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花鲈前脂肪细胞系的建立及油酸诱导分化

水生生物学报 2024年第7期48卷 1102-1110页

作者：柯轶雄毛孝江任惠娟张春晓王玲宋凯李学山鲁康乐集美大学水产学院海水养殖生物育种全国重点实验室厦门 361021

花鲈(Lateolabrax maculatus)前脂肪细胞系为探索鱼类脂肪细胞分化和脂肪沉积的调控作用及相关分子机制提供了一种新的体外模型.研究将花鲈腹腔脂肪组织用胶原酶消化后原代培养,再以胰酶消化后传代,总共经过150次传代培养后,得到花鲈前... 详细信息

花鲈(Lateolabrax maculatus)前脂肪细胞系为探索鱼类脂肪细胞分化和脂肪沉积的调控作用及相关分子机制提供了一种新的体外模型.研究将花鲈腹腔脂肪组织用胶原酶消化后原代培养,再以胰酶消化后传代,总共经过150次传代培养后,得到花鲈前脂肪细胞系.进而,染色体核型分析表明该细胞系长期培养仍能保持正常表型,进一步使用线粒体cox1和cytb基因鉴定该细胞系来源于花鲈.用pEGFP-C1质粒转染细胞系,观察到明显的绿色荧光,表明可用于研究外源基因的表达.用不同浓度的油酸培养细胞系,3d后细胞有明显脂滴聚集,7d后脂滴达到最大;油红O染色表明,400 μmol/L油酸诱导7d后细胞即可正常分化成熟.综上所述,实验建立了花鲈前脂肪细胞系,该细胞系形态典型、可正常分化,为后续研究鱼类脂肪细胞分化及脂肪沉积提供了良好的实验材料.

关键词：前脂肪细胞细胞系细胞培养诱导分化花鲈

来源：博看期刊评论

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花鲈前脂肪细系的建立及油酸诱导分化

水生生物学报 2024年

作者：柯轶雄毛孝江任惠娟张春晓王玲宋凯李学山鲁康乐集美大学水产学院海水养殖生物育种全国重点实验室

花鲈(Lateolabrax maculatus)前脂肪细胞系为探索鱼类脂肪细胞分化和脂肪沉积的调控作用以及相关分子机制提供了一种新的体外模型。本研究将花鲈腹腔脂肪组织用胶原酶消化后原代培养,再以胰酶消化后传代,总共经过150次传代培养后,得到... 详细信息

花鲈(Lateolabrax maculatus)前脂肪细胞系为探索鱼类脂肪细胞分化和脂肪沉积的调控作用以及相关分子机制提供了一种新的体外模型。本研究将花鲈腹腔脂肪组织用胶原酶消化后原代培养,再以胰酶消化后传代,总共经过150次传代培养后,得到花鲈前脂肪细胞系。进而,染色体核型分析表明该细胞系长期培养仍能保持正常表型,进一步使用线粒体cox1和cytb基因鉴定该细胞系来源于花鲈。用pEGFP-C1质粒转染细胞系,观察到明显的绿色荧光,表明可用于研究外源基因的表达。用不同浓度的油酸培养细胞系, 3d后细胞有明显脂滴聚集, 7d后脂滴达到最大;油红O染色表明, 400μmol/L油酸诱导7d后细胞即可正常分化成熟。综上所述,实验建立了花鲈前脂肪细胞系,该细胞系形态典型、可正常分化,为后续研究鱼类脂肪细胞分化及脂肪沉积提供了良好的实验材料。

关键词：前脂肪细胞细胞系细胞培养诱导分化花鲈

刺激隐核虫感染对大黄鱼生理生化指标及免疫指标的影响

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水产学报 2024年第5期48卷 85-93页

作者：胡水木刘悦李奕晨田国鹏郭心怡林嘉琪白玉麟徐鹏周涛厦门大学海洋与地球学院海水养殖生物育种全国重点实验室厦门大学海洋与地球学院福建省海洋经济生物遗传育种重点实验室

刺激隐核虫感染能够导致海水鱼类感染“白点病”，而大黄鱼是受“白点病”影响最严重的海水养殖鱼类。为了探究刺激隐核虫感染对大黄鱼生理生化指标及免疫指标的影响，本研究利用刺激隐核虫人工感染大黄鱼，分别在感染后0、12、24、48和... 详细信息

