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肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠模型的构建

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安徽医科大学学报 2024年第3期59卷 384-390页

作者：许雅萍王语涵陈婷婷李南高萍萍李玲王华孙妩弋安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室合肥230032 安徽医科大学第一附属医院肿瘤科合肥230032

目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠... 详细信息

目的运用Cre-loxP技术构建肝细胞特异性沉默信息调节因子3(silence information regulator 3,Sirt3)基因敲除(Sirt3^(Δhep))小鼠,为研究肝细胞Sirt3基因在疾病中的生物学功能提供重要动物模型。方法将loxP标记的Sirt3 ^(flox/flox)小鼠与Alb-Cre纯合子(Alb-Cre^(+/+))小鼠进行交配,F1代Sirt3^(flox/-)/Alb-Cre^(+/-)小鼠再与Sirt3^(flox/flox)小鼠进行交配并鉴定,F2代基因型为Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(+/-)的小鼠即为本实验所构建的Sirt3^(Δhep)小鼠,Sirt3 ^(flox/flox)/Alb-Cre^(-/-)小鼠即为对照小鼠Sirt3 ^(flox/flox)小鼠。提取鼠尾DNA,通过PCR鉴定子代小鼠的基因型;免疫荧光双染观察Sirt3在小鼠肝细胞中的表达;提取Sirt3^(Δhep)小鼠原代肝细胞及心脏、脾脏、肾脏、肺组织蛋白,Western blot法验证Sirt3在小鼠肝细胞及其他组织中的表达水平;HE染色观察小鼠肝脏及心脏、脾脏、肺等组织结构。结果成功鉴定出Sirt3^(Δhep)小鼠;免疫荧光及Western blot结果显示,小鼠肝细胞中Sirt3蛋白表达水平低于对照组小鼠(P0.05);HE染色结果显示Sirt3^(Δhep)小鼠肝脏、心脏、脾脏、肺、肾脏的组织学特征与对照组小鼠相比无明显变化。结论成功构建肝细胞特异性Sirt3基因敲除小鼠,为进一步研究肝细胞Sirt3基因在相关疾病中的调控作用机制奠定了基础。

关键词：肝细胞 Sirt3 基因敲除 Sirt3^(Δhep)小鼠 Cre-loxP 基因型鉴定

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新生儿黄疸早期筛查的研究进展

中华围产医学杂志 2024年第6期27卷 511-515页

作者：胡忠华林振浪浙江大学医学院附属第二医院临平院区儿科杭州311199 温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院新生儿科温州325027 温州医科大学第二临床医学院

新生儿黄疸早期筛查是新生儿保健的重要工作之一。近年来,新生儿黄疸早期筛查的方法和仪器有了一定的更新和进步,主要包括视觉评估、黄疸计、血清胆红素的即时检测、基于手机应用软件的黄疸筛查以及呼气末一氧化碳检测等。本文综述了上... 详细信息

新生儿黄疸早期筛查是新生儿保健的重要工作之一。近年来,新生儿黄疸早期筛查的方法和仪器有了一定的更新和进步,主要包括视觉评估、黄疸计、血清胆红素的即时检测、基于手机应用软件的黄疸筛查以及呼气末一氧化碳检测等。本文综述了上述方法的相关研究和进展,以期指导临床实践及科学研究。

关键词：黄疸,新生儿胆红素新生儿筛查即时检测移动医疗

采用RNA测序技术分析儿童呼吸道合胞病毒毛细支气管炎的转录组特征

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中华预防医学杂志 2024年第1期58卷 71-80页

作者：王乐颖乐伊莎李海燕刘振伟翁婷婷陈小芳留佩宁董琳温州医科大学附属第二医院育英儿童医院儿童呼吸科温州325027 温州医科大学基因组医学研究院温州325025 温州医科大学附属第二医院育英儿童医院儿童保健科温州325027

本研究通过对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿血白细胞进行RNA测序,探讨与发病机制及疾病严重度相关的生物学特征。本研究是一项病例对照研究,以2019年10月至2022年4月于温州医科大学附属第二医院儿童呼吸科住院临床诊断为毛细支... 详细信息

