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表观遗传调控在植物病原真菌发育和致病过程中的作用与分子机制

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2024年第3期50卷 469-480页

作者：孙子越陶增浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所浙江杭州310058

经过长期进化,植物病原真菌发展出多种复杂而精妙的侵染宿主策略。在植物与病原菌互作过程中,病原菌致病基因的精准表达与调控起至关重要的作用。表观遗传调控是指通过化学修饰改变染色体上的DNA和蛋白质,从而调控基因表达的过程,包括DN... 详细信息

经过长期进化,植物病原真菌发展出多种复杂而精妙的侵染宿主策略。在植物与病原菌互作过程中,病原菌致病基因的精准表达与调控起至关重要的作用。表观遗传调控是指通过化学修饰改变染色体上的DNA和蛋白质,从而调控基因表达的过程,包括DNA甲基化、组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化以及染色质重塑等。越来越多的证据表明,表观遗传调控在植物病原真菌基因的转录重编程中发挥重要作用,进而影响其发育、环境应激反应、次生代谢物的生物合成和致病性等方面。本文综述了近年来表观遗传调控因子方面的研究进展,包括组蛋白修饰、染色质重塑等在植物病原真菌发育和致病性中的作用,并对当前的研究进行了展望,以期为未来的病害防治研究奠定坚实的理论基础。

关键词：植物病原真菌组蛋白修饰染色质重塑 DNA/RNA甲基化真菌致病性

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牛奶中喹诺酮类药物残留的AlphaLISA检测方法的研究

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食品工业科技 2024年第14期45卷 264-270页

作者：马立才邢维维于莹贾良曦秦誉金兴丁亚芳北京维德维康生物技术有限公司北京100095

本文旨在建立一种可检测牛奶中喹诺酮类药物(Quinolones,QNS)残留的均相光激化学发光免疫分析方法(Amplifiedluminescent proximity homogeneous assay linkedimmune sorbent assay,AlphaLISA)。采用EDC/NHS活泼酯法在诺氟沙星分子连接6-氨基己酸作为间隔臂,制备生物素修饰诺氟沙星半抗原(Biotin-6AS-NOR),并在受体微球上偶联QNS单克隆抗体,Biotin-6AS-NOR可与牛奶样品中的QNS竞争结合喹诺酮抗体;通过优化受体微球的QNS抗体偶联量,Biotin-6AS-NOR及供/受体微球的用量等参数,以及牛奶样品的稀释方案,建立了牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法。采用1:5牛奶样品稀释方案,所建立牛奶中QNS残留的AlphaLISA检测方法的检出限和定量限分别为0.19 ng/mL和0.46 ng/mL,回收率在85.97%~110.11%之间,日内和日间变异系数均小于10%,与诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、达氟沙星和洛美沙星的交叉反应率均高于70%。本研究所建立AlphaLISA检测方法具有灵敏度和准确度高、重复性好等优点,且在整个检测过程中不需要繁琐洗涤操作,具有较高的应用和推广价值。

关键词：喹诺酮类半抗原生物素 AlphaLISA

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基于Eu3+荧光微球的丁香酚时间分辨荧光免疫层析技术的建立

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农业生物技术学报 2024年第9期32卷 2190-2202页

作者：宋妍灵翟璐李因来陈青舟廖杰金仁耀浙江工商大学海洋食品研究院杭州博岳生物技术有限公司杭州南开日新生物技术有限公司浙江华才检测技术有限公司

丁香酚具有来源广、成本低、效果好且残留期短等优点，被广泛应用于渔业麻醉，但国际上对于其安全性存在争议，认为丁香酚类化合物对啮齿动物是致癌物或潜在的致癌物。为提供一种高效、简便适用于现场快速检测水产品中丁香酚残留的方法... 详细信息