刺激隐核虫感染能够导致海水鱼类感染“白点病”，而大黄鱼是受“白点病”影响最严重的海水养殖鱼类。为了探究刺激隐核虫感染对大黄鱼生理生化指标及免疫指标的影响，本研究利用刺激隐核虫人工感染大黄鱼，分别在感染后0、12、24、48和72 h采集血液、肝脏、脾脏、肠道、鳃、头肾和皮肤组织，并检测血清皮质酮、皮质醇以及肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量等指标的变化。同时使用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)实验检测肝脏、脾脏、肠道、鳃、头肾和皮肤组织中TNF-α、IL-8和IL-1β基因的表达量。结果显示，在大黄鱼感染刺激隐核虫后的0～72 h内，实验组大黄鱼表现出刺激隐核虫病的发病症状；血清皮质醇和皮质酮含量显著增加；肝脏GSH-Px活性极显著降低；肝脏SOD活性极显著增加；肝脏MDA含量在0～12h内急剧增加并达到峰值，随后含量缓慢降低；各组织中的TNF-α、IL-8和IL-1β的表达量均有不同程度的上调，在鳃、头肾、肝脏和皮肤中上调最为显著。研究表明，刺激隐核虫感染后有明显变化的皮质类激素含量和氧化应激指标能够反映大黄鱼的感染程度，有助于进一步辅助抗刺激隐核虫表型测量的优化。本研究可为深入理解刺激隐核虫感染后大黄鱼生理生化及免疫指标的动态变化提供基础，为后续的机制解析和品种选育工作提供参考。

关键词：大黄鱼刺激隐核虫生理生化指标免疫指标抗虫性状评价

大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

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水产学报 2024年第2期48卷 31-45页

作者：张鑫洛王永阳吴子良黄小红陈新华张伟妮海水养殖生物育种全国重点实验室福建省海洋生物技术重点实验室福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能，实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，Lc... 详细信息

为了揭示硬骨鱼C型凝集素受体(C-type lectin receptor,CTLR)的生物学功能，实验以从大黄鱼转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因(Clec4e)为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，LcClec4e cDNA全长1 546 bp，开放阅读框(ORF)771 bp，编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区，无信号肽，C端含有一个糖识别结构域(CRD)，其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明，LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示，LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布，且在肝脏中表达量最高；LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达，且在巨噬细胞中表达量最高；经灭活溶藻弧菌刺激后，LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段(recombinant LcClec4e-extracellular domain,rLcClec4e-ex)具有Ca2+依赖性的凝集活性，可凝集小鼠、家兔的红细胞，以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用，说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。上述结果提示，LcClec4e可能作为一种模式识别受体，通过结合病原菌表面的糖类病原体相关分子模式来识别病原，参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。

关键词：大黄鱼 C型凝集素受体(CTLR) Clec4e 红细胞凝集细菌凝集

牡蛎疱疹病毒结构蛋白真核表达系统构建及多聚化特性

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水产学报 2024年第5期48卷 65-74页

作者：曹书华魏茂乐李永仁黄博闻辛鲁生白昌明王崇明天津农学院水产学院天津市水产生态及养殖重点实验室中国水产科学研究院黄海水产研究所海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室农业农村部海水养殖病害防治重点实验室青岛市海水养殖流行病学与生物安保重点实验室

牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡，成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞(HEK293t)，构建OsHV-1主要核衣壳蛋白(ORF104和ORF33)的真核表达系统，... 详细信息

牡蛎疱疹病毒(OsHV-1)在全球范围内导致牡蛎、扇贝与蚶类的大规模死亡，成为双壳贝类养殖产业的重要威胁。为了解OsHV-1的结构与致病机制。本研究利用人胚胎肾细胞(HEK293t)，构建OsHV-1主要核衣壳蛋白(ORF104和ORF33)的真核表达系统，并对ORF104和ORF33潜在相互作用进行分析。实验首先通过特异性PCR扩增技术得到orf 104和orf 33的基因序列，根据其编码蛋白的理化性质、跨膜区与三维结构等生物信息学分析结果，选择pCDNA3.1(+)构建两种基因的重组表达质粒。重组质粒经大肠杆菌扩增、提取后，利用转染试剂Lipo8000?将pCDNA3.1(+)-orf 104与pCDNA3.1(+)-orf 33分别单独或共转染至HEK293t。然后，将转染后的细胞培养18 h后裂解收集蛋白。最后利用蛋白免疫印迹(Western blot,WB)与负染电镜检测两种目的蛋白的表达情况。结果显示，实验成功构建了OsHV-1衣壳蛋白ORF104和ORF33的重组表达质粒载体，通过真核细胞表达得到大小约为135与35 ku的目的蛋白。研究表明，表达质粒可在真核表达系统中实现蛋白单独转染与共转染，共转染蛋白间可能存在相互作用的趋势并形成多聚体，其中，ORF33自身即可形成分子质量不同的多聚体。本研究首次利用真核表达系统开展OsHV-1关键结构蛋白的表达，为进一步开展该病毒结构蛋白功能与互作，以及病毒入侵机制研究奠定基础。