本研究通过对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿血白细胞进行RNA测序,探讨与发病机制及疾病严重度相关的生物学特征。本研究是一项病例对照研究,以2019年10月至2022年4月于温州医科大学附属第二医院儿童呼吸科住院临床诊断为毛细支气管炎,RSV抗原阳性和(或)RSV核酸阳性的87例患儿作为病例组,将病例组按病情分为轻、中、重三组,按有无特应征分为特应征组和无特应征组,选择同期40名健康体检儿童作为对照组,提取病例组和对照组儿童的全血白细胞RNA进行测序,分析数据得到差异表达基因(DEGs),再通过基因本体论(GO)注释、京都基因和基因组百科全书(KEGG)注释、蛋白质相互作用网络(PPI)构建筛选与发病机制、病情以及特应征相关的免疫生物学通路及基因。通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)构建共表达网络,寻找与疾病严重度相关的潜在生物学指标。结果显示,病例组与对照组相比DEGs共有1782个,其中上调基因1586个,下调基因196个,这些DEGs的GO通路富集显示在分子功能中主要富集在过氧化物酶活性、氧化还原酶活性等过程,在细胞学组分中主要富集在细胞质囊泡腔、分泌颗粒腔中,在生物学过程中主要富集在中性粒细胞激活参与免疫反应、中性粒细胞脱颗粒、中性粒细胞激活等过程。DEGs的KEGG富集分析显示主要富集于病毒蛋白与细胞因子及其受体的相互作用信号通路。构建PPI网络后得到CCL2、IL-10、MMP9和JUN共4个处于核心位置的基因。不同病情组与对照组比较所得DEGs主要富集在逆行内源性大麻素信号转导和细胞凋亡通路上。WGCNA分析显示与血氧饱和度相关的棕色模块与病情关系最为密切,其基因主要富集在RNA解旋酶维甲酸诱导基因-I(RIG-I)样受体信号通路上。特应征组的特异性DEGs有230个,无特应征组的特异性DEGs有444个,KEGG富集分析结果显示两组均富集到NF-κB信号通路上,特应征不会导致RSV毛细支气管炎儿童免疫反应和转录组特征发生明显改变。综上,中性粒细胞激活、脱颗粒途径以及病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用信号通路参与RSV毛细支气管炎宿主的免疫反应。CCL2、IL-10、MMP9和JUN基因可能与发病相关。在RIG-I样受体、细胞凋亡及内源性大麻素相关的信号通路中可能存在与疾病严重度相关的潜在生物学标志物。

关键词：呼吸道合胞病毒毛细支气管炎疾病严重程度 RNA测序

髓样分化蛋白-2调控AMPK介导肥胖所致心肌损伤的研究

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中国临床药理学杂志 2024年第10期40卷 1458-1462页

作者：黄成坷周伶俐孙未林晓东陈瑞杰温州医科大学附属第二医院药学部浙江温州325027 温州医科大学附属第二医院病理科浙江温州325027

目的探讨髓样分化蛋白-2(MD-2)通过调控AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)介导肥胖引起的心肌损伤中的作用。方法用高脂饲料喂养制备肥胖小鼠模型。将野生型和MD-2基因敲除小鼠随机分为野生型对照组(正常饲养)、野生型模型组(高脂饲料)、敲除对照... 详细信息

目的探讨髓样分化蛋白-2(MD-2)通过调控AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)介导肥胖引起的心肌损伤中的作用。方法用高脂饲料喂养制备肥胖小鼠模型。将野生型和MD-2基因敲除小鼠随机分为野生型对照组(正常饲养)、野生型模型组(高脂饲料)、敲除对照组(正常饲养)和敲除模型组(高脂饲料),每组8只。用试剂盒测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)水平,用小动物超声检测左心室射血分数(LVEF)和左短轴缩短率(LVFS),用苏木精-伊红(HE)染色法和Masson染色法观察心肌组织病理变化,用蛋白质印迹法检测心肌组织中磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白的表达情况。结果HE染色和Masson染色结果发现野生型模型组小鼠心肌组织出现明显变性坏死和纤维化,而敲除模型组心肌细胞变性坏死与心肌组织纤维化明显减轻。野生型对照组、野生型模型组、敲除对照组和敲除模型组的LVEF值分别为(83.98±7.58)%、(52.03±4.91)%、(76.42±3.89)%和(73.71±4.22)%,LVFS值分别为(53.61±8.51)%、(24.56±3.76)%、(48.14±5.00)%和(44.07±3.74)%,CK-MB值分别为(49.83±15.49)、(83.75±11.90)、(54.03±18.66)和(66.85±12.98)U·L^(-1),LDH值分别为(12.24±3.20)、(27.90±6.10)、(13.55±3.55)和(15.53±2.58)U·L^(-1),p-AMPK蛋白相对表达水平分别为221.31±88.76、46.29±10.07、148.66±32.02和161.49±78.11。野生型模型组的上述指标与野生型对照组比较,敲除模型组的上述指标与野生型模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论高脂饲料通过MD-2抑制AMPK活性介导了肥胖小鼠的心肌损伤。

关键词：髓样分化蛋白-2 AMP依赖的蛋白激酶肥胖心肌损伤

诱导多能干细胞分泌的外泌体对角质细胞增殖与迁移的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第10期40卷 1438-1442页