丁香酚具有来源广、成本低、效果好且残留期短等优点，被广泛应用于渔业麻醉，但国际上对于其安全性存在争议，认为丁香酚类化合物对啮齿动物是致癌物或潜在的致癌物。为提供一种高效、简便适用于现场快速检测水产品中丁香酚残留的方法，本研究建立了丁香酚时间分辨荧光免疫层析技术并制备免疫层析试纸条，利用Eu3+标记的荧光微球和抗丁香酚单克隆抗体进行标记，先后对微球活化时间、荧光标记缓冲液pH值、标记抗体量、荧光微球用量及T线和C线包被浓度等参数进行优化，并在最优条件下制备免疫层析试纸条并对其性能进行评价。结果表明，在最优条件下制成的试纸条在0.05～0.40μg/mL之间丁香酚标样浓度的对数值与T/C值具有良好的线性关系，标准曲线方程：y=-2.415lnx+2.589 4,R2=0.994，仪器检出限为0.1μg/mL，表明试纸条具有良好的灵敏度。样品添加回收率试验表明，回收率在94.16%～109.27%范围内，批内和批间变异系数分别为2.00%～7.33%和2.73%～6.97%。利用新研发试纸条对丁香酚标样检测与传统的高效液相色谱检测方法相比结果一致。稳定性试验证明，本研究制备的试纸条的有效保质期至少为1年。本研究所建立的方法适用于水产品中丁香酚残留的快速检测，同时为开发丁香酚快速检测技术提供依据。

关键词：丁香酚时间分辨荧光免疫层析试纸条

杉木与浙江楠混交对根系分泌物和丛枝菌根真菌群落结构的影响

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林业科学 2024年第9期60卷 59-68页

作者：杨淑雅王镜如朱滢滢伊力塔刘美华浙江农林大学林业与生物技术学院杭州311300

【目的】研究杉木与浙江楠混交对根系分泌物和土壤中丛枝菌根真菌(AMF)群落结构的影响,为杉木人工纯林“针改阔”的树种选择提供参考,为提高杉-阔混交林生产力提供理论依据和思路。【方法】在杉木纯林、浙江楠纯林、杉木与浙江楠混交林... 详细信息

【目的】研究杉木与浙江楠混交对根系分泌物和土壤中丛枝菌根真菌(AMF)群落结构的影响,为杉木人工纯林“针改阔”的树种选择提供参考,为提高杉-阔混交林生产力提供理论依据和思路。【方法】在杉木纯林、浙江楠纯林、杉木与浙江楠混交林中,采集0~20 cm土层样品,分析纯林和混交林土壤中根系分泌物和AMF群落结构差异,阐明混交林根系分泌物对AMF群落结构变化的影响。【结果】纯林与混交林土层样品中共检出含量高且具有化感活性的主要分泌物5种:2,4-二叔丁基苯酚、邻苯二甲酸二丁酯、油酸甲酯、棕榈酸、硬脂酸,其中油酸甲酯、棕榈酸、硬脂酸含量在不同林分间差异显著。浙江楠纯林根际土壤中含AMF属的OTU数量最多、多样性和相对丰度最高,混交林次之,杉木纯林最低;3种林分土壤AMF优势属均为Glomus属,混交显著降低Glomus占比、提高Gigaspora占比。相关分析表明,邻苯二甲酸二丁酯对杉木纯林土壤AMF群落结构影响较大,油酸甲酯对混交林土壤AMF群落结构影响较大。【结论】杉木与浙江楠混交使土壤化感物质含量发生改变,影响土壤微生物结构组成,AMF群落多样性和丰富度显著高于杉木纯林。

关键词：混交林根系分泌物丛枝菌根真菌杉木浙江楠纯林

基于目标颜色基及梯度方向匹配的菌落分割计数算法

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微生物学报 2024年第3期64卷 953-967页

作者：何健郡李子印马咸莹中国计量大学浙江杭州310018 杭州大微生物技术有限公司浙江杭州310000

【目的】通过菌落测试片提取菌落并计数,在农业、食品业、医疗卫生等领域中是一项常用且重要的工作。目前,菌落自动计数算法大都是以菌落培养皿为主要工作对象,对菌落测试片适用性较差。另外,目前相关技术在常规的粘连物体分割中有着较... 详细信息