关键词：牡蛎疱疹病毒核衣壳蛋白真核表达系统蛋白多聚化

灭菌和添加益生菌对沉积物菌落数和营养盐通量的影响

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中国水产科学 2024年第1期31卷 82-94页

作者：张爽房景辉曾超吕富杨明树罗坤梁博中国水产科学研究院黄海水产研究所海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室盐城工学院江苏省海洋滩涂生物化学与生物技术重点建设实验室江苏省滩涂池塘养殖生态重点实验室

通过对养殖环境灭菌,可以降低作为对虾亲虾的饵料沙蚕携带病原弧菌的风险。本研究采用实验生态学方法,基于病原弧菌的生物学特征,探究不同温度灭菌处理（65℃处理30 min, 100℃处理30 min和121℃处理20 min）对沉积物的灭菌效果及加入... 详细信息

通过对养殖环境灭菌,可以降低作为对虾亲虾的饵料沙蚕携带病原弧菌的风险。本研究采用实验生态学方法,基于病原弧菌的生物学特征,探究不同温度灭菌处理（65℃处理30 min, 100℃处理30 min和121℃处理20 min）对沉积物的灭菌效果及加入益生菌制剂对沉积物理化指标的影响。结果表明,各温度处理组在灭菌后立即采样,灭菌效果良好:65℃-30 min、100℃-30 min和121℃-20 min处理组对沉积物中总菌落数量的灭菌率分别为57.5%、99.45%、99.99%,表明随着灭菌处理温度的升高,灭菌率逐渐提高,对病原弧菌的灭菌率均达到100%。对于沉积物的理化指标分析表明,随着取样时间增长,灭菌处理方式给沉积物–上覆水界面的氮磷扩散通量带来的影响逐渐减小,益生菌制剂的添加能够降低水体和沉积物中的NO3-浓度和PO43-浓度,同一取样时间添加益生菌制剂处理组与未添加益生菌制剂处理组的NO3-扩散通量和PO43-扩散通量有显著差异（P实验期间未检测到病原弧菌菌落,添加益生菌制剂能够优化沉积物菌落结构,抑制总菌落数量的增长,同时对沉积物-上覆水界面的氮磷扩散通量产生影响。本研究可为沉积物灭菌及益生菌制剂在养殖环境中的应用提供数据参考。

关键词：温度处理灭菌益生菌沉积物

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稻米油脂遗传改良研究进展

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第3期50卷 329-338页

作者：王诗怡刘西西金龙应杰政李志永黄捷童晓红王以锋张健中国水稻研究所水稻生物育种全国重点实验室浙江杭州311400

脂肪是水稻种子不可或缺的营养成分,提升水稻种子中的油脂含量、优化其有益脂肪酸和抗氧化物质等关键组分是水稻品质育种的一大趋势。本文综述了稻米油脂的主要成分与功能、油脂合成与调控通路、稻米油脂的调控基因及遗传改良的研究进展... 详细信息

脂肪是水稻种子不可或缺的营养成分,提升水稻种子中的油脂含量、优化其有益脂肪酸和抗氧化物质等关键组分是水稻品质育种的一大趋势。本文综述了稻米油脂的主要成分与功能、油脂合成与调控通路、稻米油脂的调控基因及遗传改良的研究进展,旨在深化对稻米油脂生物合成的理解,并为未来创造高油脂、高品质水稻种质资源提供新的启示和方向。

关键词：水稻油脂含量品质遗传改良

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机插种植均匀度对水稻产量构建及品质形成的影响

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作物学报 2024年

作者：唐承翰陈惠哲叶天承张玉屏向镜张义凯王志刚王亚梁中国水稻研究所/水稻生物育种全国重点实验室

水稻种植均匀度对产量和品质有显著的影响，本试验旨在明确均匀度的提高协同产量和品质提升的机理。试验选用籼粳杂交稻甬优1540，常规粳稻浙禾香2号，杂交籼稻华浙优210为供试品种，设置4种不同种植均匀度处理：T1(条播机插，种植均匀... 详细信息