作者：张蓉蓉郭晓令朱光辉温州医科大学附属第二医院药学部浙江温州325000 温州医科大学附属第二医院基础医学研究中心浙江温州325000

目的探讨多能干细胞(iPSC)分泌的外泌体(Exos)促进角质细胞的增殖、侵袭与迁移,从而促进伤口愈合的作用。方法提取iPSC-Exos并通过透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析技术和蛋白质印迹法进行鉴定。将带有PKH26标记纯化的iPSC-Exos加到角... 详细信息

目的探讨多能干细胞(iPSC)分泌的外泌体(Exos)促进角质细胞的增殖、侵袭与迁移,从而促进伤口愈合的作用。方法提取iPSC-Exos并通过透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析技术和蛋白质印迹法进行鉴定。将带有PKH26标记纯化的iPSC-Exos加到角质细胞(HaCaT)里进行角质细胞摄取外泌体的测定;用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测外泌体最佳工作浓度。HaCaT细胞分为对照组(细胞划痕)和实验组(细胞划痕之后加入最佳工作浓度的外泌体)。分别用CCK-8、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、划痕实验及Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。结果iPSC-Exos呈现圆形或椭圆形的膜囊泡结构,直径为(120.00±25.00)nm。实验组iPSC-Exos特征性表面标志物CD9、CD63、CD81的表达均呈阳性,对照组均呈阴性。HaCaT细胞能够摄取iPSC-Exos。干预24 h后,对照组和实验组的划痕愈合率分别为(25.70±1.07)%和(71.60±12.76)%,Transwell侵袭细胞数分别为(86.33±10.79)和(166.33±24.13)个,EdU阳性比例分别为(45.30±3.17)%和(78.10±6.29)%,实验组的上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论多能干细胞分泌的外泌体能够促进角质细胞的增殖、迁移及侵袭,从而间接促进伤口愈合。

关键词：外泌体角质细胞增殖迁移侵袭

肠道菌群导致卵巢切除小鼠骨髓内铁死亡的研究

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中国骨质疏松杂志 2024年第5期30卷 643-648,661页

作者：谭曾林曾菁菁刘建纬边若瑜陈雷温州医科大学附属第一医院骨科浙江温州325000 温州医科大学宁波院区浙江宁波325000 温州医科大学基础医学院浙江温州325000 温州医科大学浙江温州325000

目的探讨肠道菌群是否激活骨髓内铁死亡引发绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)。方法通过Micro-CT分析正常组及卵巢切除(ovariectomy,OVX)组小鼠的股骨结构;通过16 S rRNA测序分析小鼠的肠道菌群结构;提取小鼠回肠、... 详细信息

目的探讨肠道菌群是否激活骨髓内铁死亡引发绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)。方法通过Micro-CT分析正常组及卵巢切除(ovariectomy,OVX)组小鼠的股骨结构;通过16 S rRNA测序分析小鼠的肠道菌群结构;提取小鼠回肠、结肠和股骨的RNA及蛋白,并检测其中炎性因子、紧密连接蛋白及铁死亡相关因子的表达水平;利用试剂盒检测股骨中丙二醛、还原型谷胱甘肽及组织铁含量。结果OVX组小鼠肠道菌群的物种多样性及丰富度显著增加,引起OVX小鼠肠道屏障功能受损。肠道屏障功能的受损引起骨髓的炎性反应及铁死亡的发生,最终导致了PMOP的发生发展。结论肠道菌群能够通过促进OVX小鼠骨髓炎症及骨髓内细胞铁死亡引起PMOP。

关键词：肠道菌群骨质疏松症炎症铁死亡·

维得利珠单抗治疗炎症性肠病患者疗效评价的回顾性研究

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中国临床药理学与治疗学 2024年第8期29卷 899-906页

作者：李培培武岳张贤政张玲玲安徽中医药大学第一附属医院药学部安徽中医药大学第一附属医院肛肠外科安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室安徽合肥230032

目的:评价维得利珠单抗(VDZ)治疗炎症性肠病的疗效和安全性。方法:回顾性收集2021年3月至2023年8月本院肛肠科收治的使用VDZ治疗的炎症性肠病(IBD)患者共25例[溃疡性结肠炎(UC)13例、克罗恩病(CD)12例]的病例资料。给予静脉输注VDZ,在第... 详细信息

