3／PSAmRNA比值明显高于BPH组（P〈0．01）。尿液DD3／PSAmRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积（AUC）为0．746（95％CI：0．630—0．862），当截断值为0．254时其敏感度和特异度分别为64．7％和77.3％，其阳性率与临床和病理分级均无关。结论成功建立了双重实时荧光RT—PCR检测尿液DD3／PSAmRNA比值的分子生物学诊断方法。该方法对PCa诊断具有较高特异度和敏感度，且节省操作时间、降低实验成本，有望成为PCa早期诊断的有效方法。