水稻种植均匀度对产量和品质有显著的影响，本试验旨在明确均匀度的提高协同产量和品质提升的机理。试验选用籼粳杂交稻甬优1540，常规粳稻浙禾香2号，杂交籼稻华浙优210为供试品种，设置4种不同种植均匀度处理：T1(条播机插，种植均匀度65%～75%)、T2(撒播机插，种植均匀度45%～55%)、T3(人工模拟机插，种植均匀度100%)、T4(人工模拟机插，种植均匀度50%)，比较不同种植均匀度群体的分蘖动态变化、叶面积光合效能、干物质积累与转运、产量形成及稻米品质的变化。结果表明：(1) 种植均匀度提高通过促进分蘖增加了群体有效分蘖数，3个品种平均分蘖高峰苗数表现为T3>T1>T2>T4，不同品种在处理间变化趋势一致。(2) 种植均匀度的提高增加了群体叶面积指数，同时显著提高了抽穗期上三叶高效叶面积指数。而且，增加均匀度显著提高了干物质积累并促进了植株干物质转运，成熟期干物质积累量表现为T3>T1>T2>T4，品种间趋势一致，但是T2跟T4差异不明显。均匀度提高对灌浆期茎鞘物质运转有一定促进作用，品种间存在差异，T1、T2和T4间差异不明显。(3) 不同均匀度处理下每穗粒数无显著性差异，但高均匀度下一次枝梗和二次枝梗的着粒分布更均匀。(4) 高均匀度群体主要通过有效穗数提高产量，品种间趋势一致，T3分别比T1、T2、T4平均产量高8.16%、15.41%、15.61%。(5) 提高种植均匀度提高了稻米糙米率、精米率、整精米率和蛋白质含量，降低了稻米垩白米率和垩白度。以上结果表明，提高种植均匀度能够促进群体分蘖，增加群体叶面积指数和干物质积累，提高有效穗数，从而提升了稻谷产量和出米率，并一定程度上改善了稻米品质。试验结果明确生产上采用精准条播育秧机插能够通过提高种植均匀度协同提升稻谷产量和稻米品质。

关键词：水稻种植均匀度播种方式产量稻米品质

水稻DMP1-3基因突变体的创制及其单倍体诱导能力鉴定

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中国水稻科学 2024年

作者：胡风越王健王春王克剑刘朝雷中国水稻研究所水稻生物育种全国重点实验室

【目的】探究水稻DMP家族基因的单倍体诱导能力，为单倍体育种提供新的基因资源。【方法】筛选与ZmDMP基因高同源和在花粉中高表达的水稻DMP家族同源基因作为候选基因；利用CRISPR/Cas9多基因编辑技术，在籼粳杂交稻“春优84”中对筛选... 详细信息

【目的】探究水稻DMP家族基因的单倍体诱导能力，为单倍体育种提供新的基因资源。【方法】筛选与ZmDMP基因高同源和在花粉中高表达的水稻DMP家族同源基因作为候选基因；利用CRISPR/Cas9多基因编辑技术，在籼粳杂交稻“春优84”中对筛选的DMP家族基因和单倍体诱导基因OsMTL创制单基因敲除以及多基因组合敲除突变体；对突变体进行形态学观察和花粉育性鉴定；调查统计转基因T0材料的结实率和单倍体诱导率。【结果】在水稻RAP-DB数据库中共检索到13个玉米单倍体诱导基因ZmDMP的同源基因。OsDMP1和OsDMP2与ZmDMP同源性最高，相似度分别为41.24% 和37.32%；OsDMP1和OsDMP3在花药中表达量最高。因此，选择OsDMP1、OsDMP2、OsDMP3基因为候选基因。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术创制了OsDMP1、OsDMP2、OsDMP3的单基因敲除和组合敲除突变体(osdmp1、osdmp2、osdmp3、osdmp1-osdmp2、osdmp1-osdmp3、osdmp1-osdmp2-osdmp3)，OsMTL单基因敲除突变体(osmtl)，以及OsDMP1、OsDMP2、OsDMP3与OsMTL基因的组合敲除突变体(osmtl-osdmp1、osmtl-osdmp2、osmtl-osdmp3、osmtl- osdmp1-osdmp2、osmtl- osdmp1-osdmp3、osmtl- osdmp1-osdmp2-osdmp3)。表型考察发现，相比较野生型，所有突变体的植株形态和花粉育性均未发生显著变化，而仅在包含osmtl的单基因敲除和多基因组合敲除突变体中结实率发生显著下降。单倍体鉴定结果显示，OsDMP1、OsDMP2、OsDMP3和OsMTL组合突变的单倍体诱导效率分别为0.4% ± 0.6%、2.6% ± 2.8%、1.4% ± 0.6%、1.5% ±1.3%、2.1% ± 2.4%、2.2% ± 0.6%，与osmtl突变体(1.5% ± 0.5%)无显著差异。然而，当OsDMP家族基因单个突变或多个组合突变时均无单倍体产生。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功创制了水稻OsDMP1、OsDMP2、OsDMP3、OsMTL单基因和多基因组合敲除突变体，发现了OsDMP1、OsDMP2和OsDMP3均无独立单倍体诱导能力，也不能提升OsMTL基因的单倍体诱导效率。本研究促进了对水稻中OsDMP同源基因的了解，为后续单倍体诱导基因研究提供参考。

关键词：水稻单倍体诱导 DMP1-3 OsMTL