目的:评价维得利珠单抗(VDZ)治疗炎症性肠病的疗效和安全性。方法:回顾性收集2021年3月至2023年8月本院肛肠科收治的使用VDZ治疗的炎症性肠病(IBD)患者共25例[溃疡性结肠炎(UC)13例、克罗恩病(CD)12例]的病例资料。给予静脉输注VDZ,在第0、2、6周给药300 mg诱导缓解治疗,随后每8周300 mg静脉给药一次维持缓解治疗,用药30周后进行评价。主要疗效指标包括临床应答率、临床缓解率、内镜缓解率,次要疗效指标包括营养状况指标[体质量(Wt)、血红蛋白(HGB)、白蛋白(ALB)、血细胞比容(HCT)]、炎症程度指标[超敏C反应蛋白(hs-CRP)、红细胞沉降率(ESR)]。记录VDZ治疗期间出现的所有不良反应。结果:IBD患者使用VDZ治疗6周和14周的总临床应答率分别为32%和60%,用药14周和30周的总临床缓解率分别为16%和36%,用药30周的总内镜缓解率为16%。VDZ对于治疗UC和CD的临床应答率和临床缓解率无统计学差异。与用药前相比,UC患者用药30周后体质量明显增加,营养指标HCT%、ALB、HGB水平明显好转,炎症指标ESR水平显著下降;CD患者用药30周与用药前相比,体质量明显增加,炎症指标hs-CRP、营养指标HCT%、ALB、HGB水平显著改善。1例患者在第3次输注VDZ后出现白细胞计数升高外,未发生其他不良反应。结论:VDZ作为IBD患者的诱导和维持治疗用药,能够显著减轻IBD患者肠道炎症反应、缓解患者临床症状、改善患者营养状况、提高患者生活质量,且安全性良好。

关键词：炎症性肠病维得利珠单抗疗效安全性

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EP联合方案耐药小细胞肺癌细胞株的构建及机制探讨

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陆军军医大学学报 2024年第18期46卷 2092-2100页

作者：刘明菩王红梅伍元丽周端方周维英重庆医科大学药学院药理学系重庆400016 重庆医科大学药物代谢研究重庆市重点实验室重庆400016 重庆医科大学附属第一医院药学部重庆400016 重庆市妇幼保健院药学部重庆401147

目的构建依托泊苷(etoposide,VP-16)联合顺铂(cisplatin,DDP)化疗方案(EP联合方案)耐药的小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)细胞株H446/EP,并进行耐药特性鉴定及机制探讨。方法以药物浓度递增法,使用VP-16联合DDP处理NCI-H446细胞构建H446/EP细胞株。以H446/EP与NCI-H446细胞为研究对象,MTT法检测细胞活力,计算H446/EP细胞耐药指数(resistance index,RI);细胞克隆实验、Incucyte细胞增殖(无标记)法检测细胞增殖能力;转录组学测序后,对2种细胞差异表达基因进行富集分析;Western blot检测细胞耐药、DNA损伤修复(repair of DNA damage,DDR)、自噬标志分子的蛋白表达量。结果MTT结果显示,H446/EP细胞对VP-16、DDP与DOX的RI分别为6.14、3.43与1.96;细胞克隆实验与Incucyte细胞增殖(无标记)法结果显示,H446/EP细胞增殖能力显著高于NCI-H446细胞(P<0.01);转录组学测序、通路富集分析显示差异表达基因在肿瘤化疗耐药、DDR、自噬相关通路富集;Western blot结果显示,相比NCI-H446细胞,H446/EP细胞MRP1、BCRP、RAD51、γ-H2AX及LC3-II/LC3-I蛋白表达量显著升高,p62蛋白表达量显著降低(P<0.05)。结论EP联合方案耐药的SCLC细胞株H446/EP构建成功,增殖能力增强;细胞外排转运蛋白表达量增加、DDR及自噬水平升高可能是SCLC对EP联合方案产生耐药的机制。

关键词：小细胞肺癌多药耐药顺铂依托泊苷

单细胞转录组测序在病原微生物肺部感染研究中的应用

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中国病理生理杂志 2024年第5期40卷 950-955页

作者：黄佳佳王楚雯刘颖张莹莹陈染钱国清宁波大学附属第一医院浙江宁波315000 温州医科大学慈溪生物医药研究院浙江宁波315000

肺部感染是指在终末气道、肺泡腔及肺间质中由细菌、真菌和病毒等病原体诱发的炎症,是威胁人类健康的全球十大问题之一。2019年,世界卫生组织数据显示肺部感染致全球近260万死亡,位列第四大死因^([1]),而且,成人肺部感染的发作次数呈上... 详细信息

肺部感染是指在终末气道、肺泡腔及肺间质中由细菌、真菌和病毒等病原体诱发的炎症,是威胁人类健康的全球十大问题之一。2019年,世界卫生组织数据显示肺部感染致全球近260万死亡,位列第四大死因^([1]),而且,成人肺部感染的发作次数呈上升趋势,特别是≥70岁的男性患者数量增幅最为显著^([2])。病原微生物的感染是病原体与免疫相互作用的结果,不同病原体引起的肺部感染作用机制不同,感染的病原体可激活免疫信号通路和诱导炎症风暴,诱发急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)^([3]),导致预后不佳,甚至死亡。

关键词：单细胞转录组测序肺部感染病原微生物