【目的】通过菌落测试片提取菌落并计数,在农业、食品业、医疗卫生等领域中是一项常用且重要的工作。目前,菌落自动计数算法大都是以菌落培养皿为主要工作对象,对菌落测试片适用性较差。另外,目前相关技术在常规的粘连物体分割中有着较好的效果,但在菌落分割计数中,由于菌落本身的形态特征,对粘连菌落分割计数的效果尚不够精准。【方法】为解决此类问题,本文提出一种基于目标颜色基及梯度方向匹配的菌落分割计数算法。首先利用图像中菌落的颜色特征作为基,将图像转换到基空间内,以增强菌落与背景之间的差异,其次利用菌落图像的梯度幅值特征对梯度方向进行滤波,然后通过梯度方向进行匹配,进而将粘连的菌落分割,最后利用非极大值抑制的方法筛选出菌落并计数。【结果】经试验,本研究算法的计数精度可达98.00%,能够满足实际需求。【结论】在针对菌落的目标分割计数中,本研究算法不仅计数精度高,而且具有较好的鲁棒性,在对不同厂家的菌落总数测试片菌落分割计数中均有优异效果;然而在对大面积目标的检测分割中算法的准确率会有所下降,因此,该算法更适合于菌落等小目标的检测分割。

关键词：颜色基微生物梯度空间粘连分割菌落计数

反义寡核苷酸药物AD00510-AS在小鼠、大鼠、猴、人肝S9和血浆中的代谢产物研究

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中国新药杂志 2024年第2期33卷 151-158页

作者：柳庆龙纪海霞李伦张云祁佳琦刘添浩梁柳艺陶桂勇周绍联益诺思生物技术南通有限公司南通226133 上海益诺思生物技术股份有限公司上海201203 上海舶望制药有限公司上海201203

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule Prof... 详细信息

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule ProfilerTM软件分析空白样品和给药后孵育24h样品的提取离子流图(XIC)的差异,得到可能的代谢产物,并推测代谢途径.结果:AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人肝S9孵育24h后,共检测到3个代谢产物(M1,M4和M5),母药的相对丰度分别为73.9%,87.1%,78.4%和81.3%;AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人血浆孵育24h后,共检测到4个代谢产物(M2,M3,M4和M5),母药的相对丰度分别为69.1%,94.5%,67.8%和68.1%;通过MS及MS/MS的测定,鉴定的代谢产物如下:M1:3'末端丢失9个核苷酸代谢产物(MW=4544);M2:3'末端丢失2个核苷酸代谢产物(MW=6857);M3:3'末端丢失1个核苷酸代谢产物(MW=7232);M4:双脱硫代谢产物(MW=7559);M5:脱硫代谢产物(MW=7575).结论:采用确认的LC-UV-Q-TOF方法可以检测到AD00510-AS及其5个代谢产物,AD00510-AS在体外肝S9和血浆中主要通过降解(丢失核苷酸)和脱硫进行代谢.

关键词：反义寡核苷酸肝S9 血浆代谢产物鉴定固相萃取

猪伪狂犬病病毒BJC变异株分离鉴定及gB和gE基因序列分析

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动物医学进展 2024年第9期45卷 20-26页

作者：娄昆鹏李阳项伟徐博朱国强扬州大学兽医学院江苏扬州225009 浙江美保龙生物技术有限公司浙江金华321016

为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gB、gE基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件Geneious Prime... 详细信息

为了确定伪狂犬病疑似发病猪场PRV变异株病原及其病毒分子特征,通过病理剖检、病毒分离鉴定与纯化、ST细胞TCID_(50)和小鼠LD_(50)测定,对分离鉴定的病毒gB、gE基因进行PCR扩增、回收、克隆和测序,用生物信息学分析软件Geneious Prime对gB、gE基因进行遗传进化和同源性分析。结果显示,该分离株为PRV强毒株。该病毒在ST细胞生长良好,纯化后的病毒经测定半数组织培养感染量为10^(8.5)TCID_(50)/mL,对6周龄昆明小鼠的LD_(50)为10^(5.8)TCID_(50)。测序结果与预期的PRV gB、gE基因片段相符。遗传进化分析可知与国内代表PRV变异毒株如JS2012、HN1201、ZJ01等处于同一分支,与欧美分离株如Bartha、Kaplan、Becker等亲缘关系较远,处于不同的大分支。氨基酸序列分析表明,BJC株与国外经典毒株和国内早期分离毒株存在多个特征性位点替换,符合国内流行变异毒株特征,BJC株为PRV变异毒株。

关键词：伪狂犬病毒病分离鉴定 BJC株 gB、gE基因序列分析

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猪3型圆环病毒研究进展

新农民 2024年第18期 123-125页

作者：千国胜於庆雄娄昆鹏胡永明彭俊平欧伟业浙江美保龙生物技术有限公司

猪圆环病毒（Porcinecircovirus,PCV）是目前危害全球养猪业的重要病原之一。该病除了导致断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）等，还可以导致新生仔先天性脑震颤（CT）、母猪繁殖障碍、增生性肠炎、猪呼吸... 详细信息

猪圆环病毒（Porcinecircovirus,PCV）是目前危害全球养猪业的重要病原之一。该病除了导致断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）等，还可以导致新生仔先天性脑震颤（CT）、母猪繁殖障碍、增生性肠炎、猪呼吸道综合征等。目前为止，该病毒有发现总共有PCV-1、PCV-2、PCV-3和PCV-4四种基因型，其中PCV-2的致病性最强。近年来，随着PCV-3的检出率不断提高，给养猪业带来了新的问题。本文就PCV-3圆环病毒的病原学、流行病学、致病机理、临床症状、诊断方法及防治措施作了全面的综述，为更加全面地认识该病毒，防控该病毒在规模化猪场暴发做基础。

关键词：猪3型圆环病毒 PCV诊断防治

不同圆环病毒病疫苗和蓝耳病灭活疫苗联合免疫的效果比较

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今日养猪业 2024年第1期 37-42页

作者：赖庆光李阳浙江美保龙生物技术有限公司浙江金华321016

【目的】建立一种简便有效的圆环病毒病和蓝耳病联合免疫方法。【方法】在同一个集团2个不同猪场选择3个不同厂家的圆环病毒病疫苗(简称为“A圆环病毒病疫苗”“B圆环病毒病疫苗”“C圆环病毒病疫苗”)和同一猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗... 详细信息

【目的】建立一种简便有效的圆环病毒病和蓝耳病联合免疫方法。【方法】在同一个集团2个不同猪场选择3个不同厂家的圆环病毒病疫苗(简称为“A圆环病毒病疫苗”“B圆环病毒病疫苗”“C圆环病毒病疫苗”)和同一猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗(CH-1A株,简称为“A蓝耳病灭活疫苗”)同时开展免疫试验,试验的3个处理组均采取14日龄、30日龄2次免疫。A组:免疫A圆环病毒病疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL;B组:免疫B圆环病毒疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL;C组:免疫C圆环病毒病疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL。观测免疫后的体温变化,接种后应激反应、采食量变化、精神状态、异常猪情况;采血检测IgM、IgG抗体,了解抗体变化情况、离散度和新旧感染;检测蓝耳病病毒和圆环病毒的病毒载量变化、血液中核酸阳性率。【结果】2个猪场3个免疫组14日龄、30日龄2次免疫后,体温均有不同程度升高;A组相对B组增重有优势,和C组相差不大;从圆环病毒抗体检测结果来看,A组免疫疫苗后产生IgM、IgG抗体水平更快、更高;H场A组在45日龄检测到PCV2核酸后,没有再检测到,但B组和C组在110日龄均可以检测到PCV2核酸阳性;H场B组110日龄、H场C组70日龄、G场C组可以检测到PRRVS(蓝耳病病毒)核酸。【结论】对比3个试验组的结果发现,免疫A圆环病毒病疫苗1 mL+A蓝耳病灭活疫苗1 mL组免疫效果最佳。这说明圆环病毒病疫苗和蓝耳病疫苗可以联合免疫,不影响抗体的产生。但由于圆环病毒病疫苗不一样,免疫后产生的保护水平有差异,高水平IgG持续时间越长,保护不被感染时间越长。

关键词：猪圆环病毒病蓝耳病疫苗联合免疫抗体增重